李雅靜，杜 宇，白雅雯，王 爍，卜鳳躍，孫麗寧，邊春艷

（1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110；2.包頭市第八醫(yī)院，內(nèi)蒙古 包頭 014040；3.包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古 包頭 014017；4.克什克騰旗蒙醫(yī)中醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 赤峰 025378）

IgA腎?。↖gA nephropathy，IgAN）是最常見(jiàn)的原發(fā)性腎小球疾病，低糖基化IgA1沉積于腎小球系膜區(qū)為其病理特征，血尿、蛋白尿、高血壓等為其主要臨床表現(xiàn)。相關(guān)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，50%的IgAN患者在20～25年內(nèi)可進(jìn)展至終末期腎?。╡ndstage renal disease，ESRD）[1]。IgAN的治療重點(diǎn)是優(yōu)化支持治療，包括嚴(yán)格控制血壓、使用最大耐受劑量的腎素-血管緊張素系統(tǒng)抑制劑（renin-angiotensin system inhibitors，RASI）以及生活方式改變等來(lái)延緩疾病的進(jìn)展[2]。

IgAN可歸屬于中醫(yī)學(xué)“血尿”“水腫”“腰痛”等范疇。病位雖然在腎，但與肺臟關(guān)系十分密切。《靈樞·本輸》云“腎上連肺”。肺主皮毛，外通玄府，上達(dá)咽喉。若肺主氣無(wú)權(quán)，無(wú)力抗邪，外邪侵襲，從表入里或由上傳下，皆可波及于腎；反之，若肺主氣有權(quán)，玄府開(kāi)闔有度，外邪則無(wú)從侵襲，故有學(xué)者認(rèn)為治腎病必先求之于肺。玉屏風(fēng)散是補(bǔ)肺固表、扶正固本的經(jīng)典方劑。臨床研究發(fā)現(xiàn)，玉屏風(fēng)顆?？商岣吣I病治療總有效率和治愈率，減輕激素對(duì)人體腎功能的損傷，消退浮腫，改善尿蛋白，防止IgAN患者因外感而加重或復(fù)發(fā)[3-8]。然而目前其作用機(jī)制研究較少，本研究擬通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法預(yù)測(cè)玉屏風(fēng)顆粒治療IgAN的作用機(jī)制，并通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證，闡述其可能的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)

1.1.1 篩查玉屏風(fēng)顆粒有效成分和作用靶點(diǎn) 活性化合物的篩選條件為口服生物利用度（oral bioavail-ability，OB）≥30%和類(lèi)藥性（drug-likeness，DL）≥0.18。在TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)（https://tcmsp-e.com/）[9]中檢索中藥標(biāo)準(zhǔn)化名稱(chēng)“黃芪、白術(shù)、防風(fēng)”的化學(xué)成分。獲取標(biāo)準(zhǔn)化名稱(chēng)的有效成分，建立數(shù)據(jù)庫(kù)，運(yùn)用SwissTarget（http://www.swisstargetprediction.ch/）對(duì)缺少的靶點(diǎn)化合物進(jìn)行補(bǔ)充[10]。運(yùn)用Uniport數(shù)據(jù)庫(kù)將其轉(zhuǎn)換為統(tǒng)一的基因名稱(chēng)。

1.1.2 疾病靶點(diǎn)篩選 以“ IgA nephropathy”為關(guān)鍵詞，在GeneCards（https://www.genecards.org/）、OMIM（https://omim.org）、TTD（http://db.idrblab.net/ttd/）數(shù)據(jù)庫(kù)中，檢索IgAN靶點(diǎn)，進(jìn)行合并去重，獲得最終靶點(diǎn)。

1.1.3 構(gòu)建“活性成分-交集靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)圖 將獲得的玉屏風(fēng)顆粒和IgAN的靶點(diǎn)分別導(dǎo)入Venny 2.1.0在線(xiàn)平臺(tái)取兩者交集靶點(diǎn)，繪制韋恩圖。運(yùn)用Cytoscape3.7.2軟件構(gòu)建“活性成分-交集靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)關(guān)系圖。

1.1.4 構(gòu)建蛋白互作網(wǎng)絡(luò)圖 運(yùn)用String數(shù)據(jù)庫(kù)（https://cn.string-db.org/）[11]，構(gòu)建蛋白互作網(wǎng)絡(luò)（PPI），通過(guò)Cytoscape 3.7.2軟件獲取核心靶點(diǎn)。

1.1.5 富集分析 運(yùn)用DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)（https://david.ncifcrf.gov/）并設(shè)置閾值＜0.05，進(jìn)行GO功能和KEGG富集分析，利用微生信網(wǎng)站（http://www.bioinformatics.com.cn/）制作GO和KEGG富集氣泡圖。

1.2 分子對(duì)接 通過(guò)PDB數(shù)據(jù)庫(kù)（https://www.rcsb.org/）獲得核心靶蛋白3D結(jié)構(gòu)PDB格式文件，去除配體和水分子。通過(guò)PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)（http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov）獲得玉屏風(fēng)顆粒主要活性成分3D結(jié)構(gòu)文件，經(jīng)Auto Dock Tool軟件預(yù)處理后，運(yùn)用Auto Dock Vina1.5.6軟件進(jìn)行分子對(duì)接。

1.3 動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 選取SPF級(jí)雄性昆明小鼠60只，體質(zhì)量20~22 g，購(gòu)買(mǎi)并飼養(yǎng)于內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（蒙）2020-0001。飼養(yǎng)環(huán)境：室溫20~24 ℃，相對(duì)濕度40%左右，12 h光照環(huán)境。所有小鼠均經(jīng)尿蛋白試紙測(cè)試為陰性，適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d開(kāi)始造模，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（倫理審批號(hào)：YKD2014001）。

1.3.1 藥物與試劑 24小時(shí)尿蛋白定量（24-hour urine protein，24 h-UTP）試劑盒（批號(hào)：CS8480）、血肌酐（serum creatinine，Scr）試劑盒（批號(hào)：CR6113）、尿素氮（serum urea nitrogen，SUN）試劑盒（批號(hào)：BU8121）均購(gòu)自北京利德曼生化股份有限公司；脂多糖（批號(hào)：L8880）、牛血清白蛋白（批號(hào)：A8020）均購(gòu)自美國(guó)sigma公司；蘇木素（批號(hào)：G1140）、伊紅（批號(hào)：G1100）、糖原染色液（批號(hào)：G1280）均購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；熒光素標(biāo)記的兔抗大鼠IgA抗體（批號(hào)：SC-373823）購(gòu)自Santa Cruz Biotechnology；腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）試劑盒（批號(hào)：JYM0218Mo）、干擾素γ（interferon-gamma，INF-γ）試劑盒（批號(hào)：JYM0540Mo）、白細(xì)胞介素-2（interleukin-2，IL-2）試劑盒（批號(hào)：JYM0010Mo）、白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）試劑盒（批號(hào)：JYM0012Mo）、白細(xì)胞介素-4（interleukin-4，IL-4）試劑盒（批號(hào)：JYM0011Mo）均購(gòu)自武漢基因美生物科技有限公司。黃芪（批號(hào)：22002351）、白術(shù)（批號(hào)：22042181）、防風(fēng)（批號(hào)：21029071）按比例（3：1：1）購(gòu)自天津康仁堂藥物有限責(zé)任公司；福辛普利鈉片（國(guó)藥準(zhǔn)字號(hào)H19980197）購(gòu)自中美上海施貴寶制藥有限公司。

1.3.2 主要儀器 TBA-40FR全自動(dòng)生化分析儀（北京利德曼生化股份有限公司）；FlexA-200酶標(biāo)定量測(cè)定儀（合肥吉象生物技術(shù)有限公司）；KS41SF光學(xué)顯微鏡、NIKON ECLIPSE CI正置熒光顯微鏡（日本尼康）。

1.3.3 造模方法 60只SPF級(jí)雄性昆明小鼠，隨機(jī)分為正常組10只，造模組50只。參照湯穎等[12-14]改進(jìn)的“口服牛血清白蛋白（BSA）+尾靜脈注射脂多糖（LPS）+皮下注射四氯化碳（CCl4）”建立IgAN小鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停炷＝M大鼠采用0.1%BSA酸化水灌胃，劑量為0.4 mL/只，隔日1次；每周1次皮下注射體積分?jǐn)?shù)為25%的CCl4溶液，0.4 mL/只。第6周、第8周尾靜脈注射0.05mgLPS。正常組給予等量6 mmol/L酸化水、蓖麻油、生理鹽水分別進(jìn)行灌胃、皮下注射、尾靜脈注射，持續(xù)到第8周末。8周末隨機(jī)選取正常組和造模組小鼠各1只進(jìn)行IgA免疫熒光染色以確定造模是否成功。

1.3.4 分組及給藥 將49只造模成功小鼠隨機(jī)分為模型組（9只）、西藥對(duì)照組（10只）、玉屏風(fēng)顆粒高劑量組（10只）、玉屏風(fēng)顆粒中劑量組（10只）、玉屏風(fēng)顆粒低劑量組（10只），給藥劑量參考玉屏風(fēng)顆粒及福辛普利鈉片使用說(shuō)明書(shū)分別為15 g/d、10 mg/d，按照體表面積換算法計(jì)算，玉屏風(fēng)顆粒高劑量組劑量為78 mg/d，玉屏風(fēng)顆粒中劑量組劑量為39 mg/d，玉屏風(fēng)顆粒低劑量組劑量為19.5 mg/d，西藥對(duì)照組給予福辛普利鈉片（0.026 mg/d），模型組及正常組給予4 mL蒸餾水，給藥8周。

1.3.5 觀(guān)察指標(biāo)

1.3.5.1 一般情況 觀(guān)察、測(cè)量并記錄小鼠的一般情況，包括尿量、尿液的顏色及體質(zhì)量。

1.3.5.2 血液指標(biāo) 給藥結(jié)束后，小鼠采用異氟烷吸入性麻醉，沿腹正中線(xiàn)剪開(kāi)，鈍性逐層分離腹主動(dòng)脈，使用一次性采血針采集小鼠腹主動(dòng)脈血液，靜置2 h，3 500 r/min（離心半徑為4 cm），離心10 min，分離血清。ELISA法檢測(cè)腎功能（24 h-UTP、BUN、Scr），血清中IgA、輔助性T細(xì)胞因子1（T helper cell 1，Th1）相關(guān)因子TNF-α、INF-γ、IL-2，以及輔助性T細(xì)胞因子2（T helper cell 2，Th2）相關(guān)因子IL-6、IL-4表達(dá)水平。

1.3.5.3 腎組織病理學(xué)變化 取腎臟，去除包膜，置于4%多聚甲醛組織液中固定48 h，流水沖洗24 h，常規(guī)脫水，石蠟包埋，制作成3 μm厚切片，用于IgA免疫熒光染色、HE染色、糖原染色，分別置于熒光顯微鏡、光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察腎組織病理學(xué)變化，拍照記錄。

2 結(jié)果

2.1 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)果

2.1.1 玉屏風(fēng)顆粒-IgAN交集靶點(diǎn) 通過(guò)TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)，去重后得到玉屏風(fēng)顆粒活性成分34個(gè)，作用靶點(diǎn)222個(gè)。通過(guò)GeneCards、OMIM、TTD數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，刪除重復(fù)后得到疾病靶點(diǎn)1 436個(gè)，輸入Venny2.1.0在線(xiàn)平臺(tái)，獲得交集靶點(diǎn)102個(gè)，繪制韋恩圖。（見(jiàn)圖1）

圖1 韋恩圖

2.1.2 “活性成分-交集靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)模型 使用Cytoscape3.7.2繪制“活性成分-交集靶點(diǎn)-疾病”相互作用網(wǎng)絡(luò)圖，網(wǎng)絡(luò)中有140個(gè)節(jié)點(diǎn)，478條邊。（見(jiàn)圖2）通過(guò)拓?fù)鋵W(xué)分析，度值排名靠前10的化合物有槲皮素（quercetin）、山柰酚（kaempferol）、漢黃芩素（wogonin）等。（見(jiàn)表1）通過(guò)String數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建蛋白互作網(wǎng)絡(luò)圖，使用Cytoscape3.7.2軟件，根據(jù)度值構(gòu)建核心靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖，其中平均度值為37.54，最大值為83，最小值為1，大于平均度值靶點(diǎn)有51個(gè)，排名靠前的有TNF、IL-6、IL-4、IL-2等。（見(jiàn)圖3、表2）

表1 核心化合物

表2 核心靶點(diǎn)

圖2 活性成分-交集靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)圖

圖3 核心靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖

2.1.3 富集分析 通過(guò)DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)交集靶點(diǎn)進(jìn)行GO富集分析，以P＜0.05為篩選條件，得到生物過(guò)程（BP）689條、細(xì)胞組分（CC）54條、分子功能（MF）115條，分別選取排名前10的結(jié)果繪制GO富集氣泡圖。（見(jiàn)圖4）通過(guò)DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行KEGG富集分析，得到157條信號(hào)通路，選取最具代表性的前20條通路，作KEGG富集氣泡圖。（見(jiàn)圖5）

圖4 GO 富集氣泡圖

圖5 KEGG 富集氣泡圖

2.2 分子對(duì)接結(jié)果 分子對(duì)接結(jié)果顯示，主要化合物與關(guān)鍵靶點(diǎn)均有較好的結(jié)合活性，所有結(jié)合能均≤-6.0 kJ/mol。（見(jiàn)圖6）結(jié)合作用最強(qiáng)的是槲皮素與IL-6，結(jié)合能為-10.4 kJ/mol。（見(jiàn)圖7）其次是槲皮素與TNF，結(jié)合能為-9.3 kJ/mol。（見(jiàn)圖8）

圖6 分子對(duì)接熱圖

圖7 槲皮素-IL-6

圖8 槲皮素-TNF

2.3 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3.1 各組小鼠一般情況 造模8周后，造模組小鼠食欲差，體質(zhì)量偏低，皮毛蓬垢，喜臥惡動(dòng)，尿色深，尿味重；給藥后，各治療組小鼠一般狀況均有不同程度改善。

2.3.2 各組小鼠腎組織IgA免疫熒光染色結(jié)果 正常組小鼠腎小球系膜區(qū)可見(jiàn)極少I(mǎi)gA沉積；模型組、西藥對(duì)照組及玉屏風(fēng)顆粒高、中、低劑量組均可見(jiàn)不同強(qiáng)度綠色熒光信號(hào)。其中模型組可見(jiàn)團(tuán)塊狀強(qiáng)綠色熒光信號(hào)；西藥對(duì)照組及玉屏風(fēng)顆粒高、中、低劑量組熒光信號(hào)強(qiáng)度較模型組明顯降低，呈散在顆粒狀，其中玉屏風(fēng)顆粒高劑量組降低程度最明顯。（見(jiàn)圖9）

圖9 各組小鼠腎組織IgA 免疫熒光染色病理圖（免疫熒光染色，×200）

2.3.3 各組小鼠腎組織HE染色結(jié)果 正常組小鼠腎小球結(jié)構(gòu)正常，腎小球系膜細(xì)胞、系膜基質(zhì)未見(jiàn)增生，無(wú)纖維組織增生；模型組小鼠可見(jiàn)腎小球腫脹，系膜細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞增生，細(xì)胞外基質(zhì)增多，系膜區(qū)擴(kuò)張。與模型組比較，西藥對(duì)照組及玉屏風(fēng)顆粒組高、中、低劑量組小鼠腎組織病變程度均有所改善，其中玉屏風(fēng)顆粒高劑量組改善較為明顯。（見(jiàn)圖10）

圖10 各組小鼠腎組織HE 染色病理圖 （HE 染色，×300）

2.3.4 各組小鼠腎組織PAS染色結(jié)果 正常組小鼠腎組織未見(jiàn)系膜細(xì)胞增生，細(xì)胞外基質(zhì)增多；模型組小鼠腎組織可見(jiàn)中重度系膜細(xì)胞增生及細(xì)胞外基質(zhì)增多，同時(shí)見(jiàn)間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；西藥對(duì)照組及玉屏風(fēng)顆粒高、中、低劑量組可見(jiàn)系膜細(xì)胞增生程度均有所減輕，細(xì)胞外基質(zhì)以輕中度增生為主，其中以玉屏風(fēng)顆粒高劑量組減輕較為明顯。（見(jiàn)圖11）

圖11 各組小鼠腎組織PAS 染色病理圖（PAS 深色，×400）

2.3.5 各組小鼠腎功能比較 與正常組比較，模型組小鼠24 h-UTP及血清中BUN、Scr水平明顯升高（P＜0.01）；給藥后，各治療組小鼠腎功能均有不同程度改善，但不同干預(yù)藥物及玉屏風(fēng)顆粒組間比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（見(jiàn)表3）

表3 各組小鼠腎功能比較 （±s）

表3 各組小鼠腎功能比較 （±s）

注：與正常組比較，aP＜0.01；與模型組比較，bP＜0.05，cP＜0.01。

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2.3.6 各組小鼠血清中IgA、Th1/Th2比較 與正常組比較，模型組小鼠血清中IgA含量明顯升高（P＜0.05），使用藥物治療后，各治療組小鼠血清中IgA含量均有所下降。其中，西藥對(duì)照組及玉屏風(fēng)顆粒高、中、低劑量組明顯低于模型組（P＜0.05）；西藥對(duì)照組與玉屏風(fēng)顆粒高劑量組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；西藥對(duì)照組與玉屏風(fēng)顆粒中、低劑量組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；玉屏風(fēng)顆粒高劑量組與玉屏風(fēng)顆粒中、低劑量組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；玉屏風(fēng)顆粒中、低劑量組組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與正常組比較，模型組小鼠血清中Th1相關(guān)因子TNF-α、INF-γ、IL-2表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05），使用藥物治療后，各治療組小鼠血清中Th1相關(guān)因子TNF-α、INF-γ、IL-2均有所上調(diào)；西藥對(duì)照組小鼠血清中TNF-α表達(dá)與玉屏風(fēng)顆粒高、中、低劑量組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；玉屏風(fēng)顆粒高劑量組與玉屏風(fēng)顆粒低劑量組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；西藥對(duì)照組及玉屏風(fēng)顆粒高、中、低劑量組小鼠血清中INF-γ與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；西藥對(duì)照組與玉屏風(fēng)顆粒高、中、低劑量組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；玉屏風(fēng)顆粒組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。西藥對(duì)照組及玉屏風(fēng)顆粒高、中劑量組小鼠血清中IL-2與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；西藥對(duì)照組與玉屏風(fēng)顆粒高劑量組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），與玉屏風(fēng)顆粒中劑量組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；玉屏風(fēng)顆粒高、中劑量組組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與正常組比較，模型組小鼠血清中Th2相關(guān)因子IL-4、IL-6表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05）；使用藥物治療后，各治療組小鼠血清中Th2相關(guān)因子IL-4、IL-6表達(dá)水平均有所降低；西藥對(duì)照組及玉屏風(fēng)顆粒高、中、低劑量組小鼠血清中IL-4與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；西藥對(duì)照組與玉屏風(fēng)顆粒高、中劑量組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），與玉屏風(fēng)顆粒低劑量組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；玉屏風(fēng)顆粒高劑量組與玉屏風(fēng)顆粒低劑量組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與模型組比較，西藥對(duì)照組及玉屏風(fēng)顆粒高、中、低劑量組血清中IL-6均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；西藥對(duì)照組與玉屏風(fēng)顆粒高、中劑量組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），與玉屏風(fēng)顆粒低劑量組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；玉屏風(fēng)顆粒高劑量組與玉屏風(fēng)顆粒低劑量組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與正常組比較，模型組小鼠血清Th1/Th2（INF-γ/IL-6）比值明顯降低（P＜0.05）；使用藥物治療后，各治療組小鼠血清中Th1/Th2（INF-γ/IL-6）比值明顯升高（P＜0.05）；西藥對(duì)照組與玉屏風(fēng)顆粒高、中、低劑量組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；玉屏風(fēng)顆粒高、中、低劑量組組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（見(jiàn)表4）

表4 各組小鼠血清中IgA、Th1 相關(guān)因子、Th2 相關(guān)因子、Th1/Th2 比較 （±s）

表4 各組小鼠血清中IgA、Th1 相關(guān)因子、Th2 相關(guān)因子、Th1/Th2 比較 （±s）

注：與正常組比較，aP＜0.05；與模型組比較，bP＜0.05；與西藥對(duì)照組比較，cP＜0.05；與玉屏風(fēng)顆粒高劑量組比較，dP＜0.05；與玉屏風(fēng)顆粒中劑量組比較，eP＜0.05；與玉屏風(fēng)顆粒低劑量組比較，fP＜0.05。

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3 討論

《諸病源候論》指出“風(fēng)邪入于少陰，則尿血，是為風(fēng)邪擾腎也”；《傷寒雜病論》記載“風(fēng)為百病之長(zhǎng)，中于項(xiàng)，則下太陽(yáng)，甚則入腎”，說(shuō)明風(fēng)邪是IgAN的主要致病因素。周靜威等[15]認(rèn)為腎臟病的發(fā)生根于外風(fēng)傷腎、內(nèi)風(fēng)動(dòng)腎、風(fēng)伏腎絡(luò)、內(nèi)外合風(fēng)。郭立中在治療腎炎尿蛋白時(shí)常用祛風(fēng)、息風(fēng)、搜風(fēng)、御風(fēng)等法[15]。《黃帝內(nèi)經(jīng)》云“風(fēng)水相搏……，金為水母，母病及子，肺腎同病，而成風(fēng)水是也”。這說(shuō)明本病病位雖然在腎，但與肺臟關(guān)系密切?！端貑?wèn)·咳論篇》云“皮毛者，肺之合也”。肺通過(guò)宣散功能將衛(wèi)氣布散于皮毛，成為抵御外邪的第一道防線(xiàn)，如《醫(yī)旨緒余·宗氣營(yíng)氣衛(wèi)氣》所言，“衛(wèi)氣者，為言護(hù)衛(wèi)周身……不使外邪侵犯也”。風(fēng)邪侵襲，衛(wèi)氣奮起反抗，與邪氣相互交爭(zhēng)于肌表。肺氣失于宣降，水液代謝障礙，壅塞于肌表而見(jiàn)水腫；若肺衛(wèi)功能異常，無(wú)力抗邪，風(fēng)邪循經(jīng)入里，下移至腎，擾動(dòng)腎臟，則見(jiàn)血尿；腎失封藏，精微物質(zhì)外泄，則見(jiàn)蛋白尿?！端貑?wèn)·評(píng)熱病論篇》云“邪之所湊，其氣必虛”，故本病是肺衛(wèi)虧虛，無(wú)力抗邪所致。玉屏風(fēng)散是補(bǔ)肺固表、扶正固本的經(jīng)典方劑，由黃芪、白術(shù)、防風(fēng)組合而成。方中黃芪與白術(shù)君臣合用，補(bǔ)氣固表，扶正固本，鞏固人體的根本，防止體內(nèi)精微物質(zhì)外泄，以降低蛋白尿、減少血尿、保護(hù)腎功能，促進(jìn)受損腎組織修復(fù)。黃芪得防風(fēng)，固表而不留邪；防風(fēng)得黃芪，祛邪不傷正。全方補(bǔ)中寓疏，散中寓補(bǔ)，重在提升人體的正氣，鞏固人體的根本，改善機(jī)體病理狀態(tài)，恢復(fù)其生理功能，改善IgAN患者的臨床癥狀，延緩病情的進(jìn)展。黃芪具有雙向調(diào)節(jié)免疫的作用，可改善腎臟微循環(huán)，提高腎小球?yàn)V過(guò)率，延緩腎纖維化，恢復(fù)腎小管重吸收與分泌功能，保護(hù)腎功能[6,16-18]。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，T淋巴細(xì)胞在腎臟病中具有免疫調(diào)節(jié)、免疫激活、免疫耐受的重要作用，尤其是CD4+T淋巴細(xì)胞在原發(fā)性腎小球疾病中的作用受到越來(lái)越多的國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注[19]。活化的CD4+T細(xì)胞可以由Th0細(xì)胞分化Th1、Th2細(xì)胞。Th1細(xì)胞主要分泌INF-γ、TNF-α、IL-2等細(xì)胞因子參與細(xì)胞免疫，Th2細(xì)胞主要分泌IL-4、IL-6等細(xì)胞因子參與體液免疫[20-21]。INF-γ、IL-6作為T(mén)h1、Th2細(xì)胞分泌合成的特征性細(xì)胞因子[22]，兩者的比值即INF-γ/IL-6可反映Th1/Th2平衡狀態(tài)。當(dāng)機(jī)體免疫功能異常時(shí)，Th1/Th2則處于失衡狀態(tài)[23]。研究發(fā)現(xiàn)，Th1/Th2失衡與IgAN的臨床表現(xiàn)、病理分級(jí)顯著相關(guān)，主要表現(xiàn)為T(mén)h1及其分泌的INF-γ、TNF-α、IL-2等細(xì)胞因子減少，細(xì)胞免疫受抑制，致使體內(nèi)病原體不能及時(shí)清除，病原體反復(fù)持續(xù)刺激B細(xì)胞增殖產(chǎn)生IgA入血；Th2失去Th1制約，使Th0細(xì)胞向著Th2細(xì)胞方向極化，增多的Th2及其分泌的細(xì)胞因子IL-4、IL-6等進(jìn)一步刺激B細(xì)胞增殖、活化，進(jìn)而產(chǎn)生更多的IgA入血，加之半乳糖基化缺陷使得IgA糖基化異常，產(chǎn)生的Gd-IgA1沉積于腎小球系膜區(qū)導(dǎo)致IgAN的發(fā)生[24]。

本次網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)共篩選出玉屏風(fēng)顆粒治療IgAN的關(guān)鍵靶點(diǎn)有TNF、IL-6、IL-4、IL-2等。分子對(duì)接結(jié)果表明，槲皮素與TNF、IL-6、IL-4、IL-2具有較好的結(jié)合活性，這也體現(xiàn)出中藥治療的多靶點(diǎn)特點(diǎn)。本次動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，與正常組比較，模型組小鼠血清中Th1相關(guān)因子TNF-α、INF-γ、IL-2減少，Th2相關(guān)因子IL-4、IL-6增多，這說(shuō)明IgAN模型小鼠中存在Th1/Th2失衡，向Th2漂移，同時(shí)伴血清IgA高表達(dá)。這與以往的研究結(jié)果一致。給予藥物干預(yù)后，與模型組比較，玉屏風(fēng)顆?？上抡{(diào)Th2相關(guān)因子及IgA的表達(dá)水平，上調(diào)Th1相關(guān)因子，糾正Th1/Th2失衡，改善腎功能和腎臟組織病理學(xué)。該作用以玉屏風(fēng)顆粒高劑量組作用最為明顯。

綜上所述，玉屏風(fēng)顆粒治療IgAN的機(jī)制可能是通過(guò)主要活性成分槲皮素、山柰酚、漢黃芩素等作用于TNF、IL-6、IL-4、IL-2等靶點(diǎn)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。玉屏風(fēng)顆粒對(duì)IgAN具有較好的治療作用，其機(jī)制可能是通過(guò)調(diào)節(jié)Th1/Th2失衡，減輕體內(nèi)免疫炎癥反應(yīng)，從而改善腎功能和腎臟組織病理情況。