李 璇，李 鑫，陳 楊，仝佳祥，黃靈欣，伍嘉慧，董婷霞，詹華強(qiáng)，段金廒，朱 悅＊＊

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江蘇省方劑研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/江蘇省方劑高技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/中藥資源產(chǎn)業(yè)化與方劑創(chuàng)新藥物國(guó)家地方聯(lián)合工程研究中心/江蘇省中藥資源產(chǎn)業(yè)化過(guò)程協(xié)同創(chuàng)新中心 南京 210023；2.香港科技大學(xué)生命科學(xué)部中藥研發(fā)中心 香港 999077）

抑郁癥是一種以情緒低落、興趣減低、思維遲緩為主要癥狀的情志疾病[1-2]。據(jù)WHO 統(tǒng)計(jì)，全世界有超過(guò)3.5 億人受抑郁癥困擾，已成為世界第四大疾病。受COVID-19 影響，2020 年全球范圍內(nèi)重度抑郁癥增加了28%[3]。抑郁癥患者持久心境低落，生活質(zhì)量嚴(yán)重降低，同時(shí)也是自殺的高危人群。即使在非自然死亡人群中，抑郁癥患者高達(dá)30%的比例也遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他精神疾病患者。因此抑郁癥已成為危害公眾身心健康的重大疾病[4-5]。

長(zhǎng)期以來(lái)，5-羥色胺與多巴胺等單胺類神經(jīng)遞質(zhì)在突觸間隙的重?cái)z取障礙與表達(dá)下降，被認(rèn)為是抑郁癥的主要病理機(jī)制[6-7]?，F(xiàn)有抗抑郁藥物如氟西汀、帕羅西汀與文拉法辛等，均以抑制5-羥色胺在突觸間隙的重新攝取來(lái)提高其突觸間隙濃度為作用靶點(diǎn)。但這些藥物除了具有胃腸不適、睡眠障礙、性功能障礙等副作用之外，且對(duì)30%-50%患者無(wú)效。而對(duì)這些藥物有反應(yīng)的患者，又普遍存在起效時(shí)間延遲（2-6 周）、缺乏認(rèn)知改善甚至損害認(rèn)知、甚至加劇部分患者自殺傾向等嚴(yán)重問(wèn)題[8-9]?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，抑郁癥的發(fā)病機(jī)制尚涉及神經(jīng)生長(zhǎng)與可塑性障礙、中樞神經(jīng)炎癥、“下丘腦-垂體-腎上腺”壓力應(yīng)激系統(tǒng)亢進(jìn)等多種環(huán)節(jié)，靶點(diǎn)單一的神經(jīng)遞質(zhì)再攝取抑制劑無(wú)法有效滿足抑郁癥的治療需要[10-11]。因此中藥復(fù)方多成分、多靶點(diǎn)、多途徑的作用特點(diǎn)使其在抗抑郁臨床應(yīng)用備受關(guān)注，并有將甘麥大棗湯、逍遙散、越鞠丸等與氟西汀聯(lián)用進(jìn)行抗抑郁的諸多報(bào)道，發(fā)現(xiàn)聯(lián)合用藥可以提升抗抑郁起效時(shí)間，減少不良反應(yīng)，提升患者治療依從性，但是這些報(bào)道多為臨床觀察，對(duì)其聯(lián)合用藥的作用環(huán)節(jié)與機(jī)制缺乏深入研究[12-15]。

開心散始載于唐代“藥王”孫思邈《備急千金要方》。由人參、遠(yuǎn)志、石菖蒲、茯苓組成，治療“心氣不足，五臟不足，甚者憂愁悲傷不樂，忽忽喜忘，朝差暮劇，暮差朝發(fā)狂眩”與“好忘”，非常類似于今天的抑郁癥與老年癡呆癥。該方是經(jīng)中醫(yī)臨床驗(yàn)證有效的輕、中度抑郁癥治療方劑，并被納入2018年國(guó)家中醫(yī)藥管理局公布的首批古代經(jīng)典名方目錄[13]。臨床也發(fā)現(xiàn)，以開心散為組方基礎(chǔ)的安神定志方與抗抑郁西藥聯(lián)用后起效更快，并顯著縮短病程治療，降低胃腸道不良反應(yīng)[16]。因此本研究將基于慢性壓力應(yīng)激小鼠抑郁模型，考察開心散與氟西汀聯(lián)合用藥的抗抑郁效用；并在此基礎(chǔ)上探索聯(lián)合用藥的作用環(huán)節(jié)與機(jī)制，以期為中西藥聯(lián)合治療抑郁癥提供更多的現(xiàn)代科學(xué)證據(jù)。

1 材料

1.1 動(dòng)物

健康SPF 級(jí)ICR 小鼠，雄性，體質(zhì)量20-23 g，購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司，動(dòng)物合格證號(hào)為SCXX（滬）2022-0005。動(dòng)物飼養(yǎng)于南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF 環(huán)境中，常規(guī)飼養(yǎng)，溫度22-25℃，濕度40%-70%，光照周期為12 h。本實(shí)驗(yàn)方案獲得南京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)，倫理編號(hào)為202206A036。

1.2 藥物

1.2.1 藥材

人參（Panax ginsengC.A.Mey，批號(hào)：220801）、石菖蒲（Acorus tatarinowiiSchott，批號(hào)：220621）、茯苓（Poria cocos(Schw.) Wolf，批號(hào)：220701）、遠(yuǎn)志（Polygala tenuifoliaWilld，批號(hào)：210601）采購(gòu)于蘇州市天靈中藥飲片有限公司，經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)鑒定教研室劉圣金教授鑒定為合格藥材。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑

氟西汀鹽酸鹽（≥98%）購(gòu)自上海阿拉丁生化科技有限公司（F131623-25 g）；蔗糖購(gòu)自上海阿拉丁生化科技有限公司（S112228-500 g）；小鼠皮質(zhì)醇（Cortisol）ELISA 試劑盒（AF30178-A）、小鼠促腎上皮質(zhì)激素釋放因子（CRF）ELISA 試劑盒（AF2554-A）、小鼠促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）ELISA 試劑盒（AF2110-A）均購(gòu)自湖南艾方生物科技有限公司; 實(shí)驗(yàn)所用抗體Caspase-3 Antibody、Caspase-9 Antibody、Anti-rabbit IgG 均購(gòu)自CST 公司，β-actin Monoclonal Antibody 購(gòu)自湖南艾方生物科技有限公司。

1.3 儀器

小鼠電子計(jì)重秤（YHW-L01，英衡）、精密分析天平（瑞士Mettler Toledo 公司）、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士Buchi公司）、全自動(dòng)樣品快速研磨儀（上海凈業(yè)信發(fā)展有限公司）、AXIO Vert.A1 熒光倒置顯微鏡、ImageXpress Pico 自動(dòng)細(xì)胞成像系統(tǒng)和Cell ReporterXpress 自動(dòng)成像分析軟件（上海美谷分子儀器公司）、凝膠成像系統(tǒng)（Bio-Rad）。

2 方法

2.1 開心散提取物的制備

稱取人參、遠(yuǎn)志、石菖蒲、茯苓四種藥材共100 g，比例為3∶2∶2∶3，加入1000 mL水，回流提取2 h，過(guò)濾。重復(fù)上述回流提取過(guò)程并合并兩次回流提取液，減壓濃縮至濃度為1 g·mL-1。

2.2 CUMS模型建立及分組

動(dòng)物安置7 天以適應(yīng)環(huán)境，進(jìn)行體質(zhì)量與糖水偏嗜率測(cè)試，剔除數(shù)值異常小鼠。選取測(cè)試評(píng)分正常的小鼠80 只，隨機(jī)分為8 組，每組10 只。組別分別為空白組（Control）、模型組（Model）、開心散組（KXS）、氟西汀低量組（FXT-L）、開心散+氟西汀低量組（KXS+FXT-L）、氟西汀中劑量組（FXT-M）、開心散+氟西汀中劑量組（KXS+FXT-M）、氟西汀高劑量組（FXT-H）。空白組小鼠與模型小鼠分開飼養(yǎng)，不給予任何刺激。模型小鼠每天隨機(jī)給予不同的1-2 種刺激，刺激方式包括：禁水24 h、禁食24 h、斜籠、電擊、束縛4 h、濕籠、晝夜顛倒。每周進(jìn)行體質(zhì)量和糖水偏嗜測(cè)試，記錄小鼠體質(zhì)量變化與糖水偏嗜率。持續(xù)6 周，待抑郁表型出現(xiàn)后，對(duì)抑郁小鼠進(jìn)行灌胃給藥。動(dòng)物的分組和給藥劑量詳見表1。

表1 小鼠分組和給藥劑量

2.3 行為學(xué)檢測(cè)

采用糖水偏嗜實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)小鼠的抑郁樣行為，具體過(guò)程參照本課題組已發(fā)表過(guò)文章[17]。

2.4 ELISA法測(cè)定壓力應(yīng)激因子的表達(dá)

行為學(xué)測(cè)試結(jié)束后小鼠眼眶取血，靜置2 h 后離心2 次，20 min 后取上清。按照小鼠各ELISA 試劑盒所列步驟，測(cè)定小鼠血清中壓力應(yīng)激因子的水平。

處死小鼠快速剝?nèi)〈竽X海馬和下丘腦，用PBS 沖洗，迅速冷凍在-80℃冰箱中。使用精密天平每組稱取一定量組織，用PBS 溶液低溫研磨，制成10%的勻漿液。取上清，按照小鼠ELISA 試劑盒所列步驟，測(cè)定小鼠海馬和下丘腦組織中壓力應(yīng)激因子的水平。

2.5 腦片HE染色

小鼠行為學(xué)測(cè)試后，解剖受試動(dòng)物，取出完整大腦，用冰冷的生理鹽水沖洗，4%的多聚甲醛固定72 h。梯度蔗糖脫水，將固定的腦組織常規(guī)處理石蠟包埋，旋轉(zhuǎn)切片機(jī)切取5 μm 切片。切片用蘇木精染色10 min，蒸餾水洗2 次，于70%乙醇中分化20-30 s，伊紅復(fù)染10 min，蒸餾水洗2 次，梯度乙醇脫水，二甲苯透明后中性樹膠封片。光學(xué)顯微鏡下觀察小鼠海馬切片的病理情況，光學(xué)顯微鏡下觀察小鼠海馬區(qū)的凋亡情況。

2.6 腦片Nissl染色

將“2.5”項(xiàng)下所制得的石蠟切片用尼氏染色液染色10 min，蒸餾水洗2 次，梯度乙醇脫水，二甲苯透明后中性樹膠封片。光學(xué)顯微鏡下觀察小鼠海馬區(qū)神經(jīng)元的排列與數(shù)目以及尼氏小體破碎情況，光學(xué)顯微鏡下觀察小鼠海馬區(qū)的凋亡情況。

2.7 TUNEL檢測(cè)海馬區(qū)凋亡

將“2.5”項(xiàng)下所制得的石蠟切片脫蠟，根據(jù)TUNEL 試劑盒檢測(cè)步驟進(jìn)行檢測(cè)，熒光顯微鏡下觀察小鼠海馬區(qū)的凋亡情況。

2.8 蛋白免疫印跡法

行為學(xué)測(cè)試結(jié)束后，快速處死動(dòng)物并剝?nèi)『ｑR組織，PBS 沖洗，迅速冷凍于-80℃冰箱中。稱取一定量組織，RIPA 蛋白裂解液提取組織總蛋白，BCA 法測(cè)定總蛋白濃度，于98℃，5 min 高溫變性。制備10%聚丙烯酰胺凝膠，上樣后90 V 2 h 電泳，300 mA 轉(zhuǎn)膜2 h，5% BSA 封閉，一抗（Caspase-3 Antibody、Caspase-9 Antibody、β-actin Monoclonal Antibody），抗體比例1:3000。4℃過(guò)夜，孵育二抗（Anti-rabbit IgG），二抗比例1:10 000，室溫50min。ECL試劑盒顯色。

2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理與數(shù)據(jù)表示

采用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA）。P<0.05 為有差異；P<0.01 為有極顯著差異。

3 結(jié)果

3.1 開心散聯(lián)合氟西汀改善抗抑郁效用評(píng)價(jià)

小鼠CUMS 抑郁模型建立成功后，按照表1 給藥方案對(duì)動(dòng)物進(jìn)行灌胃給藥。開心散組給藥劑量根據(jù)臨床常用生藥材劑量進(jìn)行折算；氟西汀低劑量組參照氟西汀臨床常用劑量的1/2 進(jìn)行設(shè)置；氟西汀中劑量組參照氟西汀臨床常用劑量進(jìn)行設(shè)置；氟西汀高劑量組參照氟西汀臨床使用的最高劑量進(jìn)行設(shè)置。

給藥后第3 天，測(cè)試糖水偏嗜率評(píng)價(jià)動(dòng)物抑郁樣行為。與空白組小鼠相比，模型組小鼠糖水偏嗜率顯著降低（P<0.01）。與模型組小鼠相比，開心散組、氟西汀低劑量組以及中劑量組小鼠的糖水偏嗜率與模型組相比未見顯著性差異，氟西汀高劑量組糖水偏嗜率顯著升高。聯(lián)用后，開心散聯(lián)合氟西汀低劑量組與中劑量組糖水偏嗜率相比模型組顯著升高（P<0.05），其中開心散聯(lián)合氟西汀中劑量組的作用趨勢(shì)與氟西汀高劑量組相似（P<0.01）。給藥第7 天后，與空白組小鼠相比，模型組小鼠糖水偏嗜率顯著降低（P<0.01）。與模型組小鼠相比，開心散組、氟西汀中劑量組與高劑量組小鼠糖水偏嗜率顯著上升（P<0.05），氟西汀低劑量組仍無(wú)顯著差異。聯(lián)合用藥組中，開心散聯(lián)合氟西汀低劑量組小鼠糖水偏嗜率顯著提高且效用與氟西汀中劑量組相似（P<0.01）；開心散聯(lián)合氟西汀中劑量組小鼠糖水偏嗜率顯著提高且效用與氟西汀高劑量組相似（P<0.01）。上述結(jié)果表明，開心散與氟西汀聯(lián)用顯著改善模型小鼠抑郁樣行為，可提升單用氟西汀抗抑郁起效時(shí)間，同時(shí)可降低氟西汀抗抑郁用量（見圖1）。

圖1 開心散聯(lián)合氟西汀對(duì)CUMS小鼠行為學(xué)的影響（n=7）

3.2 開心散聯(lián)合氟西汀對(duì)小鼠血清中壓力應(yīng)激軸相關(guān)因子調(diào)控的影響

采用ELISA 法測(cè)定小鼠血清中“下丘腦-垂體-海馬”壓力應(yīng)激軸（Hypothalamus-Pituitary gland-Adrenal gland，HPA）軸調(diào)控因子CRF、ACTH 和Cortisol的表達(dá)。與空白組相比，模型組小鼠血清中CRF、ACTH 和Cortisol 的表達(dá)顯著上升（P<0.01）。與模型組相比，開心散顯著下調(diào)模型小鼠血清中CRF、ACTH和Cortisol 的表達(dá)（P<0.01）；氟西汀低劑量組除下調(diào)ACTH 表達(dá)外（P<0.05），CRF 與Cortisol 表達(dá)未見顯著性差異；氟西汀中、高劑量組則顯著下調(diào)3種壓力因子表達(dá)（P<0.01）。聯(lián)合用藥組中，開心散聯(lián)合氟西汀低劑量組顯著下調(diào)3種壓力因子表達(dá)且效用接近氟西汀中劑量組（P<0.01）；開心散聯(lián)合氟西汀中劑量組顯著下調(diào)3 種壓力因子表達(dá)且效用接近氟西汀高劑量組（P<0.01），提示其抗抑郁作用可能與抑制壓力應(yīng)激HPA軸激活相關(guān)（見圖2）。

3.3 開心散聯(lián)合氟西汀對(duì)小鼠下丘腦和海馬組織中壓力應(yīng)激軸相關(guān)因子調(diào)控的影響

采用ELISA 法測(cè)定小鼠下丘腦中HPA 軸調(diào)控因子CRF和海馬中Cortisol的表達(dá)。與空白組相比，模型組小鼠CRF 和和Cortisol 的表達(dá)顯著上升（P<0.01）。與模型組相比，開心散顯著下調(diào)模型小鼠下丘腦中CRF 和海馬中Cortisol 的表達(dá)（P<0.01）；氟西汀低劑量組對(duì)上述指標(biāo)表達(dá)未見顯著性差異，而中劑量與低劑量組可顯著下調(diào)上述指標(biāo)（P<0.01）。聯(lián)合用藥組中，開心散聯(lián)合氟西汀低劑量組可顯著下調(diào)兩種壓力因子的表達(dá)且效用接近氟西汀中劑量組（P<0.01），開心散聯(lián)合氟西汀中劑量組具有相似的作用趨勢(shì)且效用接近氟西汀高劑量組（P<0.01），提示其抗抑郁作用可能與抑制壓力應(yīng)激HPA軸激活相關(guān)（見圖3）。

圖3 開心散聯(lián)合氟西汀對(duì)CUMS小鼠下丘腦和海馬壓力因子的影響（n=7）

3.4 開心散聯(lián)合氟西汀對(duì)CUMS 小鼠海馬組織結(jié)構(gòu)的影響

分離并獲取受試動(dòng)物全腦固定后切片HE 染色后于顯微鏡下觀察開心散與氟西汀聯(lián)合用藥對(duì)CUMS小鼠海馬組織結(jié)構(gòu)的影響。與空白組相比，模型組小鼠海馬齒狀回區(qū)域細(xì)胞排列松散、細(xì)胞核固縮、細(xì)胞空泡化現(xiàn)象明顯，出現(xiàn)明顯損傷現(xiàn)象。與模型組相比，氟西汀低劑量組未明顯改善上述損傷現(xiàn)象。聯(lián)合用藥組顯著改善了上述損傷現(xiàn)象，且開心散聯(lián)合氟西汀低劑量組效用接近氟西汀中劑量組，開心散聯(lián)合氟西汀中劑量組效用接近氟西汀高劑量組，提示聯(lián)合用藥具有改善小鼠海馬損傷的作用（見圖4）。

圖4 開心散聯(lián)合氟西汀對(duì)CUMS小鼠海馬切片HE染色的影響（n=6）

取切片進(jìn)行Nissl 染色，鏡下觀察可以發(fā)現(xiàn)，與空白組相比，模型組小鼠的海馬齒狀回區(qū)域細(xì)胞排列紊亂，尼氏體顯著減少（P<0.05），說(shuō)明神經(jīng)元的活力降低。與模型組相比，開心散組與氟西汀低劑量組對(duì)尼式體的影響未見顯著性；聯(lián)合用藥組顯著提高尼式體的數(shù)量（P<0.05），且開心散聯(lián)合氟西汀低劑量組效用優(yōu)于氟西汀中劑量組，開心散聯(lián)合氟西汀中劑量組效用優(yōu)于氟西汀高劑量組，提示聯(lián)合用藥可改善海馬神經(jīng)元損傷（見圖5）。

圖5 開心散聯(lián)合氟西汀對(duì)CUMS小鼠海馬區(qū)腦片Nissl染色的影響（n=6）

3.5 開心散聯(lián)合氟西汀對(duì)CUMS 小鼠海馬區(qū)細(xì)胞凋亡的影響

分離并獲取受試動(dòng)物全腦固定后切片TUNEL 染色后于顯微鏡下觀察開心散與氟西汀聯(lián)合用藥對(duì)CUMS 小鼠海馬區(qū)細(xì)胞凋亡的影響。與空白組相比，模型組海馬區(qū)凋亡顯著增多（P<0.01）。與模型組相比，開心散顯著減少模型動(dòng)物海馬區(qū)細(xì)胞凋亡（P<0.01）；氟西汀低劑量組具有減少海馬區(qū)細(xì)胞凋亡趨勢(shì)但未見顯著性差異，而其中劑量組與高劑量組具有顯著性差異（P<0.01）。聯(lián)合用藥組可顯著減少模型動(dòng)物海馬區(qū)細(xì)胞凋亡（P<0.01），開心散聯(lián)合氟西汀低劑量組效用接近氟西汀中劑量組，聯(lián)合氟西汀中劑量組效用則接近氟西汀高劑量組，提示聯(lián)合用藥可抑制慢性壓力應(yīng)激導(dǎo)致的海馬區(qū)細(xì)胞凋亡（見圖6）。

圖6 開心散聯(lián)合氟西汀對(duì)CUMS小鼠海馬區(qū)凋亡的影響（n=6）

3.6 開心散聯(lián)合氟西汀對(duì)CUMS 小鼠海馬凋亡蛋白表達(dá)的影響

分離并獲取受試動(dòng)物海馬，采用Western blotting法考察小鼠海馬中凋亡蛋白Caspase-9 和Caspase-3的表達(dá)。與空白組相比，模型組小鼠海馬中Caspase-9 和Caspase-3 的表達(dá)顯著上升（P<0.01）。與模型組相比，開心散顯著下調(diào)模型小鼠海馬中Caspase-9 和Caspase-3 的表達(dá)（P<0.01）；氟西汀低劑量組下調(diào)Caspase-9表達(dá)（P<0.05）而下調(diào)Caspase-3未見顯著性差異，其中劑量組與高劑量組均可顯著下調(diào)兩者的表達(dá)（P<0.01）。聯(lián)合用藥組中，開心散聯(lián)合氟西汀低劑量組顯著下調(diào)兩種凋亡蛋白的表達(dá)且效用接近氟西汀中劑量組（P<0.01），其聯(lián)合氟西汀中劑量組下調(diào)的效用接近氟西汀高劑量組（P<0.01），提示開心散與氟西汀聯(lián)合用藥可抑制凋亡相關(guān)信號(hào)通路的激活（見圖7）。

圖7 開心散聯(lián)合氟西汀對(duì)CUMS模型小鼠海馬凋亡蛋白的影響（n=3）

4 討論

抑郁癥的發(fā)病原因錯(cuò)綜復(fù)雜，除最經(jīng)典的單胺類假說(shuō)外還有神經(jīng)炎癥、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)、神經(jīng)傳導(dǎo)、腸道菌群等諸多誘導(dǎo)因素，這些因素共同作用導(dǎo)致抑郁癥的發(fā)生發(fā)展。其中抑郁患者的神經(jīng)-內(nèi)分泌功能的紊亂，尤其是慢性壓力應(yīng)激導(dǎo)致的HPA 軸激活與海馬組織凋亡進(jìn)而導(dǎo)致抑郁情緒的發(fā)生是公認(rèn)的抑郁癥病理機(jī)制[18-20]。機(jī)體處于應(yīng)激狀態(tài)時(shí)，下丘腦釋放促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（CRH），CRH 刺激垂體分泌ACTH，ACTH 又刺激腎上腺皮質(zhì)釋放糖皮質(zhì)激素（GC）隨體循環(huán)入腦。正常人GC水平升高能夠通過(guò)海馬的糖皮質(zhì)激素受體（Glucocorticoid receptor，GR）對(duì)下丘腦與垂體進(jìn)行負(fù)反饋調(diào)節(jié)，抑制CRH 分泌并抑制HPA 軸過(guò)度激活。若HPA 軸持續(xù)過(guò)度激活則會(huì)導(dǎo)致腦內(nèi)GC 大量堆積，使海馬組織細(xì)胞凋亡、體積變小，最終導(dǎo)致HPA 軸的負(fù)反饋調(diào)控機(jī)制喪失而產(chǎn)生海馬組織損傷。而Ramezani 等[21]使用LONI 概率腦圖譜對(duì)多個(gè)抑郁癥患者的腦部影像學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)健康人群和抑郁人群在海馬體和左右海馬旁回處存在較大的差異。這與本研究中抑郁小鼠的海馬區(qū)存在結(jié)構(gòu)的變化、神經(jīng)元中尼氏體的減少和神經(jīng)元的凋亡等發(fā)現(xiàn)相符。

氟西汀是典型的5-HT 再攝取抑制劑，其副作用和不良反應(yīng)主要有神經(jīng)與精神系統(tǒng)副作用、消化系統(tǒng)副作用以及性功能障礙，發(fā)生率在10%-23%[22]，主要由氟西汀自身抑制5-HT 再攝取的藥理特性導(dǎo)致。由于5-HT 的再攝取被氟西汀抑制,突觸間隙內(nèi)5-HT 增多，過(guò)度激動(dòng)5-HT3和5-HT4受體則導(dǎo)致厭食、口干、腸胃脹氣、惡心嘔吐、便秘、腹瀉等消化系統(tǒng)的副作用[23-24]；過(guò)度激動(dòng)5-HT2受體則產(chǎn)生勃起困難、性欲減退或消失、性快感缺失、性高潮延遲或缺失、射精困難等性功能障礙[25]。中藥復(fù)方治療抑郁與西藥治療相比具有多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)起效的特點(diǎn)，副作用相對(duì)較小，因此將中藥復(fù)方與氟西汀聯(lián)用以減少氟西汀用量成為臨床喜用的抗抑郁用藥方式。其中中藥開心散作為臨床驗(yàn)證有效的治療輕度與中度抑郁癥的抗抑郁經(jīng)典名方，并且實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)其可以通過(guò)增加神經(jīng)遞質(zhì)與神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子表達(dá)，抑制HPA 軸過(guò)度激活，調(diào)控“腦-腸軸”干預(yù)神經(jīng)元炎性損傷等多種途徑發(fā)揮抗抑郁作用[26-27]。在本研究中也發(fā)現(xiàn)開心散與氟西汀聯(lián)合用藥可以有效抑制慢性壓力應(yīng)激導(dǎo)致的小鼠HPA 軸激活與干預(yù)海馬凋亡損傷，同時(shí)開心散可提升氟西汀抗抑郁起效時(shí)間并減少氟西汀的用量，發(fā)揮增效作用。

開心散方中藥味人參可大補(bǔ)元?dú)?、健脾益肺、生津止渴、安神益智，其中人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1均具有強(qiáng)大的神經(jīng)保護(hù)作用[28-29]；茯苓可利水滲濕、健脾和胃、養(yǎng)心安神，其所含三萜類成分茯苓酸具有緩解神經(jīng)炎癥、抗氧化應(yīng)激[30]的作用；遠(yuǎn)志鎮(zhèn)靜催眠、交通心腎，石菖蒲化濕開竅，其中遠(yuǎn)志口山酮Ⅲ和細(xì)辛醚類成分均可顯著提高壓力應(yīng)激模型下細(xì)胞的存活率，是通過(guò)HPA 軸進(jìn)行調(diào)控的重要成分[26,31]；同時(shí)孫宇飛[32]通過(guò)藥代動(dòng)力學(xué)等手段研究發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)志和石菖蒲可以通過(guò)中藥配伍后的協(xié)同作用促進(jìn)人參與茯苓兩味藥的治療效果。在未來(lái)的研究中，將深入研究開心散中效用成分與氟西汀聯(lián)用后增效的作用機(jī)制，為中西結(jié)合抗抑郁提供更多的科學(xué)依據(jù)。