王靜 王振波 戴翚 肖璜 王似錦 周發(fā)友 馬仕洪

摘要：無菌檢查法是無菌藥品檢查的法定檢驗方法，其中薄膜過濾法因易操作、風險低和準確度高等優(yōu)點比直接接種法應用更廣泛。無菌藥品劑型種類繁多，其中抗生素類藥品因品種結構多變、抑菌性強和抗菌譜廣等因素，一直以來是建立無菌檢查方法的難點。本文就薄膜過濾法中的溶解、過濾、沖洗和培養(yǎng)等4個關鍵步驟展開討論，通過對已建立的13類47個品種共61個抗生素藥品無菌檢查方法的綜述，探討建立無菌檢查方法的基本策略，并對無菌檢查方法和結果的局限性進行討論，以期為建立抗生素類無菌藥品無菌檢查方法及正確認識無菌檢查結果提供思路和參考。

關鍵詞：抗生素；無菌藥品；無菌檢查；薄膜過濾法；局限性

中圖分類號：R978.1文獻標志碼：A

Development on sterility testing methods for antibiotic drugs

Wang Jing1， Wang Zhenbo2， Dai Hui1， Xiao Huang1， Wang Sijin1， Zhou Fayou1，? and Ma Shihong1

（1 National Institutes for Food and Drug Control， Beijing 100050;?2 Ningxia Hui Autonomous Region Institute of Drug Inspection， Yinchuan 750002）

Abstract Sterility testing is a statutory inspection method for sterile drugs， among which the membrane filtration method is more widely used compared to the direct inoculation of culture medium due to its advantages of easy operation， low risk， and high accuracy. There are various types of sterile drug formulations， among which antibiotic drugs have been a challenge in establishing sterility testing methods due to their diverse variety， structure， strong antibacterial properties， and wide antibacterial spectrum. This article discussed the four key steps of dissolution， filtration， rinsing， and cultivation in the membrane filtration method. Through a review of 61 established sterility testing methods for 13 categories and 47 varieties of antibiotics， the basic strategies for establishing sterility testing methods were discussed， and the limitations of sterility testing methods and results were also discussed in order to provide ideas and references for the establishment of sterility testing methods for antibiotics and the correct understanding of sterility testing results.

Key words Antibiotics; Sterile drugs; Sterility testing; Membrane filtration method; Limitation

藥品無菌檢查法最早于1932年收載于《英國藥典》（British Pharmacopoeia， BP）[1]，《中國藥典》第一版于1953年收載有“藥品無菌檢驗法”[2]，用于判斷藥品是否滿足無菌特性。經過幾十年的技術發(fā)展，藥品無菌概念亦不斷變化，如今，無菌檢查的結果是評估藥品在規(guī)定的檢驗條件下是否滿足質量標準要求的一個關鍵指標，而確認藥品的無菌特性更重要的是需要結合無菌生產工藝、數(shù)據(jù)記錄和質量監(jiān)控等，構建無菌保障體系。藥品進行無菌檢查主要用于檢測由于技術故障、人為失誤、混淆滅菌與非滅菌物品等因素引起的污染，是生產企業(yè)和監(jiān)管機構用于成品無菌性檢測的唯一可用的分析方法[3-4]，也是GMP檢查的主要內容之一[5]。

無菌檢查法包括薄膜過濾法和直接接種法。無菌藥品可大致可分為注射劑、眼用制劑、無菌固體原料和抗生素原料藥等。其中，注射劑中抗生素類藥品的市場占有份額較大，應用最為廣泛。在進行無菌檢查時，通常只要供試品性質允許，應首選薄膜過濾法。薄膜過濾法最早于1964年用于抗生素樣品[6]，一般采用封閉體系，具有操作方便、不易污染、結果準確等優(yōu)勢[7]。

抗生素類藥品用于治療細菌、真菌等引起的感染類疾病。按結構可分為β-內酰胺類、四環(huán)素類、氯霉素、大環(huán)內酯類、硝基咪唑類、氨基糖苷類、喹諾酮類、三唑類和蒽環(huán)類等[8]?？股仡愃幤芬志詮?、抗菌譜廣，大多數(shù)樣品難以去除抑菌性，一直以來是建立無菌檢查方法的重點和難點。本文以抗生素類藥品的無菌檢查方法為研究對象，從溶解、過濾、沖洗和培養(yǎng)4個主要環(huán)節(jié)，總結文獻中61個采用薄膜過濾法的案例，剖析無菌檢查方法開發(fā)的要點，建立消除抗生素類產品抑菌性的策略，以期為開發(fā)類似藥物或新品種的無菌檢查方法提供思路和參考。

1 建立無菌檢查方法的過程拆解

對抗生素藥品開展無菌檢查時，首先應消除抗生素的抑菌性對實驗的影響。消除抗生素抑菌性的途徑主要包括降低抗生素初始濃度、選擇合適的沖洗液（可添加中和劑）、增加沖洗量、濾膜材質的篩選、培養(yǎng)基的體積及是否添加中和劑等。表1對13類共47種抗生素品種的無菌方法按其結構進行了匯總，下文將從溶解、過濾、沖洗和培養(yǎng)4個維度分別討論各類抗生素藥品無菌檢查的難點及解決辦法。

1.1 溶解

樣品溶解過程需要兼顧抽樣方式的特點及取樣量。固體注射用粉針劑，需要選擇適宜的溶解液[9]，同時考慮稀釋樣品所需的溶解液量。抗生素供試液除了應具有易過濾的特點外，還要考慮抗生素在濾膜表面的吸附、殘留等問題。供試液中抗生素的初始濃度決定了每張膜過濾的抗生素量，其對于消除抑菌性也很重要，表1中雖然有少數(shù)方法中抗生素的濃度超過50 mg/mL，但73%的方法中抗生素的初始濃度均控制在25 mg/mL的范圍內（圖1）；80%的方法能夠將每張濾膜過濾抗生素的量控制在5 g的范圍內，剩余的方法每張濾膜過濾抗生素最高量為10 g

（圖2）。結合表1數(shù)據(jù)可知，當抗生素濃度或每張濾膜過濾抗生素的量較高時，所建立的方法要么沖洗量較大，要么需添加高效中和劑，如青霉素酶、金屬離子等降低沖洗量，要么使用特殊材質的濾膜，如低吸附的尼龍膜等，或多種方法聯(lián)用，以消除其強抑菌性。

1.2 過濾

《中國藥典》規(guī)定薄膜過濾法所用濾膜的孔徑為0.45 μm[7]，但未規(guī)定濾膜的種類和材質?？紤]到抗生素類樣品若吸附殘留在濾膜上，抑菌性難以去除。因此，選擇低吸附的濾膜材質，也是建立抗生素無菌方法的一個考慮要點。常用的濾膜材質有醋酸纖維素膜、硝酸纖維素膜、醋酸和硝酸混合纖維素膜、尼龍膜、聚偏二氟乙烯膜等，不同材質的濾膜具有不同的適用范圍及優(yōu)缺點。抗生素在濾膜上的吸附特性通常以每張膜上抗生素的殘留量來表示，有報道表明，泊沙康唑在不同材質濾膜上的殘留量明顯不同[10]。由表1可知，篩選出的具有低吸附特性的濾膜大多為聚偏二氟乙烯膜（polyvinylidene fluoride，簡稱PVDF）或尼龍膜，纖維素膜較少；少數(shù)使用濾膜廠家標注為特殊材質或抗生素專用濾膜，由于未明確材質的具體種類，對使用者選擇濾膜的參考價值較??；由于生產工藝的差異，相同材質不同品牌濾膜的結構和性能亦可能存在差異，因而不同研究團隊對相同抗生素品種篩選出的具有最低吸附特性的濾膜可能略有不同[10-11]。此外，對于難以過濾的樣品如眼膏劑等，應關注過濾參數(shù)（如：泵速/泵壓）；若使用有機溶劑等特殊溶劑，應關注濾膜使用前后的完整性[12-13]；對具有高殘留、高抑菌性的樣品，可采用分膜過濾的方式[14]；對于易堵膜的樣品，可采用雙膜過濾的方式等[15]。

1.3 沖洗

建立無菌檢查方法時，選擇適宜的中和劑和優(yōu)化沖洗量是沖洗過程中需要摸索的兩項最重要的實驗因素（圖3）。

1.3.1 中和劑

《中國藥典》列出了常見干擾物的對應中和劑[16]。然而，抗生素因種類繁多且抑菌活性強，添加1種中和劑有時無法消除抑菌活性，需要幾種中和劑聯(lián)合使用或探索新型高效的中和劑以適用于樣品的性質。

卵磷脂和吐溫80是應用最廣泛的非特異性中和劑，具有表面活性，且與非離子具有較好的相容性[17]；青霉素酶是最常用的β-內酰胺酶，對多種β-內酰胺類（如青霉素）抗生素具有水解活性，是首選的中和劑，但濃度較高時，也可抑制微生物生長[18]。此外，不同類型的β-內酰胺酶，如頭孢菌素酶（50萬單位頭孢菌素酶與600萬單位青霉素酶對去除頭孢尼西鈉的抑菌活性相當）[19]、金屬酶（25萬單位金屬酶與600萬單位青霉素酶對去除亞胺培南的抑菌活性相當）[20]等對相應的β-內酰胺品種具有較高的水解活性。二價金屬離子，如鎂離子、鈣離子和錳離子等與喹諾酮類抗生素可形成絡合物，使其抗菌活性減弱，因而常用作喹諾酮類抗生素的中和劑，但也應注意其對微生物生長的影響[21-22]。此外，也可嘗試使用新型的中和劑，如利用β-環(huán)糊精對抑菌物質的包埋作用、表面活性劑的乳化作用等抑制特定抗生素的抑菌活性。

1.3.2 沖洗量

《中國藥典》規(guī)定薄膜過濾法的沖洗量一般不超過500 mL，最高不得超過1000 mL[7]，以防止沖洗對微生物的損傷和對濾膜截留能力的影響。通常樣品供試液本身具有一定的體積，而《中國藥典》僅建議了沖洗液的體積，若供試液體積較大，也可能會影響濾膜的完整性。圖4分析了61種方法中，供試液及沖洗液體積大于500和1000 mL所占的比率。若只考慮沖洗液的影響，61%的方法沖洗量大于500 mL，7%的方法沖洗量大于1000 mL；若考慮供試液和沖洗液兩者共同的影響，84%的方法沖洗量大于500 mL，15%的方法沖洗量大于1000 mL，沖洗的總體積較高。分析沖洗總體積較低的方法，大多使用了β-內酰胺酶，酶作為一種高效的中和劑，可高效消除β-內酰胺類抗生素的抑菌性，從而可有效控制沖洗量于較低的范圍。

1.4 培養(yǎng)

不同抗生素因抗菌譜的不同使得其對代表性菌株的敏感性也不同。建立無菌方法時通常應選用最容易被抑制、最難培養(yǎng)、最敏感的代表性菌株作為敏感菌，保證所建立方法的有效性。圖5列出了13類抗生素共61種方法所選用的敏感菌，可見，具有不同抗菌譜的不同代頭孢菌素的敏感性具有明顯差異（圖6）；同一類抗生素的不同品種也可能存在微量差異。總體來說，抗細菌類抗生素以大腸埃希菌（革蘭陰性菌的代表菌株）、金黃色葡萄球菌（革蘭陽性菌的代表菌株）和兩者共同作為敏感菌居多，也存在枯草芽孢桿菌較為敏感的情況；應根據(jù)抗生素的抑菌特性選擇敏感菌，對抗革蘭陽性的抗生素，一般選擇金黃色葡萄球菌；對抗革蘭陰性的抗生素一般選擇大腸埃希菌，具體可參考美國臨床實驗室標準指南（NCCLS）中對各類抗生素的MIC值[23-24]?？箙捬躅惪股囟嘁陨咚缶鸀槊舾芯?；抗真菌類抗生素多以白色念珠菌為敏感菌，但也應注意黑曲霉的敏感性。敏感菌在建立無菌檢查方法時作為代表菌種，可更高效、精準地建立無菌方法。

2 討論

2.1 建立無菌檢查方法的基本策略

無菌檢查過程可拆解為溶解、過濾、沖洗和培養(yǎng)4個關鍵步驟，每一步驟又可細化為多個要點（圖7）。抗生素樣品的抑菌性可通過稀釋、沖洗、中和和轉移等多種方式去除。若僅考慮中和劑和沖洗量，易導致沖洗量過大（圖4），可能破壞濾膜的完整性或/和損傷微生物。影響建立無菌檢查方法的因素較多（圖7），多因素交叉使得其難度高、任務量大。因而，建立無菌檢查的方法策略是十分重要的（圖8）。首先應通過查閱文獻，基于產品的特性把握關鍵要素設計試驗方案，在此基礎上以敏感菌株為指示劑開展方法預實驗，最后用其他菌株驗證方法的適用性。利用該策略可更加高效、科學、合理地開發(fā)無菌檢查的方法。

2.2 無菌檢查法的局限性

無菌檢查法作為1種可靠的傳統(tǒng)檢驗方法，仍存在主觀判斷、人工操作、耗時長等局限性。由于影響因素較多，無菌方法在轉移過程中，可能存在不同實驗室、不同儀器、不同人員、不同試劑和耗材等的差異，導致方法的適用性結果出現(xiàn)差異，因而應注重微生物實驗室的質量控制，盡可能地保證試驗結果的可靠、可重復和科學合理[25]?！吨袊幍洹方诎l(fā)布的無菌檢查法公示稿中，將每張膜的沖洗量限制在500 mL[26]，提示對抑菌性極強的樣品開發(fā)合適的無菌方法的難度增加，且對已有方法的合規(guī)性亦應重新進行評估。此外，一些新型快檢技術，如流式細胞技術[27-28]、呼吸法[29-30]、ATP生物發(fā)光[31]、等溫微量熱法[32]和毛細管電泳法[33]等方法具有快速、微量、自動化等優(yōu)勢，但儀器和耗材價格昂貴，目前已嘗試用于生物制品，有望用于抗生素類藥品無菌檢查方法的初篩或替代。

無菌檢查由于取樣量較小，對于監(jiān)測該批次產品的污染能力是有限的，因而結果具有一定的局限性和風險。僅根據(jù)無菌檢查結果作為評價產品無菌水平的依據(jù)可能會產生誤導，因為無菌檢查結果陰性（無菌 “合格”）可能只是無法檢測到污染微生物[34]，其實際產品仍可能存在污染微生物（“不合格”）。深度理解產品的無菌特性、無菌檢查與無菌保證水平三者之間的關鍵區(qū)別，明確無菌檢查的應用范圍，將無菌檢查與終端滅菌工藝驗證、無菌生產工藝驗證結合[35]，是保障無菌藥品質量水平的關鍵。

參 考 文 獻

范文平， 趙宏大， 謝文. 無菌檢查試驗的先天缺陷及應對策略的思考[J]. 中國藥事， 2014， 28（6）： 591-594.

衛(wèi)生部出版社. 中華人民共和國藥典[S]. （1953年版）. 北京： 中國醫(yī)藥科技出版社， 1953： 附錄42藥品無菌檢查法.

The European Pharmacopoeia Commission. The European Pharmacopoeia[S]. （11.0th Ed）. Strasbourg： Council of Europe， 2021：5.1.9 Guidelines for using the test for sterility.

Australian Government Department of Health and Ageing. TGA guidelines for sterility testing of therapeutic goods[R]. Therapeutic Goods Administration， 2006.

Pharmaceutical Inspection Convention and Pharmaceutical Inspection Co-operation Scheme. PIC/S Recommendation on Sterility Testing[R]. Pharmaceutical Inspection Convention and Pharmaceutical Inspection Co-operation Scheme， 2007-9-25.

Bowman F W. Application of membrane filtration to antibiotic quality control sterility testing[J]. J Pharm Sci， 1966， 55（8）： 818-821.

國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典[S]. （2020年版第四部）. 北京： 中國醫(yī)藥科技出版社， 2020： 1101無菌檢查法.

德尼爾 S P， 霍奇 N A， 戈爾曼 S P. 藥物微生物學[M]. 北京： 化學工業(yè)出版社， 2007.

Cardoso V M， Solano A G R， Prado M A F， et al. Investigation of fatty acid esters to replace isopropyl myristate in the sterility test for ophthalmic ointments[J]. J Pharm Biomed Anal， 2006， 42（5）： 630-634.

馬仕洪， 肖璜， 袁宇， 等. 泊沙康唑注射液無菌檢查方法的建立[J]. 藥物分析雜志， 2018， 38（9）： 1568-1572.

陳青連， 姚振， 萬超. 三唑類抗真菌藥物泊沙康唑注射液無菌檢查方法研究[J]. 中國藥業(yè)， 2020， 29（17）： 63-67.

馮震， 肖珊珊， 陳輝， 等. 注射用微球內部無菌檢查法探討[J]. 中國醫(yī)藥工業(yè)雜志， 2022， 53（12）： 1761-1768.

王璐， 向東， 張艷， 等. 非水溶液氯硝西泮注射劑無菌檢查法的研究[J]. 昆明醫(yī)科大學學報， 2023， 44（11）： 82-86.

李瑋， 許威， 馬仕洪. 15種注射用頭孢菌素無菌檢查方法研究[J]. 中國藥房， 2007， 18（25）： 1971-1973.

丁勃， 徐曉潔， 冷佳蔚， 等. 雙濾膜過濾方法的建立及在卡波姆眼用凝膠無菌檢查試驗中的應用[J]. 藥物分析雜志， 2014， 34（5）： 800-804.

國家藥典委員會. 非無菌產品微生物限度檢查： 微生物計數(shù)法. 中華人民共和國藥典（2020年版四部）[S]. 北京： 中國醫(yī)藥科技出版社， 2020： 1105.

張福娥， 喬玫， 王曉瑞. 一種醋酸氯己定皮膚消毒劑的中和劑選擇[J]. 中國消毒學雜志， 2018， 35（10）： 746-748.

Kou Y， Halpenny M， Elmoazzen H， et al. Development of a proof of principle for universal neutralization of antibiotics in cord blood by-products used for sterility testing[J]. Transfusion， 2018， 58（6）： 1421-1426.

肖建光， 歐國棟， 賴珊， 等. 注射用頭孢尼西鈉無菌檢查方法的優(yōu)化及關鍵影響因素[J]. 中國抗生素雜志， 2021， 46（4）： 287-290.

歐國棟， 肖建光， 賴珊， 等. 注射用亞胺培南西司他丁鈉無菌檢查法的優(yōu)化及標準化[J]. 中國抗生素雜志， 2023， 48（3）： 327-332.

楊美琴， 蔡春燕， 劉鵬， 等. 鹽酸莫西沙星片微生物限度檢查方法討論[J]. 中國抗生素雜志， 2022， 47（3）： 245-251.

馬仕洪， 劉鵬， 戴翚， 等. 加替沙星無菌檢查方法的建立與標準操作探討[J]. 藥物分析雜志， 2007， 27（6）： 877-880.

張新妹， 胡昌勤， 馬越， 等. 敏感菌株在抗生素抑菌試驗中的應用[J]. 廣東藥學院學報， 2003， 19（2）： 116-119.

張新妹， 馬越， 胡昌勤， 等. 抗菌藥物無菌檢查法中陽性對照菌選擇的探討[J]. 中國藥事， 2003， 17（8）： 513-515.

Mcguire J， Kupiec T. Quality-control analytical methods： the quality of sterility testing[J]. Int J Pharm Compd， 2007， 11（1）： 52-55.

國家藥典委員會. 關于1101無菌檢查法標準草案的公示[S/OL]. （2023-9-13）[2024-1-12]. https：//www.chp.org.cn/#/business/standard.

宋光艷， 馮震， 潘盈盈， 等. 流式細胞技術在藥品無菌檢查中的應用研究[J]. 中國藥師， 2018， 21（2）： 342-345.

Mohr H， Lambrecht B， Bayer A， et al. Basics of flow cytometry-based sterility testing of platelet concentrates[J]. Transfusion， 2006， 46（1）： 41-49.

厲高慜， 潘偉婧， 王燦， 等. 二氧化碳信號檢測的快速微生物方法應用于細胞制品無菌檢查的評估[J]. 藥物分析雜志， 2022， 42（1）： 147-155.

Bugno A， Saes D P S， Almodovar A A B， et al. Performance survey and comparison between rapid sterility testing method and pharmacopoeia sterility test[J]. J Pharm Innov， 2018， 13（1）： 27-35.

Guest M， Pickard B， Smith B， et al. The use of amplified ATP bioluminescence for rapid sterility testing of drug product formulations [J]. PDA J Pharm Sci Technol， 2023， 77（5）： 402-411.

Brueckner D， Krahenbuhl S， Zuber U， et al. An alternative sterility assessment for parenteral drug products using isothermal microcalorimetry[J]. J Appl Microbiol， 2017， 123（3）： 773-779.

Petr J， Jiang C， Sevcik J， et al. Sterility testing by capillary electrophoresis： A comparison of online preconcentration approaches in capillaries with greater internal diameters[J]. Electrophoresis， 2009， 30（22）： 3870-3876.

The United States Pharmacopeial Convention. United States Pharmacopoeia43-National formulary38[S]. （2020）. Boston： United States Pharmacopoeia， 2020： 1211 Sterility assurance.

Daniell E， Bryans T， Darnell K， et al. Product Sterility Testing . . . To Test or Not to Test？ That Is the Question[J]. Biomed Instrum Technol， 2016， 50（Suppl 3）： 35-43.

藍福勝， 鄭挺， 王曉英， 等. 鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液無菌檢查方法優(yōu)化[J]. 海峽藥學， 2023， 35（7）： 48-51.

王君， 吳俊紅， 黃加秀， 等. β-環(huán)糊精溶液在注射用德拉沙星無菌檢查中的應用[J]. 中國藥品標準， 2022， 23（6）： 653-656.

李昊， 李旭， 張亞杰. 注射用甲磺酸培氟沙星無菌檢查法的確定[J]. 中國抗生素雜志， 2017， 42（6）： 531-533.

于翾， 曹曉云. 鹽酸環(huán)丙沙星乳膏無菌檢查方法的建立[J]. 天津藥學， 2013， 25（3）： 3-6.

湛文青， 林麗英. 氧氟沙星眼膏無菌檢查方法的建立[J]. 今日藥學， 2009， 19（9）： 35-36.

江志杰， 劉文杰， 高春， 等. 左氧氟沙星注射液無菌檢查方法驗證[J]. 中國藥品標準， 2008， 9（4）： 245-247.

張新妹， 李會輕， 胡昌勤， 等. 5種抗生素滴眼劑的無菌檢查[J]. 華西藥學雜志， 2003， 18（5）： 380-381.

孫春艷， 張春瑛， 沈佳特， 等. 注射用頭孢菌素無菌檢查的方法學驗證[J]. 醫(yī)藥導報， 2007， 26（9）： 1089-1091.

陳扣寶， 呂小燕. 注射用頭孢噻肟鈉舒巴坦鈉無菌檢查方法適用性研究[J]. 職業(yè)與健康， 2020， 36（13）： 1757-1760.

肖莉. 注射用頭孢曲松鈉無菌檢查法驗證[J]. 中國藥師， 2011， 14（11）： 1698-1700.

李趣嫦， 李文靖. 頭孢匹胺無菌檢查方法的建立[J]. 中國抗生素雜志， 2020， 45（12）： 1242-1245.

張新妹， 劉元瑞， 胡昌勤， 等. 頭孢地尼原料無菌檢查法的研究[J]. 醫(yī)藥導報， 2004， 23（2）： 121-122.

傅莉萍， 王朝麗， 李婷， 等. 氨曲南及其注射劑無菌檢查方法適用性試驗[J]. 藥學服務與研究， 2021， 21（6）： 419-423.

張平， 彭春丹， 王健美， 等. 美羅培南及其注射劑無菌檢查方法的優(yōu)化[J]. 中國藥品標準， 2021， 22（5）： 458-464.

張曉明， 何曉英. 青霉素粉針劑無菌檢查方法的實驗研究[J]. 中國抗生素雜志， 2004， 29（4）： 255-256.

邵翠翠， 馬弋， 鄧瑜. 3種抗菌藥物眼用制劑無菌檢查方法的建立[J]. 醫(yī)藥導報， 2015， 34（z1）： 110-111.

楊光梅， 管茂東， 黃燕， 等. 氯霉素無菌檢查方法學研究[J]. 藥物生物技術， 2023， 30（2）： 136-139.

董自艷， 戴翚. 氯霉素滴眼液無菌檢查方法的研究[J]. 中國實用醫(yī)藥， 2015， （16）： 280-281.

李冰， 周曼迪， 傅蓉， 等. 利福霉素鈉制劑的無菌檢查法方法學研究[J]. 中國藥師， 2014， 17（6）： 1047-1049.

李秋菲， 楊敏， 趙生奇， 等. 注射用阿奇霉素無菌檢查法方法學研究[J]. 中國藥業(yè)， 2008， 17（20）： 23-24.

殷飛， 呂玉奇， 崔春英. 抗生素品種無菌檢查最佳沖洗條件的選擇[J]. 中國藥品標準， 2001， 2（4）： 55-57.

夏天， 崔迎， 李宏鐸， 等. 甲硝唑氯化鈉注射液無菌檢查方法適用性試驗[J]. 中國醫(yī)藥導報， 2018， 15（24）： 121-124.

裴小龍， 楊曉莉， 張志蕓. 硝基咪唑類藥物無菌檢查中吐溫80應用的研究[J]. 安徽醫(yī)藥， 2013， 17（4）： 571-572.

劉洪祥， 劉海玲， 解慧， 等. 注射用替加環(huán)素無菌檢查的研究及優(yōu)化[J]. 藥物分析雜志， 2020， 40（8）： 1443-1450.

肖甜甜， 姜儒， 劉知源， 等. 注射用鹽酸多西環(huán)素無菌檢查方法學考察[J]. 中國藥師， 2019， 22（1）： 191-193.

張建革， 楊淑先， 劉守志. 多柔比星脂質體凍干粉針無菌檢查方法探討[J]. 醫(yī)藥導報， 2004， 23（4）： 263.

基金項目：中國食品藥品檢定研究院中青年發(fā)展研究基金（No. 2023A7）

作者簡介：王靜，女，生于1995年，碩士，助理研究員，主要從事藥品微生物檢驗與控制工作，E-mail： wangjing123@nifdc.org.cn

*通信作者，E-mail： mash@nifdc.org.cn

第一作者：王靜，北京化工大學藥學碩士，助理研究員；主要從事藥品微生物檢驗及科研工作。

通信作者：馬仕洪，生于1972年，藥學碩士，主任藥師，2003年畢業(yè)于中國藥品生物制品檢定所，現(xiàn)任中國食品藥品檢定研究院化藥所微生物室主任。從事藥品微生物科研及檢驗工作。