黃 雅，王保錦，王 樂，高 曄，崔藝彤，王朝慧，劉宇琦，常子豪，劉 越，張?zhí)m珍

基于指紋圖譜和多成分定量結(jié)合化學(xué)模式識別的蓮房藥材質(zhì)量評價

黃 雅，王保錦，王 樂，高 曄，崔藝彤，王朝慧，劉宇琦，常子豪，劉 越*，張?zhí)m珍*

北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院北京 102488

建立不同產(chǎn)地蓮房的HPLC指紋圖譜及多成分含量測定方法，結(jié)合化學(xué)模式識別法評價不同產(chǎn)地蓮房藥材質(zhì)量。采用Welch Ultimate?Polar-RP（250 mmí4.6 mm，3 μm）色譜柱，以甲醇-乙腈（1∶2，A）-0.2%甲酸水溶液（B）為流動相，柱溫40 ℃，體積流量0.6 mL/min，檢測波長270 nm，繪制20批不同產(chǎn)地的蓮房藥材的指紋圖譜，應(yīng)用SPSS 26.0和SIMCA 14.1軟件結(jié)合化學(xué)模式識別，聚類分析（cluster analysis，CA）、主成分分析（principal component analysis，PCA）、正交偏最小二乘法判別分析（orthogonal partial least squares discriminant analysis，OPLS-DA）、優(yōu)劣解距離法（technique for order preference by similarity to ideal solution，TOPSIS）對不同產(chǎn)地蓮房樣品進行質(zhì)量評價，并測定6種主要成分的含量。20批HPLC指紋圖譜共匹配出17個共有峰，分別指認出兒茶素、荷葉堿、-去甲荷葉堿、金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素-3--葡萄糖醛酸苷和紫云英苷7個成分；指紋圖譜相似度在0.546～0.991，CA將20批蓮房分為3類；PCA、OPLS-DA與TOPSIS分析結(jié)果為產(chǎn)于安徽蕪湖、江西贛州、山東微山湖的藥材質(zhì)量較好；并分析篩選出荷葉堿、-去甲荷葉堿和兒茶素等5個成分為引起不同產(chǎn)地質(zhì)量差異的標志性成分。蓮房中6個主要成分兒茶素、荷葉堿、-去甲荷葉堿、金絲桃苷、異槲皮苷和槲皮素-3--葡萄糖醛酸苷的質(zhì)量分數(shù)分別為0.029%～0.958%、0.007%～0.137%、0.013%～0.104%、0.015%～0.282%、0.008%～0.110%、0.027%～0.541%。建立的蓮房HPLC指紋圖譜操作簡便、結(jié)果可靠，兒茶素、荷葉堿、-去甲荷葉堿、金絲桃苷、異槲皮苷和槲皮素-3--葡萄糖醛酸苷可以作為蓮房質(zhì)量評價的主要指標性成分。

蓮房；化學(xué)模式識別；含量測定；兒茶素；荷葉堿；-去甲荷葉堿；金絲桃苷；異槲皮苷；槲皮素-3--葡萄糖醛酸苷

蓮房為睡蓮科植物蓮Gaertn.的干燥花托，性溫、味苦、澀，歸肝經(jīng)。具有化瘀止血功能，主治崩漏、尿血、痔瘡出血、產(chǎn)后瘀阻、惡露不盡等癥[1]?，F(xiàn)代研究表明，蓮房中含有黃酮類、生物堿類、酚酸類、原花青素類和有機酸類等成分，具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤、抗輻射、保護心臟和肝臟等作用[2-3]。

目前報道的蓮房藥材質(zhì)量研究僅有HPLC法測定黃酮類化合物槲皮素和金絲桃苷含量[4]，HPLC法測定荷葉堿的含量[5]，且《中國藥典》2020年版中無含量測定項。為了有效控制蓮房藥材的質(zhì)量，本研究建立20批蓮房藥材HPLC指紋圖譜，結(jié)合聚類分析（cluster analysis，CA）、主成分分析（principal component analysis，PCA）、正交偏最小二乘法判別分析（orthogonal partial least squares discriminant analysis，OPLS-DA）等化學(xué)模式識別技術(shù)對不同產(chǎn)地蓮房樣品進行質(zhì)量評價，并對蓮房6個主要成分包括4個黃酮類成分兒茶素、金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素-3--葡萄糖醛酸苷和2個生物堿成分荷葉堿和-去甲荷葉堿進行HPLC含量測定，為蓮房藥材質(zhì)量控制提供參考。

1 材料

1.1 儀器

Waters Alliance e2695 高效液相色譜儀（美國Waters公司）；Empower 3色譜工作站；2998型PDA紫外檢測器；Welch Ultimate? Polar-RP（250 mm í4.6 mm，3μm）色譜柱；Sartorious BT25S型電子天平（十萬分之一，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；OHAUS AX124ZH電子天平（萬分之一，常州奧豪斯儀器有限公司）；KQ5200E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試劑

對照品金絲桃苷（批號D22041511，質(zhì)量分數(shù)≥98%）購自南京狄爾格醫(yī)藥科技有限公司；異槲皮苷對照品（批號PS011802，質(zhì)量分數(shù)≥98%）購自成都普思生物科技股份有限公司；槲皮素-3--葡萄糖醛酸苷對照品（批號ST78770120，質(zhì)量分數(shù)≥98%）購自上海詩丹德標準技術(shù)服務(wù)有限公司；紫云英苷（批號20010763，質(zhì)量分數(shù)≥98%）購自北京倍特仁康生物科技有限公司；荷葉堿（批號N06GB166466，質(zhì)量分數(shù)≥98%）、-去甲荷葉堿對照品（批號P10N11L126430，質(zhì)量分數(shù)≥98%）購自上海源葉生物科技有限公司，乙腈（美國Fisher公司，色譜純）、甲醇（美國Fisher公司，色譜純），無水乙醇（色譜純，天津市大茂化學(xué)試劑廠）、甲酸（色譜純，天津市大茂化學(xué)試劑廠）。

20批蓮房藥材產(chǎn)地來源見表1，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)張媛教授鑒定為蓮Gaertn.的干燥花托，樣品購買后，密封保存，粉碎后過3號篩后，置于干燥器中備用。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

2.1.1 供試品溶液的制備 稱取蓮房藥材粉末（粉碎后過3號篩）0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理60 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用70%甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。進樣前經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過。

2.1.2 對照品溶液的制備 分別精密稱取對照品兒茶素、金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素-3--葡萄糖醛酸苷、荷葉堿、-去甲荷葉堿和紫云英苷適量，分別放入10 mL量瓶中，甲醇溶解稀釋至刻度，得到兒茶素（0.527 mg/mL）、金絲桃苷（0.49 mg/mL），異槲皮苷（0.512 mg/mL）、槲皮素-3--葡萄糖醛酸苷（0.52 mg/mL）、荷葉堿（0.525 mg/mL）、-去甲荷葉堿（0.568 mg/mL）和紫云英苷（0.31 mg/mL）。

2.2 指紋圖譜的建立

2.2.1 色譜條件 Welch Ultimate? Polar-RP（250 mmí4.6 mm，3μm）色譜柱，流動相為甲醇-乙腈（1∶2，A）-0.2%甲酸水溶液（B），洗脫梯度：0～15 min，5%～12.5% A；15～35 min，12.5%～20%A；35～75 min，20%～35% A；75～85 min，35%～80% A；體積流量0.6 mL/min；檢測波長270 nm；柱溫40 ℃；進樣量20 μL。

2.2.2 精密度試驗 取樣品（S20），按照“2.1.1”項下方法制備，得到蓮房供試品溶液，連續(xù)進樣6次，以N-去甲荷葉堿（7號峰）為參照峰，測得蓮房中共有峰的相對保留峰面積RSD值小于2.89%，共有峰的相對保留時間RSD值小于0.10%，表明儀器精密度良好。

2.2.3 重復(fù)性試驗 取樣品（S20），按照“2.1.1”項下方法制備，制備蓮房供試品溶液6份，分別進樣，以-去甲荷葉堿（7號峰）為參照峰，測得蓮房中共有峰的相對保留峰面積RSD值小于2.98%，共有峰的相對保留時間RSD值小于0.34%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.4 穩(wěn)定性試驗 取樣品（S20），按照“2.1.1”項下方法制備蓮房供試品溶液，分別于制備后0、4、8、12、24 h進行測定，以-去甲荷葉堿（7號峰）為參照峰，測得蓮房中共有峰的相對保留峰面積RSD值小于2.77%，共有峰的相對保留時間RSD值小于0.35%，表明樣品穩(wěn)定性良好。

2.2.5 HPLC指紋圖譜的建立和共有峰的指認 將HPLC數(shù)據(jù)導(dǎo)入軟件《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》（Version 2012.130723，中國國家藥典委員會），建立HPLC指紋圖譜并進行相似度分析，以S1為參照圖譜，采用平均數(shù)法，時間窗寬度為0.1，經(jīng)過多點校正，生成指紋圖譜，其中，標定出17個共有峰，指認了7個峰，依次為兒茶素（4號峰）、荷葉堿（6號峰）、-去甲荷葉堿（7號峰）、金絲桃苷（9號峰），異槲皮苷（10號峰），槲皮素-3--葡萄糖醛酸苷（11號峰）和紫云英苷（15號峰），20批蓮房的HPLC疊加指紋圖譜、混合對照品和對照指紋圖譜（R）的HPLC見圖1和圖2。

2.2.6 指紋圖譜相似度評價 采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)對蓮房進行相似度分析，相似度評價結(jié)果見表2，蓮房樣品中7號峰（-去甲荷葉堿）的出峰時間相對穩(wěn)定，分離度較好，是蓮房藥材的指標性成分。所以選擇7號峰（-去甲荷葉堿）作為參照峰，計算得到20批藥材的共有峰的相對保留時間和相對保留峰面積。結(jié)果表明，共有峰的相對保留峰面積存在巨大的差異，但是共有峰的相對保留時間的RSD＜3%，樣品相似度為0.546～0.991，其中有5批藥材的相似度小于0.9，分別為S6、S7、S9、S11、S18，其余15批相似度評價結(jié)果均在0.9以上，表明蓮房藥材在市面上的質(zhì)量存在一定的差異。

圖1 20批次不同產(chǎn)地蓮房HPLC疊加指紋圖譜和對照指紋圖譜(R)

4-兒茶素；6-荷葉堿；7-N-去甲荷葉堿；9-金絲桃苷；10-異槲皮苷； 11-槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷；15-紫云英苷。

2.3 化學(xué)模式識別

2.3.1 HCA 以20批蓮房藥材共有峰的峰面積作為變量，將色譜數(shù)據(jù)導(dǎo)入SPSS 26.0軟件中，采用組間連接，平方歐式距離法進行系統(tǒng)聚類分析，結(jié)果如圖3所示，當(dāng)歐氏距離為20時，所有蓮房樣品可以聚為3類，從結(jié)果可以看出，S1（安徽蕪湖）單獨聚為一類，其共有峰峰面積為所有批次中最大，聚為第1類，S15（江西鄱陽），S17（山東微山湖），共有峰峰面積較其他批次大，僅小于S1，故聚為第2類，S2～S14、S16共有峰峰面積無較大差異，則聚為第3類。

表2 20批蓮房藥材相似度評價結(jié)果

圖3 20批蓮房藥材系統(tǒng)聚類分析圖

2.3.2 PCA 將20批蓮房的共有峰的峰面積導(dǎo)入SPSS 26.0和SIMCA14.1軟件，對藥材進行主成分分析[6]。從Bartlett球形檢定顯示顯著性＜0.05說明研究數(shù)據(jù)適合進行主成分分析，以主成分特征值＞1作為提取標準，得到相關(guān)性矩陣共提取得到3個主成分碎石圖見圖4，其累積方差貢獻率為85.539%，說明可以使用這3個成分的含量來對蓮房進行質(zhì)量評價，其特征值與貢獻率見表3。

圖4 蓮房藥材PCA碎石圖

表3 特征值與方差貢獻率

從因子載荷矩陣（表4）可以得知，主成分1主要反應(yīng)了色譜峰1、2、3、4、5、6、8的信息、主成分2主要反應(yīng)了色譜峰10、11、12、14、15的信息，主成分3主要反應(yīng)了峰7、9、13、16、17的信息。

運用SPSS 26.0軟件計算20批蓮房樣品的主成分得分，以各成分所對應(yīng)的貢獻率作為權(quán)重進行排序，計算綜合得分并進行排序，結(jié)果見表5，主成分排名最高的3個批次，分別是S15、S1、S17，也是所有批次中峰面積最高的3個批次成分。

將20批蓮房樣品的17個共有峰峰面積導(dǎo)入SIMCA 14.1，經(jīng)分析得到PCA得分圖，由圖5可知，所有數(shù)據(jù)均在置信區(qū)間內(nèi)，結(jié)果可以得知S1、S15、S17、與其他批次有區(qū)分明顯，其中S1位于第4象限，而S15與S17位于第2象限，表明這3批中S15與S17樣本相似性更大，其結(jié)果與聚類分析結(jié)果基本一致。

表5 20批蓮房的主成分得分和排序

圖5 20批蓮房PCA得分圖

2.3.3 OPLS-DA OPLS-DA分析能夠更好的體現(xiàn)不同樣本之間的差異，篩選出對組件差異具有較大貢獻率的成分，采用SIMCA 14.1軟件，將蓮房共有峰峰面積作為變量導(dǎo)入軟件，進行建模分析，模型得分見圖6。本次分析中自變量擬合指數(shù)（2）為0.820，因變量擬合指數(shù)（2）為0.954，模型預(yù)測指數(shù)（2）為0.506，2與2均大于0.5表示模型可接受，經(jīng)過200次置換實驗[7]，置換檢驗圖如圖7所示，2與縱軸的相交點為負值，表明模型不存在過擬合現(xiàn)象，模型驗證有效。在置信區(qū)間內(nèi)，根據(jù)OPLS-DA模型中得到的VIP值，VIP得分圖如圖8所示，篩選出VIP值大于1的成分，按照大小排序分別為15（紫云英苷）、6（荷葉堿）、8、12號峰、7（-去甲荷葉堿），表明5個成分在批次中差異較大。

2.3.4 優(yōu)劣解距離法（technique for order preference by similarity to ideal solution，TOPSIS）分析 將20批蓮房樣品的17個共有峰峰面積作為原始數(shù)據(jù)，采用熵權(quán)法作為變量權(quán)重，TOPSIS權(quán)重計算結(jié)果和TOPSIS評價計算結(jié)果[8]見表6、7，TOPSIS分析結(jié)果顯示在17個峰中權(quán)重排名前3的峰為15（紫云英苷）、6（荷葉堿）和4（兒茶素），表明這3個成分對批次差異的貢獻率較高，在評價計算結(jié)果中，S1（安徽蕪湖）、S15（江西贛州）、S17（山東微山湖）排名前3，與所收集的其他批次區(qū)分開來。

圖6 20批蓮房OPLS-DA得分圖

圖7 20批蓮房OPLS-DA置換檢驗

圖8 20批蓮房VIP得分圖

2.4 蓮房主要成分含量測定

基于化學(xué)模式識別分析，篩選得到造成產(chǎn)地質(zhì)量差異的主要成分，同時，根據(jù)中藥質(zhì)量標志物（Q-marker）確定的原則[9]，Q-marker為藥材中存在的與功效相關(guān)的標志性成分，其中有研究表明金絲桃苷和異槲皮苷[10]對體外凝血功能具有一定的影響，槲皮素-3--葡萄糖醛酸苷對體內(nèi)血小板具有一定的調(diào)節(jié)作用[11]，因此確定荷葉堿、-去甲荷葉堿、兒茶素、金絲桃苷，異槲皮苷和槲皮素-3--葡萄糖醛酸苷為蓮房中潛在的Q-marker，建立含量測定方法，并對來自于不同產(chǎn)地蓮房中的6個成分進行含量測定[12]

表6 TOPSIS權(quán)重計算結(jié)果

表7 TOPSIS評價計算結(jié)果

2.4.1 色譜條件 Welch Ultimate?Polar-RP（250 mmí4.6 mm，3 μm）色譜柱，流動相為甲醇-乙腈（1∶2）（A）-0.2%甲酸（B），洗脫梯度：0～8 min，10%～20% A；8～50 min，20%～35% A，50～55 min，35%～50% A，體積流量0.6 mL/min；檢測波長270 nm；柱溫40 ℃；進樣量20 μL。按照“2.1”項制備方法制備樣品。

2.4.2 專屬性考察 取“2.1”項下對照品及供試品溶液，按照“2.4.1”項下色譜條件進樣分析，供試品與對照品色譜峰保留時間基本一致，說明該方法專屬性良好，色譜圖見圖9。

1-兒茶素；2-荷葉堿；3-N-去甲荷葉堿；4-金絲桃苷；5-異槲皮苷；6-槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷。

2.4.3 線性關(guān)系考察 分別精密量取“2.1.2”項下對照品溶液適量，加甲醇定量稀釋，稀釋成含有金絲桃苷1.568、3.92、7.84、15.68、31.36、62.72 μg/mL，異槲皮苷0.813、2.0323、4.064、8.129、16.258、32.516 μg/mL，槲皮素-3--葡萄糖醛酸苷2.60、5.20、10.40、20.80、41.60、83.20 μg/mL，荷葉堿0.42、2.10、4.20、8.40、16.80、33.60 μg/mL，-去甲荷葉堿1.136、2.272、4.544、9.088、18.17、36.34 μg/mL，按“2.4.1”項下色譜條件進樣測定，以質(zhì)量濃度為橫坐標（），色譜峰峰面積為縱坐標（），分別繪制標準曲線并進行線性回歸，結(jié)果見表8。

2.4.4 檢測限（LOD）與定量限（LOQ） LOD和LOQ根據(jù)以下公式計算：LOD＝3 σ/S，LOQ＝10 σ/S，其中σ是線性回歸方程標準曲線的截距的標準偏差，S是線性回歸方程標準曲線的斜率，計算結(jié)果見表9。

表8 6種成分線性關(guān)系及相關(guān)系數(shù)

表9 6種成分的檢測限和定量限

2.4.5 精密度考察 取批號S20的蓮房藥材供試品溶液，按照“2.1.1”項下方法備蓮房供試品溶液，按照“2.4.1”項下的色譜條件進樣測定，連續(xù)測定6次，記錄峰面積，分別計算RSD，結(jié)果顯示兒茶素、荷葉堿、-去甲荷葉堿、金絲桃苷，異槲皮苷和槲皮素-3--葡萄糖醛酸苷的峰面積RSD值分別為2.43%、1.27%、1.32%、1.49%、2.06%、1.42%，表明該儀器精密度良好。

2.4.6 重復(fù)性考察 取批號S20的蓮房藥材粉末按照“2.1.1”項下的蓮房供試品制備方法制備6份供試品溶液，按照“2.4.1”項下色譜條件進樣，計算各成分RSD，結(jié)果顯示兒茶素、荷葉堿、-去甲荷葉堿、金絲桃苷、異槲皮苷和槲皮素-3--葡萄糖醛酸苷的峰面積RSD值分別為2.14%、1.13%、1.61%、1.93%、2.40%、1.73%，表明該檢測方法重復(fù)性良好。

2.4.7 穩(wěn)定性考察 取樣品（S20）的蓮房藥材粉末，按照“2.1.1”項下方法備蓮房供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24 h按照“2.4.1”項下色譜條件進樣，分別計算各成分RSD，結(jié)果顯示兒茶素、荷葉堿、N-去甲荷葉堿、金絲桃苷，異槲皮苷和槲皮素-3--葡萄糖醛酸苷的峰面積RSD值分別為2.75%、2.30%、2.94%、1.90%、2.51%、1.46%，表明該檢測方法在24 h內(nèi)穩(wěn)定性較為良好。

2.4.8 加樣回收率試驗 取樣品（S20）的蓮房藥材粉末250 mg，精密稱定，共6份，分別精密加入適量對照品溶液，每份加入對照品兒茶素（0.110 mg/mL）、荷葉堿（0.062 5 mg/mL）、-去甲荷葉堿（0.046 mg/mL）、金絲桃苷（0.169 mg/mL）、異槲皮苷（0.070 mg/mL）和槲皮素-3--葡萄糖醛酸苷（0.367 mg/mL）各1 mL，按“2.1.1”項下方法制備供試品溶液，測定各化合物峰面積，各成分的平均回收率為102.96%、102.25%、99.55%、100.28%、99.42%、99.50%，RSD值分別為2.08%、1.52%、2.06%、1.31%、1.67%、2.28%。表明該檢測方法準確度符合要求。

2.4.9 樣品含量測定 取20個產(chǎn)地蓮房藥材粉末0.5 g，精密稱定，平行制備3份，按照本節(jié)“2.1.1”項下制備方法得到供試液，按照“2.4.1”項下色譜條件進樣檢驗，計算兒茶素、金絲桃苷、異槲皮苷，槲皮素-3--葡萄糖醛酸苷、荷葉堿、-去甲荷葉堿的含量，結(jié)果見表10，其中20批藥材中兒茶素、荷葉堿、-去甲荷葉堿、金絲桃苷、異槲皮苷和槲皮素-3--葡萄糖醛酸苷的平均質(zhì)量分數(shù)為0.143%、0.044%、0.034%、0.123%、0.044%、0.228%；兒茶素分布在0.029%～0.958%、荷葉堿分布在0.007%～0.137%、-去甲荷葉堿分布在0.013%～0.104%、金絲桃苷分布在0.015%～0.282%、異槲皮苷分布在0.008%～0.110%、槲皮素-3--葡萄糖醛酸苷分布在0.027%～0.541%。

含量測定結(jié)果表明來自S1（安徽蕪湖）、S15（江西贛州）、S17（山東微山湖）3個批次標志性成分含量值和排名前3，按照標志性成分含量之和高低順序排列S15＞S17＞S1＞S3＞S14＞S16＞S6＞S18＞S20＞S11＞S4＞S12＞S8＞S2＞S13＞S5＞S10＞S19＞S9＞S7，標志性成分含量較高的批次在PCA、OPLS-DA與TOPSIS分析中排名也較高，進一步提示兒茶素、荷葉堿、-去甲荷葉堿、金絲桃苷、異槲皮苷和槲皮素-3--葡萄糖醛酸苷可以作為蓮房質(zhì)量評價的指標成分。

表10 20批蓮房藥材6種成分的平均含量（n＝3）

3 討論

供試品制備考察了不同提取溶劑（水、50%甲醇、70%甲醇和100%甲醇）、提取方式（超聲提取法和加熱回流提取法）、提取時間（30、45、60 min）、溶劑提取倍數(shù)（0.5 g∶25 mL、0.5 g∶50 mL和0.5 g∶100 mL），檢測波長（254、260、270、320 nm）等條件，確定了供試品制備方法，在270 nm下所檢測的圖譜分離度較好，色譜峰數(shù)量較多，可滿足分析要求。

本研究建立了不同產(chǎn)地蓮房藥材HPLC指紋圖譜，標定出17個共有峰，相似度大于0.9的有15批樣品，小于0.9的有5批樣品，表明不同批次藥材質(zhì)量存在一定的差異。通過化學(xué)模式識別，得到各批次間含量差異較大的標志性成分。其中，安徽蕪湖、山東微山湖和江西贛州的藥材與其他批次很易區(qū)分開，質(zhì)量較好。對標志性成分的含量測定方法重復(fù)性好，操作簡便，方法穩(wěn)定，可用于蓮房藥材的質(zhì)量評價。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Quality evaluation ofbased on fingerprint and multi-component quantification combined with chemical pattern recognition

HUANG Ya, WANG Baojin, WANG Le, GAO Ye, CUI Yitong, WANG Zhaohui, LIU Yuqi, CHANG Zihao, LIU Yue, ZHANG Lanzhen

School of Chinese Materia Medica, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 102488, China

To establish HPLC fingerprint and multi-component content determination method combined with chemical pattern recognition method and evaluate the quality of Lianfang () from different regions.A Welch Ultimate? Polar-RP (250 mm × 4.6 mm, 3 μm) column was used with methanol: acetonitrile =1∶2 (A) -0.2% formic acid aqueous solution (B) as the mobile phase, column temperature 40℃, volume flow rate 0.6 mL/min, detection wavelength 270 nm, and the fingerprint of 20 batches offrom different regions was drawn. SPSS 26.0 and SIMCA 14.1 software combined with chemical pattern recognition, cluster analysis (HCA), principal component analysis (PCA), orthogonal partial least squares discriminant analysis (OPLS-DA) and TOPSIS were used to evaluate the quality ofsamples from different habitats, and the content of six main components was determined..A total of 17 common peaks were matched in 20 batches of HPLC fingerprints, and seven components were identified, namely catechin, nuciferine,-nornuciferine, hyperoside, isoquercitrin, quercitin-3--glucuronide and astragalin. The similarity of fingerprints ranged from 0.546 to 0.991. The 20 batches ofwere divided into three categories by cluster analysis. PCA, OPLS-DA and TOPSIS analysis showed that the medicinal materials from Wuhu of Anhui Province, Ganzhou of Jiangxi province and Weishanhu of Shandong Province were of good quality. Five marker components, including nuciferine,-nornuciferine and catechin, which caused the quality difference in different areas were analyzed and screened. The contents of catechin, nuciferine,-nornuciferine, hyperoside, isoquercitrin and quercetin-3--glucuronide inwere 0.029%—0.958%, 0.007%—0.137%, 0.013%—0.104%, 0.015%—0.282% and 0.008%—0.110%, 0.027%—0.541%.The HPLC fingerprint ofis simple and reliable. Catechin, nuciferine,-nornuciferine, hyperoside, isoquercitrin and quercetin-3--glucuronide can be used as the main index components for the quality evaluation of.

;chemical pattern recognition; catechin; nuciferine;-nornuciferine; hyperoside; isoquercitrin; quercitin-3--glucuronide

R286.2

A

0253 - 2670(2024)09 - 3098 - 09

10.7501/j.issn.0253-2670.2024.09.023

2023-11-02

北京中醫(yī)藥大學(xué)縱向科研發(fā)展基金項目（2024-ZXFZJJ-JW-010）

黃 雅，女，碩士研究生，研究方向為藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及其藥理作用。E-mail: hya9993@163.com

通信作者：張?zhí)m珍，研究員，主要從事中藥藥效物質(zhì)與質(zhì)量控制工作。E-mail: zhanglanzhen01@126.com

劉 越，講師，主要從事中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及質(zhì)量控制。E-mail: liuyuebei_002@163.com

[責(zé)任編輯 時圣明]