楊靜

摘 要：為評(píng)估測(cè)試片法在食品菌落總數(shù)檢測(cè)中的應(yīng)用可行性及與傳統(tǒng)的平板計(jì)數(shù)法的一致性，選取大腸埃希氏菌、枯草芽孢桿菌和蠟樣芽孢桿菌作為標(biāo)準(zhǔn)菌株，同時(shí)采集生肉、水產(chǎn)品、乳制品、面食和果蔬等自然污染樣品，分別采用測(cè)試片法和平板計(jì)數(shù)法對(duì)上述樣品進(jìn)行菌落總數(shù)檢測(cè)，并采用t檢驗(yàn)分析兩種方法測(cè)定結(jié)果的一致性。結(jié)果表明，兩種方法對(duì)標(biāo)準(zhǔn)菌株的檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著差異（P＞0.05），對(duì)自然污染樣品的檢測(cè)也無(wú)顯著差異（P＞0.05），其中現(xiàn)制面條菌落總數(shù)最多，牛肉菌落總數(shù)最少。這表明測(cè)試片法與平板計(jì)數(shù)法的檢測(cè)結(jié)果具有很好的一致性。測(cè)試片法操作簡(jiǎn)便，為食品菌落總數(shù)快速檢測(cè)提供了可行的技術(shù)手段，具有一定的應(yīng)用前景。

關(guān)鍵詞：測(cè)試片法；平板計(jì)數(shù)法；食品；菌落總數(shù)

Feasibility Analysis of the Application of Test Slice Method in the Detection of Total Number of Food Colonies

YANG Jing

（Shaanxi Provincial Institute of Product Quality Supervision and Inspection， Xian 710048， China）

Abstract： In order to evaluate the application feasibility of the test slice method in the detection of the total number of food colonies and the consistency with the traditional plate counting method， Escherichia coli， Bacillus subtilis and Bacillus cereus are selected as the standard strains， and natural contaminated samples such as raw meat， aquatic products， dairy products， pasta and fruits and vegetables are collected. The total number of colonies are detected by the test slice method and the plate counting method， and t - test is used to analyze the consistency of the two methods. The results show that there is no significant difference between the two methods in the detection of standard strains （P＞0.05）， and there is no significant difference in the detection of natural contaminated samples

（P＞0.05）， in which the total number of fresh noodle colonies is the highest， and the total number of beef colonies is the least. This shows that the test results of the test slice method and the plate counting method are in good agreement. The test slice method is easy to operate and provides a feasible technical means for the rapid detection of the total number of food colonies， and has a certain application prospect.

Keywords： test slice method; plate counting method; food; total colony

食品安全與人們的健康息息關(guān)系，因此食品安全問(wèn)題一直備受關(guān)注。食品安全熱點(diǎn)數(shù)據(jù)顯示，微生物污染等成為食品安全的重點(diǎn)關(guān)注領(lǐng)域，因此構(gòu)建快速、準(zhǔn)確、高效的微生物檢測(cè)體系對(duì)于高效開展食品安全監(jiān)管工作十分必要[1]。菌落總數(shù)是判定食品被細(xì)菌污染的程度，反映食品新鮮程度和衛(wèi)生狀況的重要微生物指標(biāo)之一[2]。傳統(tǒng)的平板計(jì)數(shù)法是目前最常用的一種活菌計(jì)數(shù)方法，但其操作流程煩瑣、檢測(cè)周期長(zhǎng)、人力成本高等，制約了其在快速檢測(cè)領(lǐng)域的應(yīng)用[3]。為此，人們相繼提出了一系列簡(jiǎn)便、快捷、敏感、準(zhǔn)確的檢測(cè)新思路，測(cè)試片法是近年來(lái)不斷取得進(jìn)展的一種新型檢測(cè)方法。該方法是以紙片、紙膜、膠片等作為培養(yǎng)基載體，將特定的培養(yǎng)基和顯色物質(zhì)附著在上面，通過(guò)微生物在上面的生長(zhǎng)、顯色來(lái)測(cè)定食品微生物的方法[4]。該方法操作簡(jiǎn)單、結(jié)果直觀、無(wú)須人工計(jì)數(shù)等[5]。然而，由于其發(fā)展與應(yīng)用時(shí)間較短，其檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性及與傳統(tǒng)方法的一致性有待進(jìn)一步評(píng)估和驗(yàn)證。因此，本研究對(duì)比分析測(cè)試片法與平板計(jì)數(shù)法的檢測(cè)結(jié)果，旨在評(píng)價(jià)該方法的可靠性和應(yīng)用前景，為實(shí)現(xiàn)食品微生物快速高效檢測(cè)提供理論和技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試劑與儀器

CompactDry菌落總數(shù)測(cè)試片（日本Nissui公司）、平板計(jì)數(shù)瓊脂（Plate Count Agar，PCA）培養(yǎng)基（北京陸橋技術(shù)股份有限公司）、營(yíng)養(yǎng)肉湯（北京陸橋技術(shù)股份有限公司）、生理鹽水。SPX-150B恒溫培養(yǎng)搖床（武漢匯誠(chéng)生物科技有限公司）、恒溫水浴箱（北京科偉永興儀器有限公司）、冰箱（海爾）、分析天平（深州市博途電子科技有限公司）、均質(zhì)器（法國(guó)梅里埃公司）、振蕩器（金壇市城西春蘭實(shí)驗(yàn)儀器廠）、微量移液器及無(wú)菌錐形瓶等。

1.1.2 標(biāo)準(zhǔn)樣品

選取大腸埃希氏菌ATCC43888、枯草芽孢桿菌ATCC6633、蠟樣芽胞桿菌CMCC63303作為標(biāo)準(zhǔn)菌株。

1.1.3 自然污染樣品

于市場(chǎng)上隨機(jī)采購(gòu)易受細(xì)菌污染的生肉（豬肉、牛肉、雞肉、鴨肉）、水產(chǎn)品（魚、蝦）、乳制品（生牛乳）、面食（面粉、現(xiàn)制面條）及果蔬（鮮果、新鮮蔬菜、新榨果汁）各20批次。

1.2 樣品測(cè)定

標(biāo)準(zhǔn)樣品制備時(shí)分別取大腸埃希氏菌ATCC43888、枯草芽孢桿菌ATCC6633和蠟樣芽胞桿菌CMCC63303各1 mL加入10 mL營(yíng)養(yǎng)肉湯中，于恒溫培養(yǎng)搖床內(nèi)在36 ℃條件下振蕩（160 r·min-1）培養(yǎng)24 h，調(diào)節(jié)光密度（Optical Density，OD）至1.0，制成菌懸液，再使用生理鹽水稀釋菌液至10-3、10-5和10-7。測(cè)定方法參照CompactDry菌落總數(shù)測(cè)試片說(shuō)明書。

自然污染樣品制備和平板計(jì)數(shù)法的應(yīng)用參照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測(cè)定》（GB 4789.2—2016）。每種方法進(jìn)行6次重復(fù)實(shí)驗(yàn)。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

使用Excel軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，使用SPSS軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)，分析兩種方法的差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)樣品菌落總數(shù)的測(cè)定

使用測(cè)試片法和平板計(jì)數(shù)法測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)樣品的菌落總數(shù)，結(jié)果如表1所示，3種微生物在10-7、10-5和10-3 3種稀釋度下的菌落總數(shù)在2.34×101～

4.27×105 CFU·mL-1；t檢驗(yàn)結(jié)果表明，兩種方法之間不存在顯著差異（P＞0.05），說(shuō)明采用測(cè)試片法測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)樣品的菌落總數(shù)可行。

2.2 自然污染樣品菌落總數(shù)的測(cè)定

采用測(cè)試片法和平板計(jì)數(shù)法對(duì)不同類別的自然污染樣品的菌落總數(shù)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如表2所示。每個(gè)品類下，兩種檢測(cè)方法得到的菌落總數(shù)相近；t檢驗(yàn)結(jié)果均為P＞0.05，表明兩種方法間的差異不顯著，即可以認(rèn)為這兩種方法在該樣本上的檢測(cè)結(jié)果是等效的。相較而言，現(xiàn)制面條的菌落總數(shù)最多，牛肉的菌落總數(shù)最少。

3 結(jié)論與討論

本研究采用測(cè)試片法與平板計(jì)數(shù)法對(duì)標(biāo)準(zhǔn)樣品及自然污染食品樣品中的菌落總數(shù)進(jìn)行了測(cè)定，并運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析了兩者的差異，以評(píng)估測(cè)試片法在食品檢測(cè)中的應(yīng)用可行性。結(jié)果顯示，無(wú)論是在標(biāo)準(zhǔn)樣品還是自然污染樣品的檢測(cè)中，兩種方法所得結(jié)果均表現(xiàn)出高度的一致性，且t檢驗(yàn)表明兩者間不存在顯著差異（P＞0.05）。這證明了測(cè)試片法的準(zhǔn)確性與平板計(jì)數(shù)法相當(dāng)，可作為食品微生物學(xué)檢驗(yàn)中菌落總數(shù)測(cè)定的有效替代或補(bǔ)充方法。對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)樣品（大腸埃希氏菌ATCC43888、枯草芽孢桿菌ATCC6633、蠟樣芽胞桿菌CMCC63303）的檢測(cè)，測(cè)試片法在不同稀釋度下測(cè)得的菌落總數(shù)與平板計(jì)數(shù)法測(cè)得的菌落總數(shù)接近，驗(yàn)證了測(cè)試片法的可靠性和穩(wěn)定性。在自然污染樣品的檢測(cè)中，本研究涵蓋了生肉、水產(chǎn)品、乳制品、面食及果蔬等多種易受細(xì)菌污染的食品類型，兩種檢測(cè)方法均能有效評(píng)估這些樣品的微生物污染水平，且在所有類別中，測(cè)試片法與平板計(jì)數(shù)法所獲得的菌落總數(shù)數(shù)據(jù)相似，進(jìn)一步證實(shí)了測(cè)試片法的廣泛適用性。不同類型食品在生產(chǎn)加工、貯存運(yùn)輸?shù)拳h(huán)節(jié)存在不同的污染風(fēng)險(xiǎn)，導(dǎo)致產(chǎn)品的微生物含量差異較大?，F(xiàn)制面條的菌落總數(shù)最高，可能與其加工環(huán)境有關(guān)，提示需要加強(qiáng)對(duì)即食食品加工過(guò)程的衛(wèi)生

管理。

參考文獻(xiàn)

[1]席雪琴.食品微生物檢驗(yàn)方法和質(zhì)量影響因素與控制措施[J].工業(yè)微生物，2024，54（2）：194-196.

[2]李學(xué)輝，唐巍飚，陳希堯，等.凈水機(jī)水質(zhì)菌落總數(shù)的不確定度評(píng)定[J].中國(guó)計(jì)量，2020（12）：110-112.

[3]周云.平板計(jì)數(shù)法測(cè)定豆?jié){中的大腸菌群[J].食品工業(yè)，2023，44（11）：316-318.

[4]蘇曉燕，楊菲，劉萬(wàn)敏，等.測(cè)試片法在細(xì)菌菌落總數(shù)檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值研究[J].人民軍醫(yī)，2019，62（7）：

628-631.

[5]劉賀，竇斐，費(fèi)春楠，等.測(cè)試片法對(duì)醫(yī)療機(jī)構(gòu)環(huán)境物體表面細(xì)菌檢測(cè)效果評(píng)價(jià)[J].中國(guó)消毒學(xué)雜志，2015，32（8）：818-820.