王松 于明艷 趙海云 于升平 陳德俊

摘要：目的 建立離子色譜法同時(shí)測(cè)定注射用阿莫西林鈉/克拉維酸鉀中鈉離子與鉀離子的含量，通過(guò)計(jì)算其成鹽率，對(duì)不同企業(yè)樣品的成鹽工藝進(jìn)行評(píng)價(jià)。方法 采用IonPac CS12A陽(yáng)離子交換色譜柱（4 mm×250 mm）和IonPac CG12A保護(hù)柱（4 mm×50 mm），檢測(cè)器為電導(dǎo)檢測(cè)器，抑制器電流為20 mA，以6.7 mmol/L甲烷磺酸溶液為淋洗液，流速為1.0 mL/min。結(jié)果? 鈉離子濃度在6.01～18.04 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系（r=0.9999，n=5）；平均回收率為100.4%（RSD=0.4%，n=9）；鉀離子濃度在3.33～9.98 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系（r=0.9998，n=5）；平均回收率為100.2%（RSD=0.5%，n=9）。測(cè)定了37批注射用阿莫西林鈉/克拉維酸鉀中鈉和鉀的含量，其成鹽率分別為1.00～1.13和0.94～1.05。結(jié)論 本方法可用于注射用阿莫西林鈉/克拉維酸鉀中鈉離子與鉀離子的含量測(cè)定，各企業(yè)樣品成鹽情況較好，但需關(guān)注成鹽劑的殘留。

關(guān)鍵詞：注射用阿莫西林鈉/克拉維酸鉀；成鹽率；離子色譜法；鈉離子；鉀離子

中圖分類號(hào)：R978.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

Analysis of the salt-forming rate of two components in amoxicillin sodium and clavulanate potassium for injection

Wang Song， Yu Mingyan， Zhao Haiyun， Yu Shengping， and Chen Dejun

（Shandong Institute for Food and Drug Control， NMPA Key Laboratory for Research and Evaluation of Generic Drugs， Shandong Research Center of Engineering ang Technology for Consistency Evalution of Generic Drugs， Ji'nan 250101）

Abstract? ? Objective? ? This research established an ion chromatographic method for simultaneous determination of sodium and potassium ions in amoxicillin sodium and clavulanate potassium for injection. According to the salt-forming rate， the salt-forming processes of different enterprises were evaluated. Methods? ? A cation exchange chromatography column of IonPac CS-12A （4 mm×250 mm） and a protection column of IonPac CG-12A （4 mm×50 mm） were used. The detector was a suppressed conductivity detector， and the suppressor current was 20 mA. An isocratic eluent of 6.7 mmol/L of methane sulfonic acid （MSA） solution was chosen as the mobile phase， with a flow rate of 1.0 mL/min. Results? ? The linear correlation of sodium ions was good within the range of 6.01～18.04 μg/mL （r=0.9999， n=5）. The average recovery was 100.4% （RSD=0.4%， n=9）. The linear correlation of potassium ions was good within the range of 3.33～9.98 μg/mL （r=0.9998， n=5）. The average recovery was 100.2% （RSD=0.5%， n=9）. The content of sodium and potassium ions in 37 batches of amoxicillin sodium and clavulanate potassium for injection were determined， with salt-forming rates ranging from 1.00 to 1.13 and 0.94 to 1.05， respectively. Conclusions? ? This method could be used for the determination of sodium and potassium ions in amoxicillin sodium and clavulanate potassium for injection. The salt-forming rate of samples from various enterprises was promising， but attention should be paid to the residue of salt-forming agents.

Key words? ? Amoxicillin sodium and clavulanate potassium for injection; Salt-forming rate; Ion chromatography;Sodium ions; Potassium ions

注射用阿莫西林鈉/克拉維酸鉀（5：1）由葛蘭素史克（GSK）公司研發(fā)，于1985年在英國(guó)首次上市。本品為阿莫西林鈉與克拉維酸鉀按標(biāo)示比例混合制成的復(fù)方制劑，未添加輔料，適用于產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶的敏感菌所致的感染。兩者合用，可保護(hù)阿莫西林免遭β-內(nèi)酰胺酶水解[1]，同時(shí)本品的抗菌譜較阿莫西林有所擴(kuò)大。

注射用阿莫西林鈉/克拉維酸鉀中兩組分均以成鹽的形式存在，成鹽是改善藥物分子理化性質(zhì)、提高成藥性的有效手段之一[2]。通過(guò)成鹽提高了本品的水溶性，適用于制備靜脈注射劑。藥物成鹽不完全，將影響藥物在體內(nèi)的吸收與分布[3]；結(jié)晶工藝不完善，致使成鹽劑過(guò)量殘留，都會(huì)影響藥物的安全性和有效性。

中國(guó)藥典2020年版二部中阿莫西林有關(guān)物質(zhì)控制的雜質(zhì)總量為不得過(guò)3.0%，而阿莫西林鈉的雜質(zhì)總量為不得過(guò)9.0%。另有文獻(xiàn)報(bào)道[4]注射用頭孢曲松鈉由于成鹽工藝的差異，不同企業(yè)產(chǎn)品中，產(chǎn)生于成鹽工序的雜質(zhì)12的含量可相差8倍。可見成鹽工藝是影響雜質(zhì)種類和含量的關(guān)鍵因素。離子色譜法廣泛應(yīng)用于藥物分析中無(wú)機(jī)離子的檢測(cè)[5-7]，且可同時(shí)測(cè)定多種離子。本研究建立了離子色譜法同時(shí)測(cè)定注射用阿莫西林鈉/克拉維酸鉀中鈉離子與鉀離子的含量，通過(guò)摩爾數(shù)比計(jì)算成鹽率，考察不同企業(yè)產(chǎn)品的成鹽情況，對(duì)評(píng)價(jià)其藥品質(zhì)量具有重要價(jià)值。

1 儀器與試藥

ICS-5000型離子色譜儀（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司）；XPR205型電子天平（瑞士Mettler Toledo公司）。

純凈水（廣州屈臣氏食品飲料有限公司）；甲烷磺酸（批號(hào)A0419723）（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司）99%；氯化鈉基準(zhǔn)試劑（批號(hào)2018710）、硫酸鉀基準(zhǔn)試劑（批號(hào)2019110）（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）100%。

注射用阿莫西林鈉/克拉維酸鉀：14家企業(yè)共36批樣品；1批參比制劑（GSK，批號(hào)SR2M）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

用陽(yáng)離子交換色譜柱（IonPac CS12A柱，

4 mm×250 mm，或效能相當(dāng)?shù)纳V柱；保護(hù)柱：IonPac CG12A，4 mm×50 mm）；檢測(cè)器為電導(dǎo)檢測(cè)器；檢測(cè)方式為抑制電導(dǎo)檢測(cè)，抑制器電流為

20 mA；柱溫35 ℃；檢測(cè)池溫度35 ℃；以6.7 mmol/L

甲烷磺酸溶液為淋洗液；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣體積25 μL。

2.2 溶液的配制

2.2.1 供試品溶液的配制

取本品約24 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2.2 對(duì)照品溶液的配制

取氯化鈉基準(zhǔn)試劑與硫酸鉀基準(zhǔn)試劑適量，置105 ℃干燥至恒重，再分別取氯化鈉約305 mg和硫酸鉀約148 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液、溶劑（屈臣氏水）分別注入離子色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，對(duì)照品溶液中鈉離子和鉀離子色譜峰之間的分離度符合要求（圖1），空白溶劑中未檢出與鈉離子和鉀離子保留時(shí)間一致的色譜峰，對(duì)樣品測(cè)定無(wú)干擾。

2.3.2 線性關(guān)系

分別取氯化鈉基準(zhǔn)試劑約305 mg和硫酸鉀基準(zhǔn)試劑約148 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加水溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含鈉離子1.2 mg和鉀離子0.66 mg的溶液，作為對(duì)照品貯備液。精密量取對(duì)照品貯備液適量，分別加水稀釋制成每1 mL中約含鈉離子6.0、9.6、12.0、14.4和18.0 μg，含鉀離子3.3、5.3、6.6、7.9和9.9 μg的系列對(duì)照品溶液，依次注入離子色譜儀，記錄色譜圖。以離子濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得出鈉離子的線性方程為Y=0.2479X-0.2953（r=0.9999），鉀離子的線性方程為Y=0.1339X-0.1367（r=0.9998），結(jié)果表明鈉離子與鉀離子在配制的濃度范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.3.3 定量限與檢測(cè)限

取“2.3.2”項(xiàng)下的系列對(duì)照品溶液繼續(xù)逐級(jí)稀釋，注入離子色譜儀，記錄色譜圖。以離子峰的信噪比為10時(shí)所對(duì)應(yīng)的離子濃度作為定量限，鈉離子的定量限為0.03 μg/mL，鉀離子的定量限為0.33 μg/mL；以離子峰的信噪比為3時(shí)所對(duì)應(yīng)的離子濃度作為檢測(cè)限，鈉離子的檢測(cè)限為0.01 μg/mL，鉀離子的檢測(cè)限為0.10 μg/mL。

2.3.4 精密度試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，鈉離子與鉀離子峰面積的RSD分別為0.13%與0.15%，儀器的精密度良好。

2.3.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取注射用阿莫西林鈉/克拉維酸鉀樣品（批號(hào)K1201203），平行制備6份供試品溶液，分別注入離子色譜儀，記錄色譜圖。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，鈉離子的平均含量為5.23%，RSD為1.1%；鉀離子的平均含量為2.98%，RSD為1.8%，結(jié)果表明方法的重復(fù)性良好。

2.3.6 回收率

取注射用阿莫西林鈉/克拉維酸鉀樣品（批號(hào)K1201203）約1.2 g，精密稱定，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，作為供試品貯備液；精密量取該溶液1.0 mL，置100 mL量瓶中，再分別精密加入“2.3.2”項(xiàng)下對(duì)照品貯備液0.3、0.5和0.7 mL，加水稀釋至刻度，搖勻，制成相當(dāng)于80%、100%和120%濃度水平的溶液，每種濃度分別制備3份，注入離子色譜儀，記錄色譜圖。計(jì)算結(jié)果見表1，結(jié)果表明回收率良好。

2.3.7 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，在室溫狀態(tài)下分別于0、2、4、6、8和12 h注入色譜儀，記錄色譜圖。鈉離子峰面積的RSD為0.13%，鉀離子峰面積的RSD為0.22%。結(jié)果表明，供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4 樣品測(cè)定與成鹽率結(jié)果

照“2.1”與“2.2”項(xiàng)下的方法，測(cè)定37批樣品中鈉離子和鉀離子的含量，同時(shí)照中國(guó)藥典2020年版二部注射用阿莫西林鈉/克拉維酸鉀含量測(cè)定的方法[8]，測(cè)定樣品中阿莫西林和克拉維酸的含量。鈉離子成鹽率%=（鈉含量%/22.99）/（阿莫西林含量%/365.4），鉀離子成鹽率%=（鉀含量%/39.10）/（克拉維酸含量%/199.16）。

國(guó)產(chǎn)樣品中阿莫西林的成鹽率在1.00～1.13之間，平均成鹽率1.07，克拉維酸的成鹽率在0.94～1.05之間，平均成鹽率1.00；原研樣品中阿莫西林的成鹽率為1.09，克拉維酸成鹽率為1.00，結(jié)果見圖2。

3 討論

經(jīng)調(diào)研，該品種各企業(yè)的生產(chǎn)工藝均為購(gòu)進(jìn)混粉原料直接無(wú)菌分裝制得，目前國(guó)內(nèi)混粉原料的生產(chǎn)企業(yè)僅有3家（分別以企業(yè)A、B、C命名）。由測(cè)定結(jié)果可知，一是國(guó)產(chǎn)樣品的成鹽率與原研樣品無(wú)顯著差異；二是阿莫西林的成鹽率普遍過(guò)高，其中以B企業(yè)為原料來(lái)源的樣品成鹽率最好，接近理論值；克拉維酸方面，成鹽率在理論值上下浮動(dòng)，但部分企業(yè)樣品離散程度較大，可能與該企業(yè)產(chǎn)品存在多家原料來(lái)源有關(guān)。

本文結(jié)果顯示，樣品中兩個(gè)組分的成鹽率良好，基本可以保證成鹽完全，此時(shí)需要關(guān)注工藝過(guò)程中過(guò)量成鹽劑的去除。生產(chǎn)工藝顯示，3家原料生產(chǎn)企業(yè)使用的成鹽劑均為2-乙基己酸鈉與2-乙基己酸鉀，兩種物質(zhì)提供鈉離子或鉀離子后生成的2-乙基己酸對(duì)皮膚、黏膜有強(qiáng)烈刺激作用[9]。從另一個(gè)角度繼續(xù)考察本品種的成鹽工藝，參照中國(guó)藥典2020年版四部通則2-乙基己酸測(cè)定方法[10]，對(duì)樣品中2-乙基己酸的殘留量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示，各企業(yè)樣品均有不同程度的殘留，以C企業(yè)為原料來(lái)源的樣品2-乙基己酸的含量為0.39%～0.51%，殘留量相對(duì)較高，提示其成鹽工藝需進(jìn)一步優(yōu)化。

目前，測(cè)定藥物中鈉含量和鉀含量的常用方法有原子吸收分光光度法、ICP-MS法與離子色譜法等。其中，原子吸收分光光度法誤差較大，測(cè)定不同元素需要更換光源，無(wú)法同時(shí)測(cè)定；ICP-MS法樣品預(yù)處理復(fù)雜、干擾多、成本高；而離子色譜法具有高選擇性和靈敏度、經(jīng)濟(jì)環(huán)保、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可同時(shí)測(cè)定樣品中鈉、鉀兩種離子的含量。本文建立的離子色譜法，通過(guò)同時(shí)測(cè)定鈉離子與鉀離子含量，考察了不同企業(yè)產(chǎn)品的成鹽情況。這對(duì)成鹽工藝的逐步優(yōu)化，制劑質(zhì)量的持續(xù)提高具有積極意義。

參 考 文 獻(xiàn)

梁再賦. 國(guó)內(nèi)阿莫西林/克拉維酸鉀復(fù)方制劑的現(xiàn)狀[J]. 國(guó)外醫(yī)藥（抗生素分冊(cè)）， 2006， （2）： 96.

沈芳， 蘇頎， 周偉澄. 成鹽藥物的研究與開發(fā)[J]. 藥學(xué)進(jìn)展， 2012， 36（4）： 151-157.

李婭萍， 薛晶， 楊智慧. 采用新型混合模式離子交換柱HPLC-ELSD法測(cè)定頭孢曲松鈉中鈉離子含量以及成鹽率[J]. 中國(guó)抗生素雜志， 2013， 38（7）： 524-530.

涂林， 胡昌勤. 毛細(xì)管電泳法測(cè)定頭孢曲松鈉有關(guān)物質(zhì)及含量[J]. 藥物分析雜志， 2005， 25（3）： 303-307.

錢敏， 耿志旺， 彭茗， 等. 離子色譜法測(cè)定頭孢曲松鈉中的鈉離子含量以及成鹽率[J]. 藥物分析雜志， 2015， 35（3）： 435-439.

聞宏亮， 趙敬丹， 秦峰， 等. 離子色譜法測(cè)定頭孢噻吩鈉中鈉離子含量以及成鹽率考察[J]. 中國(guó)藥師， 2015， 18（2）： 212-215.

高叢叢， 李珉， 洪金鳳. 離子色譜法測(cè)定注射劑中4種常用水溶性抗氧劑的含量[J]. 中國(guó)抗生素雜志， 2021， 46（3）： 262-265.

國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典（二部）[S]. 北京： 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社， 2020： 542-543.

霍東風(fēng)， 楊利紅， 丁黎. 氣相色譜法測(cè)定抗生素中2-乙基己酸殘留量[J]. 藥學(xué)與臨床研究， 2010， 18（4）： 406-407.

國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典（四部）[S]. 北京： 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社， 2020： 121-122.

作者簡(jiǎn)介：王松，男，生于1987年，碩士，副主任藥師，主要從事抗感染類藥物、抗腫瘤藥物及藥用輔料的檢驗(yàn)及質(zhì)量研究，E-mail： 277486921@qq.com

*通信作者：E-mail： chendejunweiwei@sina.com

第一作者：王松，副主任藥師，2013年畢業(yè)于山東大學(xué)，主要從事抗感染類藥物、抗腫瘤藥物及藥用輔料的檢驗(yàn)及質(zhì)量研究工作。

通信作者，陳德俊，主任藥師，山東省食品藥品檢驗(yàn)研究院抗生素室主任。長(zhǎng)期從事抗感染類藥物、抗腫瘤藥物及藥用輔料的檢驗(yàn)及質(zhì)量研究工作，多次主持完成藥品標(biāo)準(zhǔn)的制修訂及復(fù)核工作、國(guó)家藥品評(píng)價(jià)抽驗(yàn)工作，獲省級(jí)科技獎(jiǎng)二等獎(jiǎng)1項(xiàng)，獲國(guó)家級(jí)學(xué)會(huì)科技獎(jiǎng)三等獎(jiǎng)1項(xiàng)。獲省級(jí)學(xué)會(huì)科學(xué)技術(shù)二等獎(jiǎng)、三等獎(jiǎng)多項(xiàng)。