張慧雅,李慧娟

西電集團(tuán)醫(yī)院婦科,陜西西安 710077

局部晚期宮頸癌(LACC)是指腫瘤最大徑≥4 cm的ⅠB3期和ⅡA2期宮頸癌[1]。LACC患者手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)過(guò)高,臨床上通常不能直接進(jìn)行外科手術(shù)治療。新輔助化療(NACT)可縮小腫瘤體積、降低術(shù)后切緣陽(yáng)性率、消除亞臨床病灶,為L(zhǎng)ACC患者提供手術(shù)機(jī)會(huì)[2]。然而,臨床實(shí)踐中并非所有LACC患者均能從NACT治療中獲益,NACT治療無(wú)效者甚至耽誤了最佳治療時(shí)間,導(dǎo)致預(yù)后更差[3]。因此,開(kāi)展NACT前準(zhǔn)確評(píng)估LACC患者NACT療效具有重要意義。膜聯(lián)蛋白A1(ANXA1)又稱脂皮質(zhì)素Ⅰ,具有抗炎、促進(jìn)細(xì)胞增殖和凋亡等多種功能,已被證實(shí)與鱗狀細(xì)胞癌[4]、卵巢癌[5]化療敏感性有關(guān)。熱休克蛋白(Hsp)70和HSP90α是一類(lèi)廣泛的高度保守的蛋白,與腫瘤細(xì)胞的惡性增殖、分化、凋亡等生物學(xué)行為有密切的關(guān)系[6]。另有研究表明Hsp70與食管鱗癌[7]、Hsp90α與肺癌[8]化療敏感性密切相關(guān)。本研究擬探討血清ANXA1、Hsp70、Hsp90α與LACC患者NACT療效的關(guān)系,以期為L(zhǎng)ACC患者的臨床治療提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2020年1月至2023年1月在本院進(jìn)行NACT治療的LACC患者157例為研究對(duì)象。患者年齡37～80歲,平均(51.66±9.54)歲;體質(zhì)量指數(shù)(BMI)為18.27～27.43 kg/m2,平均(22.90±1.42)kg/m2;絕經(jīng)情況:絕經(jīng)112例,未絕經(jīng)45例;國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟大會(huì)(FIGO)分期:ⅠB3期89例,ⅡA2期68例;分化程度:低/未分化69例,高/中分化88例;病理類(lèi)型:鱗癌50例,非鱗癌107例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移71例;合并糖尿病52例,高血壓46例,高脂血癥29例;腫瘤最大徑4.0～7.3 cm,平均(5.84±0.81)cm;化療前糖類(lèi)抗原125(CA125)水平為(54.12±3.57)U/mL,糖類(lèi)抗原199(CA199)水平為(40.66±4.79)U/mL,血紅蛋白(Hb)水平為(122.12±11.94)g/L,血小板計(jì)數(shù)(PLT)水平為(232.41±22.07)×109/L。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合LACC診斷標(biāo)準(zhǔn)[9],腫瘤最大徑≥4 cm,病理學(xué)檢查確診為原發(fā)性宮頸癌,FIGO分期[10]為ⅠB3期和ⅡA2期;(2)入組前未接受任何相關(guān)治療;(3)符合NACT適應(yīng)證,在本院完成完整的NATC;(4)臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并其他惡性腫瘤者;(2)有腫瘤細(xì)胞遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者;(3)合并心、腦、腎等重要臟器功能障礙者;(4)合并血液系統(tǒng)疾病、急慢性感染、免疫系統(tǒng)疾病者。所有患者均簽署知情同意書(shū),本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)(審批號(hào):20191206-03)。

1.2方法

1.2.1血清ANXA1、Hsp70、Hsp90α測(cè)定 患者入院后均采集空腹靜脈血5 mL,3 000 r/min離心15 min,離心半徑10 cm,取上清液于-80 ℃保存待測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)血清ANXA1、Hsp70、Hsp90α水平。人ANXA1 ELISA試劑盒(規(guī)格96T,貨號(hào)EKU02422)購(gòu)于艾美捷科技有限公司,人HSP70 ELISA試劑盒(規(guī)格96T,貨號(hào)LM-HSP70-Hu)、人HSP90α ELISA試劑盒(規(guī)格96T,貨號(hào)LM-HSP90-Hu)購(gòu)于上海聯(lián)邁生物工程有限公司。嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,于450 mm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度(A)值,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算血清ANXA1、Hsp70、Hsp90α水平。

1.2.2NACT治療方法 患者入院確診后給予標(biāo)準(zhǔn)NACT方案進(jìn)行治療,即紫杉醇聯(lián)合順鉑治療。具體用藥方案:紫杉醇(紫杉醇注射液,揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字H20053001,規(guī)格5 mL∶30 mg)175 mg/m2,1次/d,靜脈滴注;順鉑(注射用順鉑,齊魯制藥有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字H37021356,規(guī)格30 mg)75 mg/m2,1次/d,靜脈滴注。以21 d為1個(gè)化療周期,計(jì)劃治療3個(gè)周期,具體化療周期數(shù)由化療醫(yī)師根據(jù)患者的具體情況適當(dāng)調(diào)整。

1.3NACT療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 于化療3個(gè)周期后進(jìn)行計(jì)算機(jī)斷層掃描(CT)、磁共振成像(MRI)和胸部X線片檢查,基于影像學(xué)檢查結(jié)果,根據(jù)實(shí)體腫瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)(RECIST 1.1)[11]評(píng)價(jià)NACT療效。具體標(biāo)準(zhǔn):完全緩解(CR)為全部腫瘤病灶(包括靶病灶和非靶病灶)消失并維持4周,所有淋巴結(jié)短徑必須<10 mm;部分緩解(PR)為所有靶病灶最大徑之和與基線相比縮小≥30%并維持4周,但未達(dá)到CR;疾病進(jìn)展(PD)為病灶(或靶病灶)最大徑之和較最小時(shí)增加≥20%,且最大徑增加的絕對(duì)長(zhǎng)度至少達(dá)到5 mm,或出現(xiàn)1個(gè)或多個(gè)新病灶,非靶病灶明顯進(jìn)展;疾病穩(wěn)定(SD)為介于PR與PD之間。將CR和PR評(píng)價(jià)為NACT有效,納入有效組,將SD和PD評(píng)價(jià)為NACT無(wú)效,納入無(wú)效組。

2 結(jié) 果

2.1兩組血清ANXA1、Hsp70、Hsp90α水平比較 157例LACC患者化療3個(gè)周期后,CR 37例(23.57%),PR 89例(56.69%),SD 22例(14.01%),PD 9例(5.73%)。將療效為CR和PR的126例患者納入有效組,將療效為SD和PD的31例患者納入無(wú)效組。有效組化療前血清ANXA1水平高于無(wú)效組,血清Hsp70、Hsp90α水平低于無(wú)效組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組血清ANXA1、Hsp70、Hsp90α水平比較

2.2有效組和無(wú)效組臨床資料比較 有效組FIGO分期為ⅡA2期患者占比、低/未分化患者占比、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者占比,以及化療前CA125、CA199水平低于無(wú)效組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);兩組年齡,BMI,絕經(jīng)情況,病理類(lèi)型,合并糖尿病、高血壓、高脂血癥患者比例,腫瘤最大徑,化療前Hb、PLT水平比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 有效組和無(wú)效組臨床資料比較或n(%)]

2.3LACC患者NACT療效影響因素的多因素Logistic回歸分析 以LACC患者NACT療效為因變量(賦值:有效=0,無(wú)效=1),以血清ANXA1、Hsp70、Hsp90α、CA125、CA199水平(賦值:連續(xù)性變量原值輸入)及FIGO分期(賦值:ⅠB3期=0,ⅡA2期=1)、分化程度(賦值:高/中分化=0,低/未分化=1)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(賦值:無(wú)=0,有=1)進(jìn)行多因素Logistic回歸分析。結(jié)果顯示,血清Hsp70水平升高、血清Hsp90α水平升高、FIGO分期為ⅡA2期和CA199水平升高是影響LACC患者NACT療效的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05),ANXA1水平升高是保護(hù)因素(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 LACC患者NACT療效影響因素的多因素Logistic回歸分析

2.4血清ANXA1、Hsp70、Hsp90α預(yù)測(cè)LACC患者NACT療效的價(jià)值 血清ANXA1、Hsp70、Hsp90α及3項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)LACC患者NACT無(wú)效的曲線下面積(AUC)分別為0.836、0.789、0.717和0.941,聯(lián)合檢測(cè)優(yōu)于各指標(biāo)單獨(dú)檢測(cè)。見(jiàn)圖1、表4。

圖1 血清ANXA1、Hsp70、Hsp90α單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)LACC患者NACT無(wú)效的ROC曲線

表4 血清ANXA1、Hsp70、Hsp90α預(yù)測(cè)LACC患者NACT無(wú)效的效能分析

3 討 論

近年來(lái),隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展,NACT為惡性腫瘤的治療提供了新思路,已被廣泛應(yīng)用于乳腺癌、宮頸癌、肺癌等各類(lèi)腫瘤的治療中[12]。理論上,NACT可為分期過(guò)高、腫瘤體積過(guò)大而不適宜手術(shù)治療的患者提供手術(shù)機(jī)會(huì),從而改善患者生存及預(yù)后[13]。然而臨床實(shí)踐中,部分患者對(duì)NATC不敏感,導(dǎo)致NACT治療無(wú)效。目前關(guān)于NACT無(wú)效的具體機(jī)制尚不十分明確,多認(rèn)為與藥物失活、藥物靶點(diǎn)改變、藥物流出、細(xì)胞凋亡及DNA損傷修復(fù)等多種因素有關(guān)[14]。

ANXA1是鈣離子依賴的磷脂結(jié)合蛋白,其基因定位于人染色體9q12～q21.2,由13個(gè)外顯子和12個(gè)內(nèi)含子組成,包括保守的C末端蛋白核心結(jié)構(gòu)和多功能的N末端“頭部”,已被證實(shí)與非小細(xì)胞肺癌、卵巢癌等多種腫瘤耐藥性有關(guān)[15]。Hsp是一種分布廣泛的具有高度保守性的應(yīng)激蛋白,具有分子伴侶活性,在防止蛋白聚集、調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)平衡中扮演重要角色,按照蛋白相對(duì)分子質(zhì)量大小可分為Hsp110、Hsp90(包括Hsp90α和Hsp90β)、Hsp70、Hsp60以及小分子Hsp 5類(lèi),其中Hsp70和Hsp90α易受應(yīng)激狀態(tài)的誘導(dǎo),在多種腫瘤中呈高表達(dá)狀態(tài),其水平與腫瘤臨床分期、分化程度、轉(zhuǎn)移等病理因素有關(guān)[16]。在LACC腫瘤環(huán)境下,Hsp70和Hsp90α大量分泌,腫瘤惡性程度越高,其分泌越多,在血清中水平越高。

本研究顯示,化療前有效組血清ANXA1水平高于無(wú)效組,血清Hsp70、Hsp90α水平低于無(wú)效組,血清Hsp70、Hsp90α水平升高是影響LACC患者NACT療效的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,而血清ANXA1水平升高是保護(hù)因素。這表明血清ANXA1、Hsp70、Hsp90α與LACC患者NATC療效有關(guān)。ANXA1影響LACC患者NATC療效的可能原因如下:(1)ANXA1具有鈣離子調(diào)節(jié)的胞吐及促囊泡聚合作用,可通過(guò)加強(qiáng)囊泡的聚合以及藥物填充囊泡影響藥物轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞內(nèi)而發(fā)揮作用[17],進(jìn)而影響LACC患者NACT敏感性;(2)ANXA1轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞核內(nèi)通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的去磷酸化,介導(dǎo)細(xì)胞凋亡[18],當(dāng)ANXA1表達(dá)下調(diào)時(shí)腫瘤細(xì)胞凋亡能力降低,增殖作用強(qiáng)化,進(jìn)而引起NACT耐藥。Hsp70影響LACC患者NATC療效的可能原因如下:Hsp70能通過(guò)抑制細(xì)胞色素C與凋亡酶激活因子結(jié)合,阻斷功能性凋亡小體的形成,干擾含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶激活,抑制細(xì)胞凋亡過(guò)程[19],當(dāng)Hsp70表達(dá)上調(diào)時(shí),細(xì)胞凋亡被抑制,增殖能力增強(qiáng),誘發(fā)NATC不敏感。Hsp90α影響LACC患者NATC療效的可能原因如下: Hsp90α是腫瘤特異性抗原之一,可通過(guò)與基質(zhì)金屬蛋白酶2結(jié)合或促進(jìn)表皮生長(zhǎng)因子受體2活化,增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移能力,腫瘤細(xì)胞可利用Hsp90α維持自身基因免于發(fā)生錯(cuò)誤折疊,從而增強(qiáng)NACT耐藥性[20]。

進(jìn)一步ROC曲線分析結(jié)果顯示,血清ANXA1、Hsp70、Hsp90α及3項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)LACC患者NACT無(wú)效的AUC分別為0.836、0.789、0.717和0.941,3項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)LACC患者NACT無(wú)效的效能優(yōu)于各項(xiàng)指標(biāo)單獨(dú)檢測(cè)。導(dǎo)致LACC患者NACT無(wú)效的機(jī)制是復(fù)雜且多方面的,ANXA1、Hsp70、Hsp90α可分別從藥物運(yùn)轉(zhuǎn)、腫瘤細(xì)胞凋亡以及腫瘤細(xì)胞侵襲與遷移方面反映耐藥風(fēng)險(xiǎn),因而3項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)能更好地反映患者NACT療效,提高預(yù)測(cè)效能。

綜上所述,當(dāng)LACC患者血清ANXA1水平較低,血清Hsp70、Hsp90α水平較高時(shí),NACT耐藥風(fēng)險(xiǎn)增大。在LACC患者開(kāi)展NACT治療前通過(guò)檢測(cè)血清ANXA1、Hsp70、Hsp90α水平有助于評(píng)價(jià)NACT無(wú)效的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn),具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。