廖漢琪 唐羿 胡凱 姜耕

賁門癌是指發(fā)生在食管和胃交界線下約2 cm的范圍內(nèi)發(fā)生的癌癥,其發(fā)病率呈逐年增高趨勢[1]。早期賁門癌病人的首選治療方式為手術(shù)治療,然而部分中晚期病人腫瘤轉(zhuǎn)移速度快,治療效果和生存率均不理想[2]。因此,目前迫切需要深入了解賁門癌發(fā)生發(fā)展機制,同時需闡明賁門癌相關(guān)預(yù)后生物標(biāo)志物。既往研究顯示,叉頭框C1(forkhead box C1,FOXC1)、性別決定區(qū)Y框蛋白(SRY-related HMG-box,SOX)11均與消化道腫瘤有密切聯(lián)系,然而二者在賁門癌中的表達(dá)情況仍需進(jìn)一步研究和探討[3-4]。本研究主要通過對比分析賁門癌病人癌組織和癌旁正常組織中FOXC1、SOX11的表達(dá)變化,探討二者表達(dá)與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。

對象與方法

一、對象

收集本院2018年3月～2020年3月期間確診的94例賁門癌病人癌組織標(biāo)本、癌旁5 cm以上正常組織標(biāo)本及相關(guān)臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)病人為首次確診,臨床病理證實為賁門癌,符合美國國立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)臨床實踐指南[5],所有病人均行腹腔鏡近端胃切除+胃食管吻合術(shù);(2)病人病例資料完整,均簽署知情同意書;(3)研究通過本院臨床倫理委員會審核。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并有其他惡性腫瘤;(2)心、肺、腎等臟器功能發(fā)生嚴(yán)重?fù)p傷;(3)合并有自身免疫性疾病、感染性疾病、血液系統(tǒng)疾病;(4)合并有其他胃腸道疾病。經(jīng)納入排除標(biāo)準(zhǔn)篩選后共納入94例賁門癌病人,其中男性61例,女性33例,年齡35～78(60.12±10.35)歲,病人均進(jìn)行內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)。

二、方法

1.臨床病理參數(shù)收集:收集賁門癌病人臨床病理資料,主要包括年齡、性別、腫瘤直徑、飲酒史、家族史、浸潤深度、病理分期、組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

2.免疫組化法檢測正常組織和癌組織FOXC1、SOX11表達(dá)水平:采用免疫組化法檢測組織中FOXC1(試劑盒購自上海雅吉生物科技有限公司,貨號:IH-20573R)、SOX11(試劑盒購自上海信裕生物科技有限公司,貨號:XY9M-60624R)表達(dá)水平,用已知陽性病理切片作陽性對照,磷酸鹽緩沖(phosphate buffer saline,PBS)溶液替代一抗作空白對照。將賁門癌病人癌組織及癌旁組織(距腫瘤邊緣大于5 cm的正常組織)采用10%甲醛固定液浸泡固定后制成厚度3～5 μm的石蠟切片,切片經(jīng)烘干、二甲苯脫蠟、水化、修復(fù)、一抗孵育、PBS沖洗、滴加二抗孵育、染色、固定后,封片顯微鏡下觀察。兩位專業(yè)人員采用雙盲法閱片(每個切片均任意選5個高倍視野),陽性細(xì)胞比例評分包括0分、1分、2分、3分、4分,分別代表占比為0～4%、5%～25%、26%～50%、51%～75%、>75%。染色強度評分包括0分、1分、2分、3分,分別代表無著色、淺黃、棕黃、棕褐。以陽性細(xì)胞比例及染色強度評分乘積評估FOXC1、SOX11表達(dá)情況,積分為0～2分為陰性表達(dá),≥3分為陽性表達(dá)[6]。

3.隨訪:病人治療后接受為期3年的隨訪,隨訪時間為截止至2023年3月,隨訪的主要形式為電話隨訪、上門或門診復(fù)查,隨訪終點為病人死亡或3年隨訪結(jié)束,期間94例病人均未失訪。記錄死亡病人人數(shù)并根據(jù)死亡情況分為生存組(54例)和死亡組(40例)。

三、統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 25.0統(tǒng)計學(xué)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計數(shù)資料采用例(%)表示并行χ2或配對χ2檢驗;采用Kaplan-Meier法分析賁門癌病人癌組織FOXC1、SOX11表達(dá)水平與3年生存率的關(guān)系;采用Cox風(fēng)險回歸模型分析賁門癌病人3年生存率的影響因素。雙側(cè)P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

1.賁門癌病人正常組織和癌組織FOXC1、SOX11表達(dá)情況比較:賁門癌病人癌組織中FOXC1陽性表達(dá)率高于正常組織,SOX11陽性表達(dá)率低于正常組織,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1、圖1。

A:正常組織中FOXC1陽性表達(dá);B:癌組織中FOXC1陽性表達(dá);C:正常組織中SOX11陽性表達(dá);D:癌組織中SOX11陽性表達(dá)

表1 賁門癌病人癌旁正常組織和癌組織FOXC1、SOX11表達(dá)情況比較(例,%)

2.不同臨床病理特征賁門癌病人癌組織FOXC1、SOX11表達(dá)水平差異:不同年齡、性別、腫瘤直徑、飲酒史、家族史、浸潤深度的賁門癌病人癌組織FOXC1、SOX11表達(dá)水平比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。病理分期Ⅲ+Ⅳ期、組織低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的賁門癌病人癌組織中FOXC1陽性表達(dá)率和SOX11陰性表達(dá)率顯著高于病理分期Ⅰ+Ⅱ期、組織中/高分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病人(P<0.05)。見表2。

表2 不同臨床病理特征賁門癌病人癌組織FOXC1、SOX11表達(dá)水平差異(例,%)

3.影響賁門癌病人3年生存率的單因素分析:死亡組與生存組年齡、性別、腫瘤直徑、組織分化程度、飲酒史、家族史、浸潤深度比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。死亡組病理分期Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、FOXC1陽性表達(dá)、SOX11陰性表達(dá)病人比例高于生存組(P<0.05)。見表3。

表3 影響賁門癌病人3年生存率的單因素分析(例,%)

4.賁門癌病人癌組織FOXC1、SOX11表達(dá)水平與3年生存率的關(guān)系:采用Kaplan-Meier法分析賁門癌病人癌組織FOXC1、SOX11表達(dá)與3年生存率的關(guān)系,結(jié)果顯示,癌組織中FOXC1陽性表達(dá)病人3年總生存率(32/67,47.76%)低于FOXC1陰性表達(dá)病人(22/27,81.48%)(χ2=8.951,P<0.05);賁門癌病人癌組織中SOX11陰性表達(dá)病人3年生存率(27/61,44.26%)低于SOX11陽性表達(dá)病人(27/33,81.82%)(χ2=12.356,P<0.05)。見圖2、圖3。

圖2 賁門癌病人癌組織FOXC1表達(dá)水平與3年生存率的關(guān)系

圖3 賁門癌病人癌組織SOX11表達(dá)水平與3年生存率的關(guān)系

5.影響賁門癌病人預(yù)后的多因素Cox回歸分析:以賁門癌病人3年隨訪期內(nèi)是否死亡(是=1,否=0)為因變量,將FOXC1(陽性表達(dá)=1,陰性表達(dá)=0)、SOX11(陰性表達(dá)=1,陽性表達(dá)=0)、病理分期(Ⅲ+Ⅳ=1,Ⅰ+Ⅱ=0)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(是=1,否=0)納為自變量行多因素Cox回歸分析,結(jié)果顯示,FOXC1陰性表達(dá)是賁門癌病人死亡的獨立危險因素,SOX11陰性表達(dá)是賁門癌病人死亡的保護(hù)因素(P<0.05)。見表4。

表4 影響賁門癌病人預(yù)后的多因素Cox回歸分析

討論

賁門癌的流行病學(xué)研究歷來被認(rèn)為是一個獨立的學(xué)科方向,其發(fā)生發(fā)展涉及多階段的病理改變,由遺傳因素和環(huán)境因素共同作用[7]。賁門癌早期臨床癥狀不典型,部分病人確診時病情已發(fā)展為中晚期,導(dǎo)致失去最佳治療時間,進(jìn)而使病人生存率降低[2]。近年來癌癥精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的發(fā)生較為迅速,生物靶向治療在癌癥治療領(lǐng)域有重要臨床意義[8]。為延長賁門癌病人生存時間,尋找新的生物治療靶點已成為目前賁門癌的研究重點。

研究顯示,FOXC1在結(jié)直腸癌、肺癌等多種惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展中均具有重要調(diào)控作用[9-10],但其具體功能復(fù)雜多樣,因此FOXC1在賁門癌中的表達(dá)情況及相應(yīng)功能仍需進(jìn)一步分析。腫瘤是局部組織細(xì)胞出現(xiàn)控制紊亂的現(xiàn)象,當(dāng)細(xì)胞自身控制紊亂時即表現(xiàn)出運動能力提高、血管新生、惡性增殖,進(jìn)而形成惡性腫瘤,而其中細(xì)胞惡性增殖是腫瘤產(chǎn)生的必要條件[11-12]。Lin等[13]研究表明,FOXC1可促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移。吳軍等[14]研究顯示,FOXC1與胃癌細(xì)胞增殖能力升高、凋亡率下降有關(guān),其在胃癌組織中表達(dá)上調(diào)。本研究結(jié)果同樣顯示FOXC1在賁門癌病人癌組織中表達(dá)上調(diào)。基于既往研究推測FOXC1表達(dá)上調(diào)可能通過促進(jìn)賁門癌細(xì)胞的惡性增殖,推動疾病進(jìn)展。此外,本研究結(jié)果中FOXC1與病人臨床病理特征病理分期、組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān),FOXC1高表達(dá)病人3年死亡率高。Sun等[15]研究發(fā)現(xiàn),FOXC1過表達(dá)可增強胃癌細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,激活細(xì)胞遷移和侵襲。進(jìn)一步推測,FOXC1高表達(dá)亦可能通過促進(jìn)賁門癌細(xì)胞的遷移和侵襲,促進(jìn)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移,不利于病人預(yù)后。

SOX家族編碼的蛋白是一類具有重要功能的轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白,早期研究主要集中于組織分化和胚胎發(fā)育,目前發(fā)現(xiàn)其在癌癥中同樣具有重要作用[16]。Yeh等[17]研究證實,SOX11基因rs77996007位點多態(tài)性參與口腔癌癥的進(jìn)展和臨床特征。既往研究顯示,異常的DNA甲基化,特別是抑癌基因的高甲基化,是公認(rèn)的腫瘤初始發(fā)生階段的生物標(biāo)志物[18]。Sun等[19]研究表明,SOX11在胃癌組織中通過高甲基化下調(diào),且其甲基化顯著增加了胃癌風(fēng)險。本研究發(fā)現(xiàn),賁門癌病人癌組織中SOX11低表達(dá),且其低表達(dá)與分期增加、組織低分化及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)?；诩韧芯客茰ySOX11在賁門癌組織中可能同樣通過高甲基化表達(dá)下調(diào),其表達(dá)下調(diào)可能通過促進(jìn)腫瘤細(xì)胞惡性進(jìn)展推動賁門癌疾病進(jìn)展,增加不良預(yù)后的發(fā)生風(fēng)險,其具體作用機制有待進(jìn)一步基礎(chǔ)研究證實。

綜上,賁門癌病人癌組織中FOXC1高表達(dá),SOX11低表達(dá),二者與病理分期、組織分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān),且是影響賁門癌病人死亡的重要危險因素。本研究可為賁門癌的防治提供參考,今后可將FOXC1、SOX11作為治療靶點進(jìn)一步的研究和探討,利用基礎(chǔ)研究證實二者在疾病進(jìn)展中發(fā)揮的關(guān)鍵作用機制。同時今后將進(jìn)行前瞻性的大樣本研究進(jìn)一步證實FOXC1、SOX11在賁門癌病人預(yù)后中的預(yù)測價值。