摘要：為明晰朱砂梅品種群梅花花色表型差異形成的分子調(diào)控機(jī)制，以花色由淺至深呈梯度變化的6個(gè)朱砂梅品種為試驗(yàn)材料，利用色差儀和分光光度計(jì)測(cè)定不同品種盛花期花瓣的花色表型及花色苷含量，通過(guò)熒光定量PCR及相關(guān)性分析，對(duì)花色苷合成結(jié)構(gòu)基因（PmCHS、PmCHI、PmF3H、PmF3′H、PmDFR、PmANS、PmUFGT）及轉(zhuǎn)錄因子編碼基因（PmMYB1、PmbHLH3）的轉(zhuǎn)錄特性進(jìn)行探究。結(jié)果表明，各品種間花瓣花色苷含量與花色紅度的變化趨勢(shì)一致；PmMYB1、PmbHLH3、PmF3′H、PmDFR、PmUFGT的相對(duì)表達(dá)量與花色苷含量呈極顯著正相關(guān)；轉(zhuǎn)錄因子編碼基因PmMYB1與PmbHLH3的相對(duì)表達(dá)量呈極顯著正相關(guān)，且均與結(jié)構(gòu)基因PmF3′H、PmDFR、PmUFGT的表達(dá)水平呈顯著或極顯著正相關(guān)。推測(cè)轉(zhuǎn)錄因子編碼基因PmMYB1PmbHLH3通過(guò)正向調(diào)控結(jié)構(gòu)基因PmF3′H、PmDFR和PmUFGT的表達(dá)從而調(diào)控朱砂梅花瓣的呈色。

關(guān)鍵詞：梅花；花色苷；結(jié)構(gòu)基因；轉(zhuǎn)錄因子；熒光定量PCR

中圖分類(lèi)號(hào)：S685.17文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1000-4440（2024）02-0367-09

Analysis of the expression pattern of structural genes and transcription factors encoding genes related to the anthocyanin synthesis in six cultivars of Prunus mume Cinnabar Purple Group

GUO Meng-ge 1，QIN Xiao-tian1，CHEN Rui-dan 1，2，3，4，5，6

（1.School of Landscape Architecture， Beijing Forestry University， Beijing 100083， China；2.Beijing Key Laboratory of Ornamental Plants Germplasm Innovation amp; Molecular Breeding， Beijing 100083， China；3.National Engineering Research Center for Floriculture，Beijing 100083， China；4.Beijing Laboratory of Urban and Rural Ecological Environment， Beijing 100083， China；5.Engineering Research Center of Landscape Environment of Ministry of Education， Beijing 100083， China；6.Key Laboratory of Genetics and Breeding in Forest Trees and Ornamental Plants of Ministry of Education， Beijing 100083， China）

Abstract：To clarify the molecular regulatory mechanism for the formation of phenotypic differences in flower color of Prunus mume Cinnabar Purple Group， six varieties of P. mume Cinnabar Purple Group with gradient changes in flower color from light to dark were used as the test materials. The floral color phenotypes and anthocyanin contents of petals of different varieties at full-bloom stage were determined by colorimeter and spectrophotometer， respectively. The transcriptional characteristics of the structural genes for anthocyanin synthesis （PmCHS， PmCHI， PmF3H， PmF3′H， PmDFR， PmANS， PmUFGT） and the transcription factors encoding genes （PmMYB1， PmbHLH3） were analyzed by qRT-PCR and correlation analysis. The results showed that the change trend of anthocyanin content in petals among the varieties was consistent with that of flower color redness. The relative expression of PmMYB1， PmbHLH3， PmF3′H， PmDFR and PmUFGT were highly significantly and positively correlated with anthocyanin content. The relative expression of transcription factors encoding genes PmMYB1 and PmbHLH3 were highly significantly and positively correlated， and all of them were significantly or highly significantly and positively correlated with the expression levels of the structural genes PmF3′H， PmDFR and PmUFGT. It is hypothesized that the transcription factors encoding genes PmMYB1 and PmbHLH3 regulate the expression of the structural genes PmF3′H， PmDFR and PmUFGT and thus regulate the color presentation of the petals of P. mume Cinnabar Purple Group.

Key words：Prunus mume;anthocyanin;structural genes;transcription factors;qRT- PCR

花色苷屬于類(lèi)黃酮類(lèi)次生代謝產(chǎn)物，是植物中廣泛存在的一類(lèi)色素[1-2]?；ㄉ帐鞘够ò?、果實(shí)、葉片、根莖等植物器官呈現(xiàn)紅、黃、藍(lán)、紫等豐富色彩的主要色素[3]，不僅在植物繁殖方面起重要作用，在提高植物抗逆性及人類(lèi)醫(yī)療保健方面也發(fā)揮著不可替代的作用[4-5]。植物花色苷生物合成途徑較復(fù)雜，參與其合成的基因主要分為2類(lèi)，一類(lèi)是直接編碼花青素合成途徑中相關(guān)酶類(lèi)的結(jié)構(gòu)基因，包括CHS、CHI、DFR、ANS 、UFGT、F3′H、F3H、F3′5′H等[6]。另一類(lèi)是調(diào)節(jié)基因，主要是通過(guò)調(diào)控相關(guān)結(jié)構(gòu)基因的表達(dá)，進(jìn)而控制花色苷的積累[7]。目前已在非洲菊（Gerbera hybrid）、矢車(chē)菊（Centaurea cyanus）、桃（Prunus persica）、蘋(píng)果（Malus×domestica）、葡萄（Vitis vinifera）、西洋梨（Pyrus communis）等作物的研究[8-12]中證實(shí)，花色苷合成相關(guān)基因在調(diào)控植物器官的呈色方面發(fā)揮著重要作用。但不同植物及同一植物不同品種間的著色特性、基因轉(zhuǎn)錄特性又有所不同。探究植物花色苷合成相關(guān)基因的表達(dá)模式對(duì)明晰植物呈色的分子機(jī)理及分子輔助育種具有重要意義。

梅花（Prunus mume）作為中國(guó)傳統(tǒng)的名花美木，其花期特早，花香宜人，樹(shù)姿蒼勁，深受人們喜愛(ài)，常被用作園林觀賞樹(shù)種[13-14]?；ㄉ菦Q定梅花觀賞價(jià)值的重要品質(zhì)性狀，花色育種是梅花品種改良的主要方向[2]。當(dāng)前梅花花色的研究正處于由表及里的深入探索階段。趙昶靈等[15]、吳欣欣[16]的研究結(jié)果表明，花色苷是梅花花瓣呈色的主要色素。張芹等[2]通過(guò)定性和定量分析，得出梅花花瓣花色苷合成通路主要為矢車(chē)菊素分支，并從梅花中克隆得到PmMYB1基因，在煙草中過(guò)表達(dá)后使其花瓣紅色加深，證實(shí)了轉(zhuǎn)錄因子編碼基因PmMYB1在花色苷合成途徑中起正向調(diào)控作用。截至目前，關(guān)于梅花花色的研究有限，梅花花色苷生物合成相關(guān)基因的表達(dá)模式尚不清楚，梅花花色苷生物合成的分子調(diào)控機(jī)制尚未明確。鑒于此，本研究以花色不同的6個(gè)梅花品種為試驗(yàn)材料，對(duì)梅花花色苷生物合成相關(guān)結(jié)構(gòu)基因（PmCHS、PmCHI、PmF3H、PmF3′H、PmDFR、PmANS、PmUFGT）與調(diào)節(jié)基因（PmMYB1、PmbHLH3）的轉(zhuǎn)錄特性及表達(dá)模式進(jìn)行探究，以初步明晰梅花花色表型差異形成的分子調(diào)控機(jī)制。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

梅花研究者公認(rèn)花色最深的梅品種是朱砂品種群的烏羽玉，為方便明晰梅花花色差異形成的原因，本研究選擇同品種群中花色由淺至深呈明顯梯度變化的6個(gè)梅品種[ 白朱砂（P. mume Bai Zhusha）、粉暈朱砂（P. mume Fenyun Zhusha）、白須朱砂（P. mume Baixu Zhusha）、豫西朱砂（P. mume Yuxi Zhusha）、盧氏艷朱砂（P. mume Lushi Yan Zhusha）、烏羽玉（P. mume Wu Yuyu）]作為研究對(duì)象，2022年3月前往豫西梅園采集其盛花期花瓣，用液氮冷凍保存。

1.2花瓣表型測(cè)定

使用上海首立實(shí)業(yè)有限公司提供的NF555分光色差儀對(duì)6個(gè)朱砂梅品種盛花期花瓣的L*、a*、b*值進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)品種隨機(jī)取3朵花，每朵花3次重復(fù)。其中，L*表示亮度；a*表示紅色到綠色的范圍，a*為正值表示顏色偏紅，a*為負(fù)值表示顏色偏綠；b*表示黃色到藍(lán)色的范圍，b*為正值表示顏色偏黃，b*為負(fù)值表示顏色偏藍(lán)。彩度（C*）和色相角（h）的計(jì)算參考夏溪等[17]的方法。

1.3花瓣花色苷的提取與含量測(cè)定

在花瓣中少量多次加入液氮進(jìn)行研磨直至花瓣呈細(xì)小粉末狀，取0.1 g花瓣粉末用離心管進(jìn)行分裝，然后加入浸提液（甲醇∶鹽酸=99∶1，體積比）5 ml，置于4 ℃冰箱避光浸提24 h，每隔8 h均勻搖晃1次，確?；ò攴勰┛梢酝耆佑|到浸提液直至花瓣粉末顏色近于白色，隨后將離心管置于離心機(jī)中配平，13 000 r/m離心3 min，抽取、過(guò)濾上清液到新的離心管中，接著使用紫外分光光度計(jì)測(cè)定OD530值。參考倪鐘[18]的方法計(jì)算花色苷含量，單位用mg/g表示，每個(gè)樣本3次重復(fù)。

1.4總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄

使用北京天漠科技開(kāi)發(fā)有限公司提供的植物RNA提取試劑盒進(jìn)行各品種盛花期花瓣的總RNA提取，然后使用凝膠成像系統(tǒng)GIS-500（杭州米歐儀器有限公司產(chǎn)品）和超微量核酸儀FC-1100（杭州遂真生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品）對(duì)提取的總RNA濃度及純度進(jìn)行檢測(cè)，最后按照蘇州宇恒生物科技有限公司生產(chǎn)的UEIris RT mix with DNase-All-in-One（R2020）試劑盒提供的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄得到cDNA。

1.5熒光定量檢測(cè)

利用常州福生生物技術(shù)有限公司提供的96孔熒光定量PCR儀進(jìn)行熒光定量轉(zhuǎn)錄水平檢測(cè)，熒光試劑為StarLighter SYBR Green qPCR Mix（Universal），反應(yīng)體系為：熒光試劑10.0 μl，cDNA模板1.0 μl，上游引物和下游引物各0.5 μl，ddH2O 8.0 μl。反應(yīng)程序?yàn)椋?5 ℃ 3 min；95 ℃ 10 s，60 ℃ 30 s，40個(gè)循環(huán)。以PmActin作為內(nèi)參基因?qū)δ康幕颍≒mCHS、PmCHI、PmF3′H、PmF3H、PmDFR、PmANS、PmUFGT、PmMYB1、PmbHLH3）進(jìn)行相對(duì)定量分析。使用Primer Premier 5.0軟件對(duì)已公布的相關(guān)基因序列進(jìn)行引物設(shè)計(jì)，具體引物信息見(jiàn)表1。試驗(yàn)設(shè)置3次重復(fù)。

1.6數(shù)據(jù)分析

用Excel 16和SPSS 26.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，并用Origin 2021軟件作圖。

2結(jié)果與分析

2.1不同品種朱砂梅花瓣表型分析

圖1為盛花期白朱砂、 粉暈朱砂、 白須朱砂、 豫西朱砂、盧氏艷朱砂、烏羽玉6個(gè)梅花品種的花朵，其花瓣顏色分別為粉白色、淺粉色、粉色、粉紅色、亮紅色和暗紅色。

由表2可知，6個(gè)梅花品種中，顯示紅度的a*和表示彩度的C*均是暗紅色品種烏羽玉最高，粉白色品種白朱砂最低。顯示黃藍(lán)度的b*值是粉白色品種白朱砂最高，粉色品種白須朱砂最低。與亮度相關(guān)的L*是粉白色品種白朱砂最高，暗紅色品種烏羽玉最低。6個(gè)梅花品種花色表型參數(shù)值間的線性擬合曲線（圖2）顯示，a*與L*、C*與L*均呈顯著負(fù)相關(guān)，這表明本研究中朱砂梅花瓣的紅度和彩度越高，亮度越低。

2.2不同品種朱砂梅花瓣花色苷含量分析

對(duì)比分析白朱砂、粉暈朱砂、白須朱砂、豫西朱砂、盧氏艷朱砂、烏羽玉的盛花期花色表型參數(shù)（表2）及花色苷含量（圖3），發(fā)現(xiàn)不同品種朱砂梅花瓣花色苷含量的變化趨勢(shì)與花色的紅度變化趨勢(shì)一致，其中白朱砂花色紅度最小，其花瓣花色苷含量最低，僅為0.1 mg/g；而烏羽玉花色紅度最大，其花瓣花色苷含量也最高，約為白朱砂的13倍。除白朱砂與粉暈朱砂花瓣花色苷含量差異不顯著外，其余4個(gè)品種朱砂梅的花色苷含量差異達(dá)顯著水平。這表明本研究中的朱砂梅花瓣花色苷含量與花色紅度呈一定程度的正相關(guān)。

2.3不同品種朱砂梅花瓣花色苷合成結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄特性

6個(gè)朱砂梅品種由于花瓣中花色苷含量的不同導(dǎo)致花色表型差異顯著，為探明花色苷合成途徑與朱砂梅花瓣呈色的關(guān)系，本研究對(duì)花色苷生物合成相關(guān)的7個(gè)結(jié)構(gòu)基因（PmCHS、PmCHI、PmF3′H、PmF3H、PmDFR、PmANS和PmUFGT）進(jìn)行了實(shí)時(shí)熒光定量分析，結(jié)果（圖4）顯示，PmF3′H、PmUFGT這2個(gè)結(jié)構(gòu)基因在不同品種朱砂梅花瓣中的相對(duì)表達(dá)量與花色苷含量（圖3）變化趨勢(shì)一致。PmDFR基因在亮紅色品種盧氏艷朱砂中的相對(duì)表達(dá)量稍高于在暗紅色品種烏羽玉中的相對(duì)表達(dá)量，但兩者差異不顯著，這可能是受自身品種特性或其他方面因素影響，整體上PmDFR基因在各品種中相對(duì)表達(dá)量也與其花瓣花色苷含量變化趨勢(shì)一致。PmF3′H在粉暈朱砂、白須朱砂、豫西朱砂、盧氏艷朱砂和烏羽玉中的相對(duì)表達(dá)量分別是白朱砂的4.3倍、6.9倍、9.5倍、10.4倍和16.7倍。PmDFR在粉暈朱砂、白須朱砂、豫西朱砂、盧氏艷朱砂和烏羽玉中的相對(duì)表達(dá)量分別是白朱砂中的5.4倍、6.9倍、15.3倍、20.1倍和17.5倍。PmUFGT在粉暈朱砂、白須朱砂、豫西朱砂、盧氏艷朱砂和烏羽玉中的相對(duì)表達(dá)量分別是白朱砂的1.6倍、3.9倍、4.0倍、6.5倍和13.2倍。其余4個(gè)結(jié)構(gòu)基因PmCHS、PmCHI、PmF3H和PmANS的相對(duì)表達(dá)量與其花瓣花色苷含量的變化趨勢(shì)明顯不一致。

2.4不同品種朱砂梅花色苷合成轉(zhuǎn)錄因子PmMYB1、PmbHLH3的轉(zhuǎn)錄特性

對(duì)比分析PmMYB1和PmbHLH3的相對(duì)表達(dá)量（圖5），以花色紅度最小的白朱砂為參照，粉暈朱砂、白須朱砂、豫西朱砂、盧氏艷朱砂和烏羽玉盛花期PmMYB1的相對(duì)表達(dá)量分別是白朱砂的1.8倍、 3.1倍、4.8倍、 5.6倍和7.1倍；這5個(gè)品種盛花期的PmbHLH3的相對(duì)表達(dá)量依次是白朱砂的1.2倍、1.5倍、2.4倍、2.8倍和4.0倍。

PmMYB1和PmbHLH3在各品種朱砂梅盛花期花瓣中的相對(duì)表達(dá)量均隨花色苷含量的變化而變化，這與另外3個(gè)結(jié)構(gòu)基因（PmF3′H、PmDFR、PmUFGT）相對(duì)表達(dá)量的變化趨勢(shì)基本相同。其中，轉(zhuǎn)錄因子編碼基因PmMYB1在各品種間的相對(duì)表達(dá)量差異顯著，而轉(zhuǎn)錄因子編碼基因PmbHLH3在白朱砂和粉暈朱砂間的相對(duì)表達(dá)量差異不顯著，在白須朱砂、豫西朱砂、盧氏艷朱砂和烏羽玉間的相對(duì)表達(dá)量差異顯著，這與各品種間盛花期花瓣的花色苷含量的差異顯著性高度一致。

2.5不同品種朱砂梅花色苷含量及基因相對(duì)表達(dá)量的相關(guān)性分析

為進(jìn)一步明確朱砂梅品種花色苷合成基因的表達(dá)模式，對(duì)不同品種朱砂梅花瓣花色苷含量及基因相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行了相關(guān)性分析，結(jié)果（表3）表明，PmMYB1、PmbHLH3、PmF3′H、PmDFR、PmUFGT的相對(duì)表達(dá)量與花色苷含量呈極顯著正相關(guān)（Plt;0.01）。且PmMYB1的相對(duì)表達(dá)量與PmbHLH3、PmF3′H、PmDFR的相對(duì)表達(dá)量呈極顯著正相關(guān)（Plt;0.01），與PmUFGT的相對(duì)表達(dá)量呈顯著正相關(guān)（Plt;0.05）。PmbHLH3的相對(duì)表達(dá)量與PmMYB1、PmF3′H、PmUFGT的相對(duì)表達(dá)量呈極顯著正相關(guān)（Plt;0.01），與PmDFR的相對(duì)表達(dá)量呈顯著正相關(guān)（Plt;0.05）。這表明，結(jié)構(gòu)基因PmF3′H、PmUFGT、PmDFR及轉(zhuǎn)錄因子編碼基因PmMYB1、PmbHLH3的表達(dá)與朱砂梅花瓣中花色苷的積累密切相關(guān)。

3討論

花色苷的組成成分和含量是影響植物器官呈色的主要因素[19-20]。本研究結(jié)果表明花色由淺至深

呈梯度變化的6個(gè)朱砂梅品種盛花期花瓣花色苷含量存在明顯差異，且與花色的紅色程度呈正相關(guān)，這與趙昶靈等[15]的研究結(jié)果一致?；ㄉ蘸铣上嚓P(guān)結(jié)構(gòu)基因的表達(dá)對(duì)花色苷的積累起決定性作用。F3′H是花色苷合成通路第二階段的關(guān)鍵酶編碼基因之一[21]。大量學(xué)者相繼在蘋(píng)果[8]、月季（Rosa hybrida）、三色堇（Viola tricolor）[22]、橡膠樹(shù)（Hevea brasiliensis）等[23]植物的花色苷研究中證實(shí)，過(guò)表達(dá)F3′H基因能夠使轉(zhuǎn)基因株系花瓣中花色苷含量增加從而使花瓣紅色程度加深。DFR基因作為花色苷生物合成途徑第三階段的入口酶，最初是從玉米（Zea mays）[24]中克隆出來(lái)的，之后又相繼在油菜（Brassica campestris） [25]、馬鈴薯（Solanum tuberosum）[26]等植物中被分離，大量研究結(jié)果都已證明其在花色苷生物合成中起重要作用。例如，楊寧寧[27]將在金線蓮（Anoectochilus roxburghii）中克隆得到的ArDFR1基因和ArDFR3基因轉(zhuǎn)入煙草中，可使轉(zhuǎn)基因株系花瓣花色加深。相同的試驗(yàn)結(jié)果在對(duì)毛果楊（Populus trichocarpa）[28]和燕子花（Iris laevigata）[29]的研究中也有報(bào)道。UFGT基因是花色苷生物合成途徑末端至關(guān)重要的一個(gè)酶基因，它主要負(fù)責(zé)將不穩(wěn)定的花青素糖基化變成穩(wěn)定的花色苷[30]。對(duì)蘋(píng)果[31]、梨[32]和葡萄[33]的果皮花色苷的研究結(jié)果表明，UFGT是調(diào)控紅色果皮花色苷合成的關(guān)鍵基因，其活性與果皮中花色苷的積累存在顯著正相關(guān)。在本研究的6個(gè)朱砂梅品種花瓣中，PmF3′H、PmDFR、PmUFGT基因的相對(duì)表達(dá)量與花色苷含量呈正相關(guān)，這與前人在其他植物中的研究結(jié)果基本一致[22-33]，而PmCHS、PmCHI、PmF3H和PmANS這4個(gè)結(jié)構(gòu)基因的相對(duì)表達(dá)量與花色苷含量無(wú)明顯相關(guān)性。由此推測(cè)，結(jié)構(gòu)基因PmF3′H、PmDFR、PmUFGT在朱砂梅花瓣的花色苷合成中起重要的調(diào)控作用。

在花色苷生物合成途徑中，結(jié)構(gòu)基因的表達(dá)水平通常受到轉(zhuǎn)錄因子編碼基因（MYB、bHLH、WD40、MYC等）的調(diào)控[7]，MYB是植物花色苷合成結(jié)構(gòu)基因最重要的調(diào)節(jié)因子，也是高等植物中數(shù)量最大的基因家族之一。在不同植物中，MYB基因的表達(dá)模式不同，它既能單獨(dú)對(duì)結(jié)構(gòu)基因起調(diào)控作用，也能與其他轉(zhuǎn)錄因子編碼基因（bHLH、WD40等）形成復(fù)合物共同調(diào)控結(jié)構(gòu)基因的表達(dá)。牛鐵泉等[33]通過(guò)酵母雜交技術(shù)證明，在葡萄果實(shí)發(fā)育過(guò)程中VvMYBA1通過(guò)調(diào)控下游結(jié)構(gòu)基因VvUFGT、VvDFR的表達(dá)，從而促進(jìn)果皮中花色苷的積累。紫甘藍(lán)（Brassica oleracea）葉片中花色苷的積累則是由轉(zhuǎn)錄因子編碼基因BoMYB2通過(guò)調(diào)控下游結(jié)構(gòu)基因DFR、ANS和UFGT的表達(dá)而獲得的[34]。金魚(yú)草（Antirrhinum majus）中MYB轉(zhuǎn)錄因子編碼基因Rosea1的過(guò)量表達(dá)顯著上調(diào)結(jié)構(gòu)基因F3′H、DFR、ANS和 UFGT的表達(dá)，導(dǎo)致金魚(yú)草花瓣中花色苷大量積累[35]。類(lèi)似的，茄子（Solanum melongena）中SmMYB113的過(guò)量表達(dá)顯著提高了花色苷的含量及下游基因SmCHS和SmDFR的表達(dá)水平[36]。張芹等[2]在煙草中過(guò)表達(dá)PmMYB1基因使煙草花的紅色程度明顯加深。從本研究結(jié)果來(lái)看，PmMYB1的相對(duì)表達(dá)量與花色苷含量具有極顯著正相關(guān)性，隨著各品種朱砂梅花瓣紅色程度的加深，PmMYB1的相對(duì)表達(dá)量在逐漸增加，這與張芹等[2]的研究結(jié)果是一致的。

轉(zhuǎn)錄因子MYB與bHLH相互作用共同調(diào)節(jié)花色苷的合成已經(jīng)在多種作物中被證實(shí)。在擬南芥中，AtMYB75和AtMYB90需要與bHLH轉(zhuǎn)錄因子協(xié)同作用，共同控制結(jié)構(gòu)基因CHS、DFR等的表達(dá)[37]。在蘋(píng)果中，轉(zhuǎn)錄因子MdMYB10通過(guò)與MdbHLH3/33相互作用來(lái)增強(qiáng)結(jié)構(gòu)基因MdDFR的表達(dá)，使蘋(píng)果果肉顏色變紅[38]。本研究通過(guò)相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)錄因子編碼基因PmMYB1與PmbHLH3的表達(dá)存在極顯著正相關(guān)，且均與結(jié)構(gòu)基因PmF3′H、PmDFR、PmUFGT的表達(dá)呈顯著正相關(guān)。由此推測(cè)，在朱砂梅品種群中，轉(zhuǎn)錄因子編碼基因PmMYB1的表達(dá)與轉(zhuǎn)錄因子編碼基因PmbHLH3的表達(dá)間存在某種關(guān)聯(lián)，且正向調(diào)控下游結(jié)構(gòu)基因PmF3′H、PmDFR、PmUFGT的表達(dá)。為明晰這一調(diào)控過(guò)程，今后還需對(duì)PmF3′H、PmDFR、PmUFGT啟動(dòng)子進(jìn)行克隆，利用酵母雜交技術(shù)從蛋白質(zhì)層面分析結(jié)構(gòu)基因（PmF3′H、PmDFR、PmUFGT）及轉(zhuǎn)錄因子編碼基因（PmMYB1、PmbHLH3）間的互作情況，以進(jìn)一步明晰朱砂梅品種花色形成差異的分子機(jī)理。

4結(jié)論

梅花品種可分為11個(gè)品種群[12]，其中屬朱砂品種群的烏羽玉花色最深。選擇同品種群中花色具有深淺變化的6個(gè)朱砂梅品種進(jìn)行梅花花色表型差異的探究，可有效避免由于梅花品種群的不同而產(chǎn)生的試驗(yàn)誤差。本研究中，通過(guò)對(duì)6個(gè)朱砂梅品種盛花期花瓣的花色表型、花色苷含量及相關(guān)基因的相對(duì)表達(dá)量的綜合分析發(fā)現(xiàn)，朱砂梅花瓣的紅度和彩度越高，亮度越低，且花色苷含量與花色紅度呈現(xiàn)一定的正相關(guān)。PmMYB1、PmbHLH3、PmF3′H、PmDFR、PmUFGT的表達(dá)水平與花色苷含量呈極顯著正相關(guān)，且轉(zhuǎn)錄因子編碼基因PmMYB1和PmbHLH3的表達(dá)水平與結(jié)構(gòu)基因PmF3′H、PmDFR、PmUFGT的表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)，這與前人研究結(jié)果[33-38]基本一致，推測(cè)PmMYB1、PmbHLH3、PmF3′H、PmDFR、PmUFGT這5個(gè)基因在朱砂梅花瓣呈色方面起重要調(diào)控作用。除此之外，本研究中還發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子編碼基因PmMYB1和PmbHLH3的表達(dá)強(qiáng)度呈極顯著正相關(guān)。在本研究中，推測(cè)轉(zhuǎn)錄因子編碼基因PmMYB1和PmbHLH3通過(guò)正向調(diào)控下游結(jié)構(gòu)基因PmF3′H、PmDFR、PmUFGT的表達(dá)，從而促進(jìn)朱砂梅花瓣花色苷的積累，使花瓣紅度加深。本研究初步明晰了朱砂梅花瓣花色苷合成相關(guān)結(jié)構(gòu)基因及轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)模式，為進(jìn)一步探究梅花花色表型形成差異的分子調(diào)控機(jī)制及利用分子生物技術(shù)輔助梅花花色育種提供了依據(jù)。

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