董龍聰，張瑞斌，沈 緣，李虹瑩，黃 琴，余曙光，吳巧鳳

（成都中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院 成都 610075）

傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為，腧穴功效除具有相對特異性外，同時(shí)還具有整體調(diào)節(jié)效應(yīng)，表現(xiàn)出一定的共性特點(diǎn)。例如，足三里是下合穴，其主要功能是調(diào)理胃腸道功能，但在治療心血管類疾病時(shí)，足三里也是一個(gè)高頻使用的穴位[1]；內(nèi)關(guān)是手厥陰心包經(jīng)之絡(luò)穴，其功能主要是寧心安神、理氣止痛，但治療胃腸道疾病時(shí)，由于是八脈交會(huì)穴，也會(huì)調(diào)氣機(jī)，安脾胃[2]。因此古人將這兩個(gè)腧穴的特異性功效概括為“合治內(nèi)腑”或“內(nèi)關(guān)心胸謀”，而又將其功效的多面性概括為“足三里諸病皆治”或“內(nèi)關(guān)可活一身之血脈瘀滯”。但是，這些論述背后具體的現(xiàn)代原理及其相關(guān)生物學(xué)機(jī)制還不清楚。20世紀(jì)70年代以來，研究者在動(dòng)物身體上的不同區(qū)域進(jìn)行刺激，可以特異性地誘導(dǎo)自主神經(jīng)反射調(diào)節(jié)機(jī)體功能，如針刺“足三里”穴位能通過迷走神經(jīng)介導(dǎo)作用促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)，而針刺刺激腹部“天樞”穴位能抑制胃腸運(yùn)動(dòng)（交感神經(jīng)介導(dǎo)為主）。2020 年，研究證實(shí)，用電針刺激足三里和天樞穴都能緩解小鼠的炎癥因子風(fēng)暴，但足三里只需要用0.5 mA 的低強(qiáng)度刺激就能激活從迷走神經(jīng)到腎上腺的抗炎通路，起到治療效果，而且無論是患病前預(yù)先刺激還是患病后再刺激，都有正面效果；但低強(qiáng)度刺激天樞穴無法激活以上抗炎通路，必須達(dá)到1-3 mA 的高強(qiáng)度刺激才能通過激活交感神經(jīng)通路發(fā)揮抗炎作用[3]。后續(xù)有研究指出，是否表達(dá)Prokr2 基因的背根神經(jīng)節(jié)（Sorasal root ganglion，DRG）感覺神經(jīng)元是造成足三里和天樞穴上述不同抗炎結(jié)局的重要機(jī)制，從神經(jīng)解剖學(xué)角度為穴位的相對專一性或特異性做出了進(jìn)一步的科學(xué)解釋[4]。結(jié)合上述研究的結(jié)論不難發(fā)現(xiàn)，足三里和內(nèi)關(guān)兩個(gè)穴位由于均分布在機(jī)體四肢，因此具有一定的共性，同時(shí)由于它們分別與迷走神經(jīng)和交感神經(jīng)關(guān)系密切，在功效上可能又各有特點(diǎn)，但是兩者在功效的微觀層面上到底有何差異，其功效特點(diǎn)與病變部位是否有關(guān)聯(lián)等問題仍然值得進(jìn)一步研究。因此，本研究將利用轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)，以硫酸葡聚糖鈉鹽（Dextran sulfate sodium salt，DSS）誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎（Ulcerative colitis，UC）小鼠模型為載體，研究針刺“足三里”或“內(nèi)關(guān)”對于病變部位結(jié)腸及非病變部位心臟的基因變化，從病變和非病變組織的轉(zhuǎn)錄組學(xué)等生物信息學(xué)角度，為闡釋兩個(gè)腧穴功效的相似性和差異性提供部分實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組

無特定病原體級雄性C57BL/6J 小鼠36 只，體質(zhì)量26±2 g，均購自江蘇集萃藥康生物科技股份有限公司（動(dòng)物生產(chǎn)許可證號：SCXK（川）2020-034）。動(dòng)物飼養(yǎng)于小鼠獨(dú)立通氣籠盒，室溫23±2℃，12 h 明暗交替，小鼠自由飲食、飲水。本實(shí)驗(yàn)已獲得成都中醫(yī)藥大學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)（2019-04），并嚴(yán)格按照《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見》的相關(guān)規(guī)定進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。

1.2 主要試劑與儀器

DSS（9011-18-1，MP Biomedicals），聯(lián)苯胺（92-87-5，上海阿達(dá)瑪斯試劑有限公司），一次性針灸針（北京中研太和醫(yī)療器械有限公司），4%多聚甲醛通用型組織固定液（G1101，武漢賽維爾生物科技有限公司），蘇木精-伊紅染色法（hematoxylin-eosin staining，HE染色）（G1076，武漢賽維爾生物科技有限公司），全長轉(zhuǎn)錄組測序平臺（英國Oxford Nanopore Technologies），2015 石蠟切片機(jī)（德國Leica），HS6 病理切片掃描儀（舜宇光學(xué)科技（集團(tuán)）有限公司）。

1.3 造模與干預(yù)方法

C57BL/6J小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為空白組9 只、造模組27 只。通過自由飲用2.5%濃度的DSS 7天的方式對造模組進(jìn)行造模[5]。判定造模成功的方法為：造模第5天，對比觀察空白組與造模組小鼠體質(zhì)量下降情況，采集兩組小鼠新鮮糞便，比較糞便情況，根據(jù)聯(lián)苯胺隱血檢測說明，比較兩組小鼠糞便隱血情況。以小鼠出現(xiàn)體質(zhì)量下降、糞便松散或稀便及糞便隱血試驗(yàn)陽性為造模成功的標(biāo)準(zhǔn)[6]。在第5 天按照體質(zhì)量區(qū)間分組法隨機(jī)分為模型組、足三里組和內(nèi)關(guān)組。足三里組及內(nèi)關(guān)組從造模第5 天開始進(jìn)行干預(yù)，模型組和空白組只捆綁固定，不予其它干預(yù)。依據(jù)《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[7]中“常用動(dòng)物穴位及圖譜”的小鼠“足三里”和“內(nèi)關(guān)”定位進(jìn)行針刺干預(yù)。具體方法為：足三里穴位于膝關(guān)節(jié)下方，腓骨小頭下0.3 cm 處的肌溝中；內(nèi)關(guān)穴位于前肢內(nèi)側(cè)，腕關(guān)節(jié)上方0.3 cm 處的橈、尺骨間。分別于上述穴位針刺至肌層，留針30 min，每天1次，連續(xù)針刺干預(yù)5天。

1.4 觀察指標(biāo)及檢測方法

小鼠一般狀態(tài)觀察、DAI 評分[6]：每日記錄小鼠體質(zhì)量變化，并觀察各組小鼠的自主活動(dòng)、毛發(fā)色澤及精神狀態(tài)變化。每次干預(yù)結(jié)束后，采集各組小鼠新鮮糞便觀察糞便質(zhì)地、性狀并檢測糞便隱血。同時(shí)，依據(jù)DAI計(jì)算公式，計(jì)算各組的DAI評分。

HE 染色觀察各組小鼠結(jié)腸組織形態(tài)學(xué)變化：干預(yù)結(jié)束后，將各組小鼠脫頸處死，截取盲腸遠(yuǎn)端到肛門1 cm 的全部腸段。生理鹽水沖洗腸內(nèi)容物后，放置于4%多聚甲醛組織固定液中固定48 h。常規(guī)石蠟包埋切片，厚度4 μm，二甲苯脫蠟，乙醇梯度洗脫，HE染色，封片，病理切片掃描儀掃描。

全長轉(zhuǎn)錄組測序：干預(yù)結(jié)束后，取小鼠新鮮結(jié)腸及心臟組織經(jīng)液氮速凍后，置于干冰中送至北京百邁客生物科技有限公司進(jìn)行全長轉(zhuǎn)錄組測序分析。實(shí)驗(yàn)流程按照Oxford Nanopore Technologies 公司提供的標(biāo)準(zhǔn)步驟執(zhí)行：提取總RNA，合格樣品上機(jī)檢測，通過引物擴(kuò)增、退火，反轉(zhuǎn)錄成cDNA，通過switch oligo，合成互補(bǔ)鏈，DNA 損傷修復(fù)和末端修復(fù)，磁珠純化等步驟完成文庫構(gòu)建并連接測序接頭，上機(jī)測序。

生物信息學(xué)分析：使用“DESeq2”包分析各組間的差異表達(dá)基因（Differential expressed genes，DEGs），DEGs 的篩選條件為|log2（fold change）|>2，P<0.01[8]。使用基因本體論（Gene ontology，GO）和京都基因與基因組百科全書（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）數(shù)據(jù)庫進(jìn)行功能富集分析[9-11]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用R 3.6.3 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。DAI 評分采用Kruskal-Wallis Test，組間兩兩比較選用Dunn's Test。以P<0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 針刺干預(yù)效應(yīng)觀察

2.1.1 各組小鼠一般狀態(tài)和DAI評分比較

造模開始后小鼠精神逐漸變差，毛發(fā)無光，進(jìn)食少，體質(zhì)量明顯減輕，于第3 天開始陸續(xù)出現(xiàn)肛門污穢，可見血便，糞便隱血試驗(yàn)為陽性；針刺足三里或內(nèi)關(guān)后，兩組小鼠均較模型組精神狀態(tài)好，進(jìn)食逐漸增多，體質(zhì)量恢復(fù)，糞便隱血實(shí)驗(yàn)由陽性轉(zhuǎn)為弱陽性或陰性。DAI 評分顯示，模型組DAI 評分明顯高于空白組（P<0.001），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與模型組相比，足三里組及內(nèi)關(guān)組DAI 評分明顯降低（P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且足三里組與內(nèi)關(guān)組組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（見圖1）。

圖1 各組干預(yù)后DAI評分比較（±s，n=9）

2.1.2 各組小鼠結(jié)腸組織形態(tài)比較

HE 染色結(jié)果顯示，空白組小鼠結(jié)腸上皮結(jié)構(gòu)完整，杯狀細(xì)胞數(shù)量豐富且無炎性細(xì)胞浸潤。模型組結(jié)腸上皮結(jié)構(gòu)破壞明顯，杯狀細(xì)胞大量減少并伴有炎性細(xì)胞的大量浸潤。足三里組、內(nèi)關(guān)組較模型組結(jié)腸損傷均有明顯改善（見圖2）。

圖2 各組小鼠結(jié)腸組織形態(tài)結(jié)構(gòu)比較（HE染色，×100倍）

2.2 結(jié)腸組織RNA-Seq結(jié)果分析

2.2.1 差異基因分析

與空白組相比，模型組有1420個(gè)基因上調(diào)，796個(gè)基因下調(diào)；足三里組對比模型組有537 個(gè)基因上調(diào)，770 個(gè)基因下調(diào)；內(nèi)關(guān)組對比模型組有650 個(gè)基因上調(diào)，945 個(gè)基因下調(diào)。聚類結(jié)果顯示，各組的整體基因表達(dá)模式有明顯差異（見圖3）。

圖3 各組樣本差異基因的火山圖和聚類熱圖（n=3）

為了進(jìn)一步分析針刺“足三里”“內(nèi)關(guān)”對于DSS模型干預(yù)后基因表達(dá)差異，對模型組vs.空白組、足三里組vs.模型組的差異基因取交集，獲得具有相反表達(dá)趨勢的共表達(dá)基因993 個(gè)。類似地，對模型組vs.空白組、內(nèi)關(guān)組vs.模型組的差異基因取交集，獲得具有相反表達(dá)趨勢的共表達(dá)基因1150 個(gè)。進(jìn)一步將上述兩個(gè)基因集進(jìn)行Venn分析，篩選出有相同表達(dá)趨勢差異基因（Common differential expressed genes，co-DEGs）共825 個(gè)，足三里組特有差異基因（ST36 only differential expressed genes，ST36 only-DEGs）共168個(gè)，內(nèi)關(guān)組特有差異基因（PC6 only differential expressed genes，PC6 only-DEGs）共325個(gè)（見圖4）。

圖4 差異基因Venn圖

2.2.2 差異基因富集分析

為了進(jìn)一步明確co-DEGs、ST36 only-DEGs 及PC6 only-DEGs 三個(gè)基因集的功能異同，對其進(jìn)行了GO 富集分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，針刺兩個(gè)穴位的co-DEGs主要富集到與炎癥相關(guān)的白細(xì)胞遷移、細(xì)胞趨化性等條目，反映了針刺兩個(gè)穴位均具有一定程度的抗炎作用。但分開來看，針刺兩個(gè)穴位影響的生物過程存在差異（見表1）。

表1 不同針刺干預(yù)方式后各組差異基因GO富集分析結(jié)果（結(jié)腸組織）

接下來，在KEGG 通路富集分析中，co-DEGs富集到IL-17 信號通路、TNF 信號通路、細(xì)胞因子和細(xì)胞因子受體的相互作用等通路；ST36 only-DEGs 富集到緊密連接、鈣信號通路、cAMP 信號通路、磷酸肌醇代謝等通路；PC6 only-DEGs 富集到細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體相互作用、JAK-STAT 信號通路等。為了更全面地分析三個(gè)基因集在KEGG 通路富集上的區(qū)別，將三個(gè)基因集富集到的KEGG 通路進(jìn)行歸類，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在co-DEGs 的KEGG 通路富集歸類中，人類疾病中的感染性疾病占比最高（28.57%），同時(shí)免疫系統(tǒng)也具有較高的占比（23.81%）。ST36 only-DEGs 的KEGG 通路富集歸類分析結(jié)果顯示最主要改變的通路類型為免疫系統(tǒng)（26.67%）及內(nèi)分泌系統(tǒng)（20%）。PC6 only-DEGs 的KEGG 通路富集歸類分析結(jié)果顯示最主要改變的通路類型是信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路（38.46%）。同時(shí)，使用 Cytoscape 中的ClueGO 篩選三個(gè)差異基因集中的核心KEGG通路，co-DEGs篩選出的核心通路包括IL-17信號通路、病毒蛋白與細(xì)胞因子和細(xì)胞因子受體的相互作用、Toll 樣受體信號通路等，ST36 only-DEGs 篩選出的核心通路包括胃酸分泌、磷酸肌醇代謝等，PC6 only-DEGs 篩選出的核心通路包括細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體相互作用、HIF-1信號通路等（見圖5）。

圖5 各組差異基因KEGG富集分析

2.3 心臟組織RNA-Seq結(jié)果分析

2.3.1 差異基因分析

與空白組相比，模型組有224 個(gè)基因上調(diào)，203 個(gè)基因下調(diào)；足三里組對比模型組有137 個(gè)基因上調(diào)，108 個(gè)基因下調(diào)；內(nèi)關(guān)組對比模型組有138 個(gè)基因上調(diào)，151 個(gè)基因下調(diào)。聚類結(jié)果顯示，各組的整體基因表達(dá)模式有明顯差異（見圖6）。

圖6 各組樣本基因的火山圖和聚類熱圖（n=3）

為了進(jìn)一步分析針刺“足三里”“內(nèi)關(guān)”對于DSS模型干預(yù)后基因表達(dá)差異，對模型組vs.空白組、足三里組vs.模型組的差異基因取交集，獲得具有相反表達(dá)趨勢的共表達(dá)基因123個(gè)。類似地，對模型組vs.空白組、內(nèi)關(guān)組vs.模型組的差異基因取交集，獲得具有相反表達(dá)趨勢的共表達(dá)基因209個(gè)。進(jìn)一步將上述兩個(gè)基因集進(jìn)行Venn 分析，篩選出co-DEGs 共95 個(gè)，ST36 only-DEGs共28個(gè)，PC6 only-DEGs共114個(gè)（見圖7）。

2.3.2 差異基因富集分析

為了進(jìn)一步明確co-DEGs、ST36 only-DEGs 及PC6 only-DEGs 三個(gè)差異基因集的功能異同，對其進(jìn)行了GO 富集分析。結(jié)果顯示，在心臟中，針刺兩個(gè)穴位的co-DEGs 主要富集到與炎癥相關(guān)的防御反應(yīng)等條目，一定程度反映了針刺兩個(gè)穴位正在非病變部位仍發(fā)揮了抗炎功能。但分開來看，針刺兩個(gè)穴位影響的生物過程有一定的區(qū)別（見表2）。

表2 不同針刺干預(yù)方式后各組差異基因GO富集分析結(jié)果（心臟組織）

接下來，在KEGG 通路富集分析中，co-DEGs富集到TNF 信號通路、IL-17 信號通路等；而ST36 only-DEGs 未能富集到通路；PC6 only-DEGs 則富集到蛋白質(zhì)消化吸收、金黃色葡萄球菌感染等通路。為了更全面地分析三個(gè)基因集在KEGG 通路富集上的區(qū)別，將三個(gè)基因集富集到的KEGG 通路進(jìn)行歸類。發(fā)現(xiàn)在co-DEGs 的KEGG 通路富集歸類中，人類疾病中的感染性疾病占比最高（36.36%）。PC6 only-DEGs 的KEGG 通路富集歸類分析結(jié)果顯示人類疾病中的感染性疾病也有較高的占比（18.42%），此外還發(fā)現(xiàn)了心血管疾病相關(guān)的通路被富集（2.63%）（見圖8）。

圖8 各組差異基因KEGG富集分析

將上述結(jié)果進(jìn)一步歸納整理，可以看出無論是針刺足三里還是內(nèi)關(guān)，其對結(jié)腸組織的主要影響涉及感染和免疫系統(tǒng)，包括白細(xì)胞遷移、炎性相關(guān)的IL-17、TNF、Toll 通路等，對心臟組織的主要影響仍然與炎癥和提高機(jī)體防御反應(yīng)相關(guān)；但是在這種共性基礎(chǔ)上，針刺足三里對結(jié)腸組織的影響還涉及趨化因子活性、鈣信號通路、磷酸肌醇代謝等與內(nèi)分泌系統(tǒng)相關(guān)的通路，針刺內(nèi)關(guān)穴與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路更為密切，而對非病變組織心臟而言，針刺足三里沒有富集到其它核心基因，而針刺內(nèi)關(guān)雖然富集到與心血管相關(guān)的核心基因，但也只有不足3%的比例（見表3）。

表3 不同組織基因富集結(jié)果歸納表

3 討論

本研究的目的是探討不同腧穴功效是否存在特異性和共性。以往大量的研究表明，腧穴功效存在相對特異性，“合治內(nèi)腑”和“內(nèi)關(guān)心胸謀”等臨床經(jīng)驗(yàn)的總結(jié)，一定程度上反映了腧穴功效的特異性，這也是臨床合理選穴和提升療效的重要基礎(chǔ)。但是不難發(fā)現(xiàn)，除了這種特異性，對機(jī)體整體或綜合性的調(diào)節(jié)也是針灸作用的一大特點(diǎn)，是針灸發(fā)揮“多靶點(diǎn)、多層次、多水平”綜合作用的基礎(chǔ)。因此，深刻認(rèn)識腧穴功效所具有的相對特異性和復(fù)雜多樣的整體調(diào)節(jié)作用就成為揭示針灸作用基礎(chǔ)的重要途徑?，F(xiàn)代生物學(xué)技術(shù)，如系統(tǒng)生物學(xué)以及各種組學(xué)技術(shù)的發(fā)展，為我們從宏觀與微觀相結(jié)合的角度揭示腧穴功效的特點(diǎn)提供了便利。在DSS 造模的UC 小鼠模型中，一般認(rèn)為不會(huì)對心臟組織造成損傷（非病變部位）。同時(shí)，代謝組學(xué)研究[12]顯示DSS 誘導(dǎo)的UC 模型對心臟代謝功能存在一定程度的影響，這可能也是本研究中轉(zhuǎn)錄組學(xué)發(fā)生變化的主要原因。因此，通過比較不同腧穴（足三里與內(nèi)關(guān)）對于潰瘍性結(jié)腸炎治療中的病變部位（結(jié)腸）和非病變部位（心臟）所產(chǎn)生的不同變化并探討腧穴功效異同的潛在機(jī)制。本研究采用轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序的方法對針刺足三里與內(nèi)關(guān)影響UC 小鼠結(jié)腸和心臟組織進(jìn)行了較為細(xì)致的比較研究，初步發(fā)現(xiàn)：①針刺兩個(gè)穴位均能改善UC 小鼠的一般狀況和結(jié)腸炎性癥狀；②從轉(zhuǎn)錄組測序分析結(jié)果來看，針刺足三里和內(nèi)關(guān)無論對病變組織結(jié)腸，還是對非病變組織心臟均存在較多的共性調(diào)節(jié)基因，主要富集在免疫、抗炎等方面；但與非病變組織相比，無論針刺哪個(gè)穴位都對病變組織的影響更大，共變基因更多，富集到的抗炎相關(guān)通路也更多；③對病變組織，針刺足三里和內(nèi)關(guān)均涉及感染和免疫系統(tǒng)，但足三里組主要影響的是免疫和內(nèi)分泌相關(guān)的基因和信號通路，而內(nèi)關(guān)組主要影響的是信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，兩者有細(xì)微差別。

《靈樞經(jīng)》言“合治內(nèi)腑”[13]，指出下合穴對于相應(yīng)臟腑有特異性的靶向治療作用。足三里為胃之下合穴，故有“邪在脾胃……皆調(diào)于三里”闡釋了足三里對于胃腑疾病的特殊治療作用[13]。又因“大腸、小腸，皆屬于胃”，故足三里的特效作用不僅僅拘泥于胃腑疾病，如“腸中寒，脹滿，善噫……三里主之”“霍亂遺矢氣，三里主之”等條文所述，胃腸二腑位置相近、功能相關(guān)，且經(jīng)脈相連、經(jīng)氣相通，所以足三里對于腸腑疾病也具有靶向作用[13-14]。內(nèi)關(guān)作為手厥陰心包經(jīng)絡(luò)穴，“諸邪之在于心者，皆在于心之包絡(luò)”，心與心包原為一體，脈氣相通，因心“其臟堅(jiān)固,邪弗能容也”，心包代心受邪，故內(nèi)關(guān)主治心系疾病[13]?！靶南祵?shí)則心痛，虛則為煩心，取之兩筋間也”則強(qiáng)調(diào)了內(nèi)關(guān)對心臟病變具有靶器官治療效應(yīng)[13]。此外，內(nèi)關(guān)為八脈交會(huì)穴，通陰維脈，而陰維脈與沖脈通過足太陰脾經(jīng)、足陽明胃經(jīng)和足少陰腎經(jīng)的連屬關(guān)系，相合于胃、心、胸部，疏利三焦氣機(jī)，故也常常用于胃腸消化疾病的治療[15]。相關(guān)研究也證實(shí)內(nèi)關(guān)可以有效降低胃腸道疾病的炎癥反應(yīng)，降低胃腸道敏感性以改善胃腸功能[16-17]。上述中醫(yī)理論為足三里或內(nèi)關(guān)治療胃腸道疾病提供了依據(jù)，與臨床實(shí)踐也非常相符。本研究從轉(zhuǎn)錄組測序的角度，初步證實(shí)了針刺“足三里”與“內(nèi)關(guān)”在DSS 誘導(dǎo)的UC 小鼠模型均能通過調(diào)整機(jī)體的細(xì)胞因子、趨化因子發(fā)揮對UC 抗炎“同”的功效。而“足三里”在結(jié)腸組織中具有特異性調(diào)整作用，“內(nèi)關(guān)”在心臟組織中對于心血管具有靶向作用，這一定程度體現(xiàn)了二穴對于靶器官的“異”的功效。

綜上，本研究從轉(zhuǎn)錄組學(xué)角度證實(shí)腧穴功效除具有相對特異性外，同時(shí)還表現(xiàn)出一定的共性特點(diǎn)。但是，本研究僅僅從針刺的末端（即效應(yīng)器官）入手，并沒有涉及上游神經(jīng)支配或中樞調(diào)控等路徑，未來還需要對產(chǎn)生腧穴功效“同”與“異”的具體機(jī)制進(jìn)行深入的研究。