郭會(huì)敏, 安靜霞, 李輝

邯鄲市中心醫(yī)院心血管內(nèi)科(河北邯鄲 056000)

急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)發(fā)病急且病死率高,逐漸成為危害人類生命健康的危重癥冠心病之一[1]。臨床早期常用重建治療開通患者的梗死部位,保證患者近遠(yuǎn)期預(yù)后。目前,急診經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療(percutaneous coronary intervention,PCI)已成為AMI的首選治療方案,但高血栓負(fù)荷狀態(tài)下,極易導(dǎo)致AMI患者PCI后出現(xiàn)慢血流、無復(fù)流等不良情況,所以需要給予患者相應(yīng)藥物干預(yù),避免血栓發(fā)生[2-3]。雖然PCI目前廣泛用于AMI患者的治療,但患者在治療后極易發(fā)生不良心血管事件(majoradverse cardiac events,MACE),增加了治療后的死亡風(fēng)險(xiǎn)[4]。肌紅蛋白(myoglobin,Myo)主要存在于心肌細(xì)胞中,是一種小分子蛋白質(zhì),當(dāng)心肌細(xì)胞受損時(shí),相較于常見心臟標(biāo)志物,如肌鈣蛋白,Myo可更快地釋放到血液中,表達(dá)快速升高[5]。生長停滯特異性蛋白6(growth arrest specific protein 6,Gas6)是維生素K依賴性蛋白家族成員,其與氨酸激酶成員結(jié)合,可共同發(fā)揮各種生物學(xué)作用[6]。SRY相關(guān)高遷移率族蛋白(SRY-related HMG Box,SOX),是機(jī)體中一種轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子,其結(jié)構(gòu)域高度保守,當(dāng)其與指定DNA序列結(jié)合時(shí),可適當(dāng)將靶基因激活,以產(chǎn)生各種生物學(xué)功能,其中具有代表性的SOX9 mRNA蛋白還參與心肌細(xì)胞增殖,當(dāng)其表達(dá)降低時(shí),可能會(huì)在一定程度上導(dǎo)致心肌細(xì)胞逐漸下降,對(duì)心肌細(xì)胞正常運(yùn)行有不良影響[7]。但就目前而言,關(guān)于Myo、Gas6、SOX9 mRNA在AMI患者中變化研究較少,基于此,本研究將AMI作為研究對(duì)象,分析患者M(jìn)yo、Gas6、SOX9 mRNA的表達(dá)意義及在PCI術(shù)后聯(lián)合檢測對(duì)預(yù)后評(píng)估價(jià)值,旨為AMI患者的臨床評(píng)估和診治提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2020年1月至2021年6月收治的166例AMI患者作為研究組,其中包括男105例,女61例;年齡51～79歲,平均(62.96±7.64)歲;根據(jù) 是否發(fā)生心力衰竭,包括57例無心力衰竭患者,54例輕中度心力衰竭患者,55例重度心力衰竭患者;合并癥如下:73例合并高血壓,55例糖尿病,27例合并高血脂;體質(zhì)指數(shù)(body mass index,BMI)19～26 kg/m2,平均(23.63±3.19)kg/m2;同時(shí)選取在該時(shí)間段內(nèi),在本院接受體檢且健康人員,將其納入對(duì)照組,共計(jì)90例,其中包括男67例,女23例;年齡51～78歲,平均(63.19±6.75)歲;BMI 19～27 kg/m2,平均(23.89±3.27)kg/m2。兩組性別、年齡構(gòu)成比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核并批準(zhǔn)(倫理批號(hào):TJIRB20190502)。

納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合《急性心肌梗死診斷和治療指南》[8]診斷標(biāo)準(zhǔn);(2)患者均行PCI術(shù);(3)發(fā)病后24 h內(nèi)完成PCI手術(shù);(4)近1個(gè)月內(nèi)無AMI病史;(5)患者及家屬均簽署知情同意書。

排除標(biāo)準(zhǔn):(1)住院期間,實(shí)行急診PCI;(2)活動(dòng)時(shí),可能發(fā)生出血風(fēng)險(xiǎn);(3)合并肝腎功能不全、惡性腫瘤等疾病;(4)腦血管病急性期;(5)處于妊娠期或哺乳期;(6)存在自身免疫功能疾病。

1.2 方法

1.2.1 Myo、Gas6水平檢測 分別采集對(duì)照組和研究組的清晨空腹外周靜脈血5 mL,并送至檢驗(yàn),對(duì)其行3 000 r/min轉(zhuǎn)速離心處理,離心半徑為10 cm;15 min后,將其分離并取得上清液置于-80℃冰箱內(nèi),等待備檢。其中Myo和Gas6水平的檢測均采用酶聯(lián)免疫吸附操作,首先將完成凋亡的細(xì)胞行裂解操作,隨后對(duì)其行高速離心操作,完成后可發(fā)現(xiàn)其上清液有核小體,將吸附后的蛋白體加入上清液內(nèi),使其兩者之間DNA抗體與DNA發(fā)生結(jié)合;加酶的底物,測光吸收制,試劑盒購自北京中杉金橋生物,詳細(xì)步驟按照說明書進(jìn)行操作。

1.2.2 SOX9 mRNA水平檢測 使用肝素抗凝管收集所有納入研究人員外周靜脈血5 mL,將其單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行分離并應(yīng)用RNA提取并懸浮,完成后將其置于-80℃冰箱,待測SOX9 mRNA含量。采用SOX9 mRNA分離試劑盒(上海瑞番生物科技)提取所需總RNA,詳細(xì)步驟按照說明書進(jìn)行,再使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將cDNA合成,合成PCR引物,將反應(yīng)體系為每個(gè)樣品設(shè)3個(gè)重復(fù),循環(huán)條件為95 ℃。反應(yīng)條件為95 ℃和60 ℃下分別循環(huán)30 s、95 ℃下預(yù)變性3 min,并將60 ℃的溫度下時(shí)間延長至30 s退火,并將72 ℃延伸至60 s,共計(jì)39個(gè)循環(huán)。引物序列為上游5′-TCGTGGGTCGTGTCTGGTGTTGC-3′,下游5′-GCAGAGTCCGAGGTATTC-3′;以GAPDH作為SOX9 mRNA歸一化內(nèi)參基因,內(nèi)參上游5′-CAGTGCAGGGTCCGAGG-3′,下游5′-TCGCAGGGTCCGAGGTATTC-3′。

1.2.3 預(yù)后分組 根據(jù)患者住院期間是否發(fā)生MACCE將研究組患者分為MACCE組和非MACCE組,MACCE是指全因死亡、腦血管事件、任何MI和任何血運(yùn)重建的復(fù)合事件,主要包括嚴(yán)重心律失常、心室顫動(dòng)、心源性死亡等。

1.3 觀察指標(biāo) (1)對(duì)比研究組和對(duì)照組Myo、Gas6、SOX9 mRNA表達(dá)情況;(2)Myo、Gas6、SOX9 mRNA在AMI患者PCI術(shù)前后中表達(dá)情況;(3)分析MACCE組和非MACCE組Myo、Gas6、SOX9 mRNA表達(dá)情況;(4)觀察患者預(yù)后隨訪6個(gè)月內(nèi)發(fā)生MACCE的情況,根據(jù)預(yù)后是否發(fā)生MACCE分組,分為MACCE組和非MACCE組,單因素分析兩組資料臨床差異;(5)分析Myo、Gas6、SOX9 mRNA聯(lián)合對(duì)AMI預(yù)后評(píng)估價(jià)值。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)照組和研究組Myo、Gas6、SOX9 mRNA表達(dá)差異 研究組Myo和Gas6明顯高于對(duì)照組,SOX9 mRNA表達(dá)明顯低于對(duì)照組(P<0.05),見表1。

表1 對(duì)照組和研究組Myo、Gas6、SOX9 mRNA表達(dá)差異對(duì)比

2.2 對(duì)比Myo、Gas6、SOX9 mRNA在AMI患者PCI術(shù)前后中表達(dá)情況 術(shù)后研究組患者M(jìn)yo、Gas6表達(dá)相較術(shù)前均明顯降低,SOX9 mRNA明顯升高(P<0.05),見表2。

表2 Myo、Gas6、SOX9 mRNA在AMI患者PCI術(shù)前后對(duì)比

2.3 分析MACCE組和非MACCE組Myo、Gas6、SOX9 mRNA表達(dá)情況 對(duì)患者行6個(gè)月的隨訪,發(fā)現(xiàn)其中30例患者發(fā)生MACCE,占比18.07%,未發(fā)生MACCE患者有136例,占比81.93%;MACCE組Myo和Gas6明顯高于非MACCE組,SOX9 mRNA表達(dá)明顯低于非MACCE組(P<0.05),見表3。

表3 MACCE組和非MACCE組Myo、Gas6、SOX9 mRNA表達(dá)差異對(duì)比

2.4 單因素分析MACCE組和非MACCE組臨床因素差異 MACCE組和非MACCE患者年齡、腦鈉肽(BNP)、高敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)和術(shù)后出血存在顯著差異,主要表現(xiàn)為MACCE組年齡、BNP、hs-CRP表達(dá)和術(shù)后出血占比明顯高于非MACCE組(P<0.05);兩組其他指標(biāo)對(duì)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表4。

表4 單因素分析MACCE組和非MACCE組臨床因素差異

2.5 多因素分析影響AMI患者PCI術(shù)預(yù)后危險(xiǎn)因素 多因素分析賦值年齡、BNP、hs-CRP、術(shù)后出血、Myo、Gas6、SOX9 mRNA將MACCE作為研究因變量,將年齡、用藥情況及術(shù)后出血作為自變量,結(jié)合臨床實(shí)際情況,對(duì)本研究logistic回歸模型中指標(biāo)進(jìn)行擇優(yōu)篩選,年齡大、術(shù)后出血、Myo和Gas6表達(dá)高、SOX9 mRNA表達(dá)低是影響經(jīng)PCI治療AMI患者發(fā)生MACCE獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05),見表5。

在信息化時(shí)代下，人們的出行要求越來越高。以鐵路列車為例，鐵路列車方便快捷，且具有較高的平穩(wěn)性。為此，鐵路工程項(xiàng)目呈現(xiàn)出繁榮的建設(shè)趨勢。針對(duì)當(dāng)前鐵路工程連續(xù)梁橋施工控制的現(xiàn)狀，本文以某工程為例，對(duì)鐵路橋連續(xù)梁的施工難點(diǎn)進(jìn)行分析，從連續(xù)橋梁的正裝控制、倒裝控制、預(yù)測控制和事后控制等方面，重點(diǎn)研究鐵路工程連續(xù)梁橋施工控制要素。希望可以為日后提升連續(xù)梁橋施工控制水平，促進(jìn)鐵路事業(yè)的發(fā)展奠定基礎(chǔ)。

表5 Logistic回歸分析影響AMI患者PCI術(shù)預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素

2.6 分析Myo、Gas6、SOX9 mRNA聯(lián)合對(duì)AMI預(yù)后評(píng)估價(jià)值 Myo、Gas6、SOX9 mRNA聯(lián)合評(píng)估AMI預(yù)后ROC曲線下面積為0.936,具有較高的特異度以及敏感度,且顯著高于單獨(dú)Myo、Gas6、SOX9 mRNA檢測ROC曲線下面積0.706、0.696和0.711,3種檢測方式分析預(yù)測模型有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(Z=2.261,P<0.05),見表6、圖1。

圖1 Myo、Gas6、SOX9 mRNA聯(lián)合對(duì)AMI預(yù)后評(píng)估價(jià)值ROC曲線

表6 Myo、Gas6、SOX9 mRNA聯(lián)合對(duì)AMI預(yù)后評(píng)估價(jià)值

3 討論

AMI是指冠狀動(dòng)脈疾病導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈灌注不足,導(dǎo)致心臟不能及時(shí)接受血液供應(yīng)或出現(xiàn)血流減少/終末期,最終導(dǎo)致嚴(yán)重且持續(xù)的心肌缺血和壞死,對(duì)細(xì)胞膜通透性造成損害,導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)代謝產(chǎn)物得到更多釋放,使其達(dá)到外周循環(huán)血內(nèi)[9]。而PCI臨床常規(guī)使用并不能完全清除體內(nèi)血栓,但介入手術(shù)會(huì)引起局部微血栓形成,對(duì)接受手術(shù)患者而言,可能對(duì)其機(jī)體組織產(chǎn)生傷害,尤其對(duì)機(jī)體的缺血性損傷,傷害較大,導(dǎo)致血管內(nèi)血流減慢,對(duì)患者的預(yù)后有嚴(yán)重的不良影響,因此臨床需對(duì)AMI患者PCI術(shù)后MACCE的發(fā)生做到早期預(yù)測,同時(shí)尋找可準(zhǔn)確評(píng)估患者預(yù)后的生物標(biāo)志物極為重要[10-11]。

Myo在機(jī)體內(nèi)主要在骨骼肌和心肌中有明顯的存在,在人體內(nèi)被稱為氧結(jié)合血紅素蛋白,臨床主要將其用于心肌損傷的診斷中,因從該指標(biāo)的敏感度和特異度來看,其主要表現(xiàn)為敏感性相對(duì)較高,但特異性較低,所以其也是冠脈再通后再梗阻敏感且快速的標(biāo)志物,因Myo分子量較小,所以當(dāng)機(jī)體心肌細(xì)胞受損時(shí),其將被大量釋放,且釋放速度極為迅速,據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)顯示,Myo在心肌細(xì)胞受損釋放過程中,6～8 h內(nèi)即可達(dá)到濃度最高值[12]。本研究發(fā)現(xiàn),相較于對(duì)照組,研究組Myo表達(dá)明顯較高,MACCE組Myo高于非MACCE組(P<0.05);與謝振林等[13]學(xué)者的研究一致,該學(xué)者研究發(fā)現(xiàn),Myo通常在腎臟清除后30 h內(nèi)消失,如果患者接受成功血運(yùn)重建治療,在治療后約24 h內(nèi)恢復(fù)正常。該情況特征可用于臨床確定患者是否有復(fù)發(fā)性血管閉塞,而隨著梗塞面積的增加,肌肉血清開始從受傷的心肌細(xì)胞釋放到血液中,導(dǎo)致其濃度增加。分析原因主要是由于Myo是一種亞鐵血紅蛋白,其主要在心肌和骨骼肌內(nèi)存在,在其他組織和平滑肌內(nèi)均不表現(xiàn),在機(jī)體內(nèi)主要作用是將氧氣給予儲(chǔ)存或轉(zhuǎn)移,所以當(dāng)機(jī)體發(fā)生劇烈運(yùn)動(dòng)時(shí)間或心肌損傷后,其可能自心肌細(xì)胞擴(kuò)散,逐漸進(jìn)入血液并參加體內(nèi)循環(huán),進(jìn)而出現(xiàn)水平急劇上升的情況[14]。

Gas6的分布范圍主要是機(jī)體內(nèi)皮、平滑肌細(xì)胞,主要作用是當(dāng)機(jī)體轉(zhuǎn)導(dǎo)通路運(yùn)行時(shí),其均可參加,所以當(dāng)機(jī)體無論是組織細(xì)胞增殖,還是發(fā)生炎癥反應(yīng),Gas6均可發(fā)揮顯著調(diào)控作用,尤其當(dāng)組織細(xì)胞出現(xiàn)周期停滯生長過程中,其表達(dá)明顯升高,較常規(guī)狀態(tài)下,此時(shí)Gas6表達(dá)約增加30倍左右[15]。劉暢等[16]學(xué)者的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,發(fā)現(xiàn)缺血性心臟病大鼠發(fā)生心肌細(xì)胞凋亡時(shí),Gas6可以通過自我分泌途徑參與該過程,其表達(dá)將明顯升高本研究發(fā)現(xiàn),相較于對(duì)照組,研究組Gas6表達(dá)明顯較高,MACCE組Myo高于非MACCE組(P<0.05),與朱水龍等[17]研究一致,該學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)AMI患者血清Gas6水平異常升高,分析原因主要是由于Gas6參與了左心室重構(gòu)的發(fā)生和發(fā)展,當(dāng)動(dòng)脈粥樣發(fā)生時(shí),Gas6通過血管平滑肌細(xì)胞表達(dá)生長促進(jìn)因子,進(jìn)一步增加細(xì)胞繁殖,促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展,當(dāng)血管損傷后,血管結(jié)締組織中血管平滑肌細(xì)胞的增殖和聚集是血管重構(gòu)的主要原因,進(jìn)而 導(dǎo)致AMI發(fā)生[18]。

SOX9 mRNA被發(fā)現(xiàn)時(shí),是在短肢發(fā)育不良疾病中,且研究數(shù)據(jù)顯示,當(dāng)妊娠期間胚胎SOX9 mRNA表達(dá)降低時(shí),其在妊娠期間出現(xiàn)死亡的概率明顯升高,可能是由于SOX9 mRNA參與和調(diào)節(jié)心肌發(fā)育,是心臟發(fā)育必需的同源基因,而當(dāng)SOX9 mRNA表達(dá)降低時(shí),心肌細(xì)胞內(nèi)膜墊細(xì)胞的生長、繁殖將受到一定的阻礙,增加細(xì)胞凋亡率,進(jìn)而導(dǎo)致該類胚胎在生長發(fā)育過程中,可能出現(xiàn)心內(nèi)膜墊的不良生長和發(fā)育,進(jìn)而誘發(fā)充血性心力衰竭,影響心肌細(xì)胞的吧表達(dá)。影響心肌正常生長[19-20]。本研究發(fā)現(xiàn),相較于對(duì)照組,研究組SOX9 mRNA表達(dá)明顯較低,MACCE組SOX9 mRNA低于非MACCE組(P<0.05),分析其原因主要是,當(dāng)缺血性心肌損傷發(fā)生后,心臟纖維化會(huì)明顯嚴(yán)重,而在該過程中,SOX9 mRNA是主要調(diào)節(jié)因子,在心肌損傷過程中占據(jù)重要作用,此外,其還參與調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞肥大,進(jìn)而引發(fā)心肌疾病發(fā)生[21]。與Tang等[22]學(xué)者的研究一致,該學(xué)者認(rèn)為SOX9表達(dá)的增加可能與AMI的發(fā)生及斑塊的穩(wěn)定性密切相關(guān):首先AMI患者體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生大量轉(zhuǎn)化生長因子-β,從而影響旁分泌或自分泌途徑,增加SOX9的過表達(dá);其次過表達(dá)SOX9與心肌素的血管平滑肌細(xì)胞,較單獨(dú)過表達(dá)心肌素的血管平滑肌細(xì)胞正常收縮表型被明顯地抑制,這種抑制作用被證明可能AMI患者的SOX9與心肌素相互作用,導(dǎo)致心肌素介導(dǎo)啟動(dòng)子活性給予降低,最終導(dǎo)致AMI的發(fā)生。此外,本研究logistic回歸模型結(jié)果顯示年齡、術(shù)后出血、Myo、Gas6、SOX9 mRNA是影響經(jīng)PCI治療AMI患者發(fā)生MACCE的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05),分析原因首先是年齡>65歲患者由于自身免疫力低下,自身基礎(chǔ)疾病較多,運(yùn)動(dòng)較少、血液循環(huán)較差,而術(shù)后出血可增加血栓形成風(fēng)險(xiǎn),臨床應(yīng)加以防控[23]。對(duì)AMI患者PCI術(shù)后評(píng)估,發(fā)現(xiàn)Myo、Gas6、SOX9 mRNA聯(lián)合評(píng)估AMI預(yù)后ROC曲線線下面積為0.936,具有較高的特異度以及敏感度,提示臨床對(duì)AMI患者行PCI術(shù)后,加強(qiáng)指標(biāo)的聯(lián)合檢測,為預(yù)后MACCE的發(fā)生預(yù)防提供借鑒。雖然本研究取得一定研究成果,但仍存在一定的局限性,因本研究納入的患者例數(shù)過少可能導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)一定的偏倚性,因此在今后的研究中,應(yīng)進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量,分析Myo、Gas6、SOX在AMI患者中的表達(dá)意義及在PCI術(shù)后聯(lián)合檢測對(duì)預(yù)后評(píng)估價(jià)值。

利益相關(guān)聲明:本文作者均聲明不存在任何利益沖突。

作者貢獻(xiàn)說明:郭會(huì)敏設(shè)計(jì)研究方案,實(shí)施研究過程,論文撰寫;安靜霞提出研究思路,分析試驗(yàn)數(shù)據(jù),論文審核;郭會(huì)敏、李輝參與實(shí)施研究過程,資料搜集整理,論文修改;安靜霞、李輝進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。