高興運(yùn)

摘 要：目的：建立液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定雞蛋中金剛乙胺殘留量的分析方法，為雞蛋食品安全檢測工作提供技術(shù)支持。方法：采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定雞蛋中金剛乙胺的殘留量。結(jié)果：在質(zhì)量濃度為1～

20 ng·mL-1，金剛乙胺的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 8，回收率為84.3%～91.6%，定量限為1 μg·kg-1。結(jié)論：該方法檢測效果良好，可以應(yīng)用于雞蛋中金剛乙胺含量的實(shí)際監(jiān)測工作中。

關(guān)鍵詞：液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法；雞蛋；基質(zhì)效應(yīng)；金剛乙胺

Study on the Determination of Residual Amantadine in Eggs by Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry

GAO Xingyun

（Suixi County Market Supervision and Inspection Institute， Huaibei City， Anhui Province， Huaibei 235199， China）

Abstract： Objective： To establish an analytical method for the determination of rimantadine residue in eggs by liquid chromatography-tandem mass spectrometry， and to provide technical support for the detection of egg food safety. Method： The residue of rimantadine in eggs was determined by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Result： The linear relationship of rimantadine was good at the mass concentration of 1～20 ng·mL-1， the correlation coefficient was 0.999 8， the recovery was 84.3%～91.6%， and the limit of quantitation was 1 μg·kg-1. Conclusion： The method has good detection effect and can be applied to the actual monitoring of rimantadine content in eggs.

Keywords： liquid chromatography tandem mass spectrometry; eggs; matrix effect; diamond ethylamine

在母雞養(yǎng)殖中，養(yǎng)殖企業(yè)為獲取較高利潤，存在投喂母雞金剛乙胺的現(xiàn)象。若雞蛋中金剛乙胺含量超標(biāo)，會嚴(yán)重影響孕婦、老年人的身體健康。因此，確保雞蛋的食用安全至關(guān)重要。雞蛋作為人們?nèi)粘Ｉ钪械某Ｒ娛澄铮瑸榇_保雞蛋的食用安全，應(yīng)對其金剛乙胺殘留含量進(jìn)行有效測定。測定金剛乙胺殘留量的方法有多種，包括氣相色譜法、液相色譜法等，但二者皆具有靈敏度低、預(yù)處理煩瑣等問題。而液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法不僅具有較高的靈敏度，還具有高選擇與高通量的特點(diǎn)，可以廣泛應(yīng)用于農(nóng)藥殘留、獸藥殘留等檢測工作中。因此，在檢測雞蛋內(nèi)金剛乙胺殘留量時，可選擇液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行測定，可獲得較好的測定效果?；诖耍疚慕⒁合嗌V串聯(lián)質(zhì)譜法測定雞蛋中金剛乙胺殘留量的方法，旨在為雞蛋食品安全檢測工作提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器設(shè)備

雞蛋，采購于附近超市。

金剛乙胺、甲醇、甲酸、乙酸銨、正己烷、三氯乙酸、乙腈、美金剛D6標(biāo)準(zhǔn)品和純凈水等。

液質(zhì)聯(lián)用儀，美國沃特世公司；渦旋儀、N-EVAP氮吹儀，美國Organomation公司；高速冷凍離心機(jī)，平凡儀器儀表有限公司；電子天平，瑞士Mettler-Toledo企業(yè)；尼龍微孔濾膜，天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；固相萃取小柱，美國安捷倫科技公司。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

（1）金剛乙胺標(biāo)準(zhǔn)中間液配制（100 ng·mL-1）。吸取金剛乙胺標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 μg·mL-1）100 μL至

100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度線，于-18 ℃的環(huán)境中避光保存。

（2）美金剛D6工作溶液（100 ng·mL-1）。量取100.0 μL美金剛D6標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 μg·mL-1）于

100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度線，于-18 ℃保存。

（3）金剛乙胺標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。吸取0.1 mL、

0.2 mL、0.5 mL、1.0 mL和2.0 mL的金剛乙胺標(biāo)準(zhǔn)中間液于10 mL容量瓶中，并向其中加入0.20 mL美金剛D6工作溶液，用初始比例流動相定容至刻度線，配制成質(zhì)量濃度分別為1 ng·mL-1、2 ng·mL-1、

5 ng·mL-1、10 ng·mL-1和20 ng·mL-1的金剛乙胺標(biāo)準(zhǔn)工作溶液[1]。

1.3 樣品預(yù)處理

①利用四分法獲取200 g雞蛋，并將其粉碎至均勻，冷藏存放備用。②稱取2.00 g樣本于離心管中，加入100 μL美金剛D6工作溶液與10 mL 1%乙酸-乙腈混合液，渦旋處理30 s后，利用超聲振蕩器處理20 min。以8 000 r·min-1離心5 min，并將上清液提取至離心管內(nèi)。再次添加10 mL 1%乙酸-乙腈混合液，進(jìn)行重復(fù)操作，得到上清提取液。③將提取液放置于活化后的PCX柱中，分別用5 mL水與甲醇進(jìn)行淋洗。倒出液體，并用真空泵抽干，再用6 mL 5%氨水甲醇溶液進(jìn)行洗脫與收集。經(jīng)45 ℃氮吹濃縮操作后，過0.22 μm濾膜，供儀器分析[2]。

1.4 色譜條件

色譜柱柱溫為40 ℃，流速為0.3 mL·min-1，樣品體積為2.0 μL，流動相A為0.1%甲酸水溶液，流動相B為甲醇[3]。洗脫條件如表1所示。

1.5 質(zhì)譜條件

質(zhì)譜采用電噴霧離子源進(jìn)行正離子掃描，離子模式皆為多反應(yīng)監(jiān)測模式。霧化器壓力為40 psi，毛細(xì)管的電壓值為4.5 kV，干燥器溫度為300 ℃，流速為11 L·min-1[4]。其他質(zhì)譜條件如表2所示。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取效果的對比

金剛乙胺內(nèi)部含有極性氨基基團(tuán)，能夠溶于極性有機(jī)溶劑，在酸性條件下，便于對其進(jìn)行解離提取。雞蛋內(nèi)部含有大量的蛋白質(zhì)、磷脂等物質(zhì)，通過乙腈的使用可以促進(jìn)蛋白質(zhì)沉淀，有效降低基質(zhì)的影響，三氯乙酸也可以幫助蛋白質(zhì)沉淀。以《出口動物組織中抗病毒類藥物殘留量的測定 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》（SN/T 4253—2015）為依據(jù)，試驗(yàn)利用空白樣品加標(biāo)的方法比較8種溶劑[甲醇、乙腈、1%甲酸乙腈、2%甲酸乙腈、5%甲酸乙腈、1%乙酸乙腈、1%三氯乙酸乙腈、異丙醇-2%三氯乙酸（1∶1）]對金剛乙胺提取率的影響[5]，加標(biāo)濃度為10 μg·kg-1。由表3可知，1%乙酸乙腈的提取效果最好，提取率為86.2%。因此，試驗(yàn)將1%乙酸乙腈作為萃取液。

2.2 凈化方式的對比

試驗(yàn)通過HLB柱、MCX柱、PCX柱、SCX柱、C18柱和PSA柱等方式進(jìn)行凈化，比較回收率結(jié)果。由表4可知，PCX柱的凈化效果最好，回收率為81%。因此，將PCX柱作為凈化柱。

2.3 色譜條件的對比

因金剛乙胺內(nèi)部含有氨基，在流動相中加入一定量的酸可以通過離子化效應(yīng)提升響應(yīng)值。試驗(yàn)分別比較流動相為甲醇-0.1%甲酸水溶液、甲醇-1%甲酸水溶液、甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.1%甲酸水溶液和乙腈-1%甲酸水溶液時對10 ng·mL-1金剛乙胺的分離效果。結(jié)果表明，甲醇-0.1%甲酸水溶液的峰型與峰寬最好。因此，將甲醇-0.1%甲酸水溶液作為本試驗(yàn)的流動相。

此外，試驗(yàn)分別比較了柱溫為25 ℃、30 ℃、35 ℃和40 ℃時對金剛乙胺出峰效果的影響。結(jié)果表明，柱溫為40 ℃時，流動相的溶解度達(dá)到最大，且柱壓下降。因此，柱溫選擇40 ℃。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

試驗(yàn)以目標(biāo)物濃度為橫坐標(biāo)，以對應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，在質(zhì)量濃度為1～20 ng·mL-1，金剛乙胺的線性方程為Y=1.091 053x-0.015 113，相關(guān)系數(shù)為0.999 8，信噪比（S/N）為19.437，定量限為1 μg·kg-1。

2.5 基質(zhì)效應(yīng)的處理

基質(zhì)效應(yīng)一般存在于殘留物質(zhì)分析過程中，會對殘留物檢測結(jié)果的精確性造成影響。雞蛋樣品在通過預(yù)處理工作后，仍會存在少量的磷脂、膽固醇等基本物質(zhì)，會對待測物造成基質(zhì)增強(qiáng)或基質(zhì)抑制效應(yīng)，從而導(dǎo)致金剛乙胺的檢測結(jié)果出現(xiàn)偏離?；|(zhì)效應(yīng)ME=空白基質(zhì)標(biāo)曲斜率/（溶劑標(biāo)曲斜率-1）×100%。當(dāng)ME值大于0時，會形成基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)。當(dāng)ME值小于0時，會形成基質(zhì)減弱效應(yīng)。一般而言，弱基質(zhì)效應(yīng)的ME值為-20%～20%，此時的基質(zhì)干擾程度比較低。中等程度的基質(zhì)效應(yīng)的ME值處于-50%～-20%或20%～50%。當(dāng)ME值低于-50%或高于50%，則可以判斷其為強(qiáng)基質(zhì)效應(yīng)，應(yīng)采取相應(yīng)措施來進(jìn)行基質(zhì)效應(yīng)的補(bǔ)償。通過對雞蛋樣品金剛乙胺的基質(zhì)效應(yīng)計(jì)算，其ME值為-21.80%，處于中等程度的基質(zhì)效應(yīng)。基于此，檢測人員可通過同位素內(nèi)標(biāo)法加以解決，這是因?yàn)橥凰嘏c化合物性質(zhì)相似，可提高測量結(jié)果的準(zhǔn)確性[6]。美金剛D6是金剛乙胺的同位素，因此，實(shí)驗(yàn)可通過美金剛進(jìn)行內(nèi)標(biāo)校正，進(jìn)而有效降低基質(zhì)效應(yīng)，確保檢測效果的真實(shí)有效。

2.6 回收率與精密度試驗(yàn)

在陰性雞蛋樣品中分別添加質(zhì)量濃度為1 ng·mL-1、2 ng·mL-1和10 ng·mL-1的金剛乙胺標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，平行測定6次，計(jì)算回收率以及精密度。由表5可知，金剛乙胺的回收率在84.3%～91.6%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在3.3%～6.8%。

2.7 實(shí)際樣品測定

為驗(yàn)證方法的可行性，在超市隨機(jī)選擇40批雞蛋進(jìn)行檢測。結(jié)果表明，40批雞蛋中均未檢出金剛乙胺殘留物。

3 結(jié)論

本文采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定雞蛋中的金剛乙胺含量。結(jié)果表明，在1～20 ng·mL-1，金剛乙胺的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 8，回收率在84.3%～91.6%，定量限為1 μg·kg-1。該方法的檢測效果良好，可有效檢測雞蛋中金剛乙胺的含量。

參考文獻(xiàn)

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