摘要：花粉形態(tài)特征可作為獼猴桃屬植物的分類依據(jù)?，F(xiàn)有的研究方法需要使用掃描電鏡測量花粉形態(tài)的多項(xiàng)特征，不能滿足獼猴桃遺傳育種工作的需求。為了探究一種基于獼猴桃花粉形態(tài)篩選突變體的新方法，以39份不同獼猴桃花粉為試驗(yàn)材料（包含雌株花粉15份、雄株花粉23份、突變體兩性花花粉1份），運(yùn)用掃描電鏡在較低倍數(shù)（1 000×）下觀察，選取5項(xiàng)特征指標(biāo)進(jìn)行測量，對供試樣本進(jìn)行主成分分析和正態(tài)分布分析。結(jié)果表明，39份樣本均為N3C4P5型，赤道面觀均為三裂圓形，具3條萌發(fā)溝；主成分分析中PC1、PC2貢獻(xiàn)的總方差為96.27%；載荷圖表明，在較低倍數(shù)下5個花粉形態(tài)指標(biāo)具有一定的差異性；得分圖表明，樣本中的雌株花粉和雄株花粉存在明顯分離，它們的形態(tài)學(xué)相似度不大，極軸長度與赤道軸長度的比值（P/E）與赤道軸長度（E）二者夾角最大，具有區(qū)分意義；P/E的正態(tài)分布曲線軸須圖將數(shù)據(jù)結(jié)果可視化，根據(jù)樣本的區(qū)間差異篩選離群的突變體，篩選出突變體材料4份。

關(guān)鍵詞：獼猴桃；花粉形態(tài)；掃描電鏡；突變體

中圖分類號：S663.401 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1002-1302（2024）15-0178-09

收稿日期：2023-09-14

基金項(xiàng)目：四川省科技計(jì)劃（編號：2021YFYZ0023、2020ZYD042）；四川省省級科研院所基本科研業(yè)務(wù)項(xiàng)目（編號：2021JDKY0023）。

作者簡介：何利欽（1988—），女，四川鹽亭人，碩士，助理研究員，主要從事獼猴桃病蟲害及遺傳育種相關(guān)研究。E-mail：heliqin777@163.com。

通信作者：王麗華，碩士，研究員，主要從事獼猴桃遺傳育種相關(guān)研究。E-mail：514935456@qq.com。

獼猴桃屬植物的原生中心和分布中心均在我國，野生種質(zhì)資源極為豐富［1］。獼猴桃屬（Actinidia Lindl.）共有54個種和21個變種，約75個分類群，其中有52個種原產(chǎn)于我國［2］。不同來源的材料種間和種內(nèi)差異較大，在新品種選育和種質(zhì)創(chuàng)新方面的資源開發(fā)利用潛力很大?，F(xiàn)有的育種方法有很多，有傳統(tǒng)的實(shí)生選育，還有雜交育種、芽變選擇、輻射誘變、生物技術(shù)育種等［3-7］。新品種的選育主要以從野生資源和它們的實(shí)生子代中篩選材料培育為主［8］，在其生殖與發(fā)育過程中，花粉產(chǎn)生雄性配子，花粉形態(tài)特征的遺傳保守性很強(qiáng)，不會因外界條件而受到影響，同時花粉攜帶了大量信息，在研究獼猴桃屬植物的親緣關(guān)系和突變體上有重要的參考價值和理論依據(jù)［1］。

獼猴桃植株在個體遺傳表現(xiàn)上有雌雄株的區(qū)別，花朵是形態(tài)上的二性花，功能上的單性花，在發(fā)育過程中，雌蕊或雄蕊發(fā)生選擇性敗育，即表現(xiàn)為雄株花粉可育雌株花粉敗育［9］。有關(guān)獼猴桃屬植物孢粉學(xué)的研究表明，獼猴桃花粉攜帶的遺傳信息具有穩(wěn)定性和多樣性。姜正旺等觀察了獼猴桃屬植物 21 個種、6 個變種和4個不同種間雜交F1代植株的花粉形態(tài)，提出獼猴桃屬的花粉形狀主要以長球形至近球形為主，變異較小，而花粉粒大小及外壁紋飾的種間差異較大［10］。寧允葉等觀察研究了紅陽獼猴桃及其變種的花粉形態(tài)，發(fā)現(xiàn)其中存在顯著差異［11］。王柏青觀察了東北3種獼猴桃的花粉形態(tài)，發(fā)現(xiàn)3種花粉的形態(tài)特征對比可以作為分種的依據(jù)［12］。鐘敏等對23個野生毛花獼猴桃雄株花粉粒進(jìn)行觀察分析，發(fā)現(xiàn)不同單株間存在差異，分別呈現(xiàn)毛花獼猴桃的遺傳保守性和多樣性［13］。齊秀娟等對獼猴桃3個種30個品系的花粉粒進(jìn)行形態(tài)觀察，發(fā)現(xiàn)獼猴桃花粉外觀形態(tài)和大小在相同種內(nèi)和相同來源環(huán)境背景下存在一定的保守性，花粉大小、萌發(fā)溝長度、萌發(fā)溝脊寬度、極軸長度、 赤道軸長度可作為劃分中華獼猴桃和美味獼猴桃的孢粉學(xué)特征依據(jù)［14］。這些學(xué)者先后利用掃描電鏡對獼猴桃種間、種內(nèi)及變種的不同花粉進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察研究，探討不同獼猴桃間的親緣關(guān)系，結(jié)果表明花粉形態(tài)上的顯著差異可以作為篩選獼猴桃突變體的方式之一，為獼猴桃種質(zhì)資源開發(fā)利用提供了科學(xué)依據(jù)。

但是這些研究存在2個方面的不足之處。一方面，這些研究需要測量花粉形態(tài)的多項(xiàng)指標(biāo)，至少包括花粉極軸長度、赤道軸長度、萌發(fā)溝長度、萌發(fā)溝寬度、外壁紋飾等多項(xiàng)特征，根據(jù)多項(xiàng)指標(biāo)的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)進(jìn)行平均值與標(biāo)準(zhǔn)差比較，從而研究親緣關(guān)系和變異系數(shù)。該類方法的不足之處在于：其一，在實(shí)際育種工作和科學(xué)研究中，基于獼猴桃屬植物種間和種內(nèi)資源的多樣性、花粉種類和數(shù)量較多的情況下，需要進(jìn)行大量繁瑣的工作；其二，花粉外壁紋飾的觀察對上機(jī)樣品和拍攝條件要求高，現(xiàn)有技術(shù)條件下，一般須在掃描電鏡放大10 000倍以上進(jìn)行觀察，如果樣品含水量或者導(dǎo)電性不佳，需要預(yù)先處理樣品，費(fèi)時費(fèi)力，同時由于外壁紋飾的結(jié)構(gòu)復(fù)雜多樣，相關(guān)研究依賴于觀察者的主觀判斷，沒有定量指標(biāo)，在大量篩選工作中不利于標(biāo)準(zhǔn)化的執(zhí)行和工作效率的提高。另外一方面，現(xiàn)有研究幾乎都是針對雄株的雄花花粉進(jìn)行相關(guān)研究，但是雌株也會產(chǎn)生花粉，以往多認(rèn)為雌株花粉沒有可育性，研究意義不大，而王明忠等從龍門山南段的野生美味獼猴桃變種的彩色獼猴桃中，篩選出具有生產(chǎn)利用價值的兩性花（雌雄同花）品種龍山紅［15］。筆者的相關(guān)研究也發(fā)現(xiàn)，雌株的花粉形態(tài)具有穩(wěn)定性和多樣性。因此，對雌株花粉的研究也有一定的價值。

本研究通過掃描電鏡觀察測量中華獼猴桃、美味獼猴桃、軟棗獼猴桃、毛花獼猴桃、葛棗獼猴桃、四萼獼猴桃、京梨獼猴桃共7種獼猴桃的39份花粉，其中雌株花粉15份，雄株花粉23份，美味獼猴桃突變體兩性花龍山紅花粉1份，供試材料在掃描電鏡的低倍數(shù)下觀察測量，運(yùn)用主成分分析法探究影響花粉形狀的主要因素，繪制正態(tài)分布曲線軸須圖，探究一種篩選獼猴桃突變體的新方法，以期為獼猴桃的種質(zhì)資源選育和遺傳育種提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

兩性花龍山紅獼猴桃花粉來自四川省自然資源科學(xué)研究院峨眉山生物試驗(yàn)站，其余供試花粉全部來源于四川省自然資源科學(xué)研究院什邡市獼猴桃研究基地。于2021—2023年的春季獼猴桃花期，選取不同獼猴桃的雄株和雌株進(jìn)行取樣，在四川省自然資源科學(xué)研究院實(shí)驗(yàn)室中開展相關(guān)試驗(yàn)。不同獼猴桃花粉信息詳見表1。

1.2 獼猴桃花粉收集

在獼猴桃初花期，采摘即將開放的鈴鐺花，用小鑷子剝落花藥于硫酸紙袋內(nèi)，置于帶蓋的潔凈培養(yǎng)皿中，在25 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中放置24 h，待花粉粒散出后，密封保存于棕色玻璃瓶中，放置于 -20 ℃ 冰箱中備用。

1.3 掃描電鏡觀察拍照

用潔凈棉簽將供試花粉輕柔地粘黏在導(dǎo)電膠上，噴金鍍膜后，放置在日立SU3500掃描電子顯微鏡中，在較低倍數(shù)下拍攝觀察。分別在500×、1 000×、3 000×左右倍數(shù)下，選取花粉粒的群體、極面觀、赤面觀等具有代表性的視野拍照。

1.4 數(shù)據(jù)分析

用ImageJ軟件測量較低倍數(shù)（1 000×）下花粉粒的5個指標(biāo)：極軸長度（P）、赤道軸長度（E）、極軸長度與赤道軸長度比值（P/E）、萌發(fā)溝長度、花粉粒大小（P×E）。每種花粉粒隨機(jī)挑選30粒進(jìn)行測量。試驗(yàn)數(shù)據(jù)使用Excel軟件進(jìn)行相關(guān)處理，運(yùn)用IBM SPSS Statistics 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，運(yùn)用軟件Grapad Prism 9.5進(jìn)行主成分分析。

在低倍數(shù)500×下拍照，利用ImageJ軟件測量花粉粒的極軸長度（P）、單?；ǚ蹖?yīng)的赤道軸長度（E），計(jì)算極軸長度與赤道軸長度比值（P/E）。每份樣本測量花粉粒100粒以上。運(yùn)用軟件Origin 2021制作極軸長度與赤道長度比值（P/E）的正態(tài)分布曲線軸須圖，花粉形狀學(xué)相關(guān)分類、指標(biāo)的學(xué)術(shù)用語參考《孢粉學(xué)手冊》［16］、《孢粉學(xué)概論》［17］。

2 結(jié)果與分析

2.1 花粉形態(tài)學(xué)和大小

由圖1可見，全部供試花粉形態(tài)均為單粒、等極、輻射對稱。供試花粉的赤道面觀均為三裂圓形，具3條萌發(fā)溝，等間距離分布，根據(jù)Erdtman提出的NPC系統(tǒng)分類［16］，41份花粉均為N3P4C5型。極面觀為超長球形、長球形、近球形或扁球形，其中11份中華獼猴桃中6份雄株花粉為超長球形或長球形，5份雌株花粉為近球形、長球形或扁球形；美味獼猴桃中9份雄株花粉為超長球形或長球形，4份雌株花粉為近球形，1份兩性花花粉為近球形；軟棗獼猴桃中3份雄株花粉為超長球形，2份雌株花粉為長球形、近球形；毛花獼猴桃中1份雄株花粉為長球形，1份雌株花粉為扁球形；葛棗獼猴桃中1份雄株花粉為超長球形，1份雌株花粉為近球形；四萼獼猴桃中1份雄株花粉為超長球形，1份雌株花粉為近球形； 京梨獼猴桃中2份雄株花粉分別為長球形和超長球形，1份雌株花粉為近球形。

表1列出了分析統(tǒng)計(jì)的各項(xiàng)形態(tài)指標(biāo)。雄株花粉極軸長度為21.15～33.31 μm，最小值為美味獼猴桃，最大值為四萼獼猴桃；雌株花極軸長度為14.10～21.70 μm，最小值為中華獼猴桃，最大值為四萼獼猴桃。雄株花粉赤道軸長度為9.96～16.90 μm，最小值為京梨獼猴桃，最大值為美味獼猴桃；雌株花粉赤道軸長度為14.68～24.05 μm，最小值為中華獼猴桃，最大值為毛花獼猴桃。雄株花粉極軸長度與赤道軸長度比值為1.27～2.26，供試樣品中最小值為美味獼猴桃，最大值為京梨獼猴桃；雌株花粉極軸長度與赤道軸長度比值為0.83～1.36，供試花粉中最小值和最大值均為中華獼猴桃。雄株花粉粒大?。O軸×赤道軸）為223.32～552.42 μm2，最小值為京梨獼猴桃，最大值為四萼獼猴桃；雌株花粉粒大小（極軸×赤道軸）為221.91～559.91 μm2，最小值為中華獼猴桃，最大值為毛花獼猴桃。雄株花粉萌發(fā)溝長度為17.55～29.04 μm，最小值為美味獼猴桃，最大值為四萼獼猴桃；雌株花粉萌發(fā)溝長度為9.65～15.68 μm，最小值為京梨獼猴桃，最大值為軟棗獼猴桃。

2.2 花粉指標(biāo)的主成分分析（PCA）

將供試的獼猴桃花粉38份材料（不包括25號樣本兩性花獼猴桃）的5個花粉形態(tài)指標(biāo)［包括極軸長度（P）、赤道軸長度（E）、萌發(fā)溝長度、極軸長度與赤道軸長度比值（P/E）、花粉粒大小（P×E）］的相關(guān)數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化后進(jìn)行PCA（圖2）。由圖 2-A、圖2-B可知，前2個主成分的貢獻(xiàn)度幾乎可以涵蓋原始變量的信息，前2個主成分貢獻(xiàn)的總方差為96.27%。從圖2-D載荷圖上可以看出，5個花粉形態(tài)指標(biāo)具有一定的差異性，其中極軸長度與赤道軸長度的比值（P/E）、極軸長度（P）、萌發(fā)溝長度三者分布比較集中，夾角較小，相關(guān)信息相似，區(qū)分意義不大；而P/E與赤道軸長度（E）夾角最大，冗余信息很少，可以得出二者具有區(qū)分意義。由圖 2-C 可知，樣本間有一定的程度的聚類，雌株花粉和雄株花粉存在明顯分離，二者之間相似度不大，花粉形態(tài)特征上發(fā)生了一定程度的變化。

2.3 花粉的P/E分布范圍分析

使用軟件Origin 2021制作正態(tài)分布曲線軸須圖。由圖3可知，中華獼猴桃的雌株花粉中的7、8、9、11號材料的P/E值分布在0.60～1.25之間，分布范圍較窄且集中，重合度較高；雄株花粉中的1、2、3、5、6號材料的P/E值分布在1.60～2.60之間，分布范圍同樣較窄且集中，重合度較高。但是，雌株花粉中的10號材料、雄株花粉中的4號材料分布趨勢差異較大。10號材料的P/E值分布范圍為0.60～1.80，分布范圍很寬，與大部分雌株花粉重合度不高，有部分值卻和雄株花粉重合在一起，比值分布集中在1.25左右，該區(qū)域幾乎不含其他雌株和雄株花粉。雄株花粉中的4號材料P/E值分布范圍為1.50～2.50，其中有部分與其他雄株花粉不重合，較接近于雌株花粉的分布范圍，與雌株花粉中的10號材料有部分重合，但是其離群程度又小于10號材料。從分布軸須圖中可見，4號、10號材料不同于其他材料。可以看出，圖4-A、圖4-B圖和圖4-D、圖4-E圖雌株花粉或雄株花粉的形態(tài)一致，幾乎沒有變化，而圖4-C、圖4-F圖中的4號、10號材料花粉形態(tài)不一，發(fā)生了突變。

圖5為美味獼猴桃的花粉P/E值分布范圍?？偟膩碚f，雌株花粉21、22、23、24號材料分布在0.50～1.50之間，雄株花粉12、13、14、15、16、18、19、20號材料分布在1.50～2.75之間，雌株和雄株花粉幾乎不重合，較為集中地分布在2個區(qū)域。而雄株花粉中的17號材料分布范圍為0.60～2.00，分布范圍廣，包含雌株和雄株花粉，且與雌株花粉重合區(qū)域更多。25號材料為兩性花龍山紅樣本，比值分布在0.50～1.75，分布范圍也較廣，包含雌株和雄株花粉，很大一部分區(qū)域與17號材料重合在一起。由圖6可知，17、25號材料在形態(tài)上區(qū)別較大，花粉形態(tài)上發(fā)生了突變。

由圖7可知，軟棗獼猴桃的雌株花粉P/E值分布范圍在0.60～1.50之間，雄株花粉P/E值分布范圍在1.60～2.60之間。由圖8可知，毛花獼猴桃、葛棗獼猴桃、四萼獼猴桃、京梨獼猴桃的雌株花粉P/E值分布范圍在0.50～1.50之間，雄株花粉P/E值分布范圍在1.50～2.75之間?？梢姡琍/E值分布均表現(xiàn)為分布范圍較為集中且重合區(qū)域較大，雌株和雄株花粉分布在不同區(qū)域 且區(qū)域之間幾乎不重合。由圖9、圖10也可看出，雄株或雌株花粉在形態(tài)上表現(xiàn)一致，幾乎沒有差異，未發(fā)生突變。

3 討論與結(jié)論

被子植物花粉在生殖與發(fā)育過程中產(chǎn)生雄性配子，攜帶大量穩(wěn)定的遺傳信息，花粉形態(tài)學(xué)的研究為獼猴桃屬植物的親緣關(guān)系和種質(zhì)資源選育提供重要參考價值。在相關(guān)研究中，康寧等先后運(yùn)用掃描電鏡對不同獼猴桃種間和種內(nèi)資源材料的花粉形態(tài)進(jìn)行了觀察，獼猴桃花粉均為N3P4C5型，且都以分散的單粒、等極和輻射對稱形式存在，萌發(fā)孔為三孔溝，極面觀為三裂圓形，赤道面觀察到1～2條萌發(fā)溝，但是各研究均以雄株花粉為主，幾乎很少見有關(guān)雌株花粉的研究報道［10，13-14，18-19］。本研究中39份供試材料包括7種獼猴桃花粉，不論雌雄株還是突變體兩性花龍山紅獼猴桃的花粉，均與這些學(xué)者的觀察結(jié)果一致，同時既補(bǔ)充了雌株花粉形態(tài)學(xué)研究的理論基礎(chǔ)，也進(jìn)一步證實(shí)獼猴桃花粉在形狀上穩(wěn)定遺傳變異較少的結(jié)論［20］。

獼猴桃屬植物花粉還呈現(xiàn)出遺傳多樣性。鐘敏等先后對23個野生毛花獼猴桃雄株花粉和3個種的30個品系獼猴桃花粉進(jìn)行觀察研究，花粉粒在極軸長度（P）、赤道軸長度（E）、萌發(fā)溝長度、極軸長度與赤道軸長度比值（P/E）、花粉粒大小（P×E）上都存在差異［13-14］，本研究結(jié)果也與其一致。為了研究供試材料的親緣關(guān)系，這些學(xué)者還在高倍數(shù)掃描電鏡下觀察測量了花粉的外壁紋飾形狀和萌發(fā)溝寬度，再取極軸長度（P）、萌發(fā)溝長度、赤道軸長度（E）、萌發(fā)溝寬度、極軸長度與赤道軸長度比值（P/E）、花粉粒大小（P×E）等指標(biāo)的均值進(jìn)行變異系數(shù)分析或者聚類分析。然而，在獼猴桃新品種選育中，有大量的獼猴桃野生資源和實(shí)生子代樣本需要篩選和評價；這些方法或是因?yàn)閷悠非疤幚砗腿藛T操作經(jīng)驗(yàn)有高要求，或是因?yàn)橛^察測量各項(xiàng)指標(biāo)較多導(dǎo)致工作量太大，往往不能滿足實(shí)際工作的需要。為此，筆者所在課題組提出一種篩選獼猴桃花粉突變體的方法。

在極軸長度（P）、赤道軸長度（E）、萌發(fā)溝長度、極軸長度與赤道軸長度比值（P/E）、花粉粒大?。≒×E）、萌發(fā)溝寬度、外壁紋飾7項(xiàng)花粉特征指標(biāo)中，為了提高工作效率，選擇在較低倍數(shù)下（1 000×）拍照觀察，舍去在高倍數(shù)下觀察的萌發(fā)溝寬度和外壁紋飾2項(xiàng)特征 增加觀察群體數(shù)量的同時減少測量指標(biāo)數(shù)量。然后為了探究較低倍數(shù)下的極軸長度（P）、赤道軸長度（E）、萌發(fā)溝長度、極軸長度與赤道軸長度比值（P/E）、花粉粒大?。≒×E） 5項(xiàng)指標(biāo)是否可行以及相關(guān)指標(biāo)的降維，運(yùn)用軟件Grapad Prism 9.5進(jìn)行主成分分析（PCA）。陡坡圖、方差比例圖顯示前2個主成分的貢獻(xiàn)度為96.27%，幾乎可以涵蓋原始變量的信息；得分圖中樣本間有一定的程度的聚類，雌株和雄株花粉存在明顯分離，二者之間相似度不大；載荷圖表明5項(xiàng)指標(biāo)中 極軸長度與赤道軸長度比值（P/E）與赤道軸長度（E）夾角最大，冗余信息很少，二者具有區(qū)分意義。筆者結(jié)合實(shí)際工作經(jīng)驗(yàn)，認(rèn)為極軸長度與赤道軸長度比值（P/E）這項(xiàng)指標(biāo)在花粉形態(tài)學(xué)上起著關(guān)鍵作用，特別是在突變體的花粉形態(tài)上具有重要參考價值，發(fā)生改變的花粉形態(tài)會與群體有一定程度上的差異。為此，利用ImageJ軟件快速測量低倍數(shù)下的掃描電鏡圖片，因?yàn)樵诘捅稊?shù)下電鏡圖片中花粉粒顆粒較多，可快速地得到多組極軸長度與赤道軸長度比值（P/E）數(shù)據(jù)。采用軟件Origin 2021繪制極軸長度與赤道軸長度比值（P/E）的正態(tài)曲線分布軸須圖，將所有數(shù)據(jù)可視化呈現(xiàn)出來。從不同獼猴桃花粉的P/E值的正態(tài)分布區(qū)間區(qū)域分析得出，4、10、17、25號材料差異較大，4號材料為中華獼猴桃雄株花粉；10號材料為中華獼猴桃雌株花粉，17號為美味獼猴桃雄株花粉，25號材料為美味獼猴桃的突變體兩性花龍山紅獼猴桃花粉；再對照相應(yīng)的掃描電鏡圖片，均可在群體中找到形狀差異較大的突變花粉粒，驗(yàn)證該種方法的可行性。

本研究中的供試花粉材料在形態(tài)上具有穩(wěn)定的遺傳共性特征，同時也具有多樣性和差異性。在較低倍數(shù)下（1 000×）運(yùn)用掃描電鏡對群體花粉粒拍照，實(shí)現(xiàn)快速測量，得到多組極軸長度與赤道軸長度的比值（P/E）數(shù)據(jù)，繪制正態(tài)分布曲線軸須圖，所有數(shù)據(jù)實(shí)現(xiàn)可視化，分析正態(tài)分布區(qū)間，篩選出4份差異較大的材料，在相應(yīng)的掃描電鏡圖片中均可找到形狀差異較大的突變花粉粒，該方法可行，且可高效直觀地篩選獼猴桃突變體，期待可為獼猴桃的資源開發(fā)利用以及新品種選育提供理論參考依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

［1］趙 洋，穆 雪，李春艷，等. 獼猴桃屬（Actinidia Lindl.）植物親緣關(guān)系研究進(jìn)展［J］. 果樹學(xué)報，2019，36（9）：1214-1228.

［2］黃宏文. 獼猴桃屬：分類資源馴化栽培［M］. 北京：科學(xué)出版社，2013：10-17.

［3］韓明麗，張志友，趙 根，等. 我國紅果肉獼猴桃育種研究現(xiàn)狀與展望［J］. 北方園藝，2014（1）：182-187.

［4］周玲艷，楊加偉，梁 紅. 植物體細(xì)胞雜交技術(shù)及其在獼猴桃育種中的應(yīng)用［J］. 仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院學(xué)報，2009，22（3）：59-64.

［5］劉平平，葉開玉，龔弘娟，等. 獼猴桃60Co-γ射線輻射誘變植株變異的ISSR分子標(biāo)記研究［J］. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報，2016，29（10）：2457-2462.

［6］井趙斌，雷玉山，李永武. 生物技術(shù)與我國獼猴桃育種［J］. 生物技術(shù)通報，2015，31（7）：1-10.

［7］李升星，劉 崢，賀 笑，等. 獼猴桃多倍體育種研究進(jìn)展［J］. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2015（17）：112-114.

［8］廖光聯(lián)，陳 璐，鐘 敏，等. 88個獼猴桃品種（系）及近緣野生種的倍性變異分析［J］. 江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2018，40（4）：689-698.

［9］何子燦爛，蔡起貴，錢迎倩，等. 美味獼猴原生質(zhì)體再生植株細(xì)胞遺傳學(xué)研究［J］. 武漢植物學(xué)研究，1997，15（3）：199-207.

［10］姜正旺，王圣梅，張忠慧，等. 獼猴桃屬花粉形態(tài)及其系統(tǒng)學(xué)意義［J］. 植物分類學(xué)報，2004，42（3）：245-260.

［11］寧允葉，熊慶娥，曾偉光.‘紅陽’獼猴桃全紅型芽變（86-3）的果實(shí)品質(zhì)及花粉形態(tài)研究［J］. 園藝學(xué)報，2005，32（3）：486-488.

［12］王柏青. 東北獼猴桃屬花粉形態(tài)的初步研究［J］. 吉林工程技術(shù)師范學(xué)院學(xué)報，2008，24（11）：92-94.

［13］鐘 敏，謝 敏，張文標(biāo)，等. 野生毛花獼猴桃雄株居群花粉形態(tài)觀察［J］. 果樹學(xué)報，2016，33（10）：1251-1258.

［14］齊秀娟，王 然，蘭彥平，等. 3個獼猴桃栽培種花粉形態(tài)掃描電鏡觀察［J］. 果樹學(xué)報，2017，34（11）：1365-1373.

［15］王明忠，蒲仕華. 彩色獼猴桃兩性花新品種龍山紅的選育［J］. 中國果樹，2012（6）：1-4.

［16］Erdtman G. 孢粉學(xué)手冊［M］. 中國科學(xué)院植物所譯.北京：科學(xué)出版社，1978：6-45.

［17］王開發(fā). 孢粉學(xué)概論［M］. 北京：北京大學(xué)出版社，1983：8-48.

［18］康 寧，王圣梅，黃仁煌，等. 獼猴桃屬9種植物的花粉形態(tài)研究［J］. 武漢植物學(xué)研究，1993，11（2）：111-116，201-205.

［19］祝晨蔯，徐國鈞，徐珞珊，等. 獼猴桃屬12種植物花粉形態(tài)研究［J］. 中國藥科大學(xué)學(xué)報，1995，26（3）：139-143.

［20］張芝玉. 獼猴桃科的花粉形態(tài)及其系統(tǒng)位置的探討［J］. 植物分類學(xué)報，1987，25（1）：9-23.