周鑫志 張松 魏小棟

大部分肺結(jié)節(jié)為良性,但有相當(dāng)一部分是早期的、潛在可治愈的惡性腫瘤,判斷結(jié)節(jié)的良性或惡性是肺癌早期發(fā)現(xiàn)的關(guān)鍵[1]。微小RNA(miRNA)是一種非編碼、短、單鏈RNA,通過miRNA通過結(jié)合mRNA的3'-UTR區(qū)在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄和翻譯參與生物體的病理生理過程[2]。miRNA的異常表達(dá)參與腫瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移、侵襲和血管生成,最近miRNA作為判斷肺結(jié)節(jié)性質(zhì)的生物標(biāo)志物被研究[3]。微小RNA(miR)-134-5p在非小細(xì)胞肺癌和鼻咽癌中起抗腫瘤作用[4]。miR-181a-5p是miR-181家族的成員,抑制非小細(xì)胞肺癌進(jìn)展[5]。本研究探討聯(lián)合測定肺結(jié)節(jié)病人血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平在鑒別良惡性肺結(jié)節(jié)中的價值。

對象與方法

一、對象

2021年1月～2021年12月收治的肺結(jié)節(jié)病人124例,根據(jù)病理結(jié)果分為良性組和惡性組,每組各62例。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)病理確診為肺結(jié)節(jié)[6];(2)無肺癌病史;(3)知情且同意;(4)臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn):合并惡性腫瘤、免疫系統(tǒng)、血液系統(tǒng)以及腎臟功能障礙疾病;有肺部放化療或手術(shù)治療史;入組前3個月有激素、抗生素治療史;肺部感染、慢性肺病或肺結(jié)核;妊娠期或哺乳期。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

二、方法

1.一般資料收集:收集病人年齡、性別、體質(zhì)指數(shù)、吸煙史、結(jié)節(jié)直徑、結(jié)節(jié)個數(shù)、結(jié)節(jié)位置等資料。與良性組相比較,惡性組病人結(jié)節(jié)直徑顯著增大,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);兩組年齡、性別、體質(zhì)指數(shù)、吸煙史、結(jié)節(jié)個數(shù)、結(jié)節(jié)位置比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組一般資料比較

2.血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平測定:采用實(shí)時熒光定量PCR(qRT-PCR)檢查。就診當(dāng)日清晨空腹靜脈血5 ml,4 ℃冰箱保存,5 000 r/min離心8分鐘,取上清液,超低溫冰箱保存?zhèn)溆谩２捎每俁NA提取試劑盒提取血清樣本總RNA,并測定RNA產(chǎn)物濃度。采用RT-PCR試劑盒進(jìn)行qRT-PCR檢測miR-134-5p和miR-181a-5p水平,以U6為內(nèi)參基因,每個樣品設(shè)置3個技術(shù)重復(fù)。

三、統(tǒng)計學(xué)方法

結(jié)果

1.兩組血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平比較見表2。與良性組比較,惡性組病人血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平均顯著降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表2 兩組血清miR-134-5p,miR-181a-5p水平比較

2.血清miR-134-5p水平與miR-181a-5p相關(guān)性分析:Pearson相關(guān)分析顯示,肺結(jié)節(jié)病人血清miR-134-5p水平與miR-181a-5p呈正相關(guān)(r=0.547,P<0.05)。見圖1。

圖1 血清miR-134-5p水平與miR-181a-5p相關(guān)性分析

3.血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平與惡性肺結(jié)節(jié)臨床病理特征相關(guān)性:以惡性組肺結(jié)節(jié)病人血清miR-134-5p平均值0.73為臨界值將惡性肺結(jié)節(jié)病人血清miR-134-5p水平分為高水平和低水平,分別為32例和30例;以惡性組肺結(jié)節(jié)病人血清miR-181a-5p水平平均值0.97為臨界值將惡性肺結(jié)節(jié)病人血清miR-181a-5p水平分為高水平和低水平,分別31例和31例。血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平與病人淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移、結(jié)節(jié)直徑相關(guān)(P<0.05);血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平與病人性別、癥狀、組織學(xué)類型、肺部位置無關(guān)(P>0.05)。見表3。

表3 血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平與惡性肺結(jié)節(jié)臨床病理特征相關(guān)性(例,%)

4.肺結(jié)節(jié)惡性因素多因素Logistic回歸分析:以肺結(jié)節(jié)是否為惡性(是=1,否=0)作為因變量,以血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平、結(jié)節(jié)直徑為自變量進(jìn)行多因素Logistic回歸分析。結(jié)果顯示,高水平miR-134-5p、miR-181a-5p為病人肺結(jié)節(jié)為惡性的獨(dú)立保護(hù)因素(P<0.05);結(jié)節(jié)直徑為病人肺結(jié)節(jié)為惡性的獨(dú)立危險因素(P<0.05)。見表4。

表4 肺結(jié)節(jié)惡性影響因素Logistic回歸分析

5.血清miR-134-5p、miR-181a-5p在鑒別良惡性肺結(jié)節(jié)中的價值:以血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平為檢驗(yàn)變量,以肺結(jié)節(jié)是否為惡性肺結(jié)節(jié)為狀態(tài)變量(是=1,否=0)繪制ROC曲線,結(jié)果見圖2、表5。血清miR-134-5p、miR-181a-5p聯(lián)合鑒別肺結(jié)節(jié)良惡性的效能均優(yōu)于兩者單獨(dú)鑒別,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

圖2 血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平鑒別良惡性肺結(jié)節(jié)的ROC曲線

表5 血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平在鑒別良惡性肺結(jié)節(jié)中的效能分析

討論

如何通過無創(chuàng)的方式實(shí)現(xiàn)對良惡性肺結(jié)節(jié)綜合評估是目前臨床研究趨勢,確定這些肺結(jié)節(jié)的性質(zhì)對于病人治療計劃的制定具有重要意義。本研究發(fā)現(xiàn),惡性組肺結(jié)節(jié)病人結(jié)節(jié)直徑較良性結(jié)節(jié)直徑顯著增大,且結(jié)節(jié)直徑較大為病人肺結(jié)節(jié)為惡性的獨(dú)立危險因素,提示肺結(jié)節(jié)性質(zhì)與其直徑大小具有一定相關(guān)性。

miRNA可在生理或病理?xiàng)l件下由正常細(xì)胞分泌到體液中,也可以由凋亡和壞死細(xì)胞分泌到體液中。miR-134-5p與抑制癌細(xì)胞生長、侵襲和遷移有關(guān),其表達(dá)在腎癌、結(jié)直腸癌和肝癌等已被證實(shí)[7]。miR-134-5p過表達(dá)能夠減少SGC7901細(xì)胞的增殖、集落形成和侵襲[8]。miR-134-5p的表達(dá)在非小細(xì)胞肺癌中顯著下調(diào),且與非小細(xì)胞肺癌進(jìn)展呈負(fù)相關(guān)[9]。本研究發(fā)現(xiàn),惡性組肺結(jié)節(jié)病人血清miR-134-5p水平顯著降低,與饒德新等[9]研究結(jié)果一致。

miR-181a-5p作為一種功能性miRNA,已經(jīng)在包括肺癌在內(nèi)多種癌癥類型中進(jìn)行研究,且miR-181a-5p是炎癥蛋白的關(guān)鍵上游調(diào)節(jié)因子,具有抗炎活性[10]。miR-181a-5p在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中的表達(dá)降低,miR-181a-5p過表達(dá)可阻止非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲[11]。miR-181a-5p通過靶向STAT3信號傳導(dǎo)緩解克雷伯菌肺炎感染引起的肺損傷[12]。miR-181a-5p在肺癌組織和細(xì)胞系中表達(dá)顯著降低,過表達(dá)miR-181a-5p的肺腺癌細(xì)胞可顯著抑制肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549的增殖和遷移[13]。本研究發(fā)現(xiàn),惡性組肺結(jié)節(jié)病人血清miR-181a-5p水平顯著降低,與Wang等[13]研究結(jié)果一致。本研究還顯示,血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平與病人淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移、結(jié)節(jié)直徑相關(guān),低水平miR-134-5p、miR-181a-5p病人淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移概率更高、結(jié)節(jié)直徑更大,提示低水平miR-134-5p、miR-181a-5p與肺結(jié)節(jié)病人惡性發(fā)展具有一定相關(guān)性。高水平miR-134-5p、miR-181a-5p均為病人肺結(jié)節(jié)為惡性的獨(dú)立保護(hù)因素,且肺結(jié)節(jié)病人血清miR-134-5p水平與miR-181a-5p呈正相關(guān),推測miR-134-5p、miR-181a-5兩者在肺結(jié)節(jié)的發(fā)展中具有協(xié)同作用,抑制肺結(jié)節(jié)的惡性發(fā)展。進(jìn)一步ROC分析顯示,血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平鑒別病人肺結(jié)節(jié)為良惡性的AUC分別為0.867、0.868,兩者聯(lián)合鑒別的AUC為0.931,均優(yōu)于兩者單獨(dú)鑒別,提示miR-134-5p、miR-181a-5p聯(lián)合在鑒別良惡性肺結(jié)節(jié)中具有一定潛在價值。

綜上所述,惡性肺結(jié)節(jié)病人血清miR-134-5p、miR-181a-5p水平較良性病人均顯著降低,兩者聯(lián)合檢測對良惡性肺結(jié)節(jié)的鑒別具有重要價值。本研究樣本數(shù)量有限,后續(xù)本研究將繼續(xù)擴(kuò)大樣本量并納入健康樣本作為對照組,進(jìn)一步分析二者水平變化,并深入探究病人結(jié)節(jié)中miR-134-5p、miR-181a-5p水平變化及其潛在的作用機(jī)制。