黃煒坪， 甘松永， 王 慶， 楊少森， 黃錦雄， 趙艷飛， 鄒翠云，黃培衛(wèi)， 張瀟瀟， 陳永南， 秦真東， 吳錦輝*， 林 蠡*

(1. 廣東省水環(huán)境與水產(chǎn)品安全工程技術(shù)研究中心，廣州市水產(chǎn)病害與水禽養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院，廣東 廣州 510222；2. 廣東省農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心，廣東 廣州 510520；3. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)海洋學(xué)院，廣東 廣州 510642)

黃鸝無(wú)齒鲹(Gnathanodon speciosus)屬于鱸形目 (Perciformes) 鲹 科 (Carangidae) 無(wú) 齒 鲹 屬(Gnathanodon)。其體色金黃，故俗稱(chēng)黃金鲹，體側(cè)具7～11 條的黑色縱向條紋[1]。黃鸝無(wú)齒鲹主要分布于我國(guó)南海，日本本州島以南、琉球群島、印度洋太平洋及東南亞珊瑚礁海域等地。游泳能力強(qiáng)，成群活動(dòng)，個(gè)體中小型，常常跟隨在大型魚(yú)類(lèi)后方，如鯊魚(yú)、大型石斑魚(yú)等。肉食性，依靠可伸縮的吻部吸食珊瑚礁中的小型無(wú)脊椎動(dòng)物為生，其幼魚(yú)期下頜具有少數(shù)齒，而成魚(yú)下頜和犁骨部位則無(wú)齒，僅有舌面較為粗糙，同類(lèi)相殘比較少。黃鸝無(wú)齒鲹成魚(yú)可達(dá)1 m 以上，肉質(zhì)鮮美，可加工為刺身食用。由于其肉質(zhì)比主養(yǎng)品種卵形鯧鲹(Trachinotus ovatus)更加細(xì)嫩，市場(chǎng)售價(jià)也更高。這些特征使得黃鸝無(wú)齒鲹既是良好的觀賞性魚(yú)類(lèi)，又是高經(jīng)濟(jì)價(jià)值的食用魚(yú)。

黃鸝無(wú)齒鲹的人工養(yǎng)殖以海水網(wǎng)箱和室內(nèi)海水循環(huán)水池模式為主。目前國(guó)內(nèi)只針對(duì)水族養(yǎng)殖的黃鸝無(wú)齒鲹的細(xì)菌性疾病進(jìn)行了初步研究[2]，國(guó)外主要集中在其環(huán)境因子適應(yīng)性、生長(zhǎng)性能、食性、營(yíng)養(yǎng)需求和微衛(wèi)星序列測(cè)定等方面[3-9]，該魚(yú)種的研究還處于比較初級(jí)的階段，對(duì)于其生殖生理特性以及胚胎發(fā)育過(guò)程等的研究還較缺乏。本研究通過(guò)人工繁殖黃鸝無(wú)齒鲹，并使用顯微拍攝技術(shù)對(duì)其胚胎發(fā)育和胚后發(fā)育過(guò)程進(jìn)行了記錄，描述了不同發(fā)育階段的形態(tài)特征，為后續(xù)開(kāi)發(fā)該品種的人工繁殖和苗種培育提供基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象

實(shí)驗(yàn)用黃鸝無(wú)齒鲹成魚(yú)購(gòu)于海南陵水當(dāng)?shù)貪O民捕撈的野生個(gè)體，轉(zhuǎn)運(yùn)至廣東省農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心大亞灣基地海水循環(huán)水系統(tǒng)中養(yǎng)殖，養(yǎng)殖池大小為5 m×5 m×3 m，光周期為12L∶12D，光照強(qiáng)度約3 000 lx、DO≥5 mg/L、pH 值 (7.66±0.17)、水溫(27.75±1.38) °C、鹽度32.32±0.59。親魚(yú)強(qiáng)化培育交替使用冰鮮魚(yú)和人工配合飼料。人工配合飼料使用鰻魚(yú)粉、魷魚(yú)漿、沙蟲(chóng)漿按照5∶3∶2的比例制作成顆粒。隔天投喂冰鮮的日本鳀(Engraulis japonicus)、沙丁魚(yú)(Sardina pilchardus)、日本鯖(Scomber japonicus)等雜魚(yú)，連續(xù)投喂15～30 d 后檢查成熟度。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中操作人員嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理規(guī)范，并按照仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院倫理委員會(huì)制定的規(guī)章制度執(zhí)行。

1.2 親魚(yú)繁殖及受精卵的獲得

強(qiáng)化培育15～30 d 后檢查成熟度，使用氧化鋅丁香酚水門(mén)汀麻醉后，當(dāng)雄魚(yú)能擠出精液及雌魚(yú)腹部柔軟微微隆起、生殖孔發(fā)紅，轉(zhuǎn)移至催產(chǎn)池進(jìn)行人工催產(chǎn)。

人工催產(chǎn)采用兩針催產(chǎn)法，均采用背部肌肉注射，第1 針注射促黃體素釋放激素A3 (LHRHA3)，劑 量 為3～5 μg/kg。12 h 后 注 射 第2 針，LHRH-A3 和絨毛膜促性腺激素(HCG)聯(lián)合用藥，LHRH-A3 的劑量為10～15 μg/kg，HCG 的劑量為7.5～10.0 μg/kg。注射完第2 針后12 h 通常可以獲得成熟的卵。用干法受精進(jìn)行人工授精操作：將成熟魚(yú)卵放入干凈的燒杯中，加入成熟的精液，用羽毛攪拌均勻，靜置3 min 后加入新鮮海水，輕輕攪動(dòng)5 min 后，用新鮮海水沖洗魚(yú)卵，挑選浮性卵放入孵化桶中孵化。

1.3 受精卵的孵化、胚胎發(fā)育及胚后發(fā)育觀察

將受精卵置于500 L 循環(huán)桶中孵化，同時(shí)通氣保持水體充氧。受精卵在Leica DM2000 顯微鏡下進(jìn)行觀察，顯微圖像系統(tǒng)拍攝圖片，記錄各時(shí)期特征，每次觀察取樣胚胎30 粒。

仔魚(yú)出膜后，在直徑6.0 m，水深1.5 m 的圓形水泥池中進(jìn)行苗種培育，餌料系列為經(jīng)營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化的褶皺臂尾輪蟲(chóng)(Brachionus plicatilis)、豐年蟲(chóng)(Artemia salina)、凍存的低鹽咸水劍水蚤(Halicyclops aequoreus)、豐年蟲(chóng)成體及微囊顆粒飼料等。初孵仔魚(yú)培養(yǎng)密度約為10 000 尾/m3，水質(zhì)條件為溫 度(25.59±0.21) °C、鹽 度31.36±0.47、pH 值7.58±0.11、 DO≥5 mg/L、光照強(qiáng)度約3 000 lx。胚后發(fā)育的時(shí)間采用日齡(day post hatch, dph)進(jìn)行記錄，初孵的仔魚(yú)定義為0 日齡，以此類(lèi)推。胚后發(fā)育觀察為每日選取25～30 尾健康仔魚(yú)，在Leica S8AP0 體視鏡下拍照，顯微圖像系統(tǒng)測(cè)量記錄全長(zhǎng)、卵黃囊大小等。

1.4 卵徑的測(cè)量及胚胎發(fā)育總積溫的計(jì)算方法

根據(jù)有效積溫法則，胚胎發(fā)育總積溫的公式：

式中，K代表總積溫(h·°C)；N代表完成某一發(fā)育階段所需的時(shí)間(h)；T代表發(fā)育期間的平均水溫(°C)；C代表該生物種類(lèi)的發(fā)育起始溫度(°C)。利用顯微圖形軟件測(cè)量100 粒受精卵的直徑，取這100 粒卵直徑的算術(shù)平均值。

1.5 數(shù)據(jù)分析

受精卵與仔魚(yú)可量性狀數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。

2 結(jié)果

2.1 受精卵

黃鸝無(wú)齒鲹受精卵為非黏性、圓球形的透明浮性卵，但大量受精卵聚集在一起時(shí)呈現(xiàn)淡黃色。受精卵平均卵徑為(764.29±14.74) μm，具有1 個(gè)油球，油球平均直徑為(166.32±18.28) μm。

2.2 胚胎發(fā)育

受 精 卵 在 鹽 度30.26±0.67、 溫 度(24.72±0.32) °C、pH 值7.46±0.12、溶 解 氧(5.13±0.33)mg/L、光照強(qiáng)度約3 000 lx 的海水環(huán)境中孵化，18 h 30 min 后，開(kāi)始出膜。整個(gè)胚胎發(fā)育過(guò)程所需要的總積溫為470.8～503.8 °C·h，黃鸝無(wú)齒鲹胚胎發(fā)育時(shí)序見(jiàn)表1。

表1 黃鸝無(wú)齒鲹胚胎發(fā)育特征Tab. 1 Embryonic development characteristics of G. speciosus

胚盤(pán)期 黃鸝無(wú)齒鲹的受精卵(圖版Ⅰ-1)在受精后15 min，細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核開(kāi)始從植物極定向流動(dòng)向動(dòng)物極，形成盤(pán)狀的胚盤(pán)隆起(圖版Ⅰ-2)。

卵裂階段 受精后25 min，黃鸝無(wú)齒鲹的受精卵進(jìn)行第1 次卵裂，標(biāo)志著胚胎發(fā)育進(jìn)入2細(xì)胞期。此時(shí)胚盤(pán)中央?yún)^(qū)域由外向內(nèi)進(jìn)行縊裂，均等分成2 個(gè)分裂球，這是整個(gè)胚胎發(fā)生過(guò)程中的首次細(xì)胞分裂(圖版Ⅰ-3)。受精后35 min～1 h，胚胎連續(xù)進(jìn)行從第2 次到第5 次的細(xì)胞分裂，即胚胎從2 細(xì)胞期快速發(fā)育到32 細(xì)胞期。每次細(xì)胞分裂所形成的分裂面均與上一輪分裂面垂直，使得胚胎整體維持球?qū)ΨQ(chēng)性，而細(xì)胞數(shù)則以幾何級(jí)數(shù)翻倍增長(zhǎng)(圖版Ⅰ-4～7)。受精后1 h 10 min，隨著胚盤(pán)中央?yún)^(qū)域的快速分裂，各個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)大小開(kāi)始不均等，中心區(qū)域細(xì)胞較小，邊緣區(qū)域較大。細(xì)胞之間分界面也變得不再規(guī)則，呈現(xiàn)出桑椹狀早期胚胎的特征(圖版Ⅰ-8)。15 min 后，受精卵發(fā)育到桑椹胚晚期，此時(shí)分裂球繼續(xù)變小，特別是邊緣區(qū)域細(xì)胞分裂數(shù)目增加，使得整個(gè)胚盤(pán)輪廓近似圓形。細(xì)胞分化初步完成，胚胎發(fā)育進(jìn)入下一個(gè)更為復(fù)雜的階段 (圖版Ⅰ-9)。

囊胚階段 受精后2 h 5 min，黃鸝無(wú)齒鲹的受精卵進(jìn)入囊胚發(fā)育階段。此時(shí)胚盤(pán)細(xì)胞極度縮小，并在一側(cè)形成半圓形的囊胚層。同時(shí)胚盤(pán)開(kāi)始向一側(cè)移動(dòng)，標(biāo)志著高囊胚期的開(kāi)始(圖版Ⅰ-10)。此后隨著時(shí)間的推移，在受精后3 h，越來(lái)越多的囊胚層表層細(xì)胞向下層及外圍區(qū)域生長(zhǎng)、擴(kuò)散和遷移，囊胚腔可見(jiàn)，進(jìn)入低囊胚期 (圖版Ⅰ-11)。

圖版 Ⅰ 黃鸝無(wú)齒鲹受精卵至出膜前期階段圖譜1. 受精卵，2. 胚盤(pán)形成，3. 2 細(xì)胞期，4. 4 細(xì)胞期，5. 8 細(xì)胞期，6. 16 細(xì)胞期，7. 32 細(xì)胞期，8. 桑椹胚早期，9. 桑椹胚晚期，10. 高囊胚期，11. 低囊胚期，12. 原腸胚早期，13. 原腸胚中期，14. 原腸胚晚期，15. 胚孔閉合早期，16. 胚孔閉合期，17. 頭部原基形成期，18. 眼基形成期，19. 眼囊形成期，20. 心臟出現(xiàn)期，21. 晶狀體出現(xiàn)期，22. 心跳期，23. 出膜前期，24. 出膜前期(側(cè))。Plate Ⅰ Photos of G. speciosus from fertilized eggs to pre-hatching stage 1. fertilized eggs, 2. blastodisc formation, 3. 2-cell stage, 4. 4-cell stage, 5. 8-cell stage, 6. 16-cell stage, 7. 32-cell stage, 8. early morula stage, 9. late morula stage, 10. high blastula stage, 11. low blastula stage, 12. early gastrula stage, 13. middle gastrula stage, 14. late gastrula stage, 15. early blastopore closure stage, 16. closure of blastopore, 17. head primordium formation stage, 18. ocular primordium stage, 19. ocular sac stage, 20. cardiac onsets, 21.eye lens emergence, 22. heart-beating stage, 23. pre-hatching stage, 24. pre-hatching stage (side).

原腸胚階段 受精后3 h 35 min，原腸胚發(fā)育進(jìn)入早期，此階段可觀察到兩層胚層中的外層細(xì)胞開(kāi)始向原卵黃囊1/3 區(qū)域發(fā)育、擴(kuò)張，而尚未形成完整的胚環(huán)，僅有模糊虛影。此時(shí)出現(xiàn)原始的胚盾結(jié)構(gòu)，但細(xì)胞分化還不明顯(圖版Ⅰ-12)。4 h 時(shí)，原腸胚發(fā)展到中期，細(xì)胞快速分裂增殖，外層胚層完全覆蓋了卵黃囊右上方1/2 的表面，胚環(huán)邊界清晰可辨，且胚盾增厚放大，細(xì)胞分化明顯，預(yù)示原腸腔形成(圖版Ⅰ-13)。40 min后，進(jìn)入原腸胚晚期，外層細(xì)胞開(kāi)始向另一側(cè)覆蓋，到達(dá)卵黃囊的2/3 左右。此時(shí)胚盾變窄，原腸胚發(fā)育結(jié)束(圖版Ⅰ-14)。

神經(jīng)胚階段 受精后5 h 30 min，黃鸝無(wú)齒鲹胚胎發(fā)育進(jìn)入神經(jīng)胚階段。在胚盾外層可見(jiàn)神經(jīng)板細(xì)胞出現(xiàn)分化，神經(jīng)芽的雛形出現(xiàn)，同時(shí)胚孔接近閉合(圖版Ⅰ-15)。受精后6 h 10 min，胚層細(xì)胞已經(jīng)幾乎完全覆蓋整個(gè)卵黃囊，尚存的孔隙被填平，胚胎從單層的胚盤(pán)發(fā)育成了由兩層細(xì)胞構(gòu)成的柱狀胚體結(jié)構(gòu)(圖版Ⅰ-16)。1 h 后，神經(jīng)板進(jìn)一步發(fā)育為中空的圓筒狀神經(jīng)管，頭部原基在膨大的柱狀胚體一端成形，這標(biāo)志著胚胎器官和系統(tǒng)開(kāi)始進(jìn)行高速分化，進(jìn)入新的發(fā)育階段(圖版Ⅰ-17)。

器官形成階段 受精后8 h 30 min，黃鸝無(wú)齒鲹胚胎發(fā)育進(jìn)入眼原基形成期，頭部?jī)蓚?cè)隆起眼芽結(jié)構(gòu)的雛形。與此同時(shí)柱狀胚體前端呈現(xiàn)鏟狀扁平結(jié)構(gòu)，為頭部特征發(fā)育奠定基礎(chǔ) (圖版Ⅰ-18)。在受精后的9 h，眼原基的外胚層向內(nèi)下陷，逐漸膨脹凸出而形成眼囊。這標(biāo)志著視覺(jué)器官的關(guān)鍵分化已經(jīng)開(kāi)始(圖版Ⅰ-19)。發(fā)育到受精后11 h 35 min，心臟作為第一個(gè)運(yùn)動(dòng)器官而出現(xiàn)，呈現(xiàn)簡(jiǎn)單的管狀結(jié)構(gòu)位于頭部末端略為下方，這預(yù)示著胚胎循環(huán)系統(tǒng)形成(圖版Ⅰ-20)。 13 h 30 min，在擴(kuò)張的眼囊下方可觀察到光學(xué)性晶狀體的出現(xiàn)，視網(wǎng)膜和其他結(jié)構(gòu)將在其后形成(圖版Ⅰ-21)。至13 h 45 min 心臟開(kāi)始有自主規(guī)律的收縮和舒張，標(biāo)志著有效的血液循環(huán)系統(tǒng)已經(jīng)建立(圖版Ⅰ-22)。18 h 30 min 進(jìn)入出膜前期，最后階段胚胎整體呈 “C” 字形，心跳和血流明顯，破膜孵化的最后階段即將到來(lái)(圖版Ⅰ-23～24)。

圖版 Ⅱ 黃鸝無(wú)齒鲹前仔魚(yú)期1. 初孵仔魚(yú)(正)，2. 初孵仔魚(yú)(側(cè))，3. 1 日齡仔魚(yú)，4. 2 日齡仔魚(yú)，5. 3 日齡仔魚(yú)。Plate Ⅱ G. speciosus larvae-prelarval stage 1. newly hatched larvae (frontal), 2. newly hatched larvae (side), 3. 1 dph larvae, 4. 2 dph larvae, 5. 3 dph larvae.

2.3 胚后發(fā)育

黃鸝無(wú)齒鲹從破殼而出到尾鰭骨骼開(kāi)始形成的0～20 dph 為仔魚(yú)期，其中0～3 dph 為前仔魚(yú)期(圖版Ⅱ)，是整個(gè)仔魚(yú)發(fā)育中最為關(guān)鍵的階段。剛孵化時(shí)體內(nèi)卵黃尚存余，口部和消化道尚未完全形成，不能進(jìn)食，依賴(lài)儲(chǔ)存養(yǎng)分。在0～3 dph，一系列器官和系統(tǒng)快速發(fā)育，口咽開(kāi)啟，腸胃通路建立，與此同時(shí)眼部色素沉積，視網(wǎng)膜和晶狀體功能加速建立，這為下一個(gè)積極攝食和快速成長(zhǎng)的發(fā)育階段奠定了基礎(chǔ)。

4～20 dph 為黃鸝無(wú)齒鲹的后仔魚(yú)期(圖版Ⅲ)，以卵黃囊被完全吸收作為進(jìn)入該階段的標(biāo)志。后仔魚(yú)期作為其生長(zhǎng)發(fā)育中極為關(guān)鍵的一個(gè)時(shí)期，卵黃囊儲(chǔ)備已消耗殆盡，消化道系統(tǒng)完善，通過(guò)主動(dòng)捕食獲得外部營(yíng)養(yǎng)。同時(shí)各鰭條迅速延長(zhǎng)，使運(yùn)動(dòng)更為靈活敏捷，追逐和捕食能力大幅提高。20 dph 后仔魚(yú)進(jìn)入稚魚(yú)階段，以脊索的完全彎曲作為進(jìn)入該階段的標(biāo)志。同時(shí)各鰭和消化系統(tǒng)發(fā)育完善，身體大面積浸染色素，不再透明，具備一定的保護(hù)色，這標(biāo)志著其由依賴(lài)型向獨(dú)立型生長(zhǎng)的轉(zhuǎn)變。

圖版 Ⅲ 黃鸝無(wú)齒鲹6、9、12、15 和20 dph 圖譜6 日齡仔魚(yú)，2. 9 日齡仔魚(yú)，3. 12 日齡仔魚(yú)，4. 15 日齡仔魚(yú)，5. 20 日齡仔魚(yú)。Plate Ⅲ Photos of 6, 9, 12 and 20 dph of G. speciosus larvae 6 dph larvae, 2. 9 dph larvae, 3. 12 dph larvae, 4. 15 dph larvae, 5. 20 dph larvae.

卵黃囊前仔魚(yú)期 黃鸝無(wú)齒鲹初孵仔魚(yú)全長(zhǎng)為(1 520±19) μm，卵黃囊呈長(zhǎng)橢圓形，長(zhǎng)徑為(981±12) μm，短徑為(597±11) μm，位于仔魚(yú)身體前下方，油球位于卵黃囊的最前端(圖版Ⅱ-1～2)。此位置構(gòu)造與其他鲹科魚(yú)類(lèi)有所不同，其他鲹科魚(yú)類(lèi)初孵仔魚(yú)的卵黃囊一般與頭部齊平或不超過(guò)頭部位置，且油球位于卵黃囊中部或中前端。初孵仔魚(yú)剛脫膜時(shí)，身體彎曲，軀體前半部分伏在卵黃囊上，呈現(xiàn)彎曲弓背狀，腹部朝天。頭部與軀干可見(jiàn)散點(diǎn)黑色素，細(xì)長(zhǎng)腸道緊貼在腹面，眼囊與晶狀體不著色(圖版Ⅳ-1)。

1 dph 仔魚(yú)：全長(zhǎng)為(1 737±24) μm，卵黃囊體積縮小約75%，不再遮蓋整個(gè)頭部。仔魚(yú)身體完全伸展，尾部提供動(dòng)力，能在水中上下調(diào)整身姿，但活動(dòng)能力仍較虛弱。背鰭與臀鰭基部色素沉積增加，形成色素帶，眼囊開(kāi)始著色(圖版Ⅳ-2、7)，軀干兩側(cè)顏色加深，尾部近乎透明。細(xì)長(zhǎng)腸道尚未充氣膨脹(圖版Ⅱ-3、圖版Ⅳ-11)。

2 dph 仔魚(yú)：全長(zhǎng)為(1 981±41) μm，卵黃囊體積僅余10%左右。此時(shí)能夠平衡懸浮并自主游動(dòng)，通過(guò)尾鰭擺動(dòng)快速變換身體位置。各鰭面的發(fā)育加快，尤其眼囊區(qū)黃色素沉淀，不透明(圖版Ⅳ-3)。消化道管腔擴(kuò)大，輪廓清晰可見(jiàn)(圖版Ⅱ-4)。

3 dph 仔魚(yú)：全長(zhǎng)為(2 126±39) μm，原有巨大卵黃囊儲(chǔ)備已完全被吸收消化。尾端殘留少量散點(diǎn)狀色素沉淀，軀干區(qū)域顏色轉(zhuǎn)為棕黃?；顒?dòng)行為仍較虛弱。眼部因黑色素高度富集而全黑(圖版Ⅳ-4)。心臟血液循環(huán)明顯。口器張開(kāi)，下頜支撐骨可見(jiàn)。消化道貫通暢通，腸道表面出現(xiàn)褶皺(圖版Ⅱ-5、圖版Ⅳ-12)。

脊索彎曲后仔魚(yú)期 6 dph 仔魚(yú)：全長(zhǎng)為(2 796±53) μm，頭腹內(nèi)原有的油球儲(chǔ)備已完全被吸收。魚(yú)鰾形成，與孵化初期相比，其游泳和避障能力獲得明顯提高，能夠主動(dòng)在水體中活動(dòng)，向光源方向趨化，這揭示了視覺(jué)系統(tǒng)和平衡裝置的逐步成熟。消化活動(dòng)增多，腸前段和胃后方之間形成了生理性的彎曲(圖版Ⅳ-13)，魚(yú)體軀干部分以及上下兩側(cè)體表可看到大塊顏色深沉的色素細(xì)胞聚集區(qū)塊，而眼囊區(qū)域因黑色素高度富集而呈現(xiàn)出黑色。此時(shí)仔魚(yú)整體體色以黃褐色為主(圖版Ⅲ-1)。

9 dph 仔魚(yú)：全長(zhǎng)為(3 266±63) μm，與6 日齡相比，軀干部分黑色素細(xì)胞沉積大量增加，在體表上形成了大塊黑色色斑。虹膜環(huán)明顯變寬，內(nèi)緣呈灰白色，外緣呈黃綠色(圖版Ⅳ-5)。背鰭位置向尾部后移，尾鰭逐漸呈扇形，尾鰭柄縮細(xì)，雛形開(kāi)始體現(xiàn) (圖版Ⅲ-2、圖版Ⅳ-8)。

12 dph 仔魚(yú)：全長(zhǎng)為(3 849±65) μm，背鰭和臀鰭區(qū)域開(kāi)始出現(xiàn)明顯的色素沉積，尾柄處變得更加纖細(xì)，腸道出現(xiàn)第2 個(gè)生理彎曲(圖版Ⅳ-14)，除頭下半部和尾端外，整個(gè)身體上遍布有分散的棕黃色色斑，整體顏色為深褐色 (圖版Ⅲ-3)。

15 dph 仔魚(yú)：全長(zhǎng)為(5 016±88) μm，除了尾端外，其他區(qū)域可見(jiàn)大量黑色素遍布魚(yú)體表面，體色以黃黑為主。虹膜環(huán)占眼球面積的2/3，均勻分布大量的顆粒狀色素(圖版Ⅳ-6)。尾柄部位愈加明確，脊索彎曲(圖版Ⅳ-9)，各鰭面逐步完善，尾鰭、第一背鰭、第二背鰭及臀鰭出現(xiàn) (圖版Ⅲ-4)。

20 dph 仔魚(yú)：全長(zhǎng)為(10 743±127) μm，除尾部和眼囊，全身大量色素沉淀，不透明，脊索末端彎曲完成。腹鰭出現(xiàn)，第一背鰭鰭條6 根；第二背鰭鰭條18 根；臀鰭鰭條24 根；尾鰭扇形面積增大，尾鰭鰭條34 根，尾叉出現(xiàn)(圖版Ⅲ-5、圖版Ⅳ-10)。

圖版 Ⅳ 黃鸝無(wú)齒鲹各部位發(fā)育形態(tài)特征1～6. 眼睛發(fā)育，7～10. 尾鰭發(fā)育，11～14. 腸道發(fā)育。Plate Ⅳ Morphological characteristics of various parts of G. speciosus in development 1-6. eye development, 7-10. caudal fin development, 11-14. intestine development.

3 討論

3.1 黃鸝無(wú)齒鲹的胚胎發(fā)育特征

魚(yú)類(lèi)胚胎發(fā)育可大致分為8 個(gè)階段，包括受精卵期、胚盤(pán)期、卵裂期、囊胚期、原腸胚期、神經(jīng)胚期、器官形成期和孵化出膜期。但不同魚(yú)種在各發(fā)育階段的命名和過(guò)程描述上存在一定差異。如畢加索小丑魚(yú)(Amphriprion percula)、云南光唇魚(yú)(Acrossocheilus yunanensis)和美洲鰣(Alosa sapidissima)的胚胎發(fā)育較為典型，可明確區(qū)分出8 個(gè)發(fā)育階段[10-12]。而錦鯉(Cyprinus carp)、棘頭梅童魚(yú)(Collichthys lucidus)、金錢(qián)魚(yú)(Scatophagus argus) 、翹嘴鲌(Culter alburnus)等[13-17]則缺失了胚盤(pán)期的描述，這可能是由于胚盤(pán)期時(shí)間較短導(dǎo)致的。另外，云南盤(pán)鮈(Discogobio yunnanensis)和臺(tái)灣泥鰍(Paramisgurnus dabryanus)亦未詳細(xì)描述胚盤(pán)期和孵化期的特點(diǎn)，僅描述了6 個(gè)發(fā)育階段[18-19]。此外，以斑馬魚(yú)(Danio rerio)為例，其發(fā)育階段的命名存在個(gè)別差異，如增加了體節(jié)期和眼囊期等[20]。這些差異一方面反映了魚(yú)類(lèi)胚胎發(fā)育過(guò)程中存在一定的物種特異性，但總體發(fā)育規(guī)律是高度一致的。研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)育時(shí)間長(zhǎng)短更多的與魚(yú)卵的黏性程度相關(guān)，黏性卵發(fā)育時(shí)間較長(zhǎng)，非黏性卵較短，這一點(diǎn)也不完全對(duì)應(yīng)于淡水魚(yú)和海水魚(yú)的區(qū)分[10,21-28]。因此，盡管存在細(xì)微差異，魚(yú)類(lèi)胚胎發(fā)育的整體發(fā)育順序和過(guò)程是高度同質(zhì)的。后續(xù)研究需關(guān)注這些差異形成的內(nèi)在機(jī)制，以期對(duì)不同物種發(fā)育規(guī)律有更深入理解。

黃鸝無(wú)齒鲹為廣鹽性魚(yú)類(lèi)，其受精卵僅能在海水條件下正常發(fā)育。通過(guò)室內(nèi)人工繁育觀察發(fā)現(xiàn)，黃鸝無(wú)齒鲹胚胎發(fā)育可分為8 個(gè)階段：受精卵期、胚盤(pán)期、卵裂期、囊胚期、原腸胚期、神經(jīng)胚期、器官分化形成期和出膜期。這一發(fā)育模式與其他硬骨海水魚(yú)類(lèi)如軍曹魚(yú)(Rachycentron canadum)[29]、黃 斑 籃 子 魚(yú)(Siganus oramin)[30]、豹紋鰓棘鱸(Plectropomus leopardus)[31]等高度相似。值得一提的是，盡管上述研究均對(duì)胚胎發(fā)育中胚盤(pán)隆起階段進(jìn)行了記錄與描述，但其對(duì)該階段的命名仍存在差異，如軍曹魚(yú)研究中，其將受精卵發(fā)育至胚盤(pán)隆起階段合稱(chēng)為合子期，而在對(duì)豹紋鰓棘鱸的研究中，則將胚盤(pán)隆起階段歸屬于卵裂期等。這可能是由于魚(yú)類(lèi)胚胎發(fā)育胚盤(pán)期時(shí)間較短引起的命名差異，實(shí)際上，魚(yú)類(lèi)從受精卵期發(fā)育至胚盤(pán)形成階段經(jīng)歷了細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核從植物極流向動(dòng)物極并最終形成盤(pán)狀胚盤(pán)的過(guò)程，是魚(yú)類(lèi)胚胎發(fā)育中首個(gè)細(xì)胞的形成過(guò)程。因此，本研究將胚盤(pán)期作為黃鸝無(wú)齒鲹發(fā)育過(guò)程中獨(dú)立的一個(gè)時(shí)期進(jìn)行描述。黃鸝無(wú)齒鲹胚胎發(fā)育所需時(shí)間為18.5 h，其發(fā)育模式及周期均類(lèi)似于豹紋鰓棘鱸的胚胎發(fā)育，屬于典型的浮性卵類(lèi)型。黃鸝無(wú)齒鲹胚胎出膜后仍無(wú)法直接攝食，約需72 h 才能開(kāi)始獲取外源性營(yíng)養(yǎng)。同時(shí)出膜個(gè)體的游泳能力較弱，通常漂浮于水體上層。待鰾完全形成(約96 h)后才能自由控制體位。

3.2 胚胎發(fā)育的速率及積溫

魚(yú)卵的大小對(duì)其發(fā)育進(jìn)程有重要影響，一般以卵徑表示其大小。殷名稱(chēng)[32]的研究表明，魚(yú)卵大小對(duì)其生長(zhǎng)發(fā)育有重要生態(tài)意義，總體來(lái)看，卵徑越大，發(fā)育速率越慢。以黃鸝無(wú)齒鲹為例，其卵徑較小，所需有效積溫為470.8～503.8 °C·h，而在相近條件下統(tǒng)計(jì)了2 種鲹科魚(yú)類(lèi)、4 種石斑魚(yú)類(lèi)，包 括 卵 形 鯧 鲹[30]、高 體 鰤(Seriola dumerili)[33-34]、棕點(diǎn)石斑魚(yú)(Epinephelus fuscoguttatus)[35]、斜帶石斑魚(yú)(E.coioides)[36]、鞍帶石斑魚(yú)(E.lanceolatus)[37]及豹紋鰓棘鱸的卵徑、發(fā)育溫度、胚胎發(fā)育所需時(shí)間及有效積溫(表2)?？梢?jiàn)黃鸝無(wú)齒鲹卵徑較卵形鯧鲹、高體鰤更小，其胚胎發(fā)育速率明顯更快，在相近的溫度條件下(22.0～26.0 °C)，高體鰤胚胎經(jīng)35 h 10 min 后孵化出膜[33]。而卵形鯧鲹的胚胎發(fā)育所需時(shí)間更是達(dá)到41 h 27 min[38]。而與礁棲性的石斑魚(yú)屬相比，在卵徑、溫度相近的條件下，斜帶石斑魚(yú)孵化時(shí)間要比黃鸝無(wú)齒鲹更長(zhǎng)，但其他鲹科魚(yú)類(lèi)如卵形鯧鲹、高體鰤的胚胎發(fā)育所需時(shí)間則遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于石斑魚(yú)屬魚(yú)類(lèi)，這可能與鮨科(Serranidae)魚(yú)類(lèi)和鲹科魚(yú)類(lèi)的種屬特異性有關(guān)。

表2 7 種海水魚(yú)類(lèi)受精卵的直徑、胚胎發(fā)育過(guò)程的溫度與發(fā)育所需時(shí)間Tab. 2 Fertilized egg diameter, temperature and time needed of embryonic development in seven fish species

黃鸝無(wú)齒鲹與4 種鲹科魚(yú)類(lèi)相比較，其前中期生長(zhǎng)速率較快，黃鸝無(wú)齒鲹卵徑小，使得卵裂期、囊胚期、原腸期以及神經(jīng)胚期等時(shí)期的發(fā)育時(shí)間相對(duì)縮短，從而整個(gè)胚胎發(fā)育的速率相對(duì)加快，各鲹科魚(yú)類(lèi)神經(jīng)胚在胚胎發(fā)育過(guò)程中形成的時(shí)間見(jiàn)表3。

表3 5 種鲹科魚(yú)類(lèi)的神經(jīng)胚形成時(shí)間Tab. 3 Formation time of neurula of five species in Carangidae

3.3 黃鸝無(wú)齒鲹的仔魚(yú)生長(zhǎng)特征

在傳統(tǒng)的魚(yú)類(lèi)早期生長(zhǎng)階段理論中，劃分不同發(fā)育階段的方式尚未統(tǒng)一，其劃分依據(jù)包括卵黃囊的消耗殆盡、由內(nèi)源性營(yíng)養(yǎng)轉(zhuǎn)向外源性營(yíng)養(yǎng)輸入、脊索彎曲等。本研究依據(jù)卵黃囊的消失，將仔魚(yú)期劃分為前仔魚(yú)期(0～3 dph)和后仔魚(yú)期(4～20 dph)，并根據(jù)脊索的完全彎曲、各鰭條的出現(xiàn)判斷后仔魚(yú)期發(fā)育是否結(jié)束。黃鸝無(wú)齒鲹仔魚(yú)初孵時(shí)平均全長(zhǎng) (1 520±19) μm，其卵黃囊3 dph即被消耗殆盡，在相近條件下，較同為鲹科魚(yú)類(lèi)的高體鰤發(fā)育時(shí)間明顯縮短[33]，黃鸝無(wú)齒鲹仔魚(yú)發(fā)育進(jìn)入后仔魚(yú)期；同屬內(nèi)源性營(yíng)養(yǎng)供給的油球于6 dph 后被仔魚(yú)完全吸收。15 dph，脊索開(kāi)始向上彎曲，各鰭逐漸成型。20 dph，脊索完全彎曲，各鰭出現(xiàn)且鰭條完備，后仔魚(yú)期發(fā)育結(jié)束。

本研究就相近條件下，對(duì)比了5 種鲹科魚(yú)類(lèi)[33-34,39-41]的仔魚(yú)階段發(fā)育特征(表4)，發(fā)現(xiàn)在4種鲹科魚(yú)類(lèi)中，黃鸝無(wú)齒鲹初孵仔魚(yú)體型最小，但其仔魚(yú)期的發(fā)育速率較其他同為鲹科的魚(yú)類(lèi)快，20 dph 時(shí)即完成了仔魚(yú)期的發(fā)育，這可能與其獨(dú)特的攝食方式有關(guān)，有研究者提出觀點(diǎn)，初孵仔魚(yú)的體型越大，其口裂也越大，其開(kāi)口攝入餌料的時(shí)間也越早。黃鸝無(wú)齒鲹吻部長(zhǎng)而寬大，沒(méi)有咽齒，僅依賴(lài)可伸縮的吻部吸取食物進(jìn)行攝食，因此盡管黃鸝無(wú)齒鲹初孵仔魚(yú)體型較小，但其在開(kāi)口攝食階段仍然可獲得相對(duì)更多的養(yǎng)分，促進(jìn)魚(yú)體各部位的分化發(fā)育。黃鸝無(wú)齒鲹魚(yú)苗的早期生長(zhǎng)呈現(xiàn)出生長(zhǎng)速率緩慢的前期和快速增長(zhǎng)的后期這種典型的 “異速生長(zhǎng)” 模式，在0～9 dph 的平均生長(zhǎng)速率僅為194 μm/d，但在10～20 dph 的平均生長(zhǎng)速率達(dá)到680 μm/d。這一發(fā)育規(guī)律與某些其他鲹科魚(yú)類(lèi)的觀察結(jié)果一致[33]。這種兩段式生長(zhǎng)策略被認(rèn)為是魚(yú)類(lèi)在進(jìn)化過(guò)程中適應(yīng)自然生態(tài)環(huán)境的重要方式之一，可提高脆弱苗種在早期關(guān)鍵階段的適應(yīng)性和存活率。9 dph 前黃鸝無(wú)齒鲹仔魚(yú)體表色素以點(diǎn)狀和散生的枝狀黃褐黑色素為主，但隨后體色迅速加深，10 dph 起以大量黑黃色塊為主要特征，顏色分布趨于均勻，整體呈現(xiàn)黃黑色調(diào)。這提示了體表色素沉積量和模式均與個(gè)體生長(zhǎng)存在高度協(xié)調(diào)性。

表4 5 種鲹科魚(yú)類(lèi)仔魚(yú)階段發(fā)育特征Tab. 4 Main characteristics of larvae stage of five species in Carangidae

本研究發(fā)現(xiàn)黃鸝無(wú)齒鲹與卵形鯧鲹的胚胎及胚后發(fā)育特征比較接近。卵形鯧鲹是我國(guó)廣東、海南海洋牧場(chǎng)的主養(yǎng)品種，黃鸝無(wú)齒鲹將來(lái)的開(kāi)發(fā)和產(chǎn)業(yè)發(fā)展，可以借鑒卵形鯧鲹成熟產(chǎn)業(yè)鏈關(guān)鍵環(huán)節(jié)的技術(shù)和管理。

（作者聲明本文無(wú)實(shí)際或潛在的利益沖突）