周敏 王富豪 張明浩 劉子琪 郭靖華 郝培培 程有普

摘 要 除草劑藥害嚴重影響油菜產(chǎn)量，研究篩選預(yù)防藥害發(fā)生的生物標(biāo)記物，結(jié)合植物生長調(diào)節(jié)劑的藥害緩解機制，可有效解決油菜田敵草胺的藥害問題。以盆栽油菜為材料，研究敵草胺處理后抗氧化酶活性及相關(guān)基因表達的變化規(guī)律，探究赤·吲乙·蕓苔的藥害緩解機制。結(jié)果顯示過氧化物酶（POD）反應(yīng)最靈敏，? 1.2 g/L敵草胺處理12 h酶活達到最高值；2.4 g/L敵草胺能夠顯著誘導(dǎo)油菜GST基因較對照6.4倍的高表達。4.8 g/L和6.0 g/L敵草胺處理48 h，葉片內(nèi)SOD、POD、CAT活性和相關(guān)基因表達量顯著低于對照，氧化損傷嚴重。噴施0.1 mg/L赤·吲乙·蕓苔，能激活低濃度（1.2 g/L、2.4 g/L）敵草胺脅迫的油菜抗氧化系統(tǒng)，解除藥害影響。綜上，敵草胺對油菜抗氧化酶活性和相關(guān)基因表達整體呈低濃度促進高濃度抑制，先升高后降低的趨勢。2.4 g/L敵草胺接近油菜受害的臨界濃度，POD可用于藥害發(fā)生的早期預(yù)警。噴施? 0.1 mg/L赤·吲乙·蕓苔可較好的緩解敵草胺產(chǎn)生的輕度藥害。

關(guān)鍵詞 敵草胺；油菜；抗氧化酶；基因表達

油菜（Brassica napus L.）是中國第一大油料作物，用途廣，具有重要的經(jīng)濟價值。在栽植過程中，油菜受雜草危害嚴重。人們?yōu)榱丝朔s草抗藥性往往加大農(nóng)藥用量，導(dǎo)致油菜藥害事件頻發(fā)，嚴重危害油菜的產(chǎn)量和質(zhì)量［1］。敵草胺（napropamide）是一類酰胺類除草劑，殺草活性高，廣泛應(yīng)用于油菜田1 a生單子葉雜草和部分闊葉雜草的防除［2］。研究敵草胺對油菜產(chǎn)生的藥害及其緩解機制對油菜安全生產(chǎn)意義重大。

常規(guī)劑量下噴施除草劑，作物表面一般不會顯現(xiàn)明顯的藥害癥狀，但其生理生化指標(biāo)，如抗氧化酶活性，往往會發(fā)生顯著變化［3］。研究發(fā)現(xiàn)，植物在受到農(nóng)藥脅迫后，體內(nèi)會產(chǎn)生大量的活性氧（reactive oxygen species，ROS），引發(fā)生理生化和相關(guān)基因表達量的各種變化以獲得適應(yīng)性［4］。但當(dāng)活性氧積累達到一定閾值，將導(dǎo)致膜脂過氧化作用加劇，造成植物體的氧化損傷［5］。植物體內(nèi)有一套負責(zé)清除活性氧產(chǎn)生的抗氧化系統(tǒng)，其中超氧化物歧化酶（SOD）負責(zé)催化O2-發(fā)生歧化反應(yīng)形成H2O2和O2-；過氧化物酶（POD）不但可以利用NAPDH等電子供體，生成H2O2，還能直接參與H2O2的清除；過氧化氫酶（CAT）則是進一步將H2O2轉(zhuǎn)化為H2O［6］。SOD、CAT基因是一類“抗氧化保護基因”，由多種基因編碼組成，可通過改變抗氧化酶活性來調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激損傷［7］，研究抗氧化酶基因的表達量變化更有助于揭示農(nóng)藥對作物本身的毒性機制。Wu等［8］研究發(fā)現(xiàn)敏感品種的甜玉米SOD、CAT、 POD活性隨著除草劑煙嘧磺隆的暴露時間延長而顯著降低，而抗性品種的SOD和CAT基因在煙嘧磺隆誘導(dǎo)下顯著上調(diào)。魏婧等［9］認為原初逆境造成細胞ROS積累，其通過信號傳導(dǎo)途徑調(diào)節(jié)抗氧化基因的表達，從而增強了植物對次生逆境的抗逆性。植物抗氧化系統(tǒng)應(yīng)激能力可以在組織中調(diào)控谷胱甘肽解毒酶（GST）基因的表達［10］。GST是一類具有抗氧化和解毒等多重功能的超家族蛋白酶，其催化的谷胱甘肽（GSH）軛和反應(yīng)在植物的解毒過程中起著至關(guān)重要的作用［11-12］。谷胱甘肽還原酶（GR）通過參與ASA-GSH循環(huán)，催化GSSG還原為GSH，使植物細胞重要的兩種非酶抗氧化劑抗壞血酸和谷胱甘肽再生，進一步參與植物應(yīng)對氧化脅迫的響應(yīng)［13］。生物標(biāo)記物被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)和動物學(xué)領(lǐng)域［14-15］，在植物上少見報道。實際上，當(dāng)作物遭受農(nóng)藥脅迫時，也可以通過測定其體內(nèi)抗氧化酶活性的變化，選擇反應(yīng)較為靈敏的酶，將其作為植物出現(xiàn)藥害前的敏感標(biāo)記物［16-17］，指導(dǎo)農(nóng)藥安全使用。植物生長調(diào)節(jié)劑具有增強植物抗逆性，緩解藥害的作用。Wang等［18］研究發(fā)現(xiàn)油菜素內(nèi)脂通過誘導(dǎo)GST和GR的活力，提高解毒酶相關(guān)基因的表達，加速了農(nóng)藥在番茄體內(nèi)的降解。赤·吲乙·蕓苔是一種新型植物生長調(diào)節(jié)劑，含有30多種天然植物內(nèi)源激素和活性物質(zhì)，被廣泛應(yīng)用于大田、油菜等，以改善作物品質(zhì)增加產(chǎn)量，解除藥害，然而其作用機制仍不清楚［19-21］。

以白菜型油菜‘三月黃為試驗材料，通過盆栽試驗并模擬田間飄移藥害，觀察、記錄油菜出現(xiàn)藥害前后的濃度及癥狀，同時比較噴施赤·吲? 乙·蕓苔后的植株生長情況和生理指標(biāo)變化，深入研究不同濃度敵草胺對油菜苗期的抗氧化酶活性和相關(guān)基因表達的影響。篩選出油菜體內(nèi)對敵草胺反應(yīng)較靈敏的酶，作為敵草胺藥害的生物標(biāo)記物，為敵草胺的安全使用及藥害解除提供數(shù)據(jù)? 支持。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

油菜供試品種為‘三月黃，由河南鄭州金陽光種子有限公司提供。供試農(nóng)藥為50%敵草胺WP，由江蘇快達農(nóng)化股份有限公司生產(chǎn)；? 0.136%赤·吲乙·蕓苔WP，由德國阿格福萊農(nóng)林環(huán)境生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)。

1.2 試驗設(shè)計

油菜種植采用穴盆育苗，盆直徑15 cm，培養(yǎng)箱內(nèi)常規(guī)管理，培養(yǎng)箱周期設(shè)置：光照12 h，光照度600 lx，溫度25 ℃，相對濕度50%；黑暗12 h，溫度20 ℃，相對濕度65%。待油菜長到二葉一心時移栽至苗盆，為模擬農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中油菜出現(xiàn)明顯飄移藥害的癥狀，在油菜移栽成活后用手提式噴霧器莖葉噴施不同質(zhì)量濃度［0、0.6、1.2（推薦劑量）、2.4、4.8、6.0 g/L］敵草胺。1 d后噴施? 0.1 mg/L（根據(jù)預(yù)試驗結(jié)果確定該濃度下緩解效果較好）赤·吲乙·蕓苔。分別于單獨噴施敵草胺和同時處理了敵草胺和赤·吲乙·蕓苔后? 12 h、24 h、48 h、3 d、5 d、7 d取樣，液氮預(yù)凍后置于-80 ℃冰箱保存待測。試驗每個處理（含空白對照）設(shè)3次重復(fù)。

1.3測定項目及方法

1.3.1 安全性觀察 按照藥害程度，可將油菜藥害分為輕度、中度、重度，輕度藥害主要表現(xiàn)為局部顏色變化，經(jīng)過一段時間可自行恢復(fù)，產(chǎn)量損失少；中度藥害則會阻礙植株正常生長，葉片有畸形，植株矮小等；重度藥害可嚴重抑制植株生長，葉片枯萎，死苗等［22］。噴施敵草胺后定時觀察油菜葉片的藥害癥狀，是否出現(xiàn)死苗，葉片畸形等，并觀察噴施赤·吲乙·蕓苔后油菜的藥害緩解癥狀，做好相關(guān)記錄。

1.3.2 酶活性測定 稱取油菜葉片0.5 g放入研缽中，加入2 mL預(yù)冷的pH為7.4（0.05?? mol/L）的磷酸緩沖液，冰浴研磨，4 ℃下冷凍離心? （3 500 r/min）15 min，取上清液用于酶活力測定。使用試劑盒（南京建成）和酶標(biāo)儀（Epoch，美國）進行酶活性測定。丙二醛（MDA）含量采用硫代巴比妥酸（TBA）法，測定532 nm下OD值。超氧化物歧化酶（SOD）以每克組織在1 mL反應(yīng)液中SOD抑制率達50%時所對應(yīng)的量為1個活力單位（U）。過氧化物酶（POD）在37 ℃條件下，每克組織每分鐘催化1 μg底物的酶量定義為1個酶活力單位（U）。過氧化氫酶（CAT）以每毫克組織每秒鐘分解1 μmol的H2O2為1個活力單位（U）。谷胱甘肽解毒酶（GST）規(guī)定每毫克組織在37? ℃反應(yīng)1 min（扣除非酶促反應(yīng)），使反應(yīng)體系中GSH濃度降低1 μmol/L為1個酶活力單位（U）。谷胱甘肽還原酶（GR）規(guī)定每克組織每分鐘使反應(yīng)體系中底物NADPH的濃度改變? 1? mmol所需的酶量為1個酶活力單位（U）。

1.3.3 基因表達量測定 稱取0.5 g油菜葉片放置在提前預(yù)冷的研缽中，加入1 mL RNAiso Plus（TaKaRa，日本）研磨至粉末狀，提取RNA，并用微量分析儀測定RNA的濃度。采用PrimeScriptTM RT reagent Kit試劑盒（TaKaRa，日本）進行反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件如下：37 ℃孵育15 min，85 ℃孵育5 s，最后4 ℃孵育10 min后放入-20 ℃冰箱保存，備用。qPCR采用TB GreenTM Premix Ex TaqTM II 熒光定量試劑盒（TaKaRa，日本）測定，反應(yīng)條件為：95 ℃預(yù)變性30 s，95 ℃變性5 s，60 ℃退火30 s，40個循環(huán)。使用實時熒光定量PCR儀（qTOWER-2.2，德國）進行熒光定量分析，基因相對表達量采用2-△△Ct相對定量法。試驗均為3次重復(fù)的結(jié)果。用于基因擴展的特異引物來自于莫江楠［23］和吳靜雪［24］，以油菜actin為內(nèi)參基因，引物序列如表1所示。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

使用Excel 2016軟件處理數(shù)據(jù)制圖，用SPSS 26.0軟件對數(shù)據(jù)進行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 敵草胺對油菜幼苗的安全性分析

藥害觀察結(jié)果如圖1所示，不同質(zhì)量濃度敵草胺對油菜的藥害程度不同，濃度越高，藥害癥狀越明顯。0.6 g/L和1.2 g/L敵草胺處理7 d內(nèi)，油菜安全，未出現(xiàn)任何藥害癥狀。噴施2.4 g/L敵草胺后24 h，油菜會產(chǎn)生癥狀不明顯的輕微藥害，如葉片稍卷曲。4.8 g/L敵草胺處理植株生長矮小，葉片卷曲黃化嚴重；6.0 g/L處理組的油菜植株藥害嚴重，心葉皺縮、株型松散矮化，部分植株凋萎。

2.2 敵草胺對油菜抗氧化酶活性的影響

丙二醛（MDA）含量可以反應(yīng)細胞受自由基危害的的嚴重程度，MDA含量越高，表示細胞膜脂過氧化損傷越嚴重。如圖2-A所示，藥后? 12 h，不同濃度敵草胺處理的油菜葉片MDA含量均高于對照水平；藥后48 h，6 g/L處理達到最高值，比對照組高出2.8倍；藥后3 d，0.6、1.2和? 2.4 g/L敵草胺處理MDA含量開始下降；藥后? 7 d，4.8和6.0 g/L處理MDA含量仍明顯高于對照水平，分別是對照的2.33倍和2.75倍。

由圖2-B可知，藥后12 h，1.2和2.4 g/L敵草胺處理SOD活性分別較對照高出17.29%和11.96%，藥后24 h達到最高值，說明此時油菜應(yīng)激反應(yīng)最強烈。藥后48 h，不同濃度敵草胺處理SOD活性均開始下降。圖2-C所示，1.2 g/L敵草胺處理的油菜POD活性在噴藥當(dāng)天顯著高于其他濃度處理組，且在藥后24 h達到最大值，比對照高出88.26%，說明此時POD被顯著激活。藥后48 h，0.6和1.2 g/L濃度處理組POD活性接近對照，而4.8和6.0 g/L處理明顯低于對照，分別比對照低13.19%和38.97%，說明此時油菜POD活性受到抑制。不同濃度敵草胺處理12 h后，油菜葉片CAT活性均明顯高于對照，2.4?? g/L處理組達到最高值，為對照2.5倍。藥后? 24 h，CAT開始下降。藥后48 h，0.6和4.8 g/L處理仍明顯高于對照，而6.0 g/L敵草胺處理組CAT活性明顯低于對照水平（圖2-D）。

圖2-E顯示1.2和2.4 g/L敵草胺處理12 h后，顯著激活了油菜葉片的GST活性，藥后24 h達到最大值。4.8 g/L濃度處理下，GST活性呈先增高后下降的趨勢，7 d后趨于對照。藥后? 12 h，2.4 g/L敵草胺處理的油菜葉片GR活力達到最高值，而4.8和6.0 g/L處理明顯低于對照，分別減少了27.64%和38.69%，說明高濃度敵草胺脅迫抑制了油菜體內(nèi)的GR活性（圖2-F）。

2.3 敵草胺對油菜抗氧化酶基因表達量的影響

為進一步研究油菜響應(yīng)敵草胺脅迫的分子機制，探究抗氧化酶基因和酶活性之間的關(guān)系，對3個抗氧化酶（braSOD、braPOD、braCAT）基因和1個解毒酶（GST）基因進行基因表達量分析，結(jié)果如圖3所示。噴施敵草胺后12 h，0.6、1.2和2.4 g/L濃度處理的油菜葉片的不同抗氧化酶基因表達量均明顯上調(diào)。2.4 g/L處理的braSOD和braPOD基因表達量分別在藥后24 h和3 d達到最高值，分別是對照的2.7倍和5.4倍。7 d內(nèi)，6.0 g/L處理的braSOD和braPOD基因表達量均明顯低于對照，說明高濃度敵草胺抑制了油菜的基因表達。如圖3-D所示，不同濃度敵草胺脅迫12 h后就強烈地誘導(dǎo)了油菜葉片GST基因的表達，0.6 g/L處理GST基因表達量是對照的2.7倍；藥后24 h，2.4 g/L敵草胺脅迫的油菜GST基因表達量達到最高值，是對照的6.4倍。藥后48 h，不同濃度處理的GST基因表達量仍明顯高于對照。

2.4 赤·吲乙·蕓苔對油菜的藥害緩解效果

如圖4所示，噴施赤·吲乙·蕓苔后24 h，? 2.4 g/L敵草胺處理組藥害癥狀消失，植株長勢良好。4.8 g/L處理的部分植株藥害癥狀減輕；而藥害發(fā)生嚴重的6.0 g/L敵草胺處理油菜不能恢復(fù)正常生長狀態(tài)，仍有部分植株死亡。

如圖5-A所示，噴施赤·吲乙·蕓苔后，對不同濃度敵草胺處理的油菜膜脂過氧化緩解作用不同，0.6、1.2和2.4 g/L濃度敵草胺處理的MDA含量與噴施清水的對照組相近，但低于單獨噴施敵草胺的處理組，且敵草胺濃度越高，下降幅度越明顯；4.8和6.0 g/L處理的MDA含量仍高于對照水平，這表明赤·吲乙·蕓苔對1.2和2.4 g/L敵草胺脅迫下油菜的膜脂過氧化緩解效果良好。

圖5-B顯示，噴施赤·吲乙·蕓苔后12 h，? 0.6和1.2 g/L敵草胺處理的SOD活性接近于對照，而2.4和4.8 g/L處理明顯高于對照，分別比對照高出77.67%和42.75%。藥后48 h，各處理組SOD活性接近于對照，而6.0 g/L處理仍低于對照，說明赤·吲乙·蕓苔的加入降低了0.6和1.2 g/L敵草胺處理下油菜葉片的SOD活性，激活了2.4和4.8 g/L濃度處理組的SOD活性，而對6.0 g/L濃度處理的影響不大。噴施赤·吲乙·蕓苔后12 h，各處理組的POD活性均高于對照，其中2.4 g/L處理比對照高94.61%。藥后3 d，4.8 g/L敵草胺處理POD活性達到最高值，比對照高出1.4倍（圖5-C）。4.8和6.0 g/L敵草胺處理在噴施赤·吲乙·蕓苔后12 h分別是對照的3倍和4倍，藥后48 h，6.0 g/L敵草胺處理的CAT活性開始下降，直到第5天始終低于對照（圖5-D）。

噴施赤·吲乙·蕓苔后12 h，油菜葉片的GST和GR活性均明顯被激活，6.0 g/L敵草胺處理的GST和GR活性分別是對照的3.4倍和4.7倍。藥后24 h，4.8 g/L敵草胺處理GST活性達到最高，是對照的2.7倍（圖5-E）。藥后? 3 d，6.0 g/L處理組GR活性仍明顯高于對照值（圖5-F）。

如圖6所示，噴施赤·吲乙·蕓苔后7 d內(nèi)，2.4 g/L等濃度處理的braSOD、braPOD、braCAT基因表達量繼續(xù)上調(diào)；而6.0 g/L敵草胺的braSOD基因表達量始終低于對照值，braPOD基因表達量則在藥后24 h達到最大值，是對照的4.7倍。噴施赤·吲乙·蕓苔后48 h（圖4-D），? 2.4和4.8 g/L處理的GST基因表達量達到最高值，分別是對照的7.7倍和10.9倍。藥后3 d，不同濃度敵草胺處理的GST基因表達量仍明顯高于對照。

3 討論與結(jié)論

植物在應(yīng)對外界污染物脅迫的過程中，自身產(chǎn)生了一套復(fù)雜的解毒機制，當(dāng)生物體內(nèi)存在大量由于毒性脅迫造成的ROS時，為了防止受損嚴重的細胞復(fù)制，抗氧化酶基因的表達會受到刺激而維持在很低的水平［25］。本試驗結(jié)果顯示，braSOD基因和braCAT基因在較低濃度（0.6和? 1.2 g/L）敵草胺處理下明顯上調(diào)，表明油菜受到氧化脅迫誘導(dǎo)抗氧化酶基因表達，激活了抗氧化防御系統(tǒng)。但在高濃度（6.0 g/L）敵草胺處理7 d內(nèi)，油菜葉片braSOD基因表達量始終低于對照，這可能是因為油菜發(fā)生了嚴重的藥害，抑制了SOD的酶活性，導(dǎo)致braSOD基因表達受到抑制。Cui等［26］研究發(fā)現(xiàn)，在敵草胺脅迫下，外源水楊酸的加入顯著降低SOD、CAT活性，激活POD、GST、GR等活性。但本研究結(jié)果顯示，噴施赤·吲乙·蕓苔后，中高濃度（2.4、4.8 g/L）敵草胺處理的SOD、POD和CAT活性明顯升高，同時braSOD、braCAT和braPOD基因均不同程度繼續(xù)上調(diào)，說明赤·吲乙·蕓苔可以通過誘導(dǎo)油菜相關(guān)抗氧化酶基因的表達來調(diào)控抗氧化酶活性，在一定程度上激活油菜的保護酶系統(tǒng)。但6.0 g/L敵草胺高濃度處理后，油菜藥害嚴重，活性氧積累超出了植株本身的抗氧化系統(tǒng)清除能力，酶活性受到抑制，細胞受損，無法恢復(fù)到正常狀態(tài)。相比之下，施用赤·吲乙·蕓苔后，0.6和1.2 g/L敵草胺處理的抗氧化酶活性和對照組差異很小，這說明施用赤·吲乙·蕓苔能夠在一定程度上緩解敵草胺對油菜的脅迫，這對敵草胺在生產(chǎn)中的科學(xué)使用有重要指導(dǎo)意義：使用敵草胺除草時可以考慮混用適量赤·吲乙·蕓苔，以提高作物的安全性。

另外，本研究顯示，5種濃度處理下，2.4 g/L處理酶活變化趨勢最明顯。2.4 g/L敵草胺處理下加入赤·吲乙·蕓苔，油菜GST基因表達量和對照接近，表明赤·吲乙·蕓苔的加入在一定程度上中和了敵草胺的氧化脅迫；而4.8 g/L敵草胺脅迫下，赤·吲乙·蕓苔的加入表現(xiàn)為促進了油菜GST基因的表達。本研究結(jié)果表明，該濃度處理下，油菜發(fā)生了強烈的應(yīng)激反應(yīng)，預(yù)示著2.4 g/L敵草胺對油菜具有潛在毒害，因此當(dāng)敵草胺的施用濃度超過2.4 g/L時，必須考慮對油菜的安全性。

本試驗中，高濃度（4.8、6.0 g/L）敵草胺脅迫導(dǎo)致油菜細胞受損；赤·吲乙·蕓苔通過降低MDA含量，調(diào)節(jié)油菜的膜脂過氧化作用，減輕敵草胺對油菜的細胞損傷，使植株恢復(fù)正常生長狀況。低濃度（0.6、1.2 g/L）敵草胺處理下，油菜的SOD、POD、CAT均被顯著激活。其中，POD反應(yīng)最靈敏，1.2 g/L處理12 h酶活就達到最高值；而SOD雖然也達到最高值，但趨勢不如POD明顯；而相同時間內(nèi)，CAT酶活性升到最高值所需的濃度更高（2.4 g/L）。綜合比較，POD最適合作為油菜出現(xiàn)敵草胺藥害前的生物標(biāo)記物。

綜上所述，不同濃度敵草胺對油菜的抗氧化酶活性和相關(guān)基因表達整體呈現(xiàn)低濃度促進高濃度抑制的趨勢，2.4 g/L是臨界濃度，對油菜具有潛在藥害，生產(chǎn)中需格外重視。POD酶反應(yīng)最靈敏，可以作為敵草胺藥害發(fā)生前的敏感生物標(biāo)記物。噴施赤·吲乙·蕓苔對2.4 g/L敵草胺脅迫的藥害緩解效果最佳。

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Effect of Napropamide on Activities of Antioxidant Enzymes and

Expression of Related Genes in Brassica napus L

ZHOU Min1，WANG Fuhao1，ZHANG Minghao1，LIU Ziqi1，

GUO Jinghua1，HAO Peipei2 and CHENG Youpu1

（1.College of Horticulture and Landscape，Tianjin Agricultural University，Tianjin 300392，China;

2.China Academy of Luheng Chemical Co.，Ltd.，Tianjin 300270，China）

Abstract Herbicide injury seriously affects the yield of rapeseed. The screening of early biomarkers for pesticide damage，combined with the application of plant growth regulators，can effectively mitigate pesticide injuries in rapeseed fields. In this study，potted rapeseed was chosen as experimental material，the patterns of antioxidant enzyme activity and related gene expression after napropamide treatment was investigated，and the mitigation mechanism of gibberellic acid·indol-3-ylacetic acid·brassinolide in response to pesticide injury was explored. The results showed that POD was the most sensitive parameter，with the highest enzyme activity at 12 h after 1.2 g/L treatment，88.26% higher than the control; 2.4 g/L napropamide significantly induced the GST gene expression of rapeseed，6.4-fold higher than the control. After 48 hours of treatment with 4.8 g/L and 6.0 g/L napropamide，the activities of SOD，POD，and CAT，as well as the expression of related genes，were significantly lower than those in the control group. However，oxidative damage was observed to be severe.Spraying 0.1 mg/L gibberellic acid·indol-3-ylacetic acid·brassinolide activated the antioxidant system of rapeseed stressed by napropamide at low concentrations（1.2，2.4 g/L） and alleviated the effects of the phytotoxicity. In conclusion，an generally low concentration of napropamide promots inhibitition of high concentration in the antioxidant enzyme activity and related gene expression in rapeseed，exhibiting an first increase followd by a subsequent decrease. The concentration of 2.4 g/L napropamide approaches the critical concentration for causing damage to rapeseed，and POD levels can be an early warning indicator for pesticide injuries. The spraying of 0.1 mg/L gibberellic acid·indol-3-ylacetic acid·brassinolide more effectively alleviates the mild damage caused by napropamdie.

Key words Napropamide; Brassica napus L; Antioxidant enzymes; Gene expression

Received ?2023-02-24??? Returned 2023-05-15

Foundation item The National Natural Science Foundation of China（No. 31572034）;Tianjin Municipal Enterprise Science and Technology Special Envoy Project（No.19JCTPJC59000）.

First author ZHOU Min，female，master student. Research area： agricultural pharmacology. E-mail： zhoumin_0915@163.com

Corresponding?? author CHENG Youpu，male，professor. Research area： agricultural pharmacology. E-mail： chengyoupu@tjau.edu.cn

（責(zé)任編輯：史亞歌 Responsible editor：SHI Yage）