摘 要 2023年7月27日，在湖南南山國(guó)家公園開展兩棲爬行動(dòng)物資源調(diào)查時(shí)，在針闊混交林旁的馬路采集到白環(huán)蛇屬（Lycodon）標(biāo)本1號(hào)（標(biāo)本號(hào)HNNU 230727；26°15'2″ N，110°15'29″ E；海拔532 m），并基于線粒體細(xì)胞色素b 基因（Cyt b）片段重建白環(huán)蛇屬系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系。結(jié)果顯示：該標(biāo)本與花坪白環(huán)蛇（L. cathaya）模式標(biāo)本聚為一支，遺傳距離為0. 1%。綜合形態(tài)特征及Cyt b 基因序列的分子系統(tǒng)關(guān)系，確定該標(biāo)本為游蛇科（Colubridae）白環(huán)蛇屬花坪白環(huán)蛇，系湖南省蛇類新紀(jì)錄。

關(guān)鍵詞：湖南南山國(guó)家公園；分子系統(tǒng)學(xué)分析；游蛇科；花坪白環(huán)蛇；新紀(jì)錄

中圖分類號(hào)：Q958.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：2310 - 1490（2024）- 02 - 0434 - 07

DOI：10.12375/ysdwxb.20240225

游蛇科（Colubridae）白環(huán)蛇屬（Lycodon）目前包含71個(gè)已知物種，廣泛分布于中東、東南亞以及印度-澳大利亞群島［1?4］，中國(guó)共記錄到白環(huán)蛇屬物種23種［5］。Wang等［6］發(fā)現(xiàn)并描述了廣西花坪自然保護(hù)區(qū)花坪白環(huán)蛇（L. cathaya），其為白環(huán)蛇屬一新種，目前文獻(xiàn)記錄該物種僅在廣西有分布。2023 年7 月27日，在湖南南山國(guó)家公園進(jìn)行兩棲爬行動(dòng)物資源調(diào)查時(shí)，于金童山片區(qū)針闊混交林旁的馬路采集到白環(huán)蛇屬標(biāo)本1號(hào)。綜合其形態(tài)特征鑒定及Cyt b 基因序列分子系統(tǒng)比較，確定標(biāo)本為花坪白環(huán)蛇，為湖南省蛇類新紀(jì)錄［7?8］。本研究對(duì)該物種標(biāo)本進(jìn)行相應(yīng)形態(tài)特征測(cè)量及系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系分析，為后續(xù)深入研究提供基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1. 1 材料采集

1號(hào)雌性白環(huán)蛇屬標(biāo)本采集自南山國(guó)家公園金童山片區(qū)（標(biāo)本號(hào)HNNU 230727；26°15'2″ N，110°15'29″ E，海拔532 m），采集時(shí)已路殺死亡，生境為針闊混交林。取部分肌肉組織于95%乙醇中保存用于分子實(shí)驗(yàn)。標(biāo)本固定后浸泡在75%乙醇中，保存于湖南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院脊椎動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)室。

1. 2 形態(tài)學(xué)測(cè)量

依據(jù)趙爾宓等［9］、Miller等［10］和Ziegler等［11］的測(cè)量方法，用電子數(shù)字游標(biāo)卡尺對(duì)標(biāo)本進(jìn)行形態(tài)學(xué)測(cè)量，精確度為0. 1 mm。

1. 3 系統(tǒng)發(fā)育分析

使用試劑盒（TIANamp Genomic DNA Kit）提取白環(huán)蛇肌肉組織樣本總DNA。采用引物L(fēng)14910（5'-GACCTGTGATMTGAAAACCAYCGTTGT-3'） 和H16064 （5'-CTTTGGTTTACAAGAACAATGCTTTA-3'）［12］擴(kuò)增線粒體Cyt b 基因。PCR反應(yīng)程序：94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s，48 ℃退火1 min，72 ℃延伸70 s，35個(gè)循環(huán)；72 ℃終延伸10 min；4 ℃保存。擴(kuò)增產(chǎn)物由生工生物工程（上海）股份有限公司測(cè)序。

采用MEGA 7［13］的Clustal W算法對(duì)所獲得序列進(jìn)行比對(duì)，人工矯正對(duì)比結(jié)果。從NCBI下載已有的部分白環(huán)蛇屬物種Cyt b 序列（表1），并選取犬牙林蛇（Boiga cynodon，KC010340）和山區(qū)食卵蛇（Dasy?peltis atra，AF471065）Cyt b 序列為外群，利用IQTREE2軟件構(gòu)建部分白環(huán)蛇屬物種分子系統(tǒng)發(fā)育樹［14］，最大似然法發(fā)育分析選取最佳模型為TPM2u+I+G，基于默認(rèn)參數(shù)，自展1 000次估算節(jié)點(diǎn)支持率。利用MEGA 7 基于未校正距離模型（uncorrected pdistance）估算本研究中所采用的白環(huán)蛇屬部分物種間的遺傳距離。

2 結(jié)果

2. 1 形態(tài)描述

標(biāo)本各測(cè)量和鱗片計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)見表2。身體細(xì)長(zhǎng)，頭較寬且扁，與頸區(qū)分明顯；吻寬圓，較前突。頭背黑色，臟粉色寬橫斑淡化。體、尾背面黑色，具36/16條臟粉色橫斑，將背部分割成橢圓形黑斑（少部分橫斑愈合），延伸至尾尖。脊部中央橫斑寬度約占2枚背鱗長(zhǎng)，從脊側(cè)開始加寬，至體側(cè)相鄰橫紋愈合相接。體側(cè)具不規(guī)則小黑斑，位于臟粉色橫斑下方，成列至尾尖。腹鱗兩邊灰白色，腹鱗中央密布黑斑，形成腹中央1條鋸齒狀縱帶。尾腹淺棕色（圖1）。

2. 2 系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系與遺傳距離

PCR 擴(kuò)增Cyt b 基因片段長(zhǎng)度為1 068 bp。用Mega 7 Clustal W 算法對(duì)所獲得的序列進(jìn)行人工比對(duì)、拼接，基于最適模型TPM2u+I+G 構(gòu)建最大似然法系統(tǒng)發(fā)育樹。結(jié)果顯示，在南山國(guó)家公園采集的白環(huán)蛇屬標(biāo)本與花坪白環(huán)蛇模式標(biāo)本相聚形成高支持率單系（圖2）?；谖闯C正距離模型估算本研究中所采用的白環(huán)蛇屬部分物種間的遺傳距離為0. 1%～19. 4%，平均遺傳距離為9. 8%。南山國(guó)家公園采集的花坪白環(huán)蛇與模式產(chǎn)地的花坪白環(huán)蛇樣本間的平均遺傳距離為0. 1%，遠(yuǎn)小于白環(huán)蛇屬物種間的平均遺傳距離（附表1）。因此，分子系統(tǒng)發(fā)育分析和遺傳距離結(jié)果均支持采集于南山國(guó)家公園的白環(huán)蛇屬標(biāo)本為花坪白環(huán)蛇。

3 討論

采自湖南南山國(guó)家公園的花坪白環(huán)蛇標(biāo)本在形態(tài)上與模式標(biāo)本基本一致，但在頭的形態(tài)、腹鱗數(shù)等形態(tài)上也存在一定差異，主要表現(xiàn)在頭寬與頭長(zhǎng)的比例上，采自湖南南山國(guó)家公園的標(biāo)本頭寬與頭長(zhǎng)比例接近于1，大于模式產(chǎn)地，可能是本次采集的標(biāo)本為路殺個(gè)體，其頭部遭遇輕微碾壓導(dǎo)致部分形態(tài)發(fā)生改變。

花坪白環(huán)蛇歷史文獻(xiàn)報(bào)道僅在其模式產(chǎn)地廣西花坪自然保護(hù)區(qū)有分布［6］。本研究報(bào)道了在湖南省南山國(guó)家公園金童山片區(qū)的新紀(jì)錄，擴(kuò)大了花坪白環(huán)蛇的分布范圍，豐富了湖南省及南山國(guó)家公園白環(huán)蛇屬物種的多樣性。本研究?jī)H基于1條花坪白環(huán)蛇標(biāo)本，未來應(yīng)加強(qiáng)野外調(diào)查，進(jìn)一步了解花坪白環(huán)蛇在南山地區(qū)的種群規(guī)模、生態(tài)習(xí)性等信息，為保護(hù)區(qū)建設(shè)和生物多樣性保護(hù)提供基礎(chǔ)資料。

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