宋選飛，楊 露，謝 歡，周 斌，劉 耀, 2, 3，徐 劍, 2, 3*，張永萍, 2, 3*

苗藥血人參提取物水凝膠的制備及促創(chuàng)面愈合體內(nèi)外研究

宋選飛1，楊 露1，謝 歡1，周 斌1，劉 耀1, 2, 3，徐 劍1, 2, 3*，張永萍1, 2, 3*

1. 貴州中醫(yī)藥大學(xué)，貴州 貴陽 550025 2. 貴州省民族藥經(jīng)皮給藥制劑工程技術(shù)研究中心，貴州 貴陽 550025 3. 國(guó)家苗藥工程技術(shù)研究中心，貴州 貴陽 550025

制備一種載苗藥血人參提取物的聚乙烯醇（PVA）/木質(zhì)素（Lig）/殼聚糖（CS）水凝膠并探究其促創(chuàng)面愈合機(jī)制。在單因素考察的基礎(chǔ)上，正交試驗(yàn)優(yōu)選處方工藝并對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)和體外生物評(píng)價(jià)，通過建立大鼠全層皮膚損傷模型，評(píng)價(jià)其促創(chuàng)愈合效果。攜載提取物的PVA/Lig/CS水凝膠的最優(yōu)處方和制備工藝為PVA用量7.0 g、CS用量4.0 g、Lig用量0.5 g、凍融循環(huán)次數(shù)4次，每次凍結(jié)6 h。該凝膠具有多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)、良好的溶脹性、保濕性及一定的機(jī)械強(qiáng)度，同時(shí)具有良好的生物相容性、抑菌性以及有效抑制巨噬細(xì)胞細(xì)胞遷移，且抑制作用可能與時(shí)間呈正比。該水凝膠的體內(nèi)藥效學(xué)研究顯示，其促創(chuàng)面愈合作用可能與減少創(chuàng)面組織炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M2型極化、增加毛血細(xì)管生成和纖維組織形成有關(guān)。制備的載血人參提取物的PVA/Lig/CS水凝膠劑制備工藝簡(jiǎn)單、穩(wěn)定可行、具有良好的緩釋性能，且對(duì)全層皮膚損傷具較好的治療效果。

血人參提取物；PVA/Lig/CS水凝膠；創(chuàng)面愈合；體外生物評(píng)價(jià)；藥效學(xué)研究

皮膚組織作為保護(hù)器官免受感染和環(huán)境變化的屏障，具有至關(guān)重要的作用，但皮膚因各種物理、化學(xué)和微生物因子等因素引發(fā)的急、慢性創(chuàng)面常難以愈合[1]，甚至伴有大量腐肉、膿液和惡臭等，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。因此，對(duì)創(chuàng)面愈合過程進(jìn)行干預(yù)，以加速創(chuàng)面愈合是皮膚創(chuàng)面治療的首要目標(biāo)。目前，皮膚創(chuàng)傷修復(fù)藥物治療因其便攜性等廣受研究者關(guān)注。但大部分皮膚創(chuàng)面用藥，主要包括抗菌劑、干細(xì)胞療法、生長(zhǎng)因子等[2]，常存在生物安全性低、易產(chǎn)生耐藥性、成本較高、穩(wěn)定性較差等不足[3]。

血人參為豆科木藍(lán)屬植物茸毛木藍(lán)Lindl.的干燥根，是苗族民間常用藥[4-5]，應(yīng)用歷史悠久，其乙醇提取物（ethanol extract，IS-EE）被證明具有抑制斑馬魚炎癥模型中巨噬細(xì)胞向急性創(chuàng)傷部位募集的作用[6]。因此，本研究擬制備一種載有苗藥血人參乙醇提取物PVA/ Lig/CS水凝膠（IS-EE PVA/Lig/CS hydrogel，IS-EE-H）作為創(chuàng)面敷料，該水凝膠是由木質(zhì)素（lignin，Lig）、殼聚糖（chitosan，CS）和聚乙烯醇（polyvinyl alcohol，PVA）組成的混合材料，旨在以木質(zhì)素改善水凝膠的機(jī)械強(qiáng)度，以殼聚糖提高創(chuàng)面的抗菌性能及以聚乙烯醇維持創(chuàng)面周圍的潤(rùn)濕環(huán)境，并利用混合水凝膠三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)作為IS-EE的藥物儲(chǔ)庫，使藥物從水凝膠中持續(xù)釋放，防止巨噬細(xì)胞向炎癥部位的過度遷移、聚集，加快皮膚創(chuàng)面愈合，以期為皮膚創(chuàng)面愈合提供新型敷料，并為皮膚創(chuàng)面愈合藥物的開發(fā)提供理論基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 主要儀器

LC-2030C 3D型高效液相色譜儀、AUW120D型十萬分之一電子分析天平，日本島津制作所；Thermo Fisher Nicolet Is10-透射/ATR紅外、Thermo 3111型CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱、MULTISKAN SKY 153型全自動(dòng)酶標(biāo)儀，賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；CKX53型倒置相差顯微鏡，上海蠻吉光電科技有限公司；YXQ-LS-100SLL型高壓滅菌鍋，上海博訊醫(yī)療生物儀器股份有限公司；PHY-III型病理組織漂烘儀，常州市中威電子儀器有限公司；RS36型全自動(dòng)染色機(jī)，常州派斯杰醫(yī)療設(shè)備有限公司；Inspect型掃描電子顯微鏡（SEM），美國(guó)FEI公司。

1.2 主要材料

血人參藥材，批號(hào)20210322，貴陽德昌祥藥業(yè)有限公司，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)張永萍教授鑒定為豆科木藍(lán)屬植物茸毛木藍(lán)Lindl.的干燥根；對(duì)照品兒茶素，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.0%，批號(hào)170209，成都植標(biāo)化純生物技術(shù)有限公司；對(duì)照品表兒茶素，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.7%，批號(hào)110878-201703，中國(guó)食品藥品檢定研究院；CCK-8（Cell Counting Kit-8細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑）試劑盒，批號(hào)K1018，APExBIO Technology LLC；殼聚糖（批號(hào)RH300965）、木質(zhì)素（批號(hào)RH238608），上海易恩化學(xué)技術(shù)有限公司；聚乙烯醇-124（PVA-124），批號(hào)181207，西隴科學(xué)股份有限公司；巨噬細(xì)胞（RAW264.7），中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心；DMEM培養(yǎng)基，批號(hào)2318854，Gibco公司；脂多糖（lipopolysaccharide，LPS），批號(hào)820F036，Solarbio公司；重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，批號(hào)6920699338625，珠海億勝生物制藥有限公司；腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α，批號(hào)20220120）、白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6，批號(hào)20220120），南京建成生物工程研究所；卡那霉素（批號(hào)820Y0411）、二甲基亞砜（DMSO，批號(hào)710N0315），Solarbio公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，體質(zhì)量180～220 g，購自長(zhǎng)沙天勤生物技術(shù)有限公司，合格證：SCXK（湘）2019-0015。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)符合動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理學(xué)要求，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物倫理委員會(huì)審查后批準(zhǔn)，編號(hào)20210174。

2 方法與結(jié)果

2.1 IS-EE的制備

稱取血人參藥材300 g，剪斷或切碎，加6倍量60%乙醇回流提取2 h，濾過，濾渣加4倍量60%乙醇回流提取1.5 h，濾過。合并2次濾液，減壓回收乙醇并濃縮至一定濃度，真空干燥至含水量＜5%，得IS-EE浸膏粉54 g[6]。

2.2 IS-EE體外分析方法的建立

2.2.1 色譜條件 色譜柱為ComatexTMC18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈-0.2%磷酸水溶液，梯度洗脫：0～40 min，8%～14%乙腈；體積流量為1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm；柱溫為30 ℃；進(jìn)樣10 μL。

2.2.2 混合對(duì)照品溶液的制備 精密稱取兒茶素16.35 mg、表兒茶素14.24 mg分別置于10 mL量瓶中，加甲醇使其完全溶解并稀釋至10 mL，作為兒茶素和表兒茶素的儲(chǔ)備液。精密移取2 mL兒茶素儲(chǔ)備液和5 mL表兒茶素儲(chǔ)備液置于100 mL量瓶中并用甲醇稀釋至100 mL，得到含兒茶素32.70 μg/mL和表兒茶素71.20 μg/mL的混合對(duì)照品儲(chǔ)備液，4 ℃保存。

2.2.3 供試品溶液的制備 精密稱取IS-EE浸膏粉50.0 mg于10 mL量瓶中加入甲醇超聲使其完全溶解，稀釋至10 mL。

2.2.4 專屬性考察 取混合對(duì)照品溶液及IS-EE供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，色譜圖見圖1。在該色譜條件下，IS-EE供試品溶液和對(duì)照品溶液中兒茶素和表兒茶素的色譜峰具有相同的保留時(shí)間，且能實(shí)現(xiàn)完全分離。

圖1 空白甲醇(a)、混合對(duì)照品(b)、IS-EE樣品(c) 的HPLC圖

2.2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取0.625、1.25、2.5、5.0、10.0 mL“2.2.2”項(xiàng)下的混合對(duì)照品儲(chǔ)備液，分別置于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋，得到兒茶素系列質(zhì)量濃度和表兒茶素系列質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，測(cè)定其峰面積。以對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（），待測(cè)成分峰面積為縱坐標(biāo)（）進(jìn)行線性回歸，得兒茶素的線性回歸方程為＝6 659.00－404.29，2＝0.999 9，線性范圍為2.04～32.74 μg/mL；表兒茶素的線性回歸方程為＝7 148.20－659.54，2＝1.000 0，線性范圍為4.50～71.20 μg/mL。由此可知，IS-EE中2種成分在線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.6 精密度考察 精密吸取2.5 mL混合對(duì)照品儲(chǔ)備液，用甲醇定容至10 mL，并按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，重復(fù)6次，以隨行線性回歸方程計(jì)算其中兒茶素和表兒茶素的實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度，并計(jì)算其RSD值，結(jié)果其RSD分別為0.69%和1.07%，可知兒茶素和表兒茶素RSD值均符合要求，儀器精密度良好。

2.2.7 重復(fù)性考察 取同一批IS-EE樣品50.0 mg，精密稱定，平行6份，按“2.2.3”項(xiàng)下方法處理樣品制備供試品溶液，并按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，以隨行線性回歸方程計(jì)算其中兒茶素和表兒茶素的實(shí)測(cè)含量，并計(jì)算其RSD值，結(jié)果其RSD分別為2.11%和1.11%，可知其RSD值均符合要求，表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.8 穩(wěn)定性考察 取同一批IS-EE樣品50.0 mg，精密稱定，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件在制備后0、2、4、6、8、10、12 h時(shí)分別進(jìn)樣分析，以隨行線性回歸方程計(jì)算其中兒茶素和表兒茶素的實(shí)測(cè)含量，并計(jì)算其RSD值，結(jié)果其RSD分別為2.12%和2.37%，可知其RSD值均符合要求，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.9 加樣回收率考察 稱取已測(cè)定指標(biāo)成分含量的IS-EE樣品約25.0 mg，精密稱定，平行6份，按照所得2種成分含量分別加入其1.0倍量的對(duì)照品，按“2.2.3”項(xiàng)下方法處理樣品制備供試品溶液，并按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，以隨行線性回歸方程計(jì)算其中兒茶素和表兒茶素的實(shí)測(cè)含量，并計(jì)算2個(gè)指標(biāo)成分的加樣回收率及其RSD值，結(jié)果兒茶素和表兒茶素的平均加樣回收率分別為103.87%和100.53%，RSD分別為2.86%和2.8.6%。

2.3 IS-EE-H的制備

稱取IS-EE浸膏粉0.5 g，精密稱定，以60%乙醇溶液7 mL溶解，加入PVA溶液（取8 g PVA加32 g超純水，90 ℃攪拌溶解）攪拌后與Lig溶液（取1 g Lig加9 g超純水，常溫?cái)嚢枞芙猓┗旌?，攪拌均勻后加入CS溶液（取CS 4 g加71 g 2%乙酸溶液，90 ℃攪拌溶解），得到的混合溶液進(jìn)行離心（2 000 r/min、3 min）脫氣處理，采用凍融法（冷凍-解凍）在?20 ℃下物理交聯(lián)得IS-EE-H。

2.4 單因素考察IS-EE-H的處方工藝

本實(shí)驗(yàn)采用凍融法制備PVA水凝膠，其機(jī)制主要為在冷凍狀態(tài)下，隨著凍融循環(huán)增加，水凍結(jié)、膨脹，推動(dòng)PVA鏈與其他高分子材料鏈緊密接觸，形成高分子無規(guī)則狀的高密度區(qū)，促進(jìn)氫鍵和晶體的形成[7]。為了考察凍融循環(huán)次數(shù)、凍結(jié)時(shí)間、不同基質(zhì)比、木質(zhì)素含量對(duì)水凝膠的影響，本研究選取的凍融循環(huán)次數(shù)分別為2、4、6次，凍結(jié)時(shí)間分別為6、12、24 h，PVA/Lig/CS比例（質(zhì)量比）分別為8∶1∶2、7∶1∶3、6∶1∶4；Lig含量分別為0.5、1.0、1.5 g。除篩選因素改變外，將其他因素固定，即凍融循環(huán)次數(shù)和凍結(jié)時(shí)間分別為4次和6 h，PVA/Lig/CS比例為7∶1∶3，Lig含量為1.0 g。按照“2.3”項(xiàng)下方法制備水凝膠，評(píng)價(jià)各因素對(duì)水凝膠藥物釋放性能的影響。

2.4.1 凍融循環(huán)次數(shù) 不同凍融循環(huán)次數(shù)的水凝膠均在12 h后到達(dá)溶脹平衡狀態(tài)，經(jīng)過4次循環(huán)后，水凝膠的溶脹率達(dá)到最佳，溶脹率為374.8%，當(dāng)凍融循環(huán)增加至6次時(shí)水凝膠溶脹率幾乎不變，說明水凝膠凍融至4次時(shí)，其交聯(lián)程度可能已達(dá)到最大，此外凍融2次水凝膠中兒茶素和表兒茶素的累積釋放率最大，其次是凍融6次和凍融4次。

2.4.2 凍結(jié)時(shí)間 不同凍結(jié)時(shí)間的水凝膠均在12 h后達(dá)到溶脹平衡，其中凍結(jié)6 h的溶脹率（401.4%）最佳，較凍結(jié)12 h和24 h的平衡溶脹率（350.0%）高，同時(shí)凍結(jié)6 h和24 h時(shí)水凝膠中的兒茶素和表兒茶素的累積釋放率較12 h高，可達(dá)80%以上。研究表明，水凝膠溶脹率是衡量其吸收傷口滲出液能力的關(guān)鍵因素之一[8-9]，因此，本研究后續(xù)采用凍結(jié)6 h進(jìn)行水凝膠的制備。

2.4.3 基質(zhì)比 PVA/Lig/CS質(zhì)量比（6∶1∶4）水凝膠溶脹率最大，可達(dá)至284.0%，其次是PVA/Lig/ CS質(zhì)量比（7∶1∶3）水凝膠（265.6%）和PVA/Lig/ CS質(zhì)量比（8∶1∶2）水凝膠（238.2%）。該結(jié)果表明，水凝膠處方中PVA和CS比值越小，水凝膠的溶脹度可能越大，其中CS對(duì)水凝膠的溶脹度可能起主導(dǎo)作用。水凝膠處方中PVA和CS比值越小，水凝膠的保濕性越小。PVA/Lig/CS質(zhì)量比（6∶1∶4）水凝膠中兒茶素和表兒茶素的累積釋放率最大，分別為101.4%和85.4%，其次是PVA/Lig/CS質(zhì)量比（8∶1∶2）水凝膠和PVA/Lig/CS質(zhì)量比（7∶1∶3）水凝膠，2者的兒茶素累積釋放率分別為93.9%、77.7%，表兒茶素的累積釋放率分別為84.5%、64.8%。

2.4.4 木質(zhì)素含量 在木質(zhì)素含量分別為0.5、1.0、1.5 g的水凝膠處方中，PVA/Lig/CS質(zhì)量比（7∶0.5∶3）水凝膠的溶脹率和保濕率最高，該結(jié)果表明木質(zhì)素在水凝膠處方中的比例越小，水凝膠的溶脹率和保濕率可能越大。PVA/Lig/CS質(zhì)量比（7∶1.5∶3）水凝膠兒茶素和表兒茶素的累積釋放率最大，其次是PVA/Lig/CS質(zhì)量比（7∶1.0∶3）水凝膠和PVA/ Lig/CS質(zhì)量比（7∶0.5∶3）水凝膠，該結(jié)果表明，水凝膠中木質(zhì)素含量越大水凝膠的藥物釋放率可能越大。

2.5 正交試驗(yàn)優(yōu)化處方工藝

為了進(jìn)一步篩選IS-EE-H的制備工藝和制備處方，本實(shí)驗(yàn)采用了正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)法對(duì)其制備工藝和制備處方進(jìn)行優(yōu)化。單因素考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，PVA用量（A）、CS用量（B）、Lig用量（C）、凍融循環(huán)次數(shù)（D）均對(duì)水凝膠的溶脹率、藥物累積釋放率影響較大，對(duì)保濕度的影響相對(duì)較小，因此，正交試驗(yàn)以水凝膠中兒茶素和表兒茶素的累積釋放率和溶脹率的綜合評(píng)分［綜合評(píng)分＝(兒茶素累積釋放率/兒茶素累積釋放率最大值)×0.35×100＋(表兒茶素累積釋放率/兒茶素累積釋放率最大值)×0.35×100＋(平衡溶脹度/平衡溶脹度最大值)×0.3×100］作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，按L9(34)因素水平表（表1）進(jìn)行正交試驗(yàn)。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果（表1、2）綜合分析確定IS-EE-H的制備工藝和制備處方為A2B3C1D2，即PVA用量7.0 g、CS用量4.0 g、Lig用量0.5 g和凍融循環(huán)次數(shù)4次。

2.6 IS-EE-H的表征

2.6.1 傅里葉紅外光譜分析 將PVA水凝膠、PVA/ Lig水凝膠、PVA/Lig/CS水凝膠和IS-EE-H冷凍干燥，干燥后的水凝膠分別使用傅里葉紅外光譜分析儀分析其紅外光譜（FTIR），分辨率為4 cm?1，掃描次數(shù)為16次，光譜范圍為4 000～500 cm?1。其結(jié)果如圖2所示。1 600～1 400 cm?1是木質(zhì)素典型的芳香族骨架振動(dòng)[10]，PVA/Lig水凝膠、PVA/Lig/CS水凝膠及IS-EE-H在1 419 cm?1和1 569 cm?1處表現(xiàn)出特征峰，且1 569 cm?1的峰強(qiáng)增加，表明木質(zhì)素與PVA可能交聯(lián)成功。3 280 cm?1的強(qiáng)吸收峰是由于-OH拉伸振動(dòng)[11]，PVA存在大量親水基團(tuán)羥基，故PVA水凝膠、PVA/Lig水凝膠、PVA/Lig/CS水凝膠及IS-EE-H在3 280 cm?1均出現(xiàn)強(qiáng)吸收。研究表明，氫鍵形成時(shí)會(huì)使峰強(qiáng)增加同時(shí)將波段向低波數(shù)方向移動(dòng)[12]。IS-EE-H在3 257 cm?1左右峰強(qiáng)增加，猜想IS-EE可能以氫鍵的形式包載于PVA/Lig/CS水凝膠中。

2.6.2 形態(tài)學(xué)表征 將PVA/Lig/CS水凝膠和IS- EE-H用相機(jī)記錄其形態(tài)，同時(shí)進(jìn)行冷凍干燥，干燥后樣品折斷，暴露橫截面，噴金干燥后用SEM觀察其微觀形態(tài)。其結(jié)果如圖3-A和3-B所示，該凝膠成型性好且具有良好的彈性。在SEM下，PVA/ Lig/CS水凝膠呈三維多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)（圖3-A），該結(jié)果可能歸因于木質(zhì)素具有由多種活性基團(tuán)（羥基、羧基和磺酸基團(tuán)等）構(gòu)成的特殊化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)象，同時(shí)這些基團(tuán)與PVA的羥基形成氫鍵，與殼聚糖的氨基形成離子鍵[13]。將PVA/Lig/CS水凝膠作為藥物儲(chǔ)庫對(duì)血人參提取物進(jìn)行裝載后，形成的IS-EE-H仍保持一定數(shù)量的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)使水分子容易滲透，是具有良好的溶脹性能的保障[14]，為其作為傷口敷料對(duì)傷口組織液、細(xì)胞代謝物等具有良好吸收效果提供理論依據(jù)。

表1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

表2 方差分析

圖2 PVA水凝膠(A)、PVA/Lig水凝膠(B)、PVA/Lig/CS水凝膠(C) 和IS-EE-H(D) 的FTIR圖

圖3 PVA/Lig/CS水凝膠(A) 和IS-EE-H (B) 的宏觀形態(tài)和微觀形態(tài)表征

2.6.3 溶脹性能 將水凝膠試樣真空干燥（48 h），稱定質(zhì)量（質(zhì)量記為0），加入50 mL超純水使其在常溫下充分膨脹，在時(shí)刻取出試樣，濾紙擦干表面水分，稱定質(zhì)量（質(zhì)量記為M），計(jì)算水凝膠的溶脹率。其溶脹率結(jié)果（圖4）顯示，PVA/Lig/CS水凝膠的平衡溶脹度為（436.820±9.623）%，IS- EE-H的平衡溶脹度為（168.32±2.53）%，IS-EE-H溶脹度下降的原因可能是IS-EE以氫鍵形式包載于PVA/Lig/CS水凝膠中，使水凝膠的交聯(lián)度增加，導(dǎo)致水凝膠水滲透率下降。

2.6.4 保濕性能 理想的創(chuàng)面敷料應(yīng)具有優(yōu)良的保濕性能，敷料提供的潤(rùn)濕環(huán)境為表皮細(xì)胞的再生和趨化提供有利條件，保持細(xì)胞因子活性，促進(jìn)創(chuàng)面快速愈合[15]。將水凝膠試樣真空干燥（48 h），稱定質(zhì)量（質(zhì)量記為0），加超純水（50 mL）使其在常溫下膨脹，充分溶脹后稱定質(zhì)量（質(zhì)量記為e）。將充分溶脹后的水凝膠置于恒溫箱（37 ℃）中，在時(shí)刻取出試樣，稱定質(zhì)量（質(zhì)量記為M），計(jì)算保濕度。PVA/Lig/CS水凝膠及IS-EE-H的保濕性結(jié)果（圖4）顯示，同一時(shí)間點(diǎn)PVA/Lig/CS水凝膠的保濕率較IS-EE-H高，IS-EE-H在短時(shí)間內(nèi)具有一定的保濕性能。

2.6.5 釋放性能 藥物釋藥性能是考察水凝膠作為緩控釋制劑應(yīng)用的一項(xiàng)重要指標(biāo)。將水凝膠試樣置于PBS溶液（pH 5，20 mL）中，恒溫振蕩（37 ℃），分別在1、2、3、4、5、7、12、24、36、48 h取出釋放介質(zhì)（10 mL），同時(shí)補(bǔ)充同等體積的空白釋放介質(zhì)，將取出的釋放介質(zhì)置于蒸發(fā)皿中干燥，待其完全蒸發(fā)后，加入甲醇溶液溶解殘留物質(zhì)并定容至5 mL，0.22 μm有機(jī)膜濾過，取10 μL進(jìn)樣分析，計(jì)算水凝膠試樣的累積釋放率。IS-EE-H的累積釋放率試驗(yàn)結(jié)果（圖5）顯示，IS-EE-H中IS-EE的指標(biāo)成分兒茶素和表兒茶素均在8 h后接近恒速釋放，此時(shí)二者的累積釋放率分別為90.9%、60.8%。采用Origin2019b軟件將兒茶素和表兒茶素的累積釋放數(shù)據(jù)與零級(jí)方程、一級(jí)方程和Higuchi平方根方程進(jìn)行擬合[16]。結(jié)果顯示（表3），IS-EE-H中IS-EE指標(biāo)成分兒茶素和表兒茶素的釋放規(guī)律均符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)，該結(jié)果說明PVA/Lig/CS水凝膠作為IS-EE的藥物儲(chǔ)庫可以對(duì)其具有緩釋作用。

圖4 PVA/Lig/CS水凝膠和IS-EE-H的溶脹率(A) 和保濕率(B) 結(jié)果(, n = 3)

2.6.6 流變學(xué)性能 將水凝膠置于平行板（直徑20.0 mm）上，以1.0 mm的固定間隙值進(jìn)行頻率掃描分析。固定應(yīng)變?yōu)?%，在0.01～10 Hz的頻率范圍，進(jìn)行掃頻測(cè)試，實(shí)驗(yàn)過程中溫度保持為25 ℃。測(cè)定的PVA/CS水凝膠、PVA/Lig/CS水凝膠、IS-EE-H的流變性能結(jié)果如圖6，其中儲(chǔ)能模量（′）表示水凝膠的彈性，損耗模量（″）表示黏度。結(jié)果顯示，3種類型的水凝膠均呈現(xiàn)出彈性行為和黏性行為，因儲(chǔ)能模量值較損耗模量值高，判斷3種類型水凝膠以彈性行為為主。同時(shí)，在PVA/CS水凝膠中添加Lig后，水凝膠的儲(chǔ)能模量和損耗模量均降低，且儲(chǔ)能模量值顯著降低，該結(jié)果表明Lig在水凝膠中可能具有增加水凝膠黏度的作用。當(dāng)PVA/ Lig/CS水凝膠攜載IS-EE后，IS-EE-H的儲(chǔ)能模量顯著增加，產(chǎn)生該現(xiàn)象的原因可能是：IS-EE-H制備過程中，藥物與PVA混合后加入Lig混勻時(shí)，由于IS-EE的溶劑為60%乙醇，該乙醇可能充當(dāng)一定潤(rùn)濕劑的作用，使PVA、Lig和CS混合更加均勻，導(dǎo)致最終形成的凝膠彈性更好。

圖5 IS-EE-H中2種指標(biāo)成分的累積釋放曲線(, n = 3)

表3 IS-EE-H中2種指標(biāo)成分釋放數(shù)據(jù)的擬合情況

圖6 各水凝膠的流變學(xué)結(jié)果(, n = 3)

2.6.7 力學(xué)性能 為了進(jìn)一步探究Lig在水凝膠中的作用，將PVA/CS水凝膠、PVA/Lig/CS水凝膠和IS-EE-H進(jìn)行拉伸試驗(yàn)，將水凝膠切成條狀（4.5 mm×1.5 mm×10 mm），采用萬能試驗(yàn)機(jī)以50.0 mm/min的拉伸速率進(jìn)行拉伸測(cè)試，記錄拉伸過程中水凝膠應(yīng)變值和應(yīng)力值。試驗(yàn)結(jié)果（圖7）顯示，PVA/CS水凝膠斷裂時(shí)的應(yīng)變（斷裂拉伸率）和抗拉強(qiáng)度分別為86.3%和8.0 kPa，PVA/CS水凝膠在變形過程中表現(xiàn)出明顯的應(yīng)變硬化現(xiàn)象，產(chǎn)生該現(xiàn)象的原因可能是在PVA/CS結(jié)晶區(qū)內(nèi)PVA/CS聚合物鏈表現(xiàn)出有限的延展性[13]。當(dāng)水凝膠中引入Lig后，Lig可能增加了水凝膠的三維空間結(jié)構(gòu)，使其在拉伸過程中自行變形吸引拉力，導(dǎo)致PVA/Lig/CS水凝膠斷裂時(shí)的應(yīng)變和抗拉強(qiáng)度分別為308.3%和63.0 kPa。當(dāng)PVA/Lig/CS水凝膠包載IS-EE后，IS-EE-H的斷裂伸長(zhǎng)率反而降低至229.1%，抗拉強(qiáng)度升至90.0 kPa，產(chǎn)生該結(jié)果的原因可能是IS-EE以氫鍵形式包載于PVA/Lig/CS水凝膠中，使水凝膠具有較高的晶體密度，增加了IS-EE-H網(wǎng)絡(luò)的剛性，降低了網(wǎng)絡(luò)的柔韌[17]。

圖7 水凝膠力學(xué)性能實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.7 IS-EE-H體外生物評(píng)價(jià)

2.7.1 細(xì)胞相容性試驗(yàn) 將培養(yǎng)好的細(xì)胞（RAW 264.7）接種于96孔板中，1.5×104細(xì)胞/孔，分為空白組、DMSO組、IS-EE組、PVA/Lig/CS水凝膠組（PLC-H）和IS-EE-H組，重復(fù)3個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)（5% CO2、37 ℃）過夜。各組分別加入無血清DMEM配制的PBS、DMSO、IS-EE（兒茶素質(zhì)量濃度分別為25.0、50.0、100.0、200.0 μg/mL，表兒茶素質(zhì)量濃度分別為43.6、87.2、174.4、347.8 μg/mL）、PLC-H浸提液、IS-EE-H浸提液（兒茶素質(zhì)量濃度分別為25.0、50.0、100.0、200.0 μg/mL，表兒茶素質(zhì)量濃度分別為43.6、87.2、174.4、347.8 μg/mL），培養(yǎng)（5% CO2、37 ℃）24 h，吸去細(xì)胞上清液，每孔加入100 μL無血清DMEM和10 μL CCK-8溶液，輕輕混勻后孵育（5% CO2、37 ℃）2 h，通過酶標(biāo)儀測(cè)定其在450 nm處的吸光度，計(jì)算細(xì)胞存活率［細(xì)胞存活率＝(實(shí)驗(yàn)孔吸光度－空白孔吸光度)/(對(duì)照孔吸光度－空白孔吸光度)］。結(jié)果（表4）顯示，IS-EE的細(xì)胞存活率與質(zhì)量濃度呈負(fù)相關(guān)，且與相對(duì)應(yīng)濃度的DMSO對(duì)細(xì)胞存活率無明顯影響，該結(jié)果表明較高質(zhì)量濃度的IS-EE可能對(duì)RAW264.7細(xì)胞具有抑制作用。將PLC-H攜載IS-EE后，在低質(zhì)量濃度時(shí)，IS-EE-H的細(xì)胞存活率與其質(zhì)量濃度呈正相關(guān)，細(xì)胞存活率均高于76.0%。在高質(zhì)量濃度時(shí)，IS-EE-H的細(xì)胞存活率降低至73.5%，該結(jié)果與PLC-H實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，說明低水平的PLC-H對(duì)細(xì)胞（RAW264.7）可能具有良好的增殖作用，高水平的PLC-H對(duì)RAW264.7細(xì)胞可能具有輕微的抑制作用。

表4 IS-EE-H的細(xì)胞生物相容性試驗(yàn)結(jié)果(, n = 3)

2.7.2 細(xì)胞劃痕試驗(yàn) 試驗(yàn)前用記號(hào)筆在24孔板背后畫橫線。將培養(yǎng)好的細(xì)胞（RAW264.7）接種于24孔板中，1.0×105細(xì)胞/孔，分為空白組、IS-EE組、PLC-H組和IS-EE-H組，每組3個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)（5% CO2、37 ℃）過夜。棄去細(xì)胞上清，各組分別加入1 mL無血清DMEM配制的PBS，IS-EE（兒茶素50.0 μg/mL，表兒茶素87.2 μg/mL），PLC-H浸提液，IS-EE-H浸提液（兒茶素50.0 μg/mL，表兒茶素87.2 μg/mL），孵育2 h。采用槍頭（200 μL）在各組細(xì)胞正上方垂直孔板預(yù)處理的黑線劃痕，劃線完成后，使用無菌PBS清洗細(xì)胞2次，去除劃下的細(xì)胞，給予LPS（100.0 ng/mL）刺激，將細(xì)胞放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（5% CO2、37 ℃）。分別在不同時(shí)間點(diǎn)（8、12、24 h）取出，顯微鏡拍照記錄細(xì)胞的愈合情況，以Image J分析各實(shí)驗(yàn)組的劃痕面積，計(jì)算傷口愈合率，傷口愈合率越小，說明RAW 264.7遷移率小。結(jié)果（表5）表明IS-EE可以抑制RAW264.7細(xì)胞遷移，且隨時(shí)間點(diǎn)增加抑制效果越明顯。將PLC-H對(duì)IS-EE進(jìn)行包載后，IS-EE-H對(duì)RAW264.7細(xì)胞的抑制遷移現(xiàn)象更顯著。巨噬細(xì)胞是創(chuàng)面愈合炎癥期的主要炎癥細(xì)胞，因此，IS- EE-H可能對(duì)創(chuàng)面愈合炎癥期治療具有重要作用。

2.7.3 對(duì)炎癥因子的影響 將培養(yǎng)好的細(xì)胞（RAW 264.7）接種于24孔板中，1.0×105細(xì)胞/孔，分為空白組、IS-EE組、PVA/Lig/CS水凝膠組（PLC-H）和IS-EE-H組，每組3個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)（5% CO2、37℃）過夜。棄去細(xì)胞上清液，各組分別加入1.5 mL無血清DMEM配制的PBS，IS-EE（兒茶素50.0 μg/mL，表兒茶素87.2 μg/mL），PLC-H浸提液，IS-EE-H浸提液（兒茶素50.0 μg/mL，表兒茶素87.2 μg/mL），孵育2 h。吸出細(xì)胞上清，用PBS清洗細(xì)胞2次，給予LPS（100.0 ng/mL）刺激18 h，吸出細(xì)胞上清，按照ELISA試劑盒檢測(cè)其中IL-6和TNF-α的含量。試驗(yàn)結(jié)果如表6所示，與空白組相比，IS-EE、PLC-H和IS-EE-H能顯著降低LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞TNF-α的產(chǎn)生。與空白組相比，IS-EE和IS-EE-H對(duì)LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞IL-6的產(chǎn)生表現(xiàn)出抑制作用，但該作用無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。該結(jié)果表明，IS-EE、PLC-H和IS-EE-H可能具有抑制炎癥反應(yīng)發(fā)生的作用。

表5 不同時(shí)間點(diǎn)IS-EE-H的細(xì)胞劃痕愈合率(, n = 3)

同一時(shí)間點(diǎn)與空白組比較：**＜0.01***＜0.001；與8 h空白組比較：##＜0.01###＜0.001；與8 h IS-EE組比較：Δ＜0.05；與8 h PLC-H組比較：&＜0.05。

**< 0.01***< 0.001blank group at the same time point;##< 0.01###< 0.0018 h blank group;Δ< 0.058 h IS-EE group;&< 0.058 h PLC-H group.

2.7.4 抑菌試驗(yàn) 采用大腸桿菌和金黃色葡萄球菌通過CFUs試驗(yàn)評(píng)價(jià)水凝膠的抑菌活性。用無菌PBS將細(xì)菌濃度調(diào)整為1.0×108cfu/mL，將PVA/Lig水凝膠浸提液、PVA/CS水凝膠浸提液、PLC-H浸提液、IS-EE（50.0 μg/mL）、IS-EE-H浸提液（IS-EE 50.0 μg/mL）和卡那霉素（kanamycin，50.0 μg/mL）分別與上述細(xì)菌懸液孵育（37 ℃）8 h，各混懸液逐步稀釋至 1×10?5濃度，后將其（30 μL）接種于LB培養(yǎng)皿中。在37 ℃下孵育過夜后，拍照記錄菌落數(shù)并計(jì)數(shù)。每組重復(fù)3次試驗(yàn)。計(jì)算抑菌率［抑菌率＝(CFU空白組－CFU樣本組)/CFU空白組］。由試驗(yàn)結(jié)果（表7）可知，在水凝膠中增加CS可以增強(qiáng)水凝膠的抗菌效果，且PVA/CS水凝膠、PLC-H、IS-EE-H、卡那霉素（50.0 μg/mL）對(duì)大腸桿菌的抑菌率有良好的抑菌效果，均大于99.0%。

表6 IS-EE-H的對(duì)細(xì)胞炎癥因子的影響結(jié)果(, n = 3)

與空白組比較：*＜0.05**＜0.01。

*< 0.05**< 0.01blank group.

表7 IS-EE及其有無殼聚糖水凝膠的抑菌結(jié)果(, n = 3)

與PVA/Lig組比較：*＜0.05。

*< 0.05PVA/Lig group.

2.8 IS-EE-H體內(nèi)藥效評(píng)價(jià)

2.8.1 全層皮膚損傷模型的建立 采用正常雄性SD大鼠（180～220 g）構(gòu)建全層皮膚損傷模型。將SD大鼠80只隨機(jī)分為5組，每組16只，即模型組、陽性對(duì)照組（重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子）、IS-EE組、空白凝膠（blank gel，B-G）組、IS-EE-H組。其中IS-EE給藥量為0.315 g/kg（生藥量），IS-EE質(zhì)量濃度0.26 g/mL。造模前將大鼠麻醉并對(duì)其背部脫毛，脫毛后用95%醫(yī)用酒精消毒，隨后在每只大鼠的背部創(chuàng)建全層皮膚傷口（1.5 cm×1.5 cm）。造模后第1天開始給藥，隔1天給藥1次，共6次。其中模型組給予300 μL PBS，陽性對(duì)照組給予重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，其余各組分別給予相應(yīng)藥物。

2.8.2 創(chuàng)面愈合率 采用Image J軟件分析3、7、14 d時(shí)各組動(dòng)物創(chuàng)面的傷口面積，并以第1天傷口面積作為傷口初始面積，計(jì)算創(chuàng)面愈合率。由表8可知，與模型組相比，第3、7天時(shí)IS-EE-H和陽性藥組傷口面積明顯減小，以第3天尤為顯著，且兩者的創(chuàng)面愈合率分別是模型組的4.3倍和3.5倍，結(jié)果表明IS-EE-H具有良好的促創(chuàng)面愈合的作用，產(chǎn)生該作用可能與前面證實(shí)IS-EE-H具有良好的生物相容性、抗菌性、抑制炎癥細(xì)胞向創(chuàng)口過度聚集有關(guān)及抑制TNF-α生成有關(guān)。

表8 第3、7、14天各實(shí)驗(yàn)組的創(chuàng)面愈合率(, n = 5)

與模型組比較：*＜0.05***＜0.001。

*< 0.05***< 0.001model group.

2.8.3 再生組織HE染色分析 經(jīng)藥物干預(yù)后，對(duì)第3、7、14天的創(chuàng)面再生組織進(jìn)行HE染色分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖8所示，經(jīng)治療14 d后，與模型組相比，IS-EE-H和陽性藥物組的皮膚組織修復(fù)程度相對(duì)最好，主要表現(xiàn)在炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減少，毛血細(xì)管形成增加，纖維組織形成明顯等。IS-EE的皮膚組織修復(fù)程度較IS-EE-H和陽性藥物組差，B-G的皮膚組織修復(fù)程度相對(duì)次之。同時(shí)隨著治療時(shí)間增加，各組的皮膚創(chuàng)面組織修復(fù)效果越明顯。該結(jié)果表明，與B-G相比，IS-EE及IS-EE-H具有良好的創(chuàng)面修復(fù)作用。

2.8.4 再生組織CD86（B淋巴細(xì)胞活化抗原B7-2）和CD163（M130抗原）的表達(dá) 選擇表面生物標(biāo)志物CD86和CD163，分別標(biāo)記M1和M2巨噬細(xì)胞[18-19]，觀察IS-EE-H對(duì)創(chuàng)面愈合期間巨噬細(xì)胞極化的影響。如圖9所示，與模型組相比，各試驗(yàn)組CD86的表達(dá)在第3、7天時(shí)明顯減少，其中第3天時(shí)模型組CD86的表達(dá)量分是IS-EE組、B-G和IS-EE-H的2.4、1.6、2.2倍，第7天時(shí)模型組CD86的表達(dá)量分是IS-EE組、B-G和IS-EE-H的4、2、1.5倍（表9）。與模型組相比，各試驗(yàn)組第3天時(shí)CD163的表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在第7天時(shí)，IS-EE-H組CD163的表達(dá)量是模型組2.1倍（表9）。該結(jié)果表明，在創(chuàng)面愈合前期，IS-EE、B-G和IS-EE-H均具有抑制M1型巨噬細(xì)胞向創(chuàng)面過度募集的作用。同時(shí)將B-G作為IS-EE緩釋藥物儲(chǔ)庫制備的IS-EE-H可能還具有促進(jìn)促炎性巨噬細(xì)胞（M1型）向抗炎性巨噬細(xì)胞（M2型）極化的作用。

圖8 第3、7、14天時(shí)再生組織的H&E染色圖像(比例尺50 μm)

圖9 第3、7天時(shí)再生組織中CD86和CD163的免疫組化染色照片(比例尺40 μm)

表9 第3、7天各實(shí)驗(yàn)組皮膚再生組織CD86和CD163的陽性面積占比(, n = 3)

與模型組比較：*＜0.05**＜0.01。

*< 0.05**< 0.01model group.

2.8.5 再生組織CD31的表達(dá) CD31是一種在早期血管生成中表達(dá)的跨膜蛋白[20]，本研究采用CD31免疫組化染色法評(píng)價(jià)創(chuàng)面的血管生成情況。如圖10-A所示，與模型組相比，IS-EE組和IS-EE-H組的CD31表達(dá)明顯，尤其是IS-EE-H組，其在第7、14天時(shí)CD31表達(dá)分別是模型組的2.5、3.2倍（表10），說明IS-EE組和IS-EE-H組的創(chuàng)面形成了更多成熟結(jié)構(gòu)的毛細(xì)血管。該結(jié)果表明IS-EE和IS- EE-H可能通過增加創(chuàng)面再生組織中的血管生成促進(jìn)創(chuàng)面修復(fù)。在傷口處理第14天時(shí)，B-G組CD31表達(dá)量也較模型組顯著，該結(jié)果表明，B-G具有一定的促創(chuàng)面愈合作用，該作用可能與其具有良好的保濕性能、生物相容性和抗菌性能有關(guān)。

圖10 第7、14天時(shí)再生組織中CD31免疫組化(比例尺40 μm, A) 和Masson染色圖片(比例尺50 μm, B)

2.8.6 再生組織膠原纖維沉淀情況 傷口部位膠原蛋白的形成，在傷口愈合重塑期修復(fù)受損皮膚組織和增強(qiáng)組織的抗拉強(qiáng)度方面發(fā)揮著重要作用[21]，本研究采用Masson三色染色法評(píng)價(jià)傷口愈合過程中膠原纖維沉積的情況。如圖10-B所示，在第7、14天，各組實(shí)驗(yàn)組均出現(xiàn)了膠原纖維沉積（藍(lán)色區(qū)域）。與模型組相比，IS-EE組、IS-EE-H和陽性藥組膠原纖維沉積的現(xiàn)象更密集和顯著，以傷口處理后的第14天尤甚，通過定量分析纖維組織表達(dá)面積百分比（表11）知，IS-EE組、IS-EE-H膠原纖維組織表達(dá)面積百分比是模型組的2.0倍，陽性藥組膠原纖維組織表達(dá)面積百分比是模型組的2.4倍。該結(jié)果表明IS-EE和IS-EE-H對(duì)改善創(chuàng)面愈后質(zhì)量具有良好作用，該作用可能與前述在創(chuàng)面愈合炎癥期抑制促炎型巨噬細(xì)胞向創(chuàng)面過度聚集有關(guān)。

表10 第7、14天各實(shí)驗(yàn)組皮膚再生組織CD31的陽性面積占比(, n = 3)

與模型組比較：*＜0.05**＜0.01。

*< 0.05**< 0.01model group.

3 討論

本研究在單因素考察的基礎(chǔ)上正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)篩選出最優(yōu)的PLC-H，即PVA、CS和Lig的質(zhì)量比為7∶4∶0.5，最優(yōu)制備工藝為凍融循環(huán)次數(shù)4次，每次凍結(jié)6 h。將PLC-H攜載IS-EE后，IS-EE-H的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)及良好溶脹性能，更有利于傷口組織液和滲出物的吸收以及使藥物發(fā)揮緩釋作用。同時(shí)PLC-H合適的機(jī)械強(qiáng)度，更是為其作為創(chuàng)面敷料提供依據(jù)。

表11 第7、14天各實(shí)驗(yàn)組再生皮膚纖維組織表達(dá)面積百分比(, n = 3)

與模型組比較：*＜0.05**＜0.01***＜0.001。

*< 0.05**< 0.01***< 0.01model group.

體外生物評(píng)價(jià)結(jié)果顯示，IS-EE（兒茶素20.0～200.0 μg/mL）的細(xì)胞（RAW264.7）存活率與IS-EE濃度呈負(fù)相關(guān)，將PLC-H對(duì)IS-EE進(jìn)行包載后，IS-EE-H對(duì)炎癥細(xì)胞（RAW264.7）的抑制遷移現(xiàn)象更顯著，同時(shí)IS-EE和IS-EE-H對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌有良好的抑菌效果。體內(nèi)藥效結(jié)果顯示，IS-EE-H具有良好的促創(chuàng)面愈合的作用，該作用可能是與其在創(chuàng)面愈合前期減少炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、抑制巨噬細(xì)胞向創(chuàng)面過度趨化、促進(jìn)M1型巨噬細(xì)胞向M2型巨噬細(xì)胞極化，同時(shí)在創(chuàng)面愈合中后期促進(jìn)血管生成、增加纖維組織形成等相關(guān)。

綜上所述，血人參因其優(yōu)良的抗炎性能是目前創(chuàng)面愈合治療具有潛力的候選藥物，同時(shí)攜載IS-EE的PVA/Lig/CS水凝膠可調(diào)控創(chuàng)面愈合炎癥期巨噬細(xì)胞的遷移和極化，增殖期血管的生成及重塑期膠原纖維的表達(dá)，以改善創(chuàng)面愈后質(zhì)量，但其具體調(diào)控機(jī)制及再生組織附屬器（毛囊、汗腺、皮脂腺等）的生成情況等有待進(jìn)一步系統(tǒng)研究。

此外，本研究還存在其他不足。其一，IS-EE中的指標(biāo)成分（兒茶素和表兒茶素）對(duì)pH敏感，在pH＞6時(shí)易降解，如后續(xù)將其制備為納米制劑該問題可能會(huì)得到有效解決，同時(shí)對(duì)溫度也較敏感，在制備過程中應(yīng)加以注意。其二，采用PVA、Lig和CS以凍融法制備的高分子材料水凝膠雖然具備優(yōu)良的機(jī)械性能、抗菌性能等，但其降解能力較薄弱是今后研究需要完善并解決的問題。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Preparation of a hydrogel ofextract from Miao medicine and promotion of wound healingandstudy

SONG Xuanfei1, YANG Lu1, XIE Huan1, ZHOU Bin1, LIU Yao1, 2, 3, XU Jian1, 2, 3, ZHANG Yongping1, 2, 3

1. Guizhou University of Traditional Chinese Medicine, Guiyang 550025, China 2. Guizhou Ethnic Medicine Transdermal Drug Delivery Preparation Engineering Technology Research Center, Guiyang 550025, China 3. National Engineering Research Center of Miao’s Medicine, Guiyang 550025, China

To prepare of a polyvinyl alcohol (PVA)/lignin (Lig)/chitosan (CS) hydrogel containing extracts of(IS), a Miao medicine, and investigate its promoting wound healing mechanism.On the basis of single factor investigation, orthogonal test was performed to prefer the prescription process and to evaluate its quality andbiological evaluation, and its promoting wound healing effect was evaluated by establishing a rat whole skin injury model.The optimal prescription and preparation process of PVA/Lig/CS hydrogels carrying the extracts were 7.0 g of PVA, 4.0 g of CS, 0.5 g of Lig, and four freeze-thaw cycles of 6 h each. The gel has a porous mesh structure, good swelling property, moisture retention and some mechanical strength, as well as good biocompatibility, bacteriostatic properties and effective inhibition of macrophage cell migration, and the inhibition effect may be proportional to time. Thepharmacodynamic study of this hydrogel showed that its promoting wound healing effect may be related to the reduction of inflammatory cell infiltration in the wound tissue, promotion of macrophage polarisation towards the M2 type, and increase of capillary formation and fibrous tissue formation.The prepared PVA/Lig/CS hydrogel containing IS extract is simple, stable and feasible to prepare, has good slow-release properties, and has better therapeutic effect on all-over skin injury.

extract; PVA/Lig/CS hydrogel; wound healing;biological evaluation; pharmacodynamic study

R283.6

A

0253 - 2670(2024)09 - 2933 - 13

10.7501/j.issn.0253-2670.2024.09.008

2023-10-19

貴州省高等學(xué)校中藥民族藥（苗藥）新劑型新制劑工程研究中心（黔教技[2022]022）；國(guó)家苗藥工程技術(shù)研究中心能力提升（黔科合中引地[2023]006）；貴州省高層次創(chuàng)新型人才（黔科合平臺(tái)人才-GCC[2023]037）

宋選飛（1996—），女，碩士研究生，主要研究方向?yàn)橹兴幖懊褡逅幩幬镄轮苿┡c新劑型。E-mail:xuanfeisong@126.com

通信作者：張永萍（1965—），女，教授，博士研究生導(dǎo)師。主要研究方向?yàn)橹兴幖懊褡逅幮轮苿?、新劑型與新技術(shù)開發(fā)研究。E-mail: zgygpg@126.com

徐 劍（1977—），男，碩士，教授，研究方向?yàn)橹兴幹苿┬录夹g(shù)與新劑型。E-mail: twt8489@126.com

[責(zé)任編輯 鄭禮勝]