【摘要】目的：建立超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定黔產(chǎn)管花黨參中黨參炔苷含量的方法。方法：樣品經(jīng)50%甲醇超聲提取，在流動(dòng)相為乙腈-水（50∶50），流速為0.2 mL/min，柱溫為35℃的條件下，經(jīng)Waters ACQUITY UPLC？BEH C18色譜柱分離；采用電噴霧離子源（ESI+）電離樣品，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式下采用標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法進(jìn)行定量分析。結(jié)果：在0.10889～1.0889 ng線(xiàn)性關(guān)系良好，平均加樣回收率為98.3%（n=6）。結(jié)論：該法結(jié)果準(zhǔn)確可靠，具有高靈敏度和高選擇性，適用于黔產(chǎn)管花黨參中黨參炔苷化合物的分析和鑒定及含量測(cè)定研究。

【關(guān)鍵詞】超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法；管花黨參；黨參炔苷；含量測(cè)定

【DOI編碼】10.3969/j.issn.1674-4977.2024.05.001

【基金項(xiàng)目】畢節(jié)市科技創(chuàng)新平臺(tái)及人才團(tuán)隊(duì)科技計(jì)劃項(xiàng)目（畢科合〔2023〕16號(hào)）：貴州黨參（管花黨參）質(zhì)量控制方法研究。

Determination of Lobetyolin Content in Codonopsis Tubulosa from Guizhou by UPLC-MS/MS

LEI Lianwei， HE Yu*， LU Liya， ZHANG Luyao

（Inspection and Testing Center of Bijie Market Supervision andAdministration Bureau， Bijie 551700， China）

Abstract： Objective： To establish a method for determining the content of lobetyolin in Codonopsis tuberosa from Guizhou using ultrahigh performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry （UPLC-MS / MS）. Methods： The samples were extracted by ultrasonic extraction with 50% methanol. Under the conditions of acetonitrile-water （50∶50） as the mobile phase， a flow rate of 0.2 mL/ min， and a column temperature of 35℃， the samples were separated on a Waters ACQUITY UPLC？BEH C18 column. The samples were ionized using an electrospray ionization source （ESI+） and quantitative analysis was performed using a standard curve method under multiple reaction monitoring （MRM） mode. Results： The linear relationship was good in the range of 0.10889 to 1.0889 ng， and the average recovery rate of spiked samples was 98.3% （n=6）. Conclusion： This method is accurate and reliable， with high sensitivity and selectivity， and is suitable for the analysis， identification， and content determination of lobetyolin compounds in Codonopsis tuberosa from Guizhou.

Keywords： UPLC-MS/MS； codonopsis tubulosa； codonopsis lobetyolin； content determination

0引言

管花黨參[1]又名貴州黨參，被收錄于2023年版《貴州省中藥、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》和《貴州省中藥及民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)原植（動(dòng)）物彩色圖鑒》中，是貴州省常用的中藥民族藥。其味甘、性平，具有補(bǔ)中益氣、健脾益肺之功效，常用于治療脾肺虛弱、氣短心悸、食少便溏、虛喘咳嗽、內(nèi)熱消渴等癥。管花黨參主要含有糖類(lèi)、甾體類(lèi)、酚酸類(lèi)、黃酮類(lèi)、氨基酸等化學(xué)成分。筆者通過(guò)建立超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）法，確定黔產(chǎn)管花黨參中的主要化學(xué)成分黨參炔苷，并對(duì)其含量進(jìn)行測(cè)定[2]，進(jìn)而對(duì)藥材質(zhì)量進(jìn)行有效控制。

1儀器與試藥

ACQUITYTM UPLC超高效液相色譜和Xevo TQ-Smicro質(zhì)譜儀；電子天平；超聲清洗器。

黨參炔苷對(duì)照品（成都格利普生物科技有限公司，批號(hào)23101910，含量：90.07%）；管花黨參藥材樣品（畢節(jié)市大方縣、威寧縣、赫章縣采挖野生）；甲醇、乙腈、水均為質(zhì)譜級(jí)。

2方法與結(jié)果

2.1色譜、質(zhì)譜條件

色譜柱：Waters ACQUITY UPLC？BEH C18（150 mm×2.1 mm，1.7μm）[3]，流動(dòng)相：乙腈-水（50∶50），流速：0.2 mL/min，柱溫：30℃，進(jìn)樣量：1μL。以三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測(cè)，電噴霧離子源（ESI），掃描方式為正離子模式，檢測(cè)模式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式；毛細(xì)管電壓：2.5 KV；錐孔電壓：30V；脫溶劑氣流速：1000 L/h；脫溶劑氣溫度：500℃；進(jìn)樣錐氣體流速：50 L/h；離子源溫度：150℃?；衔餀z測(cè)離子對(duì)和碰撞電壓（CE）如下：母離子397.019；子離子198.961，35 V（CE）；子離子127.99，38 V（CE）。

2.2溶液的制備

2.2.1對(duì)照品溶液的制備

取黨參炔苷對(duì)照品約12.09 mg，置于10 mL容量瓶中，加甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成質(zhì)量濃度為1 mg/mL的貯備液；精密吸取0.1 mL置于100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度；再次精密吸取1、2、4、6、8、10 mL分別置于10 mL容量瓶中稀釋至刻度，得不同質(zhì)量濃度的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，經(jīng)0.22μm濾膜濾過(guò)，即得對(duì)照品溶液。

2.2.2供試品溶液的制備

取管花黨參藥材粉末，過(guò)三號(hào)篩備用。精密稱(chēng)取約1 g，置于具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇20 mL，稱(chēng)定重量，超聲處理（功率500 W，頻率40 kHz）30 min，取出，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液。精密吸取0.1 mL置于100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度；再次精密吸取1 mL置于10 mL容量瓶中，經(jīng)0.22μm濾膜濾過(guò)，即得供試品溶液。

2.2.3陰性樣品溶液的制備

取質(zhì)譜級(jí)甲醇作為陰性樣品溶液。

2.3專(zhuān)屬性試驗(yàn)

取上述對(duì)照品、供試品和陰性樣品溶液，按照2.1項(xiàng)下的色譜、質(zhì)譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄質(zhì)譜圖。結(jié)果顯示，在管花黨參供試品溶液色譜圖中，黨參炔苷TIC離子峰形較好，黨參炔苷TIC離子峰周?chē)鸁o(wú)雜峰，且空白溶劑無(wú)干擾。具體見(jiàn)圖1、圖2、圖3。

2.4方法學(xué)驗(yàn)證

2.4.1線(xiàn)性關(guān)系考察

分別取2.2.1項(xiàng)下的系列對(duì)照品溶液，按2.1項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣1μL進(jìn)行測(cè)定，記錄質(zhì)譜圖，以定量離子對(duì)峰面積為縱坐標(biāo)，以系列對(duì)照品溶液進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算回歸方程。結(jié)果顯示，黨參炔苷進(jìn)樣量在0.10889～ 1.0889 ng內(nèi)，峰面積呈良好線(xiàn)性關(guān)系?；貧w方程為Y= 18479.9X-326.378，相關(guān)系數(shù)r=0.9995。

2.4.2精密度試驗(yàn)

取質(zhì)量濃度為0.43556 ng/μL的黨參炔苷對(duì)照品溶液1μL進(jìn)樣測(cè)定，重復(fù)測(cè)定6次，記錄定量離子對(duì)峰面積。結(jié)果顯示，黨參炔苷峰面積RSD為0.2%，表明儀器精密度良好。

2.4.3穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液（ZP1），分別于0、6、12、24、36、48 h進(jìn)樣測(cè)定，記錄各時(shí)間點(diǎn)黨參炔苷峰面積，48 h內(nèi)測(cè)得黨參炔苷峰面積的RSD為0.2%，表明供試品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.4重復(fù)性試驗(yàn)

取同一供試品6份（ZP1），按2.2.2項(xiàng)同法制備供試品溶液，測(cè)定黨參炔苷含量。結(jié)果顯示，6份供試品黨參炔苷含量RSD為0.6%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.4.5回收率試驗(yàn)

取已知含量的管花黨參粉末（ZP1，2.909 mg/g）約0.5 g，精密稱(chēng)定6份，置于具塞錐形瓶中，分別加入一定量的黨參炔苷對(duì)照品，按2.2.2項(xiàng)同法制備供試品溶液，測(cè)定黨參炔苷含量并計(jì)算回收率，平均回收率為98.3%，RSD為1.2%，具體結(jié)果見(jiàn)表1。

2.4.6檢測(cè)限和定量限

分別以S/N=3與S/N=10時(shí)的相應(yīng)濃度確定檢出限和定量限。

將已知濃度的黨參缺苷對(duì)照品溶液采用逐步稀釋的方法，多次采集相關(guān)數(shù)據(jù)信噪比。結(jié)果顯示：當(dāng)基線(xiàn)信噪比為4.28時(shí)，檢出限為0.005μg/kg；當(dāng)信噪比為12.99時(shí)，定量限為0.0168μg/kg。

2.4.7樣品含量測(cè)定

取10批管花黨參樣品，編號(hào)ZP1～ZP10，按2.2.2項(xiàng)同法制備供試品溶液，測(cè)定樣品中黨參炔苷的含量。ZP1～ZP10的含量分別為：2.9、3.1、2.5、2.1、2.5、2.8、2.0、2.7、2.8、2.4 mg/g，平均值為2.6 mg/g。

3討論

采用質(zhì)譜法依次對(duì)黔產(chǎn)管花黨參中的腺苷、色氨酸、紫丁香苷、黨參炔苷進(jìn)行質(zhì)譜分析。結(jié)果顯示，黨參炔苷對(duì)照品色譜峰的保留時(shí)間與供試品一致，且定量離子對(duì)峰面積較大，并且在扣除背景后的質(zhì)譜圖中，所選擇的監(jiān)測(cè)離子對(duì)均出現(xiàn)，而且所選擇的監(jiān)測(cè)離子對(duì)峰面積比與對(duì)照品的監(jiān)測(cè)離子對(duì)峰面積比一致（當(dāng)相對(duì)比例>50%時(shí)，允許偏差為±20%；當(dāng)20%<相對(duì)比例≤50%時(shí)，允許偏差為±25%；當(dāng)10%<相對(duì)比例≤20%時(shí)，允許偏差為±30%；當(dāng)相對(duì)比例≤10%時(shí)，允許偏差為±50%）。因此，后續(xù)選擇黨參炔苷進(jìn)行含量測(cè)定研究。

【參考文獻(xiàn)】

[1]劉付松，張開(kāi)弦，姚秋陽(yáng)，等.貴州黨參資源現(xiàn)狀與研究進(jìn)展[J].中華中醫(yī)藥雜志，2023，38（7）：3245-3251.

[2]孫慶文，何順志，黃敏.黔產(chǎn)管花黨參中黨參炔苷的含量測(cè)定[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2007（8）：1931-1932.

[3]馬媛媛.液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在中藥分析中的應(yīng)用[J].科技展望，2016，26（34）：133.

【作者簡(jiǎn)介】

雷聯(lián)偉，男，1992年出生，主管藥師，學(xué)士，研究方向?yàn)樗幬锓治?、藥品檢驗(yàn)與質(zhì)量評(píng)價(jià)。

通信作者：何羽，男，1978年出生，正高級(jí)工程師，學(xué)士，研究方向?yàn)樗幤窓z驗(yàn)分析和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，1142065867@qq.com。

（編輯：李鈺雙）