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        西澳菲斯特農(nóng)場赤桉樹蜂蜜對血虛證模型小鼠的影響

        2024-04-18 11:49:46趙立波陳家鈴陶春霖
        中國食品 2024年6期
        關(guān)鍵詞:血虛空白對照外周血

        趙立波 陳家鈴 陶春霖

        再生障礙性貧血(Aplastic amemia,AA),又稱血虛證,為中醫(yī)臨床常見癥候,是一種以造血功能衰竭為特征的疾病,其發(fā)病機制主要與骨髓造血干細(xì)胞損傷、造血微環(huán)境損傷以及免疫性造血抑制等機制相關(guān)。目前,治療AA的主要藥物如環(huán)孢素(cyclosporine A,CsA),存在使用后反應(yīng)率較低且復(fù)發(fā)率較高的缺點。本研究以西澳菲斯特農(nóng)場赤桉樹蜂蜜為研究對象,通過建立小鼠血虛模型,探究服用不同劑量的TA10+FFJH以及TA30+FFJH對小鼠血虛癥狀的影響。

        一、實驗材料

        1.實驗藥品與試劑。西澳菲斯特農(nóng)場赤桉樹蜂蜜(Fewsters Farm jarrah honey,F(xiàn)FJH),洋妝源(上海)網(wǎng)絡(luò)科技有限公司;乙酰苯肼、淋巴細(xì)胞分離液,美國SIGMA公司;環(huán)磷酰胺,上海華聯(lián)制藥有限公司;促紅細(xì)胞生成素(EPO)ELASA試劑盒,美國R&D Systems公司;其他試劑均為國產(chǎn)分析純或生化試劑。

        2.實驗動物。選擇BALB/c小鼠80只,購于北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司。雌雄各半,年齡為8-12周,體重控制在18-22g。飼養(yǎng)溫度為(23±1)℃,濕度控制在40%-60%,24h光暗循環(huán),通風(fēng)良好。飼養(yǎng)期間保證小鼠自由飲水、飲食。

        二、實驗方法

        1.模型建立。(1)實驗分組。選取BALB/c小鼠80只,在適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,將其分為以下8組:①正常對照組;②血虛模型組;③25%-TA10+FFJH組;④50%-TA10+FFJH組;⑤75%-TA10+FFJH組;⑥25%-TA30+FFJH組;⑦50%-TA30+FFJH組;⑧75%-TA30+FFJH組。每組小鼠各10只。(2)實驗流程。按照乙酰苯肼、X射線、環(huán)磷酰胺聯(lián)合應(yīng)用的方法,建立再生障礙性貧血小鼠模型。將不同劑量的蜂蜜溶解至等量生理鹽水中,從第7d開始,以每天1次的頻率按各組劑量對小鼠進(jìn)行灌胃,同時對空白對照組以及血虛模型組的小鼠灌胃等體積的生理鹽水。實驗周期為45d,45d后頸椎脫臼處死小鼠,采樣進(jìn)行檢測。

        2.各組小鼠一般行為學(xué)觀察。經(jīng)上述步驟處理45d后,對小鼠的運動靈活度、反應(yīng)敏捷度、毛發(fā)光澤度、脫毛情況及體重變化情況進(jìn)行觀察統(tǒng)計。

        3.外周血檢測。(1)細(xì)胞計數(shù)。各實驗組在第45d對各組小鼠進(jìn)行稱重,經(jīng)眼眶取血,測定外周血的血紅蛋白含量、紅細(xì)胞、白細(xì)胞及血小板數(shù);在顯微鏡下觀察外周血涂片,并進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。(2)EPO濃度測定。EPO是一種重要的造血調(diào)控因子,血液中的EPO水平能夠反映機體生成紅細(xì)胞的能力。參考文獻(xiàn)中的方法,對血液進(jìn)行樣品處理,使用試劑盒對血液中的EPO含量進(jìn)行測定,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算得出樣本的EPO濃度(pg/mL)。

        4.骨髓有核細(xì)胞(BMCs)計數(shù)。實驗參考陳姍姍等的方法,頸椎脫臼處死小鼠,取右側(cè)股骨,用PBS緩沖液反復(fù)沖洗,取骨髓細(xì)胞懸液,配平至相同體積,取0.2mL細(xì)胞懸液裂解紅細(xì)胞后,以自動細(xì)胞計數(shù)儀計數(shù)BMCs數(shù)量。

        5.統(tǒng)計學(xué)分析。實驗數(shù)據(jù)至少重復(fù)3次,結(jié)果以Means±SEM表示。采用Origin8.5和SPSS分析軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析,統(tǒng)計結(jié)果P<0.05認(rèn)為有顯著性差異。

        三、結(jié)果分析

        1.血虛模型小鼠一般行為學(xué)觀察。與正常對照組相比,血虛模型組小鼠陸續(xù)出現(xiàn)皮毛蓬亂、光澤度降低以及部分脫毛現(xiàn)象,且隨著實驗進(jìn)程的發(fā)展,癥狀逐漸加重。同時,小鼠還出現(xiàn)精神不佳、活動減少、體重下降的癥狀。

        對比服用各FFJH劑量組與血虛模型組發(fā)現(xiàn),服用FFJH組小鼠的皮毛光澤度下降及脫毛的程度均有所減輕,精神狀態(tài)也有明顯提升。各組小鼠的體重平均值如圖1所示,通過對比可以看出,灌胃FFJH各組小鼠的平均體重均高于血虛模型組,且呈劑量對應(yīng)關(guān)系,說明FFJH對血虛引起的小鼠體重下降有抑制作用。同時,通過在同劑量添加下體重值的對比可以觀察到,TA30+FFJH較TA10+FFJH的效果更佳。

        圖1:FFJH對小鼠體重的影響()

        注:與空白組相比,#代表與空白對照組相比差異顯著,P<0.05;*表示與模型組相比差異顯著。

        2.FFJH對血虛模型小鼠外周血三系水平的影響。表1為不同F(xiàn)FJH劑量組、空白對照組以及血虛模型組小鼠的外周血中血紅蛋白(Hb)、紅細(xì)胞(RBC)、白細(xì)胞(WBC)以及血小板(PLT)水平情況。由表1可以看出,在血虛模型條件下,小鼠血常規(guī)中的各項指標(biāo)均顯著降低(P<0.01),即血虛模型組小鼠的血象三系水平明顯下降。服用各FFJH劑量組與血虛模型組相比,小鼠的外周血三系水平均有所提升,且呈劑量對應(yīng)關(guān)系,說明FFJH對小鼠的再生障礙性貧血有顯著改善效果(P<0.01)。

        3.FFJH對血虛模型小鼠EPO濃度的影響測定。研究表明,EPO具有抗凋亡以及促進(jìn)血管生成的作用,其濃度水平能直觀反映骨髓紅系造血功能障礙的程度,圖2為不同F(xiàn)FJH劑量組、空白對照組以及血虛模型組小鼠的EPO濃度測定結(jié)果。在血虛模型條件下,小鼠血清中的EPO濃度顯著提高(P<0.01),而各FFJH劑量組與血虛模型組相比,EPO含量均顯著降低,并呈劑量對應(yīng)關(guān)系(P<0.01)。實驗結(jié)果說明,F(xiàn)FJH對再生障礙性貧血小鼠外周血中各種血細(xì)胞的形成有促進(jìn)作用,而且通過組間數(shù)據(jù)對比發(fā)現(xiàn),在同劑量添加條件下,TA30+FFJH組較TA10+FFJH組的EPO濃度下降更明顯,說明TA30+FFJH降低EPO濃度的作用比TA10+FFJH更好。

        圖2:FFJH對小鼠血液中EPO水平的影響()

        注:與空白組比較,##代表與空白對照組相比差異極顯著,P<0.01;**表示與模型組相比差異極顯著,P<0.01。

        4.FFJH對小鼠BMCs水平的影響。圖3為不同F(xiàn)FJH劑量組、空白對照組以及血虛模型組的BMCs水平。與空白組相比,血虛模型組小鼠的造血干細(xì)胞數(shù)量顯著下降(P<0.01),而各FFJH劑量組的BMCs水平明顯高于血虛模型組,并呈劑量對應(yīng)關(guān)系(P<0.05),推測FFJH有促進(jìn)造血干細(xì)胞增殖的效果,可以抑制再生障礙性貧血小鼠有核細(xì)胞減少,進(jìn)而對骨髓的造血機能產(chǎn)生明顯的促進(jìn)作用。通過組間數(shù)據(jù)對比可以發(fā)現(xiàn),在同劑量添加條件下,TA30+FFJH組較TA10+FFJH組促進(jìn)造血干細(xì)胞增殖的效果更明顯,說明TA30+FFJH促進(jìn)造血干細(xì)胞增殖的作用比TA10+FFJH更好。

        圖3:FFJH對小鼠BMCs水平的影響()

        注:與空白組相比,##代表與空白對照組相比差異極顯著,P<0.01;**表示與模型組相比差異極顯著,P<0.01。

        綜上所述,本實驗通過建立小鼠血虛模型,觀察各組小鼠體重變化、外周血常規(guī)、EPO濃度以及骨髓單個核細(xì)胞數(shù)的差異,發(fā)現(xiàn)FFJH可以改善血虛模型小鼠再生障礙性貧血導(dǎo)致的精神不佳、毛發(fā)光澤受損、體重下降癥狀。服用FFJH后,模型小鼠血象三系水平以及骨髓細(xì)胞水平的下降速度均明顯減緩(P<0.01),EPO水平波動明顯減小,并呈劑量對應(yīng)關(guān)系(P<0.01),說明FFJH能有效緩解并修復(fù)血虛模型處理小鼠的骨髓造血微環(huán)境受損。不過,本研究也存在一定的不足之處,雖然證明了FFJH可以為機體補充相關(guān)營養(yǎng)素以減輕小鼠的血虛癥狀,但未對調(diào)節(jié)血虛癥狀的具體機制進(jìn)行進(jìn)一步研究。

        作者簡介:趙立波(1987-),男,漢族,河南信陽人,工程師,碩士研究生,研究方向為功能性食品。

        陳家鈴(1993-),女,漢族,貴州安順人,大學(xué)本科,研究方向為原料包裹及改性。

        *通信作者:陶春霖(1986-),男,漢族,天津人,大學(xué)本科,研究方向為原料包裹及改性。

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