鄒宇 姚蘭 劉楊 傅蓉

摘要：目的 對國內(nèi)上市的依托紅霉素片和顆粒的質(zhì)量進行評價。方法 依據(jù)現(xiàn)行法定質(zhì)量標準，對市場中的依托紅霉素片、顆粒進行檢驗，統(tǒng)計分析依托紅霉素片、顆粒的質(zhì)量總體水平，比較不同企業(yè)產(chǎn)品的質(zhì)量。根據(jù)專題調(diào)研和標準檢驗結(jié)果，結(jié)合文獻分析，針對依托紅霉素標準中組分及有關物質(zhì)、溶出度、含量測定等的不足開展探索性研究。結(jié)果 本次抽檢涉及的4個生產(chǎn)企業(yè)的23批依托紅霉素片和16個生產(chǎn)企業(yè)的154批依托紅霉素顆粒按法定標準檢驗，有176批次符合規(guī)定，合格率為99.4%。探索性研究采用新建的組分和有關物質(zhì)測定方法，對依托紅霉素原料和制劑的組分和有關物質(zhì)進行了考察；按新增和修訂的溶出度檢查法，對20家企業(yè)的樣品的溶出曲線進行了考察；含量測定時，應根據(jù)產(chǎn)品的處方工藝情況選擇水解條件，才能保證含量測定結(jié)果的準確性。結(jié)論 依托紅霉素片和顆粒質(zhì)量狀況較好，現(xiàn)行質(zhì)量標準中項目和方法有待進一步完善。

關鍵詞：依托紅霉素片；依托紅霉素顆粒；質(zhì)量分析；抽檢

中圖分類號：R917 文獻標志碼：A

Quality analysis of domestic erythromycin estolate tablets and granules

Zou Yu1，2， Yao Lan 1，2， Liu Yang1，2， and Fu Rong1，2

（1 Liaoning Province Inspection and Testing Certification Center， Shenyang 110036；

2 Liaoning Institute for Drug Control， Shenyang 110036）

Abstract? ? Objective This study assessed the quality of erythromycin estolate tablets and granules in China. Methods The nationwide erythromycin estolate tablets and granules were tested according to the official specification. The overall quality was analyzed using statistical methods. The products from different manufacturers were compared. Based on the special survey and the determination results， some methods of erythromycin estolate in specification， i.e.， components and related substances， dissolution， and assay were optimized. Results A total of 23 batches of erythromycin estolate tablets from 4 manufacturers and 154 batches of erythromycin estolate granules from 16 manufacturers underwent testing. A total of 176 batches met the specified requirements， resulting in a pass rate of 99.4%. The optimal HPLC method was used to detect the components and related substances of erythromycin estolate raw materials and preparations. The revised dissolution method was used to test the dissolution curves of samples from 20 companies. The hydrolysis conditions should be selected in the assay according to the formulation and technology， which could ensure the accuracy of the content determination. Conclusion The quality of erythromycin estolate tablets and granules was with acceptable in general. The official specification of erythromycin estolate tablets and granules needs to be further improved.

Key words Erythromycin estolate tablets; Erythromycin estolate granules; Quality analysis; Sampling test

依托紅霉素又名無味紅霉素，為紅霉素丙酸酯的十二烷基硫酸鹽，其在腸道中以酯化物的形式被吸收，在體內(nèi)水解成活性成分紅霉素。臨床中主要用于治療對青霉素耐藥的球菌類感染以及支原體肺炎、白喉感染等 [1-2]。依托紅霉素由紅霉素經(jīng)化學合成生產(chǎn)：硫氰酸紅霉素與三乙胺在丙酮水溶液中發(fā)生游離反應，生成紅霉素堿，紅霉素堿與丙酸酐反應生成紅霉素酯，再和十二烷基硫酸鈉反應生成依托紅霉素 [3]?！吨袊幍洹?977年版開始收載依托紅霉素及制劑。依托紅霉素片、顆粒目前國內(nèi)均屬于非基本藥物。作為2022年國家藥品抽檢品種，本文通過對依托紅霉素片、顆粒的標準檢驗和探索性研究，從安全性、有效性及質(zhì)量可控性等方面對其質(zhì)量進行全面地分析評價。

1 材料與方法

1.1 儀器、試藥與樣品

1.1.1 儀器

Waters e2695系列高效液相色譜儀；Agilent 1200高效液相色譜儀；Waters XTERRA RP18色譜柱（250 mm ×4.6 mm， 3.5 μm）；資生堂CAPCELL PAK MGⅡ C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；Agilent 708-850DS全自動溶出儀；天大天發(fā)公司ZKT18真空脫氣儀； ALC-1100.2型和R225D型電子天平（Sartorius公司）；ZY-300IV抑菌圈測量儀（北京先驅(qū)威鋒技術有限公司）；GNP-9270隔水式恒溫培養(yǎng)箱（上海精宏試驗設備有限公司）；SX-700滅菌鍋（日本Tomy公司）。

1.1.2 試藥

乙腈（色譜純，美國天地公司）；磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、磷酸、鹽酸、十二烷基硫酸鈉（分析純，國藥集團化學試劑有限公司）；抗生素檢定培養(yǎng)基Ⅰ（北京陸橋技術股份有限公司）；純化水（實驗室自制）。

紅霉素對照品（紅霉素A組分含量93.3%，批號130307-201417），紅霉素系統(tǒng)適用性試驗對照品（批號130670-201902）均來自中國食品藥品檢定研究院。

標準菌株短小芽孢桿菌[CMCC（B）63202]來自中國食品藥品檢定研究院。

1.1.3 樣品

本次抽檢共抽取到23批次的依托紅霉素片，規(guī)格為125 mg（以紅霉素計）；154批次的依托紅霉素顆粒，規(guī)格為50和75 mg（以紅霉素計）；另獲得1家依托紅霉素原料企業(yè)的5批原料藥。

1.2 方法

1.2.1 法定檢驗方法

按照《中國藥典》2020年版依托紅霉素片劑和顆粒劑標準進行法定檢驗。

1.2.2 組分及有關物質(zhì)

參考歐洲藥典（EP）10.0版依托紅霉素項下[4]有關物質(zhì)和含量測定的方法以及中國藥典（ChP）2020年版二部紅霉素項下[5]組分和有關物質(zhì)的限度，通過考察水解對測定結(jié)果的影響，建立了HPLC測定依托紅霉素組分和有關物質(zhì)的檢測方法。

色譜條件：以XTerra RP C18柱（4.6 mm×250 mm，3.5 μm）為色譜柱；以乙腈-0.2 mol/L磷酸氫二鉀溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至7.0）-水（35：5：60， V/V/V）為流動相A，以乙腈-0.2 mol/L磷酸氫二鉀溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH 值至7.0）-水（50：5：45， V/V/V）為流動相B進行梯度洗脫；流速為1.0 mL/min；柱溫為65 ℃；檢測波長為210 nm；進樣體積100 μL。

供試品溶液制備：精密稱取本品適量（相當于紅霉素200 mg），置50 mL量瓶中，加甲醇25 mL使溶解，加入pH 8.0磷酸鹽溶液近刻度，搖勻，室溫放置18 h，以pH 8.0磷酸鹽溶液稀釋至刻度。

1.2.3 溶出度

方法：槳法；溶出介質(zhì)為含0.2%的十二烷基硫酸鈉的鹽酸溶液；轉(zhuǎn)速為75 r/min；溶出時間為45 min（片劑）、30 min（顆粒）。采用HPLC法測定樣品的溶出量：利用依托紅霉素配制對照品溶液；以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以磷酸鹽緩沖液（取磷酸氫二鉀8.7 g，加水1000 mL，用20%磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至8.2）-乙腈（40： 60）為流動相；流速為1.5 mL/min；柱溫40 ℃；檢測波長215 nm；進樣體積100 μL。

20家企業(yè)的產(chǎn)品各取一批樣品，按上述方法進行溶出曲線的測定，比較片劑與顆粒劑溶出曲線的差異。

1.2.4 含量測定

依托紅霉素在進行含量測定時，首先需將樣品水解成紅霉素，通過測定紅霉素的含量確定依托紅霉素的含量?！吨袊幍洹?020年版（ChP）采用乙醇-pH7.8磷酸鹽緩沖液（1：1）60 ℃水解樣品4 h后，按抗生素微生物檢定法測定紅霉素的含量；EP10.0采用甲醇-pH8.0磷酸鹽緩沖液（1：1）室溫水解12 h以上，按HPLC法測定紅霉素的含量?？疾霦P10.0[4]與ChP2020[5]含量測定中水解條件對含量結(jié)果的影響。20家生產(chǎn)企業(yè)各取一批樣品，分別按EP和ChP的條件水解，按抗生素微生物檢定法測定含量，對測定結(jié)果進行比較。

2 結(jié)果與討論

國家市場監(jiān)督管理總局數(shù)據(jù)庫顯示，截止到2022年9月，國內(nèi)依托紅霉素片生產(chǎn)企業(yè)有127家，批準文號132個；依托紅霉素顆粒生產(chǎn)企業(yè)50家，批準文號68個。本次抽檢涉及29個省市自治區(qū)，共抽到177批次樣品，其中片劑23批，涉及4個生產(chǎn)企業(yè)，占該品種國內(nèi)生產(chǎn)企業(yè)總數(shù)的3.1%；顆粒劑154批，涉及16個生產(chǎn)企業(yè)，占該品種國內(nèi)生產(chǎn)企業(yè)總數(shù)的32.0%。177批次樣品的分布率分別為生產(chǎn)企業(yè)19%，經(jīng)營企業(yè)80%，醫(yī)療機構1%。抽檢結(jié)果基本可以反映出目前該品種國內(nèi)的生產(chǎn)和使用情況。

2.1 法定檢驗結(jié)果及分析

按《中國藥典》2020年版標準，依托紅霉素片劑檢驗項目包括性狀、鑒別、溶出度、重量差異和含量測定；顆粒劑檢驗項目包括性狀、鑒別、酸堿度、水分、粒度、裝量差異和含量測定。177批樣品依據(jù)法定標準進行全檢，176批符合規(guī)定，合格率為99.4%；1批依托紅霉素顆粒含量測定不符合規(guī)定。對與產(chǎn)品質(zhì)量密切相關的主要檢查項目包括溶出度、酸堿度、水分、重（裝）量差異和含量測定等結(jié)果進行統(tǒng)計分析。

溶出度：23批依托紅霉素片的平均溶出量分布在85%～98%之間，平均溶出量的均值為92%；有87%的樣品結(jié)果為85%～97%，提示依托紅霉素片總體溶出情況較好。

酸堿度：154批依托紅霉素顆粒的pH值分布在5.2～6.8之間；pH均值為6.1，接近酸堿度規(guī)定中間值6.0，94%的樣品pH值為5.4～6.6，結(jié)果呈正態(tài)分布。

水分：154批依托紅霉素顆粒的水分值分布在0.1%～1.2%之間；水分均值為0.2%，93%的樣品水分值在0.4%以下，主要集中在0.2%以內(nèi)，遠低于限度2.0%。

費休氏試液的滴定度一般在4 mg/mL左右，如按依托紅霉素顆粒標準中的規(guī)定取0.2 g供試品進行檢驗，當含水分為2.0%（限度值）時，費休氏試液的使用量約為1 mL，而實際樣品中的水分含量基本在0.4%以下，費休氏試液的實際使用量小于0.2 mL，不滿足《中國藥典》2020年版通則0832水分測定法[6]中，費休氏試液消耗量應為1～5 mL的要求，因而易造成測定結(jié)果的不準確。建議將依托紅霉素顆粒水分檢查項中，“取本品0.2 g”修訂為“取本品適量”，以根據(jù)樣品的實際含水量稱取樣品。

重（裝）量差異：以每批樣品20片片重的RSD為指標，考察依托紅霉素片壓片工藝穩(wěn)定性。23批次樣品的片重服從正態(tài)分布，片重RSD的均值為0.96%，最小值為0.20%，最大值為2.17%，90%以上的批次片重RSD小于1.4%，提示依托紅霉素片的壓片工藝穩(wěn)定性較理想。

以每批樣品10袋的裝量RSD為考察指標，考察制粒工藝的穩(wěn)定性。154批次樣品的裝量服從正態(tài)分布，裝量RSD均值為1.4%，最小值為0.4%，最大值為4.4%，95.5%以上的批次裝量RSD小于2.4%，提示依托紅霉素顆粒的工藝穩(wěn)定性較理想。

含量測定：23批依托紅霉素片的含量分布在92.2%～102.7%之間；含量均值為97.5%，有82.3%的樣品測定結(jié)果在94.0%～102.0%之間。

153批含量符合規(guī)定的依托紅霉素顆粒的含量分布在90.1%～108.5%之間，均值為98.0%；有16批（約占樣品總量10.4%）樣品的含量在93.0%以下，8批（約占樣品總量5.2%）樣品的含量在105.0%以上，含量分布較離散。1批不符合規(guī)定的樣品含量為113.5%，超過標準上限。通過對企業(yè)提供的處方和實際裝量檢測結(jié)果的分析，認為其是制劑分劑量包裝時投料量控制出現(xiàn)問題導致裝量偏大所致。

2.2 探索性研究結(jié)果及分析

根據(jù)專題調(diào)研和標準檢驗結(jié)果，結(jié)合文獻分析，針對依托紅霉素標準中組分及有關物質(zhì)、溶出度、含量測定等的不足開展探索性研究。

2.2.1 組分和有關物質(zhì)

利用HPLC法測定紅霉素酯化物的組分及有關物質(zhì)時，需首先對酯化物進行水解，使其水解成紅霉素諸組分及雜質(zhì)后再進行測定。依托紅霉素水解完全后的HPLC色譜圖見圖1。

參考EP10.0方法[4]建立依托紅霉素組分和有關物質(zhì)檢測方法。EP方法要求本品配制成溶液后需室溫水解12 h以上再測定。對依托紅霉素0～21 h的水解情況進行考察（圖2）：不經(jīng)水解，色譜圖中只有未水解的依托紅霉素峰及少量紅霉素A峰，檢測不到B、C組分和其他紅霉素的已知雜質(zhì)；隨著水解時間的增加，各組分和雜質(zhì)逐漸出現(xiàn)，12 h后趨于穩(wěn)定，但未水解的依托紅霉素仍有約2.7%；繼續(xù)水解至18 h時，未水解的依托紅霉素降低至0.5%以下，未發(fā)現(xiàn)有其他雜質(zhì)峰產(chǎn)生。紅霉素A、B、C組分和雜質(zhì)A、F、E在12至21 h無變化，但雜質(zhì)C和D，會隨著水解時間的增加緩慢增加。因此，新建立的依托紅霉素組分和有關物質(zhì)檢測方法的水解條件和液相條件與EP10.0方法[4]一致，但規(guī)定水解時間為18 h。

在限度設定上，考慮到依托紅霉素水解后的雜質(zhì)均為紅霉素原料引入的雜質(zhì)，因而各雜質(zhì)的限度應與ChP2020紅霉素項下有關物質(zhì)的限度一致。依托紅霉素現(xiàn)行質(zhì)量標準規(guī)定每1 mg的效價不得少于610紅霉素單位，因此，擬定原料藥紅霉素A組分的限度為不少于61.0%；紅霉素B、C組分參考EP10.0[4]和ChP2020[5]，設定為不得過3.0%。采用上述方法對5批依托紅霉素原料進行檢測（表1），可見，除雜質(zhì)C外，各組分及雜質(zhì)均可達到上述限度；而雜質(zhì)C接近或超過限度。雜質(zhì)C是紅霉素發(fā)酵中的前體（紅霉素E），其含量偏高，說明合成起始原料的質(zhì)量欠佳。

由于依托紅霉素制劑的輔料多且量大，僅對其紅霉素A組分的含量進行了測定。20個生產(chǎn)企業(yè)各取一批樣品進行檢測，4批片劑中紅霉素A組分的含量分布在98.6%～101.7%范圍內(nèi)；16批顆粒劑中紅霉素A組分的含量分布在95.5%～119.9%之間，均值為103.3%；其中含量測定不合格樣品的含量為最大值119.9%。

國內(nèi)依托紅霉素原料自上市以來對其中的有關物質(zhì)情況一直未予以關注，本次抽檢中發(fā)現(xiàn)部分批次的原料藥中雜質(zhì)C的含量偏高（表1）。由于質(zhì)量標準中未設立紅霉素組分和有關物質(zhì)檢查項，使得原料和制劑企業(yè)對該產(chǎn)品中的雜質(zhì)情況均不十分了解。新建立的依托紅霉素原料藥組分、有關物質(zhì)檢查方法以及依托紅霉素片、依托紅霉素顆粒紅霉素A組分檢查方法，填補了依托紅霉素質(zhì)量標準的空白。

2.2.2 溶出度

依托紅霉素片現(xiàn)行質(zhì)量標準采用硫酸顯色-紫外法對溶出度進行測定。試驗中發(fā)現(xiàn)，溶出介質(zhì)與濃硫酸溶液混合后易發(fā)生渾濁，干擾測定。依托紅霉素顆粒未收載溶出度檢查法。采用HPLC法替代硫酸顯色法測定樣品的溶出度，可提高方法的專屬性；通過對溶出條件和檢測方法的考察，對片劑溶出度的測定方法進行了修訂，并新建立了顆粒劑溶出度測定方法。

采用新建立的顆粒劑和片劑的溶出度測定方法測定其溶出曲線（圖3），16批依托紅霉素顆粒樣品20 min時的溶出量為82%～115%；30 min時主成分基本溶出（92%～121%）。片劑樣品30 min時，3家企業(yè)的樣品溶出量為91%～107%；45 min時主成分基本溶出（98%～107%）；但一家企業(yè)的樣品60 min的溶出量仍未到70%的限度。比較片劑和顆粒的溶出曲線，片劑的溶出較顆粒劑滯后，其系片劑的崩解分散速度相對顆粒劑較慢所致。

2.2.3 含量測定

檢驗中發(fā)現(xiàn)部分企業(yè)的產(chǎn)品含量測定結(jié)果批間差異大，個別企業(yè)產(chǎn)品的含量值接近限度的低限；調(diào)研中有2家企業(yè)反饋，成品的含量測定結(jié)果較投料量約低5%～6%。因而考察水解條件對依托紅霉素含量測定的影響。

15家企業(yè)的樣品，按EP或ChP條件水解，含量測定結(jié)果無明顯差異；5家企業(yè)的樣品按EP條件水解，含量測定值較按ChP條件水解約高出5%。提示制劑的處方、工藝影響產(chǎn)品的水解速率，這5家企業(yè)的產(chǎn)品更適宜采用EP的條件水解。上述結(jié)果顯示，ChP的含量測定方法僅可滿足約75%的抽樣企業(yè)樣品的準確測定，而EP的含量測定方法能適用于全部的抽樣企業(yè)樣品。建議中國藥典對依托紅霉素含量測定中的水解條件進行修訂。

3 結(jié)論

本次國家藥品抽檢采取法定檢驗結(jié)合探索性研究模式對國產(chǎn)依托紅霉素片和依托紅霉素顆粒進行了較全面的分析評價。由法定檢驗情況可知，177批次樣品中有1批檢驗結(jié)果不符合規(guī)定，合格率為99.4%，2016年安徽省食品藥品檢驗研究院曾對依托紅霉素片進行國家藥品抽檢，14家生產(chǎn)企業(yè)130批樣品按法定檢驗合格率為100%（未發(fā)表資料），綜合兩次抽檢結(jié)果，可以認為目前國內(nèi)生產(chǎn)的依托紅霉素片和顆?？傮w質(zhì)量較好。

質(zhì)量標準方面，依托紅霉原料和制劑均缺少對其組分和有關物質(zhì)的控制；制劑的溶出度和含量測定方法亦可進一步改進。

參 考 文 獻

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萬興平. 依托紅霉素片制備工藝優(yōu)化的研究[J]. 海峽藥學， 2014， 26（6）： 24-25.

盧元東， 汪寅華. 依托紅霉素的一種合成方法： CN， ZL201310333261.0[P]. 2015-06-24.

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國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典2020年版（四部）通則0832[S]. 北京： 中國醫(yī)藥科技出版社， 2020： 114-115.

作者簡介：鄒宇，女，1981年，碩士，副主任藥師，主要從事抗生素藥品質(zhì)量標準研究， E-mail： zoe0921cn@163.com

*通信作者，E-mail： furonger25@126.com

第一作者：鄒宇，2007年獲沈陽藥科大學藥物分析專業(yè)碩士學位，副主任藥師?，F(xiàn)就職于遼寧省藥品檢驗檢測院微生物與抗生素室。主要從事藥品檢驗、分析及質(zhì)量標準研究工作，多次參與完成中國藥典標準起草及復核、國家藥品抽檢、國家標準物質(zhì)協(xié)作標定等工作，發(fā)表論文多篇。

通信作者：傅蓉，2006年畢業(yè)于沈陽藥科大學微生物與生化藥學專業(yè)，碩士學位，主任藥師。畢業(yè)至今就職于遼寧省藥品檢驗檢測院微生物與抗生素室，從事抗生素藥品檢驗及質(zhì)量標準研究工作，以及藥品、保健食品和化妝品的微生物檢驗和方法研究工作。多次參與中國藥典質(zhì)量標準起草及復核工作；多次承擔或參與國家藥品抽檢工作。