關(guān)鍵詞：覆膜；盆栽牡丹；根際基質(zhì)；酶活性；微生物多樣性

中圖分類號(hào)：S154.3：S685.11 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A 文章編號(hào)：1001-4942（2024）06-0075-06

植物生長發(fā)育受其根際環(huán)境影響，根際土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的組成對(duì)維持生態(tài)系統(tǒng)平衡具有重要作用。植物與根際微生物之間存在多層次、多方面的相互作用，對(duì)調(diào)節(jié)植物生長發(fā)育具有重要的生態(tài)功能。根際微生物多樣性及群落結(jié)構(gòu)變化能夠影響植物的生理過程，如分泌、光合、呼吸等，進(jìn)而影響植物的生長發(fā)育及根系功能等。研究表明，根際細(xì)菌和放線菌數(shù)量的增加可提高土壤肥力、促進(jìn)植物根系發(fā)育及養(yǎng)分吸收。

農(nóng)業(yè)環(huán)境對(duì)于農(nóng)作物生產(chǎn)結(jié)果具有決定性作用。覆膜技術(shù)已被證實(shí)對(duì)作物產(chǎn)量和水分利用效率具有顯著影響，能改變土壤酸堿度，為微生物提供適宜的生存環(huán)境，進(jìn)而改變土壤中微生物群落和酶活性。近年來，已有多項(xiàng)研究報(bào)道了根際微生物如何通過多種途徑促進(jìn)植物生長和發(fā)育，包括養(yǎng)分轉(zhuǎn)化、調(diào)節(jié)植物激素水平等。此外，根際微生物之間也可以通過信號(hào)傳遞相互作用，調(diào)控植物生長發(fā)育。這些研究為深入理解根際微生物與植物之間的相互作用提供了新的視角。目前對(duì)容器覆膜栽培植物的根際環(huán)境變化了解甚少，因而，分析覆膜狀態(tài)下根際基質(zhì)微生物多樣性和酶活性的變化，對(duì)于改善盆栽植物基質(zhì)環(huán)境狀態(tài)具有重要意義。

牡丹花大、色艷，有“花中之王”之譽(yù)，具有很高的觀賞價(jià)值、經(jīng)濟(jì)價(jià)值和藥用價(jià)值。然而，地栽牡丹受地域限制，無法隨時(shí)隨地觀賞。因此，將牡丹移栽至容器中，升級(jí)栽培基質(zhì)，改善栽培環(huán)境，促進(jìn)根系生長，成為當(dāng)前研究熱點(diǎn)。本研究在不同季節(jié)對(duì)盆栽牡丹植株進(jìn)行覆膜處理，并與不覆膜處理進(jìn)行比較，研究其根際基質(zhì)酶活性和微生物群落結(jié)構(gòu)變化，為盆栽牡丹的生產(chǎn)與推廣提供參考。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)在河南省洛陽市孟津區(qū)牡丹種植基地（34°84′N，112°42′E）進(jìn)行，2020年10月18日選取大小均一的三年生嫁接苗牡丹‘洛陽紅’，經(jīng)平茬、修根后進(jìn)行容器栽培種植。栽培容器內(nèi)徑22 cm，高26 cm。栽培基質(zhì)由草炭和羊糞混合腐熟制成。試驗(yàn)設(shè)置春季、夏季分別不覆膜和容器上方覆蓋白色薄膜共4個(gè)處理：T0（春季對(duì)照）、Tl（春季覆白膜）、SO（夏季對(duì)照）、S1（夏季覆白膜）。各處理均常規(guī)化管理，即定期澆水、定量施肥，同時(shí)觀察和記錄盆栽牡丹植株生長狀況。

1.2樣品采集及處理

分別于2021年春季（4月13日）和夏季（6月26日）采集盆栽牡丹根際基質(zhì)樣品。每個(gè)處理分別選取6株作為生物學(xué)重復(fù)，抖落附著在根系上的大塊基質(zhì)后使用無菌刷輕輕掃落并收集根際基質(zhì)。將基質(zhì)樣品分為兩份，一份風(fēng)干后過20目篩測定基質(zhì)酶活，另一份用液氮冷凍后測定基質(zhì)微生物。

1.3基質(zhì)酶活測定

盆栽牡丹根際基質(zhì)酶活性的測定參考關(guān)松蔭編著的《土壤酶及其研究法》。脲酶活性采用苯酚一次氯酸鈉比色法，蔗糖酶活性采用3，5-二硝基水楊酸比色法，中性磷酸酶活性采用磷酸苯二鈉比色法，過氧化氫酶活性采用紫外分光光度法測定。

1.4基質(zhì)微生物測序

通過DNA抽提試劑盒提取基因組DNA，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的純度和濃度，使用帶Barcode的特異引物序列、Takara公司的TakaraEx Taq高保真酶進(jìn)行PCR擴(kuò)增，純化后等量混樣，上機(jī)測序。16S rRNA多樣性鑒定對(duì)應(yīng)區(qū)域V3～V4區(qū)引物為343F（5’-TACGGRAGGCAG-CAG-3’）和798R（5’-AGGGTATCTAATCCT-3’）。原始數(shù)據(jù)為FASTQ格式。數(shù)據(jù)下機(jī)后，使用cutadapt軟件去除引物序列，使用DADA2進(jìn)行質(zhì)控分析，得到擴(kuò)增序列變體（Amplicon sequence variants，ASV）豐度表格。使用QIIME 2挑選出各個(gè)ASV的代表序列，與數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對(duì)注釋。16S rRNA使用Unite數(shù)據(jù)庫比對(duì)，物種比對(duì)注釋使用q2-feature-classifier軟件默認(rèn)參數(shù)進(jìn)行分析。16SrRNA建庫及測序委托上海歐易生物醫(yī)學(xué)科技有限公司完成。

1.5數(shù)據(jù)處理與分析

使用IBM SPSS Statistics V21.0軟件進(jìn)行差異顯著性分析，采用Microsoft Excel 2021和GraphPad Prism 8.0軟件繪制圖表。

2結(jié)果與分析

2.1覆膜對(duì)盆栽牡丹根際基質(zhì)酶活性的影響

覆膜對(duì)盆栽牡丹根際基質(zhì)酶活性有顯著影響。相較于春季，夏季脲酶和過氧化氫酶活性均顯著下降，蔗糖酶活性顯著升高。相對(duì)于不覆膜，覆膜處理下根際基質(zhì)酶活性均有所提高，其中中性磷酸酶活性變化最顯著，T1、S1分別較T0、S0提高182.70%、136.78%；脲酶活性變化次之，T1、Sl分別較T0、S0顯著提高43.17%、97.66%（圖1）。結(jié)果表明，覆膜形成了更加適宜基質(zhì)酶生存的根際環(huán)境，有利于根際基質(zhì)酶的活化。

2.2覆膜對(duì)盆栽牡丹基質(zhì)微生物群落結(jié)構(gòu)的影響

不同處理間共有和特有ASVs數(shù)目有所差異（圖2）。不同處理間共有的ASV數(shù)目為431個(gè)。T0和T1中分別有2610個(gè)和2861個(gè)ASV，S0和S1中分別有2769個(gè)和2983個(gè)。表明ASV數(shù)目夏季多于春季，覆膜處理多于不覆膜。

覆膜影響了盆栽牡丹根際基質(zhì)細(xì)菌在不同分類水平上的群落結(jié)構(gòu)。在門水平上（圖3），不覆膜條件下優(yōu)勢菌群為厚壁菌門（Firmicutes）、擬桿菌門（Bacteroidota）、變形菌門（Proteobacteria）、放線菌門（Actinobacteria）；覆膜處理下，根際基質(zhì)中菌群相對(duì)豐度發(fā)生改變，芽單胞菌門（Gemmati-monadota）和變形菌門相對(duì)豐度有所提升：季節(jié)因素對(duì)擬桿菌門相對(duì)豐度影響不明顯。在屬水平上（圖4），不覆膜條件下梭菌屬（Faecalibacterium）、擬桿菌屬（Bacteroides）、布勞特氏菌屬（Blautia）和放線菌屬（Collinsella）為優(yōu)勢菌屬，組內(nèi)菌群結(jié)構(gòu)較穩(wěn)定；覆膜處理改變了組內(nèi)菌群結(jié)構(gòu)，梭菌屬和擬桿菌屬的相對(duì)豐度發(fā)生變化，其中夏季覆膜處理中克雷伯氏菌屬（Klebsiella）、Muribaculaceae和大腸埃希菌屬-志賀氏菌屬（Escherichia-Shigel-la）相對(duì)豐度變化明顯。說明覆膜改變了盆栽牡丹不同分類水平上優(yōu)勢菌群的相對(duì)豐度。

2.3覆膜對(duì)盆栽牡丹基質(zhì)微生物多樣性的影響

盆栽牡丹基質(zhì)細(xì)菌群落Alpha多樣性分析（表1）表明，不覆膜條件下，夏季菌群豐度相較春季有所提升，但菌群多樣性下降。春季，T1的ACE、Chaol、Simpson和Shannon指數(shù)均高于T0，說明春季覆膜對(duì)基質(zhì)細(xì)菌豐度與多樣性影響較大；夏季，覆膜可提高根際菌群的多樣性，但降低了菌群豐度。

對(duì)基質(zhì)細(xì)菌群落Beta多樣性進(jìn)行分析，從PCoA圖（圖5A）可以看出，不同季節(jié)間的樣本存在顯著差異；春季，T0與T1的距離相似，表明兩個(gè)處理組間生存環(huán)境較為接近：夏季，S0組內(nèi)無明顯差異，S1組內(nèi)差異較大，說明覆膜有改變細(xì)菌多樣性的趨勢。NMDS分析結(jié)果（圖5B）與PCoA分析結(jié)果相似，不同季節(jié)間距離差異較大，同一季節(jié)不同處理間距離較小。結(jié)果說明，季節(jié)對(duì)細(xì)菌Beta多樣性影響較大，而覆膜有改變細(xì)菌距離的趨勢。

3討論與結(jié)論

伴隨現(xiàn)代生物信息學(xué)技術(shù)的高速發(fā)展，高通量技術(shù)能夠準(zhǔn)確、系統(tǒng)、全面地研究土壤微生物群落信息，已廣泛應(yīng)用于生物多樣性及群落分析研究中。根際是指植物根系與土壤微生物之間相互作用所形成的微生態(tài)環(huán)境，在植物生長和發(fā)育過程中起著重要作用。微生物作為植物根際的重要組成部分，其群落多樣性反映群落總體的動(dòng)態(tài)變化，而其多樣性、豐富度和均勻度等能夠影響土壤質(zhì)量進(jìn)而影響植物生長。覆膜處理可以改變植物根際基質(zhì)中的細(xì)菌群落組成結(jié)構(gòu)，進(jìn)而影響土壤生態(tài)系統(tǒng)的平衡，此外，不同季節(jié)覆膜對(duì)基質(zhì)微生物群落和酶活性的影響也不同，基質(zhì)中的物種多樣性和豐富度以及細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)也會(huì)相應(yīng)發(fā)生變化。

土壤酶與微生物之間關(guān)系密切，對(duì)生態(tài)系統(tǒng)的平衡起重要作用，覆膜技術(shù)可以穩(wěn)定根際環(huán)境，為土壤酶提供更適宜的環(huán)境條件。本研究表明，覆膜對(duì)根際基質(zhì)脲酶、蔗糖酶、中性磷酸酶和過氧化氫酶活性的影響不同，但均顯著高于不覆膜，與胡慶蘭等的研究結(jié)果一致。覆膜還會(huì)影響土壤細(xì)菌多樣性、豐富度與群落結(jié)構(gòu)。胡志娥等研究發(fā)現(xiàn)，長期覆膜對(duì)土壤中優(yōu)勢菌群的影響較大。本研究表明，覆膜改變了盆栽牡丹不同水平群落結(jié)構(gòu)優(yōu)勢菌群的相對(duì)豐度，厚壁菌門、擬桿菌門、變形菌門、放線菌門和芽單胞菌門為優(yōu)勢菌群，這與潘志針等的報(bào)道一致；在屬水平上，克雷伯氏菌屬、Muribaculaceae和大腸埃希菌屬-志賀氏菌屬相對(duì)豐度變化明顯。覆膜可增加或降低某些土壤微生物量，改變微生物群落結(jié)構(gòu)組成和多樣性。本研究發(fā)現(xiàn)，春季覆膜可以提高盆栽牡丹根際基質(zhì)中微生物的豐富度和多樣性，而夏季覆膜降低了微生物的豐富度，說明不同季節(jié)覆膜條件下根際環(huán)境的變化影響到細(xì)菌群落多樣性。

綜上，相較于不覆膜，覆膜處理為盆栽牡丹提供了更適宜的基質(zhì)微環(huán)境，進(jìn)一步提高了根際基質(zhì)中的酶活性，改變了優(yōu)勢菌群的分布，增加了微生物多樣性與豐富度，可為覆膜在盆栽牡丹中的應(yīng)用與推廣提供理論基礎(chǔ)與科學(xué)依據(jù)，對(duì)優(yōu)化盆栽牡丹生產(chǎn)技術(shù)、提高盆花產(chǎn)量和質(zhì)量具有重要意義。