韓振 何建清 葛彥宏 劉海鑫 徐東 張格杰

摘 要 從西藏農(nóng)牧學(xué)院校園采集到一株野生亞側(cè)耳（編號(hào)為HGHZ02），為了使該菌種得到更好的開(kāi)發(fā)和利用，對(duì)其進(jìn)行了鑒定和生物學(xué)特性研究。通過(guò)形態(tài)學(xué)和ITS序列聚類分析，鑒定菌株HGHZ02與勺狀亞側(cè)耳（Hohenbuehelia petaloides）的相似度達(dá)到100%，但通過(guò)形態(tài)學(xué)鑒定與地生亞側(cè)耳形態(tài)特征最相似，因此將菌株HGHZ02鑒定為地生亞側(cè)耳（Hohenbuehelia geogenia）。菌株HGHZ02菌絲最適生長(zhǎng)碳源為麥芽糖，最適生長(zhǎng)氮源為麥芽浸粉，最適溫度為25? ℃，最適pH為pH 7.0，最適無(wú)機(jī)鹽為磷酸氫二鉀。正交試驗(yàn)結(jié)果表明，菌株HGHZ02最佳生長(zhǎng)因子組合為麥芽糖 25.0 g/L、麥芽浸粉 3.0 g/L、pH 7.0 和溫度 26? ℃。

關(guān)鍵詞 地生亞側(cè)耳；分離；鑒定；生物學(xué)特性

亞側(cè)耳屬（Hohenbuehelia）屬于擔(dān)子菌門(mén)（Basidiomycota），傘菌綱（Agaricomycetes），傘菌目（Agaricales），側(cè)耳科（Pleurotaceae）［1］。該屬分布于中國(guó)、蘇聯(lián)、日本、歐洲及北美等地區(qū)［2］，在中國(guó)多省有分布，主要單生或小群體生于針葉或闊葉樹(shù)死木上，稀生于草地或灌叢中［3］。目前，全球共記錄亞側(cè)耳屬有130多個(gè)，在中國(guó)報(bào)道的有12種，即亞側(cè)耳（Hohenbuehelia serotina）、黑亞側(cè)耳（H.nigra）、灰白亞側(cè)耳（H.grisea）、橙囊亞側(cè)耳（H.aurantiocystis）、勺形亞側(cè)耳（H.petaloides）、巨囊亞側(cè)耳（H.ingentimetuloidea）、漸狹亞側(cè)耳（H.angustata）、腎形亞側(cè)耳（H.reniformis）、橄欖綠色亞側(cè)耳（H.olivacea）、暗藍(lán)亞側(cè)耳（H.atrocaerulea）、地生亞側(cè)耳（H.geogenia）和小亞側(cè)耳（H.fluxilis） ［4］。

研究表明，亞側(cè)耳屬具有抗腫瘤［5-6］、抗輻射［7］、抗疲勞［8］和衰老［9］等功效，具有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分。據(jù)報(bào)道，小亞側(cè)耳（H.fluxilis）、勺狀亞側(cè)耳（H.petaloides）和腎形亞側(cè)耳（H.reniformis）具有食用價(jià)值［10］。研究表明，亞側(cè)耳屬的無(wú)性型菌絲都具有捕食線蟲(chóng)的作用［11-15］，它們通過(guò)線蟲(chóng)被帶有膠粘細(xì)胞的菌絲俘獲，菌絲侵入體內(nèi)，將蟲(chóng)體消化或者分生孢子遇到線蟲(chóng)膨脹就會(huì)產(chǎn)生粘性，隨后粘住線蟲(chóng)表皮［14］。亞側(cè)耳屬真菌種類較多，但馴化栽培成功的較少，已馴化成功的有亞側(cè)耳（H.serotina）、勺形亞側(cè)耳（H.petaloides）和腎形亞側(cè)耳（H.reniformis），亞側(cè)耳（H.serotina）已實(shí)現(xiàn)商業(yè)化栽培。雖然亞側(cè)耳屬真菌具有較大的潛在經(jīng)濟(jì)價(jià)值，但由于亞側(cè)耳屬的野生資源量分布較少，產(chǎn)量低，采摘難，制約著對(duì)亞側(cè)耳屬的進(jìn)一步研究。目前，關(guān)于地生亞側(cè)耳的基礎(chǔ)生物學(xué)研究還未見(jiàn)報(bào)道，為了更科學(xué)地對(duì)地生亞側(cè)耳進(jìn)行開(kāi)發(fā)利用，同時(shí)也為地生亞側(cè)耳的物種保護(hù)提供基礎(chǔ)性資料，筆者從西藏農(nóng)牧學(xué)院校園草坪上采集到1株地生亞側(cè)耳子實(shí)體，采用組織分離法獲得其菌絲體，通過(guò)形態(tài)特征和ITS序列聚類分析對(duì)其進(jìn)行鑒定，單因素和正交試驗(yàn)探討了不同營(yíng)養(yǎng)因子對(duì)該菌株菌絲生長(zhǎng)影響，以期為該菌種的開(kāi)發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株 供試菌株子實(shí)體采自西藏農(nóng)牧學(xué)院校園草坪（緯度 94°34′，經(jīng)度 29°67′，海拔 3 100? m），現(xiàn)保存于西藏農(nóng)牧學(xué)院大型真菌標(biāo)?? 本館。

1.1.2 供試培養(yǎng)基 母種分離培養(yǎng)基采用PDA 培養(yǎng)基［16］：馬鈴薯塊200 g（去皮切片煮汁），葡萄糖 20 g，瓊脂粉20 g，水1 000? mL，pH 6.5。

碳源、氮源測(cè)定培養(yǎng)基采用馬鈴薯綜合培養(yǎng)基［16］：馬鈴薯塊 200 g（去皮切片煮汁），蛋白胨? 2 g，磷酸二氫鉀 1 g、 磷酸氫二鉀0.5 g、硫酸鎂?? 0.5 g、瓊脂粉20 g，水1 000 mL，pH自然。

無(wú)機(jī)鹽基礎(chǔ)培養(yǎng)基：馬鈴薯塊 200 g（去皮切片煮汁），葡萄糖 20 g，酵母膏2 g，瓊脂粉20 g， VB1 100 mg，蒸餾水1 000 mL，pH自然。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 菌種分離 采用組織分離法［17-18］進(jìn)行菌種分離，在超凈工作臺(tái)內(nèi)將采集到的2株地生亞側(cè)耳子實(shí)體用75%的酒精將表面進(jìn)行消毒，將子實(shí)體撕開(kāi)，用解剖刀取柄蓋交界處黃豆粒大小的組織置于PDA平板上，25? ℃恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行暗培養(yǎng)，菌絲多次進(jìn)行轉(zhuǎn)接，得到3組純培養(yǎng)物，將其中一個(gè)編號(hào)為HGHZ02作試驗(yàn)菌株。

1.2.2 形態(tài)學(xué)鑒定

對(duì)采集到的新鮮標(biāo)本用解剖刀縱切子實(shí)體觀察其菇蓋形狀和顏色、菌肉顏色和質(zhì)地，菌褶形狀和著生情況，菌柄著生方式和質(zhì)地、中實(shí)或中空等特征；采用徒手切片的方法，在光學(xué)和掃描電鏡下觀察其分生孢子和擔(dān)孢子各80個(gè)，菌褶等形態(tài)特征，參照《中國(guó)大型菌物資源圖鑒》［19］進(jìn)行傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)鑒定。

1.2.3 分子生物學(xué)鑒定 將分離純化的菌株HGHZ02、HGHZ03、HGHZ04進(jìn)行DNA的提取，利用 ITS1（ 5′-TCCGTAGGTGAACCTGC- GG-3′）和 ITS4（ 5′-TCCTCCGCTTATTGATA-TGC-3′）通用引物進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增測(cè)序鑒定［20］，三者序列一致將測(cè)序結(jié)果獲得的ITS序列在NCBI （National Center for Biotechnology Information）數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行Blast比對(duì)分析。自測(cè)序列和 GenBank 下載的相關(guān)序列用MEGA-11 進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析并構(gòu)建進(jìn)化樹(shù) ［21］。

1.2.4 菌絲體生物學(xué)特性研究 不同碳源對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響：以無(wú)碳源馬鈴薯綜合培養(yǎng)基? （“1.1.2”節(jié)）為空白對(duì)照，分別設(shè)置7種碳源（葡萄糖、果糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖、木糖、淀粉）作為處理組，濃度均為20 g/L。用直徑為8 mm打孔器從菌種培養(yǎng)基同一半徑處打孔取菌塊，菌面朝下接種在7種培養(yǎng)基上，25?? ℃培養(yǎng)，當(dāng)有一個(gè)處理菌絲長(zhǎng)滿時(shí)，停止試驗(yàn)，十字交叉法測(cè)量菌絲生長(zhǎng)直徑，每處理 5個(gè)重復(fù)。菌絲生長(zhǎng)速度? （mm/d）=（最后一次測(cè)量菌落直徑-第1次測(cè)量菌落直徑）/培養(yǎng)時(shí)間。

不同氮源對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響：以無(wú)氮源馬鈴薯綜合培養(yǎng)基（“1.1.2”節(jié)）為空白對(duì)照，分別設(shè)置7種氮源（蛋白胨、酵母浸粉、尿素、 硝酸鈉、硫酸銨、牛肉膏、酵母膏）作為處理組，濃度均為? 20 g/L。其他操作同碳源影響試驗(yàn)。

溫度試驗(yàn)：設(shè)置5個(gè)溫度梯度（15 ℃、20 ℃、25 ℃、30 ℃、35? ℃），其他操作同碳源影響試驗(yàn)。

不同pH對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響：設(shè)置5個(gè)pH梯度（6、7、8、9、10），其他操作同碳源影響試驗(yàn)。

不同無(wú)機(jī)鹽對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響：以無(wú)機(jī)鹽基礎(chǔ)培養(yǎng)基不添加無(wú)機(jī)鹽為空白對(duì)照，設(shè)置分別加入硫酸鎂（MgSO4）、磷酸氫二鉀（K2HPO4）、磷酸二氫鉀（KH2PO4），作為不同無(wú)機(jī)鹽處理，其他操作同碳源影響試驗(yàn)。

1.2.5 正交試驗(yàn) 選擇最佳碳源、氮源、溫度和pH進(jìn)行L9（34） 4因子3水平正交試驗(yàn)（表1）。

1.2.6 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS 22.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行整理和方差分析。菌絲日均生長(zhǎng)速率以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 形態(tài)學(xué)鑒定

2.1.1 子實(shí)體形態(tài)特征 野生擔(dān)子果群生或近叢生于草地上，子實(shí)體中等大小，菌蓋直徑3～10 cm，初期勺狀，后期花瓣?duì)?，初期淡肉桂色，后期淡肉桂色至淺黃褐色；邊緣光滑、波浪狀，中下部具白色至灰白色細(xì)小絨毛。菌肉白色，有蘑菇香味。菌褶白色，稠密、不等長(zhǎng)，延生，窄。菌柄長(zhǎng)? 2～4 cm，直徑0.7～2.0 cm，與菌蓋同色，實(shí)心，具白色至灰白色細(xì)小絨毛（圖1-A、1-B）。囊狀體多（13.9～22.5）μm×（48.8～76.5）? μm，梭形，近紡錘形（圖1-F）。擔(dān)孢子（5.18～6.05） μm×? （3.36～4.05） μm，光滑、無(wú)色，橢圓形，非淀粉質(zhì)（圖1-G）。孢子印為白色。與其親緣關(guān)系最近的勺狀亞側(cè)耳（H.petalodes）相比，菌株HGHZ02的子實(shí)體較大，菌蓋和菌柄顏色更深，菌肉有蘑菇香味，孢子較小，生長(zhǎng)環(huán)境為群生生于草坪上。

2.1.2 菌株?duì)I養(yǎng)菌絲的形態(tài)特征 在PDA平板中培養(yǎng)的菌落呈白色，絮狀，氣生菌絲多且致密（圖1-C）。但菌絲生長(zhǎng)緩慢，菌絲體5 d開(kāi)始擴(kuò)展，兩個(gè)星期向周圍延伸1 cm。分生孢子（3.5～5.8） μm×（5.4～12.1）? μm，橢圓形（圖1-E）。在光學(xué)顯微鏡下，菌絲細(xì)胞壁較薄，有隔膜，無(wú)色透明，均一，分枝均勻，菌絲直徑2.7～4.2 μm。鎖狀聯(lián)合明顯（圖1-D）。

2.2 分子生物學(xué)鑒定

對(duì)菌株HGHZ02菌絲體經(jīng)PCR擴(kuò)增及測(cè)序分析表明，菌株HGHZ02 ITS序列長(zhǎng)度為669 bp。GenBank登錄號(hào)為OP692717。將其ITS序列進(jìn)行Blast序列對(duì)比，采用MEGA-11構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)，菌株HGHZ02所有建樹(shù)亞側(cè)耳屬的菌株相似性均高，其中與勺狀亞側(cè)耳（H.petalodes）相似度達(dá)到100%，并獲得100%的支持率（圖2）。但從形態(tài)學(xué)特征方面看，菌株HGHZ02與勺狀亞側(cè)耳（H.petalodes）存在明顯的差異，與地生亞側(cè)耳的形態(tài)學(xué)特征最相似［19］，因此，結(jié)合形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)特征，將菌株HGHZ02鑒定為側(cè)耳科，亞側(cè)耳屬，地生亞側(cè)耳（H.geogenia）。該種為西藏新紀(jì)錄種。

2.3 菌絲體生物學(xué)特性

2.3.1 不同碳源對(duì)菌株HGHZ02菌絲生長(zhǎng)速率的影響 由表2和圖3可見(jiàn)，菌株HGHZ02在供試7種碳源中均能生長(zhǎng)，菌絲生長(zhǎng)速率最快的是麥芽糖和葡萄糖，菌絲生長(zhǎng)速率分別為2.57 mm/d和2.30 mm/d，菌絲生長(zhǎng)速率顯著大于其他碳源（P＞0.05），且菌絲菌絲濃密均勻、長(zhǎng)勢(shì)旺盛，氣生菌絲發(fā)達(dá)，其次是乳糖和果糖，菌絲生長(zhǎng)速率分別為1.87 mm/d和1.83 mm/d，菌絲生長(zhǎng)速率較差的是木糖、淀粉和蔗糖，菌絲生長(zhǎng)速率分別為1.53 mm/d、1.60 mm/d 和1.57 mm/d。對(duì)菌絲生長(zhǎng)速度、長(zhǎng)勢(shì)及數(shù)據(jù)的方差分析表明，菌株HGHZ02菌絲生長(zhǎng)最適宜的碳源為麥芽糖。

2.3.2 不同氮源對(duì)菌株HGHZ02菌絲生長(zhǎng)速率的影響 由表3和圖4可見(jiàn)，菌株HGHZ02在供試7種氮源中均能生長(zhǎng)，有機(jī)氮源較無(wú)機(jī)氮源對(duì)菌絲生長(zhǎng)更有利，其中以麥芽浸粉為氮源時(shí)菌絲生長(zhǎng)速率最快，菌絲生長(zhǎng)速率達(dá)2.47 mm/d，其次為酵母膏和蛋白胨，菌絲生長(zhǎng)速率分別達(dá)1.97 mm/d和1.83 mm/d，硫酸銨、硝酸鈉和尿素作為氮源時(shí)，菌絲生長(zhǎng)慢，長(zhǎng)勢(shì)弱，菌絲生長(zhǎng)速率分別為1.67 mm/d、1.53 mm/d和0.53 mm/d。對(duì)菌絲生長(zhǎng)速度、長(zhǎng)勢(shì)及數(shù)據(jù)的方差分析表明，菌株HGHZ02菌絲生長(zhǎng)最適宜的氮源是麥芽浸粉。

2.3.3 不同溫度對(duì)菌株HGHZ02菌絲生長(zhǎng)速率的影響 由表4和圖5可見(jiàn)，除在35? ℃條件下菌株HGHZ02菌絲不能生長(zhǎng)，在其他溫度條件下菌絲均可生長(zhǎng)。其中以25? ℃時(shí)菌絲生長(zhǎng)速率最快，菌絲生長(zhǎng)速率達(dá)2.30 mm/d，其次為20? ℃和? 15? ℃，菌絲生長(zhǎng)速率分別達(dá)1.57 mm/d和1.50 mm/d，30? ℃時(shí)，菌絲生長(zhǎng)慢，長(zhǎng)勢(shì)弱，菌絲生長(zhǎng)速率為? 1.20 mm/d。對(duì)菌絲生長(zhǎng)速度、長(zhǎng)勢(shì)及數(shù)據(jù)的方差分析表明，25? ℃更適宜菌株HGHZ02菌絲的生長(zhǎng)。

2.3.4 不同pH對(duì)菌株HGHZ02菌絲生長(zhǎng)速率的影響 由表5和圖6可見(jiàn)，菌株HGHZ02在5個(gè)不同的pH梯度下均能生長(zhǎng)。其中以pH 10.0時(shí)菌絲生長(zhǎng)速率最快，菌絲生長(zhǎng)速率達(dá)3.77 mm/d，其次為pH 7.0和pH 9.0，菌絲生長(zhǎng)速率分別達(dá)2.93 mm/d和2.77 mm/d，在pH 6.0和pH 8.0時(shí)，菌絲生長(zhǎng)慢，長(zhǎng)勢(shì)弱，菌絲生長(zhǎng)速率分別為2.47 mm/d和2.30 mm/d。綜合考慮培養(yǎng)基內(nèi)菌絲和氣生菌絲生長(zhǎng)情況，pH 7.0更適宜菌株HGHZ02菌絲的生長(zhǎng)。

2.3.5 不同無(wú)機(jī)鹽對(duì)菌株HGHZ02菌絲生長(zhǎng)速率的影響 由表6和圖7可見(jiàn)，菌株HGHZ02在供試3種無(wú)機(jī)鹽中均能生長(zhǎng)，其中以磷酸氫二鉀（K2HPO4）為無(wú)機(jī)鹽時(shí)菌絲生長(zhǎng)速率最快，菌絲生長(zhǎng)速率達(dá)3.50 mm/d，其次為磷酸二氫鉀（KH2PO4）和硫酸鎂（MgSO4）時(shí)，菌絲生長(zhǎng)速率分別達(dá)3.47? 和3.33 mm/d。對(duì)菌絲生長(zhǎng)速度、長(zhǎng)勢(shì)及數(shù)據(jù)的方差分析表明，選取K2HPO4作為無(wú)機(jī)鹽更有利于菌株HGHZ02菌絲的生長(zhǎng)。

2.3.6 正交試驗(yàn) 根據(jù)以上6個(gè)單因子試驗(yàn)結(jié)果，挑選影響較大的碳源、氮源、pH和溫度這4個(gè)因子3水平正交試驗(yàn)（表7，圖8）。碳源、氮源、pH和溫度這4個(gè)因子的極差R分別是0.38、? 0.20、0.33和0.45， 4因素對(duì)菌株HGHZ02菌絲生長(zhǎng)的影響依次表現(xiàn)為溫度＞碳源＞pH＞氮源。其中，碳源均值依次為X2=X3>X1，氮源均值依次為X3>X1>X2，pH均值依次為X2>X3>X1，溫度均值依次為X3>X2>X1，綜合考慮得到最佳組合為A2B3C2D3，即麥芽糖25.0 g/L、麥芽浸粉3.0 g/L、pH 7.0和溫度26? ℃，此時(shí)菌絲生長(zhǎng)速度最快，效果顯著。

3 結(jié)論與討論

結(jié)合形態(tài)學(xué)和ITS序列分析，將菌株HGHZ02鑒定為地生亞側(cè)耳（H.geogenia）。單因素試驗(yàn)結(jié)果表明：菌株HGHZ02菌絲生長(zhǎng)最適碳源為麥芽糖，最適氮源為麥芽浸粉，最適溫度為25? ℃，最適pH 7.0，最適無(wú)機(jī)鹽為K2HPO4，最適生長(zhǎng)因子為玉米粉。正交試驗(yàn)結(jié)果表明：菌株HGHZ02最佳因子組合為麥芽糖 25.0 g/L、麥芽浸粉 3.0 g/L、pH 7.0 和溫度 26? ℃。

分子生物學(xué)鑒定結(jié)果表明，菌株HGHZ02與勺狀亞側(cè)耳（H.petalodes）相似度達(dá)到100%，并獲得100%的支持率，但形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果表明，菌株HGHZ02與勺狀亞側(cè)耳（H.petalodes）在形態(tài)特征方面存在明顯的差異，菌株HGHZ02與更符合地生亞側(cè)耳（H.geogenia）的形態(tài)特征。生物學(xué)特性試驗(yàn)結(jié)果表明，地生亞側(cè)耳菌株（HGHZ02）在不同供試碳源條件下生長(zhǎng)適應(yīng)性較好，并且以麥芽糖和葡萄糖條件下菌絲生長(zhǎng)最好，差異不顯著，這與竹文坤等［15］勺狀亞側(cè)耳菌株生物學(xué)特性研究結(jié)果一致。在氮源方面，以蛋白胨、酵母浸粉、牛肉膏、酵母膏為氮源添加的培養(yǎng)基中地生亞側(cè)耳菌絲生長(zhǎng)較好，而以尿素、硝酸鈉和硫酸銨為氮源時(shí)生長(zhǎng)較差，說(shuō)明地生亞側(cè)耳菌株對(duì)有機(jī)氮源的利用率明顯高于無(wú)機(jī)氮源，這可能是由于有機(jī)氮含有更多營(yíng)養(yǎng)元素，如微量元素、維生素等，可以促進(jìn)菌絲生長(zhǎng)［22］。溫度單因素篩選試驗(yàn)顯示，地生亞側(cè)耳固體培養(yǎng)最適溫度為25? ℃，中低溫條件更適合地生亞側(cè)耳菌絲的生長(zhǎng)。在該試驗(yàn)中，地生亞側(cè)耳菌絲體表現(xiàn)出具有較廣泛的酸堿環(huán)境適應(yīng)性，pH的變化對(duì)于地生亞側(cè)耳菌絲體的生長(zhǎng)影響不大，這與前人的研究結(jié)果具有一致性［13］。在無(wú)機(jī)鹽方面，地生亞側(cè)耳在磷酸氫二鉀為無(wú)機(jī)鹽條件下菌絲體生長(zhǎng)迅速，這可能是由于地生亞側(cè)耳對(duì)于鉀營(yíng)養(yǎng)的要求偏高，或鉀可以促進(jìn)菌絲的生長(zhǎng)。

雖然擔(dān)子菌類產(chǎn)生無(wú)性孢子的種類和現(xiàn)象比較少，但少數(shù)傘菌也被證明可以通過(guò)無(wú)性孢子進(jìn)行無(wú)性繁殖［23］。在本研究中，觀察到地生亞側(cè)耳雙核菌絲產(chǎn)生的分生孢子，并且菌絲的培養(yǎng)時(shí)間與分生孢子的產(chǎn)生量呈正相關(guān)，這豐富了地生亞側(cè)耳生活史的內(nèi)容。

本研究對(duì)地生亞側(cè)耳菌株HGHZ02進(jìn)行了生物學(xué)特性的研究，其營(yíng)養(yǎng)成分、馴化栽培、藥理功效和生防藥劑利用方面有待進(jìn)一步研究，本試驗(yàn)對(duì)后續(xù)地生亞側(cè)耳的開(kāi)發(fā)研究和可持續(xù)利用提供了可能。

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Isolation，Identification and Biological Characteristics Analysis of a Wild Hohenbuehelia geogenia

HAN Zhen，HE Jianqing，GE Yanhong，LIU Haixin，XU Dong and ZHANG Gejie

（College of Plant Science，Tibet Agricultural and Animal Husbandry University，Linzhi?? Xizang 860000，China）

Abstract A wild mushroom，identified as HGHZ02 was collected on the campus of Tibet Agricultural and Animal Husbandry in Linzhi，Tibet.In order to fully develop and utilize the strain，its biological characterization was identified.The results showed that? strain HGHZ02? exhibited 100% similarity to the Hohenbuehelia petaloides through morphology and ITS sequence clustering analysis.The morphological characteristics were found to be most similar to those of Hohenbuehelia geogenia.Therefore，strain HGHZ02 was identified as the Hohenbuehelia geogenia.The biological characteristics showed that maltose was the most suitable carbon source for mycelium growth ，malt extractpowder was the most suitable nitrogen sourc，the optimum temperature was 25? ℃，the optimum pH was 10.0，and the optimum inorganic salt was K2HPO4.Orthogonal experiments showed that the best combination of growth factors for strain HGHZ02 includes? maltose at 25.0 g/L，malt extract powder at 3.0 g/L，pH at 7.0，and a temperature of 26? ℃.

Key words Hohenbuehelia geogenia; Isolation; Morphology; Biological properties

Received ?2022-11-09??? Returned 2023-02-04

Foundation item Key Science and Technology Project of Tibet Autonomous Region （No.XZ202001ZY0019N）；Graduate Student Innovation Program of Tibet Agricultural and Animal Husbandry College （No.YJS2022-49，No.YJS2022-45）.

First author HAN Zhen，female，master student.Research area：wild rare food and medicinal mushrooms.E-mail：1713858673@qq.com

Corresponding?? author HE? Jianqing，female，master supervisor.Research area：development and utilization of microbial resources.E-mail：hejianqingxz@163.com

（責(zé)任編輯：郭柏壽 Responsible editor：GUO Baishou）