胡希怡 王 穎 李馥霞 宋美英 胥保華*

(1.臨沂大學(xué)農(nóng)林科學(xué)學(xué)院,臨沂 276000;2.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,泰安 271018;3.臨沂市農(nóng)業(yè)科學(xué)院,臨沂 276002)

蜂王漿是由工蜂咽下腺和上顎腺分泌的乳狀物,是供給將要變成蜂王的幼蟲的食物,也是蜂王終身的食物[1-3]。蜂王漿具有抗炎、抗菌、抗氧化和其他多種藥理活性,被廣泛應(yīng)用于制藥、化妝品和食品工業(yè)[4-5]。由于蜂王漿具有抗腫瘤、抗過敏、抗炎、調(diào)節(jié)免疫等多種生物活性[2],可作為功能性食品和膳食補(bǔ)充劑[6],備受人們青睞。我國作為蜂王漿的最大生產(chǎn)國,每年向日本、歐盟、美國等發(fā)達(dá)國家和地區(qū)出口蜂王漿1 400多t,約占全球貿(mào)易額的90%[7]。

蜂王漿是一種復(fù)雜的混合物,由水(50%～60%)、蛋白質(zhì)(18%)、碳水化合物(15%)、脂質(zhì)(3%～6%)、微量礦物質(zhì)、水溶性維生素、游離氨基酸和許多其他不明化合物組成[8]。蜂王漿的pH在3.6～4.2[9],其脂質(zhì)主要由中鏈脂肪酸組成,含有8～12個(gè)碳原子,主要是羥基或二羧酸[10]。蜂王漿的脂質(zhì)中有80%～90%的稀有游離脂肪酸,主要脂肪酸是10-羥基-2-癸烯酸(10-HDA)[11-12]。蜂王漿中的脂質(zhì)還包括癸二酸[13]、8-羥基辛烷、3,10-二羥基癸二酸、9-羥基-2-癸二酸、3-羥基癸酸、2-癸烯-1,10-二甲酸和少量甾醇[7,12]。

10-HDA是蜂王漿中特有的活性物質(zhì)[14]。10-HDA化學(xué)穩(wěn)定性,因此10-HDA含量被認(rèn)定為評(píng)價(jià)蜂王漿質(zhì)量和新鮮度的國際標(biāo)準(zhǔn)[15]。飼料來源、蜜蜂的生理和代謝狀態(tài)、幼蟲日齡和蜂種均影響蜂王漿的組成[16]。有研究表明,硬脂酸是10-HDA合成的最適前體[17]。首先,硬脂酸在ω位發(fā)生羥基化,生成ω-羥基硬脂酸,羥基化的硬脂酸進(jìn)行不完全的β-氧化,功能基團(tuán)修飾,最終生成10-HDA[18-19]。目前,有關(guān)食物(尤其是脂肪酸)供應(yīng)對(duì)工蜂上顎腺中10-HDA合成影響的研究較少。本研究以由原種意大利蜜蜂(Apismelliferaligustica)選育而來的高產(chǎn)品種漿蜂為研究對(duì)象,通過在飼糧中添加硬脂酸,探討外源供給硬脂酸對(duì)漿蜂群勢(shì)、封蓋子數(shù)量、蜂王漿產(chǎn)量與10-HDA含量以及10-HDA合成相關(guān)基因表達(dá)的影響,以期為高品質(zhì)蜂王漿的生產(chǎn)提供技術(shù)指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)時(shí)間及蜂群

試驗(yàn)于2021年4—5月在山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院試驗(yàn)蜂場(chǎng)(36.16°N,117.16°E)進(jìn)行,試驗(yàn)蜂群為浙江漿蜂(引進(jìn)意大利蜜蜂經(jīng)過長期選育后的王漿高產(chǎn)蜂種)。4月份最高溫度平均為19 ℃,5月份最高溫度平均為24 ℃,以多云和晴天為主。蜂場(chǎng)位于城市邊緣區(qū),周圍3 km內(nèi)有零星野花,無大宗蜜粉源植物。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

本試驗(yàn)選取群勢(shì)一致、健康無病的浙江漿蜂10群(大致群勢(shì)11框蜂,3張子脾,4張蜜脾,越冬后2月10日放王產(chǎn)卵),隨機(jī)分為2組,即對(duì)照組和硬脂酸組,每個(gè)組5群。試驗(yàn)開始前,將蜂群群勢(shì)調(diào)整至一致,并將群內(nèi)粉脾移走,根據(jù)群勢(shì)情況補(bǔ)充子脾或者空巢脾。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧,硬脂酸組飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加2%硬脂酸(純度為98%)的飼糧。整個(gè)試驗(yàn)期75 d,其中預(yù)試期15 d,正試期60 d。預(yù)試期開始前,各組蜂群安裝脫粉器,以控制外勤蜂采進(jìn)花粉。基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。試驗(yàn)期間,將粉料、水和蔗糖按一定比例(1.00∶0.68∶1.50)揉制成團(tuán),放置在隔王板上供工蜂采食。飼糧每3 d更換2次。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.3 指標(biāo)測(cè)定及方法

1.3.1 蜂群采食量的測(cè)定

正式試驗(yàn)期間,記錄每次投喂的飼糧重量及剩余飼糧重量,統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)期間各蜂群的總采食量,并計(jì)算出粉料采食量。

1.3.2 蜂群群勢(shì)及封蓋子數(shù)量的測(cè)定

試驗(yàn)開始前,對(duì)每個(gè)蜂群的群勢(shì)進(jìn)行調(diào)整,使每個(gè)蜂群的封蓋子及成蜂群勢(shì)基本保持一致。正式試驗(yàn)開始后,每隔12 d(第12天、第24天和第36天)觀察并記錄各組蜂群群勢(shì)、封蓋子數(shù)量。試驗(yàn)采用設(shè)計(jì)好的木制巢脾框(巢脾框中部被細(xì)線分隔成45個(gè)大小一致的格子,尺寸為4.6 cm×4.0 cm)記錄蜂群群勢(shì)及封蓋子數(shù)量。蜂群群勢(shì)以足框蜂進(jìn)行統(tǒng)計(jì),并詳細(xì)記錄每張脾上封蓋子的面積,計(jì)算各蜂群的群勢(shì)及封蓋子數(shù)量。

1.3.3 生產(chǎn)蜂群產(chǎn)漿量的測(cè)定

于正式試驗(yàn)開始21 d后進(jìn)行取漿。雙排漿條共126個(gè)臺(tái)基,臺(tái)基預(yù)先用少量的蜂王漿濕潤。移取1日齡幼蟲至臺(tái)基中,將漿框放于繼箱中哺育,大約70 h后鉗蟲取漿于50 mL離心管中,稱重,轉(zhuǎn)入-20 ℃冰箱保存,用于蜂王漿中10-HDA含量檢測(cè)。本試驗(yàn)共取漿3次,取漿期間對(duì)蜂群獎(jiǎng)勵(lì)飼喂糖水,以提高幼蟲接受率和刺激蜂群產(chǎn)漿的積極性。

1.3.4 蜂王漿中10-HDA含量的測(cè)定

蜂王漿中10-HDA含量參照GB 9697—2008中方法進(jìn)行測(cè)定。蜂王漿樣本于室溫解凍后,將3次所取蜂王漿樣本混合均勻后稱取0.5 g置于50 mL容量瓶中,加入1 mL鹽酸(0.03 mol/L)和2 mL重蒸餾水,振蕩混勻,加入10 mL內(nèi)標(biāo)溶液(0.653 mg/mL對(duì)羥基苯甲酸甲酯溶液),無水乙醇定容,搖勻后超聲15 min,然后離心10 min(3 000 r/min),取上清待測(cè)。色譜條件:色譜柱為Agilent C18,4.6 mm×250 mm;檢測(cè)器為二極管陣列檢測(cè)器(SPD-M20A);檢測(cè)波長為210 nm;流動(dòng)相為甲醇+0.03 mol/L鹽酸+水,甲醇∶0.03 mol/L鹽酸∶水=55∶10∶35;柱溫為35 ℃;流動(dòng)相流速為1 mL/min。

1.3.5 工蜂頭部10-HDA含量的測(cè)定

每群采集9和18日齡工蜂各20只,分離頭部,液氮速凍后轉(zhuǎn)入-80 ℃保存,用于10-HDA含量的檢測(cè)。將待測(cè)樣本置于2 mL離心管中,加入1 mL甲醇和鋼珠,組織破碎儀進(jìn)行破碎。將勻漿液轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中,加入內(nèi)標(biāo)溶液(0.653 mg/mL對(duì)羥基苯甲酸甲酯溶液)1 mL,定容后搖勻,超聲15 min,用0.45 μm濾器過濾后待測(cè)。色譜條件:色譜柱為Agilent C18,4.6 mm×250 mm;檢測(cè)器為二極管陣列檢測(cè)器;檢測(cè)波長為210 nm;流動(dòng)相為甲醇+0.2%磷酸溶液,甲醇∶0.2%磷酸溶液=55∶45;流速為1 mL/min;柱溫為25 ℃。

1.3.6 工蜂上顎腺中10-HDA合成相關(guān)基因表達(dá)的檢測(cè)

每群采集9和18日齡工蜂各20只,分離上顎腺于2 mL EP管中,液氮速凍后轉(zhuǎn)入-80 ℃保存,用于10-HDA合成相關(guān)基因表達(dá)的檢測(cè)。采用TRIzol法提取工蜂上顎腺總RNA,核酸檢測(cè)儀測(cè)定RNA濃度。使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(Evo M-MLV RT Premix for qPCR,購自湖南艾科瑞生物工程有限公司)將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。采用試劑盒[SYBR ? Green Premix Pro TaqHS qPCR Kit(Rox Plus),購自湖南艾科瑞生物工程有限公司]進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR。目的基因引物序列設(shè)計(jì)參考NCBI數(shù)據(jù)庫,以rp49為內(nèi)參,采用Primer 5.0進(jìn)行引物設(shè)計(jì),委托上海生工生物科技有限公司合成引物,引物序列見表2。

表2 引物序列信息

1.3.7 工蜂頭部脂肪酸含量的測(cè)定

工蜂頭部脂肪酸含量的測(cè)定參照GB 5009.168—2016。每組隨機(jī)選3個(gè)群,每群選取18日齡工蜂50只,取頭部混合作為1個(gè)生物學(xué)重復(fù),每個(gè)組共3個(gè)生物學(xué)重復(fù)。試樣水解、脂肪的提取、脂肪的皂化和脂肪酸甲酯化參照國標(biāo)中方法。色譜柱:CD-2560(100 m×0.25 mm×0.20 μm);升溫程序:130 ℃保持5 min,以4 ℃/min的速率升溫至240 ℃,保持30 min。進(jìn)樣口溫度:250 ℃;載氣流速:0.5 mL/min;分流進(jìn)樣,分流比:10∶1;檢測(cè)器:火焰離子化檢測(cè)器(FID);檢測(cè)器溫度:250 ℃。

1.3.8 工蜂血淋巴和中腸中三酰甘油(TAG)含量的測(cè)定

每群選取9和18日齡工蜂各100只,采用微量采血毛細(xì)管吸取胸部血淋巴至200 μL,采集完立即將樣品放入-80 ℃冰箱保存待測(cè)。每群另取9和18日齡工蜂各5只,分離中腸,去除內(nèi)容物,液氮速凍后保存于-80 ℃冰箱待測(cè)。采用試劑盒(購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司)測(cè)定樣本中TAG含量。中腸樣本中蛋白質(zhì)濃度采用考馬斯亮藍(lán)試劑盒(購自南京建成生物工程研究所)進(jìn)行測(cè)定。

1.4 數(shù)據(jù)分析

使用SPSS 21.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)(t-test)分析2組數(shù)據(jù)之間的差異顯著性,若P<0.05,則差異顯著。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié) 果

2.1 外源供給硬脂酸對(duì)蜂群采食量的影響

由表3可知,與對(duì)照組相比,飼糧中添加2%硬脂酸顯著降低了蜂群的總采食量和粉料采食量(P<0.05)。

表3 外源供給硬脂酸對(duì)蜂群總采食量和粉料采食量的影響

2.2 外源供給硬脂酸對(duì)蜂群群勢(shì)和封蓋子數(shù)量的影響

由表4可知,與對(duì)照組相比,飼糧中添加2%硬脂酸顯著降低了第24天蜂群群勢(shì)(P<0.05),對(duì)其他時(shí)間點(diǎn)的蜂群群勢(shì)沒有顯著影響(P>0.05);飼糧中添加2%硬脂酸對(duì)各時(shí)間點(diǎn)的蜂群封蓋子數(shù)量均沒有顯著影響(P>0.05)。整個(gè)試驗(yàn)期,每個(gè)蜂群維持大約有12框成蜂和3框封蓋子。

表4 外源添加硬脂酸對(duì)意大利蜜蜂蜂群群勢(shì)和封蓋子數(shù)量的影響

2.3 外源供給硬脂酸對(duì)蜂王漿產(chǎn)量和蜂王漿中10-HDA含量的影響

所有組的蜂王漿樣品外觀均厚重呈乳狀,顏色略帶黃色。由表5可知,蜂王漿產(chǎn)量2個(gè)組之間沒有顯著差異(P>0.05);與對(duì)照組相比,飼糧中添加2%硬脂酸顯著升高了蜂王漿中10-HDA含量(P<0.05),為對(duì)照組的1.15倍。

表5 外源供給硬脂酸對(duì)蜂王漿產(chǎn)量和蜂王漿中10-HDA含量的影響

2.4 外源供給硬脂酸對(duì)工蜂頭部10-HDA含量的影響

由表6可知,與對(duì)照組相比,飼糧中添加2%硬脂酸顯著增加了9和18日齡工蜂頭部10-HDA含量(P<0.05),分別為對(duì)照組的1.15倍和1.14倍。

表6 外源供給硬脂酸對(duì)9和18日齡工蜂頭部10-HDA含量的影響

2.5 外源供給硬脂酸對(duì)工蜂上顎腺中10-HDA合成相關(guān)基因表達(dá)的影響

由圖1-A可知,與對(duì)照組相比,飼糧中添加2%硬脂酸顯著增加了9日齡工蜂上顎腺中脂肪酸合成酶(FAS)基因的相對(duì)表達(dá)量(P<0.05),對(duì)載脂蛋白A4(AOPA4)、細(xì)胞色素P450 6AS8(CYP6AS8)、?；o酶A氧化酶1(ACOX1)、?；o酶A氧化酶3(ACOX3)、肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶1(CPT1)、電子轉(zhuǎn)移黃素蛋白β肽(ETF-β)和蜂王漿主蛋白1(mrjp1)基因的相對(duì)表達(dá)量均沒有顯著影響(P>0.05)。由圖1-B可知,與對(duì)照組相比,飼糧中添加2%硬脂酸顯著增加了18日齡工蜂上顎腺中FAS、CYP6AS8、ACOX1、ACOX3、CPT1、ETF-β和mrjp1基因的相對(duì)表達(dá)量(P<0.05),對(duì)AOPA4基因的相對(duì)表達(dá)量沒有顯著影響(P>0.05)。

圖1 外源供給硬脂酸對(duì)9(A)和18日齡(B)工蜂上顎腺中10-HDA合成相關(guān)基因表達(dá)的影響

2.6 外源供給硬脂酸對(duì)工蜂頭部脂肪酸含量的影響

由表7可知,與對(duì)照組相比,飼糧中添加2%硬脂酸顯著提高了工蜂頭部C16∶0、C16∶1和C18∶1n9c的含量(P<0.05),對(duì)其他脂肪酸的含量沒有顯著影響(P>0.05)。

2.7 外源供給硬脂酸對(duì)工蜂血淋巴和中腸中TAG含量的影響

由表8可知,與對(duì)照組相比,飼糧中添加2%硬脂酸顯著降低了9日齡工蜂血淋巴中TAG含量(P<0.05),而顯著提高了18日齡工蜂血淋巴中TAG含量(P<0.05);2%硬脂酸的添加對(duì)9日齡工蜂中腸中TAG含量有顯著提升作用(P<0.05),而對(duì)18日齡工蜂中腸中TAG含量沒有顯著影響(P>0.05)。

表8 外源添加硬脂酸對(duì)9和18日齡工蜂血淋巴和中腸中三酰甘油含量的影響

3 討 論

3.1 外源供給硬脂酸對(duì)蜂群群勢(shì)和封蓋子數(shù)量的影響

蜜蜂從各種植物中攝取花粉和花蜜,以滿足蜂群的動(dòng)態(tài)營養(yǎng)需求?；厶峁┨妓衔?而花粉提供蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和許多微量營養(yǎng)素[21]。工蜂成蟲在生命的前2周消耗花粉,然后轉(zhuǎn)為采集蜂,以花蜜為主食。與花蜜相比,花粉中含有對(duì)成年工蜂發(fā)育和健康必不可少的營養(yǎng)物質(zhì)。工蜂攝取花粉會(huì)激活分泌腺咽下腺和上顎腺以及脂肪體的發(fā)育。腺體和脂肪體良好發(fā)育能夠?yàn)橛紫x和蜂王提供充足的分泌物,這種活動(dòng)被稱為“哺育”。蜂群營養(yǎng)不足時(shí)會(huì)影響工蜂對(duì)幼蟲的哺育[22-23]。研究表明,花粉不足時(shí),導(dǎo)致哺育蜂頻繁乞食,對(duì)幼蟲的哺育行為減少,甚至吞食卵和幼蟲[24]。另有研究表明,蜂群營養(yǎng)不足時(shí),會(huì)導(dǎo)致蜜蜂頭部腺體發(fā)育受到抑制,增加哺育蜂殘食幼蟲行為,最終導(dǎo)致封蓋子數(shù)量下降[25]。封蓋子數(shù)量通常被用作衡量孵育成功率的指標(biāo)。已有諸多研究報(bào)道飼糧脂質(zhì)水平對(duì)封蓋子數(shù)量有積極影響。Herbert等[26]研究指出,當(dāng)喂食脫脂的花粉替代品時(shí),蜂群不能正常孵育幼蟲;此外,飼喂含有2%～4%脂質(zhì)飼糧時(shí)蜂群封蓋子數(shù)量略大于飼喂含6%～8%脂質(zhì)飼糧時(shí)。相似的,有研究發(fā)現(xiàn),當(dāng)對(duì)照組飼糧中脂質(zhì)含量忽略不計(jì)時(shí),飼喂脂質(zhì)含量為8%的飼糧增加了蜂群封蓋子數(shù)量[27]。在本研究中,飼糧中添加2%硬脂酸對(duì)蜂群封蓋子數(shù)量無顯著影響。這可能是因?yàn)榛A(chǔ)飼糧中的脂質(zhì)足以滿足哺育蜂頭部腺體發(fā)育的需要,所以額外添加脂質(zhì)并沒有顯示出積極的效果。前人研究指出,飼喂不同種類的蜂花粉可影響蜂群群勢(shì),茶花粉和油菜花粉優(yōu)于荷花粉和玉米花粉[28]。此外,飼糧中維生素(維生素A)含量[29]、脂肪酸(α-亞麻酸)水平[30]以及蛋白質(zhì)水平[31]均能影響成蜂的群勢(shì)。上述研究結(jié)果說明飼糧結(jié)構(gòu)會(huì)影響蜂群發(fā)育,可能是因?yàn)轱暭Z中營養(yǎng)結(jié)構(gòu)的改變提高了工蜂的哺育能力,蜂王獲得更為全面且豐富的營養(yǎng),刺激其產(chǎn)卵能力,最終導(dǎo)致群勢(shì)增強(qiáng)。本研究發(fā)現(xiàn),添加2%硬脂酸并沒有對(duì)蜂群群勢(shì)產(chǎn)生顯著影響,原因可能與添加劑量有關(guān)。

3.2 外源供給硬脂酸對(duì)蜂王漿中10-HDA含量的影響

目前,有關(guān)飼糧結(jié)構(gòu)及營養(yǎng)水平對(duì)蜂王漿中10-HDA含量的影響已開展了廣泛研究,有關(guān)不同蛋白質(zhì)水平、不同種類花粉對(duì)其影響的研究諸多,而關(guān)于脂肪酸對(duì)蜂王漿中10-HDA含量影響的研究較少。劉麗等[32]分析比較了飼糧添加不同劑量硬脂酸(1%、5%、10%)或癸酸(1%、2.5%和5%)對(duì)工蜂10-HDA合成的影響,發(fā)現(xiàn)添加5%硬脂酸或1%癸酸顯著提高了工蜂頭部10-HDA含量,并且使10-HDA的分泌高峰提前。本團(tuán)隊(duì)前期的研究發(fā)現(xiàn),飼糧中添加不同比例(2%、4%、6%和8%)油酸時(shí),添加8%油酸能夠顯著提高蜂王漿中10-HDA含量[33]。前人研究指出,飼糧蛋白質(zhì)水平對(duì)蜂王漿中10-HDA含量無顯著影響[34],該研究結(jié)果與王改英[35]的研究結(jié)果相一致,說明蜂王漿中10-HDA的含量不受飼糧中蛋白質(zhì)水平的影響。有關(guān)不同來源花粉對(duì)蜂王漿中10-HDA含量的影響,有研究發(fā)現(xiàn)飼喂不同來源的花粉時(shí)蜂王漿中10-HDA含量不同,苦灌木和咖啡花粉優(yōu)于茶花粉;但也有研究發(fā)現(xiàn)不同來源的花粉對(duì)蜂王漿中10-HDA含量無顯著影響。荀利杰等[36]的研究表明,與自然采粉的蜂群相比,供給油菜和土連翹花粉并沒有影響蜂王漿中10-HDA的含量。不同研究所得結(jié)果不一致的原因可能與花粉中營養(yǎng)物質(zhì)組成不同相關(guān)。在本研究中,飼糧中添加2%硬脂酸顯著提高了蜂王漿中10-HDA含量;此外,9和18日齡工蜂頭部10-HDA含量可見顯著升高,說明外源供給硬脂酸促進(jìn)了哺育蜂和采集蜂上顎腺對(duì)10-HDA的分泌。

3.3 外源供給硬脂酸對(duì)工蜂上顎腺中10-HDA生物合成的影響

FAS是一種多功能酶,負(fù)責(zé)以乙酰輔酶A為底物從頭合成脂肪酸[37-38]。研究發(fā)現(xiàn),FAS在哺育蜂中高表達(dá)[39-40]。脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)是上顎腺終產(chǎn)物分泌的關(guān)鍵過程[41]。APO A4是昆蟲體內(nèi)重要的脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白[42]。ETF-β是幾種線粒體脫氫酶(如中鏈?；o酶A脫氫酶和長鏈?；o酶A脫氫酶)的特定電子受體,負(fù)責(zé)催化脂肪酸β-氧化[43]。Yang等[43]研究發(fā)現(xiàn),沉默ETF-β基因?qū)е鹿し渖项€腺對(duì)10-HDA的分泌減少。在蜜蜂中,10-HDA是由硬脂酸ω位羥基化產(chǎn)生的[18],該過程由P450酶催化進(jìn)行[19]。Fujita等[44]和Wu等[45]的研究已充分證明了CYP6AS8在工蜂10-HDA生物合成的羥基化過程中的重要作用。Mumoki等[46]報(bào)道,年齡較大的蜜蜂工蜂CYP6AS8轉(zhuǎn)錄本的豐度更高,這可能與上顎腺分泌大量10-HDA有關(guān)。在工蜂上顎腺中,β-氧化發(fā)生在線粒體和過氧化物酶體[42]。在線粒體系統(tǒng)中,β-氧化的第1步是肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶(CPT)對(duì)?；o酶A的攝取,限制著脂肪酸從細(xì)胞質(zhì)進(jìn)入線粒體內(nèi)膜的速度[47]。在過氧化物酶體系統(tǒng)中,酰基輔酶A氧化酶(ACOX)催化β-氧化起始步驟,是該過程的限速酶[48]。本研究中,2%硬脂酸的添加促進(jìn)了18日齡工蜂上顎腺中上述基因的表達(dá),表明飼糧中添加硬脂酸促進(jìn)了上顎腺對(duì)10-HDA的分泌。TAG是昆蟲體內(nèi)脂質(zhì)的主要形式,能夠在非進(jìn)食階段和長途飛行期間供應(yīng)能量[49],此外,TAG還為其他物質(zhì)的合成提供前體,如化學(xué)信息素[50]。TAG作為重要的中性脂質(zhì),包含1個(gè)甘油骨架和3個(gè)脂肪酸鏈[51]。TAG水解產(chǎn)生的脂肪酸可作為工蜂上顎腺合成10-HDA的底物。本研究結(jié)果顯示,飼糧中添加2%硬脂酸顯著提高了9、18日齡工蜂中腸和18日齡工蜂血淋巴中TAG的含量,說明硬脂酸為10-HDA的合成提供了底物。

4 結(jié) 論

外源供給硬脂酸可提高工蜂上顎腺中10-HDA合成相關(guān)基因的表達(dá),促進(jìn)10-HDA分泌,進(jìn)而增加蜂王漿中10-HDA的含量。