鐘文豪 黎爾納 李慶榮 邢東旭 楊 瓊 鄒宇曉 廖森泰 周東來*

(1.廣東省農(nóng)業(yè)科學院蠶業(yè)與農(nóng)產(chǎn)品加工研究所,廣東省農(nóng)產(chǎn)品加工重點實驗室,廣州 510610;2.廣東海洋大學食品科技學院,湛江 524088;3.廣東省特種水產(chǎn)功能飼料工程技術(shù)研究中心,佛山 528211)

大口黑鱸(Micropterussalmoides),俗名加州鱸魚,隸屬鱸形目(Perciformes)、太陽魚科(Centrarchidae)、黑鱸屬(Micropterus)。大口黑鱸生長迅速、肉質(zhì)鮮美、營養(yǎng)價值高,是我國重要的淡水經(jīng)濟魚類。根據(jù)《中國漁業(yè)統(tǒng)計年鑒2023》統(tǒng)計數(shù)據(jù),2022年我國大口黑鱸年產(chǎn)量為80.25萬t,產(chǎn)值超過200億元。大口黑鱸為肉食性魚類,以攝食活餌料魚為主,且目前已經(jīng)實現(xiàn)全程配合飼料養(yǎng)殖,然而,配合飼料在膨化制粒過程中添加的淀粉會對大口黑鱸的腸道造成損傷,導致腸道免疫力和抗氧化能力下降[1]。此外,隨著養(yǎng)殖規(guī)模的擴大和養(yǎng)殖密度的不斷增加,大量抗生素和化學品等被用于預(yù)防和治療疾病,在防治病原菌的同時也降低了大口黑鱸腸道菌群中有益微生物的活性,對其營養(yǎng)吸收能力和免疫能力造成影響[2]。維持正常的腸道生理功能對于魚類的健康和生長十分重要。研究表明,在飼料中添加適量的功能性添加劑,如益生元、益生菌或者植物提取物等,可以改善水產(chǎn)動物的腸道健康[3-5]。其中,益生元在水產(chǎn)中的應(yīng)用研究成為行業(yè)研究熱點。

目前,可用作飼料添加劑的益生元主要是由果糖、半乳糖、葡萄糖或木糖等單糖單元合成的低聚糖[6],如商品化的低聚果糖[7]、低聚半乳糖[8]和低聚異麥芽糖[9]等,它們能夠改善水產(chǎn)養(yǎng)殖動物的健康,促進生長和提高免疫力等。不過,對植物來源的功能性低聚糖研究較少。

桑葉低聚糖(mulberry leaf oligosaccharides,MLO)是由桑葉多糖通過酶解得到,其主要由甘露糖、葡萄糖和半乳糖組成,分子質(zhì)量小于3 000 u[10]。研究表明,MLO比桑葉多糖具有更高的益生活性和抗氧化能力[11]。MLO可以順利通過消化系統(tǒng)到達結(jié)腸而不被降解[12],其在促進益生菌生長、提高益生菌產(chǎn)短鏈脂肪酸能力方面具有很強的活性[11]。截至目前,MLO作為飼料添加劑在大口黑鱸中的應(yīng)用研究未見報道。因此,本研究旨在探究飼料中添加不同水平MLO對大口黑鱸生長性能、消化酶活性以及腸道組織形態(tài)、免疫功能和菌群的影響,為MLO在大口黑鱸配合飼料中的合理應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 MLO的制備

本試驗采用多糖含量為70%(采用苯酚硫酸法[13]測定)的桑葉多糖提取物,并參考本實驗室前期Hu等[11]建立的酶解法來制備MLO,具體方法如下:首先將桑葉多糖提取物進行酶解反應(yīng),酶解條件為添加1 500 U/mL β-葡聚糖酶,酶解溫度51 ℃,酶解時間4 h;然后將酶解后的水解物置于沸水浴中10 min使β-葡聚糖酶變性失活,于4 000 r/min離心10 min去沉淀,得到上清液;最后將上清液進行冷凍干燥,得到MLO。

1.2 試驗設(shè)計

試驗選擇平均初始體重為(26.89±1.16) g的大口黑鱸幼魚450尾,隨機分成3組,每組3個重復(fù),分配到9個直徑為75 cm的養(yǎng)殖桶中(養(yǎng)殖水體為350 L),每桶50尾。對照組飼喂基礎(chǔ)飼料,試驗組分別飼喂在基礎(chǔ)飼料的基礎(chǔ)上添加0.5%和1.0% MLO的試驗飼料。試驗期80 d。

1.3 試驗飼料

采用加州鱸魚商品化配合飼料作為基礎(chǔ)飼料,通過拌料的方式制備獲得含有0.5%和1.0%MLO的試驗飼料。具體的制備方法如下:分別稱取5和10 g MLO干粉,分別加入到50 g無菌水中,充分攪拌溶解,然后將得到的MLO溶液分別用噴壺均勻噴灑到1 kg基礎(chǔ)飼料上,對照組飼料噴灑50 g無菌水。將噴灑混合均勻的飼料分別在烘箱中50 ℃加熱1 h烘干水分,得到含0.5%和1.0% MLO的試驗飼料,將制備好的飼料分裝后儲存于4 ℃冰箱備用。基礎(chǔ)飼料營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)飼料營養(yǎng)水平(風干基礎(chǔ))

1.4 飼養(yǎng)管理

試驗所用大口黑鱸為市售,試驗魚先在廣東省農(nóng)業(yè)科學院蠶業(yè)與農(nóng)產(chǎn)品加工研究所室內(nèi)循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中暫養(yǎng)2周,暫養(yǎng)期間每天用基礎(chǔ)飼料飼喂。室內(nèi)循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)由微濾系統(tǒng)、生化反應(yīng)系統(tǒng)、蛋白質(zhì)分離器、紫外消毒裝置和養(yǎng)殖桶組成,養(yǎng)殖水源為經(jīng)過消毒、曝氣后的自來水,循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng)總水體為10 m3,水流量為20 m3/h。正式試驗前,停料24 h,按照試驗設(shè)計準備試驗魚。試驗期間,每天投喂2次(09:00和16:30各1次),投喂量為魚體重的2%～4%,將投喂0.5 h后未攝食完的飼料撈出,烘干水分后稱重,準確記錄每天飼料采食量和試驗魚死亡情況。試驗過程中,每周換水3次,每次換水量為每個養(yǎng)殖桶水量的1/4,養(yǎng)殖期間水溫為22.4～29.4 ℃,溶氧量≥5.0 mg/L,亞硝酸鹽含量≤0.05 mg/L,氨態(tài)氮含量≤0.2 mg/L,pH為7.0～8.2,自然光照周期。

1.5 樣品采集

試驗結(jié)束后,禁食24 h,從每個養(yǎng)殖桶隨機選取9尾魚,用MS-222麻醉后分別測量體長、體重,然后進行解剖,取內(nèi)臟、肝臟并稱重,記錄體重、體長、內(nèi)臟和肝臟重量,用于計算終末體重、肥滿度(CF)、臟體比(VSI)和肝體比(HSI)。

從每個養(yǎng)殖桶隨機選取3尾魚進行解剖,分離腸道,去除表面脂肪,取長度約1 cm的中腸,用3%多聚甲醛固定液固定,另取部分中腸,用液氮速凍后于-80 ℃保存,用于消化酶活性測定。

從每個養(yǎng)殖桶隨機選取3尾魚,用MS-222麻醉后使用焦碳酸二乙酯(DEPC)預(yù)處理過的無菌無酶解剖工具于冰上迅速解剖并分離出腸道,剪取中腸(與上述用于切片制作的腸道片段相同位置)約50 mg的組織迅速放入1.5 mL無菌無酶離心管中,液氮速凍后于-80 ℃保存?zhèn)溆?用于腸道各基因相對表達量的測定。另從每個養(yǎng)殖桶中隨機選取2尾魚,解剖后取全腸裝入15 mL無菌離心管中,置于液氮中速凍后于-80 ℃保存,用于腸道微生物16S rDNA測序。

1.6 指標測定

1.6.1 生長性能

生長性能相關(guān)指標計算公式如下:

增重率(WGR,%)=100×(終末體重-初始體重)/初始體重;特定生長率(SGR,%/d)=100×(ln終末體重-ln初始體重)/飼養(yǎng)天數(shù);攝食率(FR,%/d)=100×攝食量(FI)/[(初始體重+終末體重)/2]/飼養(yǎng)天數(shù);FI(g/尾)=攝食飼料總量/[(初始尾數(shù)+終末尾數(shù))/2];飼料系數(shù)(FCR)=攝食飼料總量/(終末體重-初始體重);CF(g/cm3)=100×體重(g)/體長3(cm3);HSI(%)=100×肝臟重量(g)/體重(g);VSI(%)=100×內(nèi)臟重量(g)/體重(g)。

1.6.2 消化酶活性

將儲存在-80 ℃的腸道組織在冰上解凍,準確稱取組織重量,按重量(g)∶體積(mL)=1∶9的比例,加入9倍體積的生理鹽水,冰水浴條件下機械勻漿,在4 ℃、2 500 r/min條件下離心10 min,取上清液,采用試劑盒(南京建成生物工程研究所)測定腸道α-淀粉酶(AMS)、脂肪酶(LPS)和胰蛋白酶(TRY)活性,具體方法參照試劑盒說明書進行。

1.6.3 腸道組織形態(tài)

腸道組織在3%多聚甲醛固定液中固定24 h后,將固定好的腸道組織進行石蠟包埋,制作石蠟切片,切片厚度為6 μm,用蘇木素-伊紅(HE)染色。采用全景切片數(shù)字掃描儀(PANNORAMIC-1000,3DHISTECH)對切片進行掃描拍照,利用CaseViewer 2.2軟件(3DHISTECH)截取切片組織照片,然后使用Image-Pro Plus 6.0(Media Cybemetics)分析軟件分別測量腸絨毛高度、絨毛寬度和肌層厚度,每個切片分別測量6組數(shù)值。

1.6.4 腸道菌群

腸道菌群測序由廣州基迪奧生物科技有限公司進行。從大口黑鱸腸道中提取基因組DNA后,采用帶有測序接頭(barcode)的特異引物擴增16S rRNA的目標區(qū)域,并使用AMPure XP Beads對擴增產(chǎn)物進行純化;采用ABI StepOnePlus實時熒光定量PCR(qRT-PCR)儀(Life Technologies,美國)進行定量分析,并使用Illumina NovaSeq 6000測序平臺進行測序,測序模式選擇PE250;測序結(jié)束后得到raw reads,使用FASTP軟件和FLASH軟件對raw reads進行過濾和拼接,得到clean tag,對clean tag進行聚類,去除聚類處理,得到有效數(shù)據(jù)effective tag;在effective tag數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上聚類得到操作分類單元(OTU)。基于之前數(shù)據(jù)的處理,根據(jù)OTU的結(jié)果,對其進行物種注釋;同時,對OTU進行豐度、指示物種分析、alpha多樣性分析和在門和屬的水平分布上進行群落結(jié)構(gòu)分析。

1.6.5 腸道RNA提取和qRT-PCR

參照RNA Easy Fast動物組織總RNA提取試劑盒(TIANGEN)說明書從腸道組織樣品中提取總RNA,利用瓊脂糖凝膠電泳法檢測總RNA完整性,并使用NanoDrop 2000分光光度計(Thermo Fisher Scientific,美國)檢測總RNA濃度和純度,并適當稀釋至1 000 ng/μL。參照FastKing RT Kit反轉(zhuǎn)錄試劑盒(TIANGEN)說明書進行反轉(zhuǎn)錄制備cDNA模板。

根據(jù)NCBI已知白細胞介素-8(IL-8)、白細胞介素-10(IL-10)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、核因子-κB(NF-κB)、轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)、β-肌動蛋白(β-actin)序列使用Premier 5.0軟件設(shè)計引物,由生工生物工程(上海)股份有限公司合成,引物信息見表2。qRT-PCR反應(yīng)體系為10.0 μL,包括5.0 μL 2×ChamQ SYBR qPCR Master Mix、0.3 μL PCR正向引物(10 μmol/L)、0.3 μL PCR反向引物(10 μmol/L)、1.0 μL cDNA模板和3.4 μL雙蒸水。qRT-PCR定量儀器為Bio-Rad MiniOptionTM實時熒光定量PCR儀(Bio-Rad,美國)。PCR反應(yīng)條件為95 ℃預(yù)變性3 min,95 ℃變性10 s,60 ℃退火30 s,72 ℃延伸30 s,40個循環(huán),之后形成熔解曲線。所有qRT-PCR進行3次重復(fù),以β-肌動蛋白為內(nèi)參基因,使用2-△△Ct方法計算目標基因的mRNA相對表達量。

表2 引物信息

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 26.0軟件進行單因素方差分析(one-way ANOVA),并用Duncan氏法進行組間顯著差異性的多重比較檢驗,試驗結(jié)果采用平均值±標準差(mean±SE)形式表示,P<0.05表示差異顯著。腸道菌群相關(guān)數(shù)據(jù)分析均在Omicsmart云平臺(www.omicsmart.com)上進行。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼料中添加MLO對大口黑鱸生長性能的影響

由表3可知,與對照組相比,飼料中添加0.5%和1.0% MLO顯著降低大口黑鱸FCR和VSI(P<0.05),飼料中添加1.0% MLO顯著降低HSI(P<0.05);飼料中添加MLO對終末體重、WGR、SGR、FR、FI和CF均無顯著影響(P>0.05)。

表3 飼料中添加MLO對大口黑鱸生長性能的影響

2.2 飼料中添加MLO對大口黑鱸腸道消化酶活性的影響

由表4可知,與對照組相比,飼料中添加0.5%和1.0% MLO顯著提高大口黑鱸腸道α-淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶活性(P<0.05),說明飼料中添加MLO能夠顯著提高大口黑鱸腸道消化酶活性。

表4 飼料中添加MLO對大口黑鱸腸道消化酶活性的影響

2.3 飼料中添加MLO對大口黑鱸腸道組織形態(tài)的影響

如圖1所示,各組大口黑鱸腸道組織結(jié)構(gòu)完整,排列有序,無混亂、脫落現(xiàn)象。由表5可知,各組之間腸道絨毛高度、絨毛寬度和肌層厚度均無顯著差異(P>0.05),但試驗組腸道絨毛高度、絨毛寬度和肌層厚度相對于對照組均有所提高。

ML:肌層 muscularis;D:黏膜皺襞 duplicature;SM:黏膜下層 submucosa;GC:杯狀細胞 goblet cell。

表5 飼料中添加MLO對大口黑鱸腸道組織形態(tài)的影響

2.4 飼料中添加MLO對大口黑鱸腸道菌群的影響

如圖2所示,對獲得的有效數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析,共得到1 481個OTU,其中各組共有OTU有181個。大口黑鱸腸道菌群alpha多樣性分析結(jié)果見表6,與對照組相比,試驗組Sobs指數(shù)、ACE指數(shù)和Chao1指數(shù)顯著降低(P<0.05);0.5% MLO組Simpson指數(shù)顯著高于對照組和1.0% MLO組(P<0.05),而各組間Shannon指數(shù)無顯著差異(P>0.05)。

圖2 大口黑鱸腸道菌群OTU維恩圖

表6 大口黑鱸腸道菌群alpha多樣性分析

如圖3所示,在門水平上,在大口黑鱸腸道中檢測出的微生物主要有10個門,其中優(yōu)勢菌門主要為厚壁菌門(Firmicutes,71.80%～82.15%)、變形菌門(Proteobacteria,6.16%～77.04%)、擬桿菌門(Bacteroidota,0.61%～4.43%)和梭桿菌門(Fusobacteriota,0.20%～3.45%)。與對照組相比,試驗組大口黑鱸腸道厚壁菌門相對豐度顯著降低(P<0.05),腸道變形菌門、梭桿菌門和擬桿菌門相對豐度顯著提高(P<0.05)。對照組、0.5% MLO組和1.0% MLO組厚壁菌門/擬桿菌門值分別為18.55、59.49和34.10;且與對照組相比,試驗組厚壁菌門/擬桿菌門值顯著提高(P<0.05)。

圖3 大口黑鱸腸道菌群在門和屬水平上的相對豐度

在屬水平上,從大口黑鱸腸道中檢測出22個屬的微生物。其中,相對豐度>1%的菌屬對照組組有5個,0.5% MLO組有3個,1.0% MLO組有7個。與對照組相比,試驗組大口黑鱸腸道支原體屬(Mycoplasma)相對豐度顯著降低(P<0.05),腸道不動桿菌屬(Acinetobacter)、乳桿菌屬(Lactobacillus)和芽孢桿菌屬(Bacillus)相對豐度顯著提高(P<0.05)。

2.5 飼料中添加MLO對大口黑鱸腸道免疫相關(guān)基因表達的影響

如圖4所示,與對照組相比,試驗組大口黑鱸腸道IL-8、NF-κB和TNF-αmRNA相對表達量顯著降低(P<0.05),腸道IL-10和TGF-βmRNA相對表達量顯著提高(P<0.05)。

數(shù)據(jù)柱形標注不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。

3 討 論

3.1 飼料中添加MLO對大口黑鱸生長性能的影響

目前,低聚糖在水產(chǎn)養(yǎng)殖中被廣泛應(yīng)用,且普遍能夠提高水產(chǎn)動物生長性能。Lin等[14]研究發(fā)現(xiàn),在飼料中添加0.25%的黃芪多糖(APS)和0.25%的殼聚糖(COS)可以顯著提高大口黑鱸的WGR和SGR,降低FCR。Torrecillas等[15]研究指出,用添加4 g/kg甘露聚糖(MOS)的飼料喂食歐洲舌齒鱸(Dicentrarchuslabrax)能夠顯著提高其WGR和SGR。此外,Wu等[7]研究表明,喂食含有4 g/kg低聚果糖(FOS)飼料的團頭魴(Megalobramaamblycephala),其終末體重和SGR顯著提高,同時FCR顯著降低。同樣,本試驗結(jié)果表明,經(jīng)過80 d的養(yǎng)殖試驗,飼料中添加0.5%和1.0%的MLO能夠顯著降低大口黑鱸的FCR,而WGR和SGR與對照組相比均有所提高,這可能是由于MLO提高了大口黑鱸腸道消化酶活性,從而促進了營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收。研究表明,肝臟損傷通常伴隨著肝臟重量和HSI的提高[16]。大口黑鱸作為肉食性魚類對飼料中淀粉不耐受,糖原在肝臟積累后會導致肝臟異常增大從而影響肝臟功能[17]。本研究發(fā)現(xiàn),飼料中添加1.0% MLO顯著降低了大口黑鱸的HSI。這可能是由于MLO具有降糖作用,減少了糖原在肝臟的積累,從而改善了肝臟健康。

3.2 飼料中添加MLO對大口黑鱸腸道消化酶活性的影響

水生動物的生長主要取決于腸道對各種營養(yǎng)物質(zhì)的消化、吸收和利用,一般通過測定腸道消化酶活性來評估水生動物的消化水平[18]。Hoseinifar等[19]研究發(fā)現(xiàn),飼料中添加0.5%和1.0%的短鏈低聚果糖能夠顯著提高鯉魚(Cyprinuscarpio)腸道消化酶活性,包括α-淀粉酶和脂肪酶。另一項研究表明,飼料中添加低聚木糖能夠顯著提高銀鯽(Carassiusauratusgibelio)腸道蛋白酶和淀粉酶活性[20]。本研究中,飼料中添加MLO顯著提高了大口黑鱸腸道α-淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶活性。前期研究發(fā)現(xiàn),MLO能夠調(diào)節(jié)糖脂代謝紊亂小鼠的腸道菌群,促進腸道益生菌產(chǎn)生短鏈脂肪酸[10]。因此,筆者推測可能是MLO進入大口黑鱸腸道后改善了腸道菌群,促進了短鏈脂肪酸的生成,從而提高了腸道消化酶活性。

3.3 飼料中添加MLO對大口黑鱸腸道組織形態(tài)的影響

腸道是魚類主要的消化器官,腸道結(jié)構(gòu)的完整性直接影響魚類的消化吸收和生長發(fā)育。魚類腸道對于外部環(huán)境的變化比較敏感,易受飼料成分等因素的影響,且易造成生理性損傷[21-23]。研究表明,飼料中添加1%的低聚半乳糖和低聚果糖能夠顯著提高美國紅魚(Sciaenopsocellatus)的幽門盲腸、近端腸和中腸的絨毛高度[22]。另一項研究報道,飼料中添加低聚甘露聚糖能夠顯著提高白鯛(DiplodussargusL.)的絨毛高度[23]。本研究中,與對照組相比,飼料中添加MLO對大口黑鱸腸道絨毛高度、絨毛寬度和肌層厚度沒有顯著影響,但試驗組絨毛高度、絨毛寬度和肌層厚度相對于對照組均有所提高,說明MLO對大口黑鱸腸道健康有一定的改善作用。

3.4 飼料中添加MLO對大口黑鱸腸道菌群的影響

腸道也是魚類的重要免疫器官,腸道微生物群落結(jié)構(gòu)在宿主營養(yǎng)吸收和健康方面發(fā)揮著重要作用[24]。本研究發(fā)現(xiàn),大口黑鱸腸道中最主要的4個菌門為厚壁菌門、變形菌門、梭桿菌門和擬桿菌門,這與其他關(guān)于大口黑鱸的研究結(jié)果[25-26]一致。郭明瑜[27]研究表明,飼料中添加β-葡聚糖對大口黑鱸腸道菌群α多樣性指標無顯著影響,但各項指標有降低趨勢。本研究發(fā)現(xiàn),與對照組相比,試驗組大口黑鱸腸道菌群的Sobs指數(shù)、ACE指數(shù)和Chao1指數(shù)均顯著降低,說明MLO的添加降低了大口黑鱸腸道菌群的豐富度。進一步分析發(fā)現(xiàn),飼料中添加MLO顯著降低了支原體屬相對豐度。而支原體屬是人類和動物的常見病原體,它們會誘導腸道炎癥反應(yīng)[28-29]。結(jié)果表明,飼料中添加MLO在一定程度上降低了大口黑鱸腸道炎癥反應(yīng)發(fā)生的風險。研究表明,厚壁菌門/擬桿菌門值反映了宿主的營養(yǎng)物質(zhì)運輸和利用的能力[30]。本研究發(fā)現(xiàn),與對照組相比,試驗組厚壁菌門/擬桿菌門值顯著提高,說明試驗組大口黑鱸對營養(yǎng)物質(zhì)的運輸和利用能力增強。不動桿菌屬對宿主的生長發(fā)育、抗病能力具有一定的促進作用[31-32];而乳桿菌屬作為一種益生菌,能夠代謝生成一些有機酸,生成多種消化酶,促進宿主生長發(fā)育[33];芽孢桿菌屬對宿主生長、免疫力有積極作用,能促進腸道菌群平衡[34]。本研究中,與對照組相比,試驗組腸道不動桿菌屬、乳桿菌屬和芽孢桿菌屬相對豐度均有所提高。這些結(jié)果提示,MLO可能是通過提高腸道有益菌屬的相對豐度,從而促進大口黑鱸的生長。

3.5 飼料中添加MLO對大口黑鱸腸道免疫相關(guān)基因表達的影響

魚的免疫狀態(tài)與炎癥密切相關(guān),并受炎性細胞因子的調(diào)節(jié)。魚類細胞因子可分為抗炎因子(如IL-10和TGF-β等)和促炎因子(如IL-8、NF-κB和TNF-α等),它們在免疫反應(yīng)中具有重要作用,NF-κB途徑通常與炎癥反應(yīng)和免疫活動有關(guān),可誘導大量炎癥因子,包括TNF-α和IL-8[35]。前期研究表明,MLO能夠顯著降低糖脂代謝紊亂小鼠血清TNF-α含量[10]。本研究中,飼料中添加MLO可以顯著降低大口黑鱸腸道中促炎因子(IL-8、NF-κB和TNF-α)的mRNA相對表達量,并顯著提高抗炎因子(IL-10和TGF-β)的mRNA相對表達量,表明MLO可能通過調(diào)節(jié)NF-κB途徑來降低炎癥反應(yīng),增強大口黑鱸的免疫功能。

4 結(jié) 論

飼料中添加MLO能夠降低大口黑鱸FCR、VSI和HSI,提高腸道消化酶活性,并調(diào)節(jié)腸道菌群,改善腸道益生菌相對豐度,增強其免疫功能。