◎ 王靜嫻，張 昂

（1.寧夏大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，寧夏 銀川 750021；2.秦皇島海關(guān)技術(shù)中心，河北 秦皇島 066000）

1 研究背景及意義

不同產(chǎn)地的蜂蜜所富含的營養(yǎng)成分不同，其商品價(jià)值也存在巨大差異[1-2]，導(dǎo)致蜂蜜制假、摻假、冒充產(chǎn)地等違法行為層出不窮。因此，解決蜂蜜原產(chǎn)地制假售假等問題，已刻不容緩[3-5]。現(xiàn)今，蜂蜜產(chǎn)地多樣、復(fù)雜，傳統(tǒng)產(chǎn)地鑒別手段已具有十分明顯的局限性。本文基于穩(wěn)定同位素分析技術(shù)，并采用主成分分析（PCA）、線性判別分析（LDA）、偏最小二乘判別分析（PLS-DA），計(jì)算整體鑒別率，以評(píng)價(jià)該方法在蜂蜜產(chǎn)地鑒別實(shí)踐中的可行性。

2 基于穩(wěn)定同位素分析技術(shù)的蜂蜜產(chǎn)地鑒別研究

2.1 材料與試劑

（1）蜂蜜樣品。分別采自云南、廣西、陜西、河北、河南、黑龍江6 個(gè)省份，每個(gè)省份采集20 份，總計(jì)120 份。樣本均從當(dāng)?shù)胤滢r(nóng)處直接購買，采集后將其放置在4 ℃條件下保存。

（2）試劑。穩(wěn)定碳同位素參照標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)［IAEACH6（δ13C：-10.4‰）］，英國SerCon 公司；二氧化碳?xì)怏w（純度≥99.999%），中國標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心；氦氣（純度≥99.999%），北京市亞南氣體有限公司；氮?dú)猓兌取?9.999%），北京北分氣體工業(yè)有限公司；二氧化硫氣體（純度≥99.999%），北京北分氣體工業(yè)有限公司；鎢酸鈉（Na2WO4·2H2O）和濃硫酸（優(yōu)級(jí)純），北京國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；水[GB/T 6682—2008（28）規(guī)定的一級(jí)水]。

2.2 儀器與設(shè)備

穩(wěn)定同位素比值質(zhì)譜儀Sercon 20-22，英國Sercon 公司；液相色譜串聯(lián)同位素質(zhì)譜儀Delta V Plus，美國Thermo Fisher 公司；元素分析儀EAGSL，英國 Sercon 公司；超純水制備儀Milli-QG，美國Millipore 公司；恒溫水浴箱德國TW20，Julabo 公司；臺(tái)式離心機(jī)Heraeus Multifuge X3R，美國Thermo Scientific 公司；烘箱UT20，美國 Thermo 公司；微量取樣器，德國Eppendorf 公司；尼龍濾膜0.22 μL，天津津騰公司。

2.3 結(jié)果與分析

2.3.1 不同產(chǎn)地蜂蜜穩(wěn)定碳同位素指紋

利用EA-IRMS 和LC-IRMS，測定云南（YN）、廣西（GX）、河北（HB）、河南（HN）、陜西（SX）、黑龍江（HLJ）6 省份蜂蜜中碳同位素比值，結(jié)果見表1。蜂蜜中δ13C（Protein）值范圍比δ13C（Honey）值的范圍窄，與李沈軼等[5]研究結(jié)果相同。

表1 6 省份蜂蜜中碳同位素比值表

2.3.2 主成分分析

對(duì)測定的5 種δ13C 數(shù)據(jù)進(jìn)行PCA 分析，僅提取了1 種主成分，累積方差貢獻(xiàn)率達(dá)84.25%，結(jié)合PCA得分圖（圖1）得知，6 個(gè)省份的樣品大部分區(qū)間重疊，分離效果較差。

圖1 基于穩(wěn)定同位素分析技術(shù)的蜂蜜PCA 得分圖

2.3.3 線性判別分析

對(duì)測定的6 個(gè)省份的蜂蜜的δ13C 數(shù)據(jù)進(jìn)行線性判別分析，結(jié)果見表2。

表2 基于穩(wěn)定同位素分析技術(shù)的蜂蜜產(chǎn)地判別函數(shù)系數(shù)表

建立基于穩(wěn)定同位素分析技術(shù)的蜂蜜產(chǎn)地訓(xùn)練集和測試集，得到6 省蜂蜜樣品預(yù)測準(zhǔn)確率，測試集預(yù)測準(zhǔn)確率3 項(xiàng)指標(biāo)，皆小于50%（見表3），表示該模型不具備預(yù)測有效性。

表3 基于穩(wěn)定同位素分析技術(shù)的蜂蜜產(chǎn)地測試集預(yù)測準(zhǔn)確率表

2.3.4 偏最小二乘判別分析

結(jié)合圖2、3 可知，方程擬合效果較差。其中，δ13C（Protein）作為關(guān)鍵影響因子，可能與樣本的選擇有關(guān)。換言之，6 個(gè)省份地理差異極大，從黑龍江到云南，幾乎跨越了整個(gè)中國，導(dǎo)致樣本中的蛋白質(zhì)含量產(chǎn)生特征性差異。

圖2 穩(wěn)定碳同位素指標(biāo)VIP 值圖

圖3 基于穩(wěn)定同位素分析技術(shù)的蜂蜜PLS-DA 得分圖

3 結(jié)語

本研究基于穩(wěn)定碳同位素，對(duì)6 省蜂蜜進(jìn)行產(chǎn)地鑒別，建立了產(chǎn)地鑒別模型，并采用IRMS 測定了不同產(chǎn)區(qū)蜂蜜樣品中的5 種碳穩(wěn)定同位素比值。結(jié)果表明，不同產(chǎn)區(qū)蜂蜜樣品存在顯著性差異（P＜0.05）。在此基礎(chǔ)上，本研究結(jié)合主成分分析（PCA）、線性 判別分析（LDA）和偏最小二乘判別分析（PLS-DA），構(gòu)建了基于穩(wěn)定同位素分析技術(shù)的蜂蜜產(chǎn)地鑒別模型。結(jié)果顯示，PCA 分析只提取了一個(gè)主成分，累積方差貢獻(xiàn)率為84.25%；LDA 分析測試集預(yù)測準(zhǔn)確率小于50%，說明該模型不具備預(yù)測有效性；PLS-DA 分析模型擬合效果較差。因此，單純基于穩(wěn)定同位素技術(shù)，在鑒定產(chǎn)地方面的表現(xiàn)一般，需相關(guān)學(xué)者結(jié)合其他分析方法，建立更為有效的鑒別模型。