班馬澤郎，李天嬌，周賽賽，吳 丹，盧姊豪，宋仁德，羅曉林，趙索南，馬進(jìn)壽，參木友，石紅梅，索朗斯珠

（1.西藏農(nóng)牧學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，林芝 860000；2.青海玉樹藏族自治州畜牧獸醫(yī)工作站，玉樹 815400；3.四川省草原科學(xué)研究院，成都 610097；4.青海省海北畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究所，海北 812200；5.青海省大通種牛場(chǎng)，大通 810102；6.西藏農(nóng)牧科學(xué)院草原研究所，拉薩 850000；7.甘南州畜牧工作站，甘南 747000）

沙門菌（Salmonella, SE）是引起人和動(dòng)物腹瀉的革蘭氏陰性腸道桿菌之一。廣泛分布于自然環(huán)境中，可以侵襲包括人在內(nèi)的各種動(dòng)物，是一種全球性的重要食源性人畜共患致病菌[1-3]。在我國(guó)自1958年甘肅丹山牧區(qū)馬場(chǎng)暴發(fā)牦牛源SE病以來(lái)[4]，四川[5]、青海[6]、西藏[7]等地均有牦牛源SE的報(bào)道。

牦牛作為青藏高原特有的物種之一，是當(dāng)?shù)剞r(nóng)牧民經(jīng)濟(jì)收入的主要來(lái)源。但是近年來(lái)，青藏高原地區(qū)牦牛腹瀉盛行，其中，犢牛腹瀉尤為嚴(yán)重，在犢牛死亡率中占89%[8]，而牦牛源SE是多年來(lái)引起牦牛腹瀉的主要原因之一[9]，給高原牦牛產(chǎn)業(yè)的發(fā)展造成嚴(yán)重影響。由于目前，青藏高原地區(qū)健康牦牛攜帶的SE研究較少、部分資料時(shí)間久遠(yuǎn)且對(duì)健康動(dòng)物分離的SE致病性研究也少有報(bào)道，加之青藏高原地理環(huán)境惡劣、民族文化差異、牦牛生活習(xí)慣等原因，我國(guó)還尚未對(duì)青藏高原 牦牛源SE進(jìn)行大規(guī)模系統(tǒng)的流行病學(xué)調(diào)查研究。因此，本實(shí)驗(yàn)對(duì)2012—2021年采集的西藏7地市、青海、甘肅、四川部分地區(qū)牦牛血清樣品共1725份進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，明確牦牛 源SE在青藏高原各省區(qū)的流行情況，為后續(xù)青藏高原牦牛源SE的防控研究提供一定的參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑 牛SE酶聯(lián)免疫分析購(gòu)自江蘇酶聯(lián)實(shí)業(yè)有限公司，批號(hào)為M M-5094301，生產(chǎn)日期為2021年3月，有效期6個(gè)月，試劑盒保存于2℃～8℃冰箱。

1.2 血清樣本來(lái)源 2012—2021年采集自青 藏高原地區(qū)牦牛血清共1725份，牦牛血清均未接種過(guò)SE疫苗，置于-80℃冰箱保存。

1.3 抗體檢測(cè)和結(jié)果判定 按照牛SE酶聯(lián)免疫分析（批 號(hào)：MM-5094301）說(shuō)明書對(duì)血清樣品進(jìn)行SE抗體檢測(cè)和結(jié)果判定。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 利用SPSS 21.0軟件對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行年份、海拔、性別、地區(qū)分析，通過(guò)χ2檢驗(yàn)，分析差異顯著性，P＜0.01為差異極顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；P＜0.05為差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；P＞0.05為無(wú)顯著性差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與討論

2.1 不同年份牦牛SE陽(yáng)性率檢測(cè)結(jié)果與分析 2012—2021年青藏高原地區(qū)牦牛血清SE抗體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1，經(jīng)SPSS統(tǒng)計(jì)分析顯示：除了2012年、2016年及2018年檢出的陽(yáng)性率不到10.00%，其余年份檢測(cè)出的陽(yáng)性率均超過(guò)14.00%，其中2013年和2021年檢測(cè)出的陽(yáng)性率超過(guò)了46.00%（P＜0.01），差異性極顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 不同年份青藏高原牦牛血清SE 抗體檢測(cè)結(jié)果Table1 Detection results of serum SE antibody of yaks in Qinghai-Tibet Plateau in diff erent years

近幾年，隨著旅游業(yè)和養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，一些傳染病隨著人口車輛的流動(dòng)[10]和一些其他肉食品的引進(jìn)[11]，對(duì)牦牛的生長(zhǎng)環(huán)境造成污染，引起牛群SE的感染，再加上牧民對(duì)牦牛源SE的防控意識(shí)比較差，這可能是近些年青藏高原地區(qū)牦牛SE血清陽(yáng)性率較高的原因之一；另外，2013年和2021年牦牛血清樣品大多數(shù)是在腹瀉的牛群中采集，而牛群腹瀉的主要原因可能是由SE感染引起的，因此，這也可能是造成SE陽(yáng)性率高的原因。本次檢測(cè)結(jié)果表明，近10年牦牛源SE可能一直影響著高原牦牛產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。

2.2 不同海拔牦牛血清 SE陽(yáng)性率檢測(cè)結(jié)果與分析 通過(guò)牦牛在不同海拔感染SE陽(yáng)性率的比較可知，牦牛感染SE陽(yáng)性率呈隨著牦牛生存環(huán)境海拔梯度的變化而變化的趨勢(shì)，在海拔3900 m以上牦牛感染SE的陽(yáng)性率與海拔3900 m以下相比差異性顯著（P＜0.05）（圖1）。

圖1 牦牛在不同海拔感染SE 陽(yáng)性率檢測(cè)結(jié)果Fig.1 Detection results of SE positive rate of yaks infected at diff erent altitudes

青藏高原不同海拔地區(qū)植被生長(zhǎng)狀況隨著海拔升高植被覆蓋率分布呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)[12]。海拔越高植被的生長(zhǎng)周期越短，一年中除了植被生長(zhǎng)周期階段牦牛所采食的量相對(duì)充足外，其他大部分時(shí)間牦牛都處于半飽狀態(tài)，甚至有些犢牛和瘦弱老牛因食物缺乏導(dǎo)致機(jī)體免疫力低下，熬不過(guò)冬天就會(huì)死亡；高海拔地區(qū)革蘭氏陰性細(xì)菌[13]在低溫條件下生存周期更長(zhǎng)，牦牛一旦感染致病菌，就會(huì)在牛群中持續(xù)傳播。基于以上原因，海拔越高的氣候環(huán)境可能會(huì)影響SE對(duì)牦牛的感染，后期需要加強(qiáng)對(duì)不同海拔牦牛感染SE陽(yáng)性率的檢測(cè)。

2.3 青藏高原牦牛性別感染SE結(jié)果與分析 通過(guò)對(duì)4省牦牛性別 感染SE陽(yáng)性率的檢測(cè)可知，青藏高原總的平均陽(yáng)性率分別為公（25.61%）、母（21.99%）。其中四川、甘肅、青海公牛SE陽(yáng)性率均高于母牛，而西藏反之（圖2）。

圖2 各地區(qū)不同性別牦牛血清SE 抗體檢出情況Fig.2 Detection of serum SE antibody in yaks of diff erent sexes in various regions

西藏地區(qū)農(nóng)牧民吃酥油的習(xí)慣更為普遍，不得不延長(zhǎng)母牦牛的使用年限，牛群中存在“老齡母牦牛多”的現(xiàn)象[14]，公牛除用于配種外，其余的成年后與淘汰母牛一同屠宰產(chǎn)肉[15]。這可能是導(dǎo)致西藏母牛陽(yáng)性率較高于公牛主要原因之一。但青藏高原牦牛性別SE總的陽(yáng)性率差異性不顯著（P＞0.05），這與從光雷[16]研究SE對(duì)肉雞性別的感染無(wú)顯著差異性結(jié)果一致。表明SE可能對(duì)牦牛性別的感染差異性不顯著。

2.4 不同地區(qū)牦牛血清SE抗體結(jié)果與分析 通過(guò)對(duì)青藏高原4省牦牛源SE抗體的檢測(cè)可知。青藏高原地區(qū)牦牛源SE總的平均陽(yáng)性率達(dá)到23.54%（406/1725），西藏地區(qū)（27.67%），明顯高于青海（13.50%）和甘肅地區(qū)（13.33%），而四川地區(qū)陽(yáng)性率最低只有1.89%。此外，甘南地區(qū)（13.33%）陽(yáng)性率與詹發(fā)茂等[17]在甘肅省天?？h從3866份牦牛樣中分離出581份，感染率為15.02%相比，差異性不顯著（P＞0.05）（表2）。青海祁連縣2020年暴發(fā)的犢牛腹瀉病副傷寒SE，其感染率13.54%[18]與本次檢測(cè)的海北、大通、玉樹的總陽(yáng)性率為（13.50%）相比，差異不顯著（P＞0.05）。陳朝喜等[19]2014年對(duì)成都青白江牦牛屠宰場(chǎng)采集的473份糞便樣本中分離得到36株SE，其分離率為7.61%，高于本次對(duì)四川地區(qū)的陽(yáng)性率1.89%， 差異性顯著（P＜0.05）。但本次四川地區(qū)檢測(cè)的樣品量少，后期需要加強(qiáng)對(duì)四川地區(qū)牦牛源SE的檢測(cè)。

表2 不同地區(qū)牦牛源血清SE 抗體檢測(cè)結(jié)果Table 2 Detection results of SE antibody in yaks serum from diff erent regions

西藏地區(qū)1271份牦牛血清中檢測(cè)出352份SE陽(yáng)性，陽(yáng)性率為27.67%，其中山南和阿里牦牛源SE陽(yáng)性率最高，分別達(dá)到51.85%、45.28%，其次那曲SE陽(yáng)性率也達(dá)到35.77%，而西藏其他地區(qū)的陽(yáng)性率為10.00%～30.00%。那曲、阿里，以及山南作為西藏牦牛的主產(chǎn)區(qū)，牦牛養(yǎng)殖已成為這里的支柱產(chǎn)業(yè)。牦牛感染SE病后常引起免疫抑制和持續(xù)感染，且病牛臨床癥狀不明顯，不易引起獸醫(yī)工作人員的注意，給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)無(wú)法估計(jì)的損失，制約著畜牧業(yè)的發(fā)展[20]；SE感染可能還因地理位置、氣候環(huán)境等因素存在差異[21]。落后的經(jīng)濟(jì)條件，使得西藏地區(qū)牦牛的養(yǎng)殖管理還處于傳統(tǒng)的散養(yǎng)模式，再加上牧民思想觀念比較陳舊，對(duì)于傳染病的防控宣傳措施，未引起重視，這可能是導(dǎo)致西藏地區(qū)牦牛源血清SE陽(yáng)性率與其他3省相比較高的原因 之一，后期相關(guān)部門需要加強(qiáng)對(duì)基層獸醫(yī)人員SE傳染病的防控培訓(xùn)，加強(qiáng)對(duì)牦牛源SE區(qū)域化監(jiān)測(cè)，才有利于牦牛產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。

本次研究掌握了4省近十年牦牛源SE血清流行情況：牦牛感染SE陽(yáng)性率呈隨著牦牛生存環(huán)境海拔梯度的變化而變化的趨勢(shì)；不同地區(qū)牦牛性別SE陽(yáng)性率差異性不顯著；西藏地區(qū)牦牛源SE陽(yáng)性率最高，其次是青海和甘肅，四川地區(qū)最低。通過(guò)本次實(shí)驗(yàn)的研究，豐富了青藏高原不同地區(qū)牦牛源SE血清流行病學(xué)的資料，對(duì)下一步牦牛源SE病的研究和防控措施提供了有利的參考。