鄧 嫻，譚瑾軒，陳映西，潘 娜，劉付杰義，黃曉燕

（1.廣西中醫(yī)藥大學研究生院，廣西 南寧 530001；2.廣西中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院，廣西 南寧 530022）

功能性消化不良（functional dyspepsia， FD）是 常見的功能性胃腸病，以上腹部脹悶不適、飽脹感、飯后不適等癥狀為主要臨床表現的功能性胃腸病。在亞洲國家FD 的發(fā)病率為5%～30%［1］?，F代醫(yī)學認為FD 與胃腸功能紊亂、胃排空延遲、幽門螺桿菌感染、內臟高敏感性等相關［2］。FD 可歸屬為祖國醫(yī)學“胃脘痛”“胃痞”范疇，脾虛氣滯、胃失和降是主要病機［3］。中醫(yī)特有的辨證論治體系治療FD 有一定優(yōu)勢。構建符合FD 的病證結合模型有助于更好發(fā)揮中醫(yī)藥治療FD 的優(yōu)勢。

FD 的中醫(yī)證型動物模型基于中醫(yī)發(fā)病機理造模方法各異。現有文獻多從造模方法及原理方面進行整理論述，忽略了對具體造模方法的整合和對比。本文對現有常見FD 證型脾虛證、肝郁證、肝郁脾虛證動物模型造模方法及評價指標進行整理分析，旨在為中醫(yī)辨證論治FD 的相關動物研究提供造模參考。

1 病證結合造模方法

1.1 脾虛證

脾主運化，喜燥惡濕?，F代人不健康的生活習慣，如三餐飲食不節(jié)律、恣意食用生冷油膩食品，加之社會生活節(jié)奏變快、作息不規(guī)律等原因均可損傷脾胃，脾胃虛弱，脾胃功能失司，氣機升降失調引起痞滿、腹脹、納食欠佳等FD 癥狀，如《名醫(yī)雜注》言：“惟飲食不節(jié)，起居不時，損傷脾胃，..，脾胃俱損，納化皆難，無氣斯弱，百邪易侵，而飽悶、痞積等癥作矣。”基于此，可采取飲食不節(jié)法、勞倦過度法構建脾虛動物模型。飲食不節(jié)法多采取隔日禁食的方式，其優(yōu)點在于操作方便，缺點是不能很好模擬現代人的飲食和生活習慣。勞倦過度常用的方式有游泳法［4］和小平臺站立法［5］，游泳法可模擬人類受到的身體和精神應激，相對更符合臨床實際，但由于需要使動物間斷游泳，在造模中可能會出現較多動物死亡。小平臺站立法則克服了這一問題，將實驗動物放置于狹窄平臺上使其站立，平臺放置于裝滿水的水箱中，局限其活動使其處于一種驚恐的狀態(tài)中，該方式更符合FD 的發(fā)病機理，且可降低動物因游泳過程嗆水或溺水導致的死亡。FD 脾虛證動物造模方式亦多參考于此。

左旋精氨酸（L-Arg）可通過影響胃腸組織中NO 濃度導致胃腸功能障礙［6］，L-Arg 疊加飲食不節(jié)法可用于制備FD 脾虛動物模型［7］，能引起胃排空率及小腸推進率明顯降低的胃動力障礙的表現，并引起與脾虛相關的內質網應激關聯因子IREI 和TRAF2 蛋白表達的明顯上升［8］。碘乙酰胺（Iodoacetamide，IA）可減慢大鼠胃排空并造成胃慢波頻率紊亂［9］，實驗研究表明［10］，單純應用IA 灌胃即可引起胃感覺和運動功能明顯障礙，且無明顯組織病理學變化，但單純應用IA 灌胃或可存在造模時間短不能模擬FD 慢性發(fā)病的問題，且其是否能建構FD脾虛證模型尚需進一步探討。應用IA 灌胃制備FD脾虛模型多疊加勞倦過度或飲食不節(jié)的方式，比如采取“IA 灌胃+勞倦過度”的方式造模，該方法制備的動物模型可影響Ca2+/CaM-MLCK-MLC 信號通路進而影響平滑肌收縮功能［11］，CRF-UCN2 失衡可進一步抑制胃排空［12］，影響EGC-NGF 通路誘發(fā)并維持內臟高敏感性［13］，并引起腦腸肽的異常［14］。在具體造模方式的選擇上，有學者對IA 灌胃結合小平臺站立和IA 灌胃結合游泳法做比較，結果發(fā)現結合小平臺站立制備的動物模型脾虛癥狀如毛發(fā)不澤、神疲乏力更嚴重，胃腸激素相關指標如尿D-木糖排泄率、血清胃動素、胃泌素含量等降低更明顯，表明IA 灌胃+小平臺站立成模效果更佳［15］。在“IA 灌胃+勞倦過度”基礎上疊加飲食不節(jié)法或更貼合現代人生活方式所致FD 的發(fā)病過程，實驗研究表明，該 方 法 可 通 過 影 響CaM-MLACK 信 號 通 路［16］、mTOR/ghrelin/GHSR - 1a 信 號 通 路［17］、CaM/MLCK/MLC20 信號通路［18］、AMPK/TSC2/mTOR信號通路［19］從而抑制胃竇平滑肌的收縮出現胃動力障礙。相比于應用L-Arg 疊加飲食不節(jié)造模，IA灌胃疊加勞倦過度或飲食不節(jié)的FD 脾虛動物造模相關研究更多，原因可能在于單純應用IA 灌胃就可制備相對貼合FD 的模型，其模型更具穩(wěn)定性。具體造模方法詳見表1。

表1 FD 脾虛證動物造模方法Tab 1 Methods of animal modeling of FD spleen deficiency syndrome

1.2 肝郁證

經典的FD 肝郁動物模型造模方法是郭海軍基于“怒傷肝”提出的夾尾激怒法［20］。該方法模擬了受到刺激時產生的焦慮、抑郁的病理狀態(tài)，出現體質量明顯下降、進食減少、無器質性病變的FD 特性，具有操作簡便，便于控制的特點。其缺點在于制備的肝郁FD 動物模型具有不穩(wěn)定性，研究表明，在造模停止后短期內大鼠會自行恢復正常，如需進一步的用藥研究，仍需持續(xù)予動物夾尾刺激［21］。在夾尾刺激法基礎上疊加飲食不節(jié)法或更利于模型穩(wěn)定，研究表明，延長夾尾時間并結合飲食不節(jié)制備FD 動物模型可出現毛發(fā)枯黃、食欲不振、扎堆、聚集、焦慮抑郁、大便稀軟等表現，糖水偏好實驗、曠場實驗表明其制備的動物模型符合FD 肝郁模型，并通過影響SCF/c-Kit 信號通路相關蛋白表達引起胃腸動力障礙［22］。具體造模方法詳見表2。

表2 FD 肝郁證動物造模方法Tab 2 Methods of animal modeling of FD liver depression syndrome

1.3 肝郁脾虛證

基于五行學說，肝屬木，脾屬土，二者相互制約相互依賴。肝郁脾虛證反應了肝脾關系的失調，基于FD 反復發(fā)作、病情遷延的特點，臨床多見FD 肝郁脾虛證型。該證型的FD 動物模型研究亦較多，制備方法各異。多因素疊加刺激的造模方法能更好的模擬FD 復雜的發(fā)病過程，5-羥色胺（5-HT）被證實與胃腸道過敏及中樞神經活動相關［23，24］。研究表明，“改良夾尾刺激+飲食不節(jié)法”可影響5-HT的濃度及相應蛋白表達水平［25］，并引起腦腸肽的改變［26］，符合FD 肝郁脾虛證的發(fā)病機制?！案牧紛A尾刺激+飲食不節(jié)+苦寒瀉下法” 制備的模型可出現精神萎靡、神志不安的表現，并引起胃腸激素紊亂及胃排空減慢［27］?！案牧紛A尾刺激+飲食不節(jié)+過度勞倦法”，可出現明顯的肝郁脾虛表現，且出現胃動力障礙的結果，運用曠場實驗進一步表明該法可制 備 成 功 的FD 肝 郁 脾 虛 模 型［28-32］?！案?良 夾 尾 刺激+飲食不節(jié)+冰生理鹽水灌胃” 可使造模動物出現明顯胃腸動力障礙及十二指腸黏膜機械屏障異常［33-35］。慢性束縛法是通過束縛大鼠于狹小空間或固定其肢體限制活動，致使其情志郁怒而肝氣郁滯［36］。研究表明，“慢性束縛+飲食不節(jié)+勞倦過度”制備的動物模型可引起腦腸肽變化，符合肝郁脾虛FD 的特征［37，38］。可選擇在此基礎上疊加夾尾刺激法制備FD 肝郁脾虛模型，可出現食少、精神萎靡、胃動力障礙、胃組織5-HT 含量減少［39］?！奥允`+飲食不節(jié)+勞倦過度+苦寒瀉下”可引起胃腸蠕動功能減慢及肝郁脾虛證的表現。刺激方式更多或更利于模型的穩(wěn)定，且能更好的模擬FD 復雜的發(fā)病機理，但多種刺激方式的應用過程較繁瑣，造模成本高，操作具有一定難度，研究者可根據具體 實 驗 需 要 選 用 適 宜 的 造 模 方 式［40，41］。“IA 灌 胃+改良夾尾刺激法”是基于FD 脾虛證及肝郁證病證結合模型研究提出的造模方法，實驗研究表明，其制備的動物模型出現胃黏膜炎癥反應［42］。具體造模方法詳見表3。

表3 FD 肝郁脾虛證動物造模方法Tab 3 Methods of animal modeling of FD liver depression and spleen deficiency syndrome

2 討論

2.1 FD 病證結合動物模型的關鍵問題

本文對FD 病證結合動物模型進行了文獻分析，多因素造模能更好地模擬FD 復雜的中醫(yī)證型以制備更貼合臨床病證的動物模型。在造模方式的選取上，FD 脾虛證動物造模多選用IA 灌胃結合小平臺站立，疊加飲食不節(jié)法或勞倦過度法更符合臨床實際。FD 肝郁證動物模型多沿用郭海軍的夾尾激怒法，其制備方法簡便又能很好模擬因情志刺激影響肝疏泄所致肝氣郁結的發(fā)病機理，疊加飲食不節(jié)法模型更穩(wěn)定。FD 肝郁脾虛證模型制備方法多樣，多以夾尾刺激法為基礎，結合飲食不節(jié)、勞倦過度等方法，亦有選用慢性束縛法疊加勞倦過度和飲食不節(jié)方法，因未見有針對改良夾尾刺激法和慢性束縛法的比較研究，具體造模效果難評孰優(yōu)孰劣。改良夾尾刺激法原理是引起大鼠暴怒而致肝郁，慢性束縛法原理是通過束縛其行動致其郁怒而肝氣郁結，《靈樞·本神》言：“肝氣虛則恐，實則怒”，肝氣過亢易于發(fā)怒，肝氣虛，則易生郁怒之變，由此認為，改良夾尾刺激法以氣郁為主，慢性束縛法以氣虛為主。隨著現代研究的深入，IA 灌胃亦應用至FD 肝郁脾虛造模過程中。基于肝郁脾虛證因虛致實、虛實夾雜、病程纏綿的特點，刺激因素越多越能更好地模擬FD 復雜的發(fā)病機理，越利于保持模型的穩(wěn)定，但多種刺激方式的應用過程較繁瑣，造模成本高，操作具有一定難度，具體可根據實驗需要選用適宜的動物造模方法。在實驗動物的選擇上，因大鼠和小鼠的飼養(yǎng)較為廉價，故多選用大鼠、小鼠作為實驗動物，相對于小鼠，大鼠白天休息、夜間活動和對光照、噪音敏感的生活習性更符合FD 的發(fā)病機理。在品系的選擇上，因Wistar 大鼠腫瘤發(fā)病率低，對刺激更敏感，更廣泛地用于肝郁及肝郁脾虛造模過程中，SD 大鼠生長發(fā)育較快，造模周期周期相對較短，亦廣為研究者歡迎［43］。

評價指標的選擇上，用于評價FD 脾虛證、肝郁證、肝郁脾虛證模型的行為學實驗多選用糖水偏好實驗、曠場實驗。糖水偏好實驗是通過計算糖水消耗率以觀察動物興趣缺失程度，曠場實驗是大鼠置于黑暗的自制木箱，通過觀察其運動的距離、時間以評價動物自主行動、探索度及緊張度，可用于評價抑郁癥［44］?；谀X腸軸理論，FD 多伴隨精神情志的異常，故多選用糖水偏好實驗評估FD 模型，而曠場實驗可評估動物是否存在焦慮緊張，廣泛用于肝郁脾虛證模型的評估［45］。FD 脾虛模型的評價多以其出現的倦怠乏力、毛色枯槁、便溏等脾虛表現等作為其評價指標，因脾虛證主要表現為消化與吸收功能的異常，乳酸可反映機體疲乏的狀態(tài)，與“勞倦傷脾”理論相契合，故血清淀粉酶活力、D-木糖、乳酸可作為衡量脾虛程度的客觀指標［13］。腦腸肽是腦腸軸分布的肽類統稱，因肝主疏泄，調暢氣機，可調節(jié)人精神情志活動，肝病犯胃，肝郁脾虛，出現胃腸疾病與情志變化，其機理與腦腸軸頗為相似，故多以腦腸肽作為肝郁脾虛的評估指標［46］。

2.2 FD 病證結合動物模型的發(fā)展思路

《功能性消化不良中醫(yī)診療專家共識意見（2017）》將FD 分為脾虛氣滯型、肝胃不和型、脾胃濕熱型、脾胃虛寒（弱）型、寒熱錯雜型5 個證型［47］。對FD 病證結合動物模型進行整理發(fā)現，FD 一般分為脾虛證、肝郁證、肝郁脾虛證、脾胃虛寒證、胃虛停飲證、寒熱錯雜證，未與指南證型相匹配，其原因可能在于難以復刻其相關臨床癥狀，且FD 病證結合模型研究多側重于脾虛證、肝郁證、肝郁脾虛證，脾胃虛寒證、胃虛停飲證、寒熱錯雜證研究頗少，這與其證型復雜，現有造模方法無法全面精準模擬其發(fā)病機制相關。造模過程中結合飲食不節(jié)或脾虛勞倦更利于模型的穩(wěn)定，這與現代人生活習性相符，基于《素問·本病論》：“人飲食勞倦即傷脾”，又如李東垣言：“百病皆由脾胃衰而生”，可知，脾虛是FD 的發(fā)病基礎。設計成熟規(guī)范的FD 脾虛證造模方法或有利于FD 病證結合模型的進一步研究，但目前FD 病證結合模型普遍存在無客觀評判標準及具體評分細則的問題，多以造模動物出現的倦臥嗜睡、體重減輕等一般狀態(tài)、病理組織學改變、胃腸動力學相關血清指標、蛋白檢測等作為評判標準，FD肝郁脾虛證引用了曠場實驗作為判斷標準，相比于FD 其他病證結合模型更具說服力，而曠場實驗用于抑郁癥模型的評估，可用于評價肝失疏泄引起的氣機失調如肝郁氣滯證，但用于評價FD 肝郁脾虛模型則客觀證據不足，對造模動物出現的一般狀態(tài)評價的主觀性過強，且未有規(guī)范的評分標準?；谥嗅t(yī)發(fā)病機理的復雜性，目前尚未有與人類FD 某個中醫(yī)證型十分貼合的中醫(yī)動物模型。制備操作性強、造模成本低、模擬程度高且評價系統完善的病證結合動物模型有助于進一步探索FD 的發(fā)病機制及有效的治療策略。因此，在FD 的進一步研究中，仍需不斷探索成熟理想的病證結合動物模型。

作者貢獻度說明：

鄧嫻：負責收集文獻資料，擬定寫作思路，撰寫論文；譚瑾軒、陳映西、潘娜、劉付杰義：參與資料整理，修改論文；黃曉燕：負責指導撰寫文章并最后定稿。

所有作者聲明不存在利益沖突關系。