王磊卿 郝科陽 馬 慧 張封東 馮 嘉 李景河 向玉軍 侯紅斌 閔育娜*

(1.西北農(nóng)林科技大學(xué)動物科技學(xué)院,楊陵 712100;2.銅川市動物衛(wèi)生監(jiān)督所,銅川 629000;3.旬邑縣動物疫病預(yù)防控制中心,旬邑 711300)

近年來,中草藥因其天然性、毒副作用小和無抗藥性等優(yōu)點而備受關(guān)注。同時中草藥規(guī)模化生產(chǎn)和加工產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅速,其加工副產(chǎn)物產(chǎn)量隨之急劇增加,造成極大的資源浪費[1]。有研究表明,中草藥加工副產(chǎn)物中富含的藥理活性成分具有提高機體免疫力和促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的潛在作用,可作為畜禽飼料添加劑或非常規(guī)飼料原料加以利用[2]。柴胡作為中醫(yī)藥常用藥材,其藥理活性成分主要有柴胡皂苷類、揮發(fā)油類、黃酮類以及多糖類等,具有抗炎、抗菌、抗氧化和免疫調(diào)節(jié)等生物學(xué)功能[3-4]。柴胡莖葉作為柴胡主要加工副產(chǎn)物,同樣含有豐富的藥理活性成分,具有調(diào)節(jié)抗氧化、免疫機能和促進(jìn)機體發(fā)育的潛在作用,但其粗纖維含量高和適口性差等特點,限制了柴胡莖葉直接作為常規(guī)飼料原料的開發(fā)利用[5-8]。微生物發(fā)酵可降低柴胡莖葉中粗纖維含量,提高粗蛋白質(zhì)含量。目前,發(fā)酵柴胡莖葉(fermented bupleurum stems and leaves,FBSL)對蛋雞生產(chǎn)性能、腸道形態(tài)和微生物區(qū)系的調(diào)控作用尚不清楚。因此,本研究基于微生物發(fā)酵技術(shù)降低柴胡莖葉粗纖維含量,提高適口性,探究發(fā)酵柴胡莖葉對蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、腸道形態(tài)、抗氧化性能和盲腸微生物區(qū)系的影響,以期為柴胡莖葉在蛋雞生產(chǎn)中應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

發(fā)酵底物為柴胡莖葉,發(fā)酵菌劑(購買于山東某生物科技有限公司)為芽孢桿菌(2×109CFU/g)、乳酸菌(3×109CFU/g)和酵母菌(5×108CFU/g)。將芽孢桿菌、乳酸菌和酵母菌菌粉按照1∶40(質(zhì)量體積比)比例溶于溫水中,充分?jǐn)嚢杓吹孟♂尵?再將稀釋菌液與柴胡莖葉混勻,控制水分含量為30%,溫度37 ℃,厭氧發(fā)酵48 h。經(jīng)測定,柴胡莖葉發(fā)酵前后營養(yǎng)水平和pH見表1。

表1 柴胡莖葉發(fā)酵前后營養(yǎng)水平和pH(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.2 試驗設(shè)計

選取384只35周齡京粉6號蛋雞,隨機分為4組,每組8個重復(fù),每個重復(fù)12只雞。對照組(CON組)飼喂基礎(chǔ)飼糧,試驗組分別飼喂基礎(chǔ)飼糧中添加5%(TM5%組)、10%(TM10%組)和15%發(fā)酵柴胡莖葉(TM15%組)的試驗飼糧。預(yù)試期2周,正試期12周。試驗飼糧組成及營養(yǎng)水平見表2。

表2 試驗飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.3 飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)試驗在陜西省銅川市春滿園養(yǎng)殖場開展。舍內(nèi)保持光照16 h/d,保持溫度在6～22 ℃。預(yù)試期均飼喂基礎(chǔ)飼糧,正試期飼喂相應(yīng)試驗飼糧。

1.4 樣品采集和指標(biāo)測定

1.4.1 飼糧營養(yǎng)水平

采用凱氏定氮法(GB/T 6432—2018)測定飼糧中粗蛋白質(zhì)(CP)含量,采用乙二胺四乙酸二鈉絡(luò)合滴定法(GB/T 6436—2018)測定飼糧中鈣(Ca)含量,采用分光光度法(GB/T 6437—2018)測定飼糧中總磷(TP)含量。依據(jù)《中國飼料成分及營養(yǎng)價值表(第30版)》[9]計算飼糧中代謝能(ME)、粗纖維(CF)、賴氨酸(Lys)、蛋氨酸(Met)和半胱氨酸(Cys)含量,依據(jù)《家禽飼料成分表(1994)》[10]計算飼糧中有效磷(AP)含量。

1.4.2 生產(chǎn)性能

每天記錄各組產(chǎn)蛋數(shù)、蛋重以及采食量,并計算產(chǎn)蛋率(laying rate,LR)、平均蛋重(average egg weight,AEW)、平均日采食量(average daily feed intake,ADFI)和料蛋比(feed to egg ratio,F/E)。

1.4.3 蛋品質(zhì)

飼養(yǎng)結(jié)束前3 d,連續(xù)收集每天全部產(chǎn)蛋。每重復(fù)隨機抽取5枚雞蛋進(jìn)行蛋品質(zhì)指標(biāo)的測定。測定儀器為多功能蛋品質(zhì)分析儀(12-ETU-001Version A)。檢測指標(biāo)包括蛋殼強度、蛋白高度、蛋黃顏色、哈氏單位和蛋殼厚度,具體的檢測方法依據(jù)多功能蛋品質(zhì)分析儀說明書(Egg Tester UltimateTMoperator’s manual)進(jìn)行。

1.4.4 腸道形態(tài)

正試期后,每重復(fù)隨機取1只蛋雞,稱重,頸靜脈放血處死,解剖,完整分離小腸,并在十二指腸、空腸和回腸中段取約1 cm長度的腸段置于4%多聚甲醛中進(jìn)行固定,用于腸道形態(tài)測定;剩余十二指腸、空腸和回腸用磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗后,刮取腸黏膜,液氮速凍,并于-80 ℃中保存,用于腸道抗氧化指標(biāo)測定;最后分離盲腸部分,并采集盲腸內(nèi)容物,液氮速凍,并于-80 ℃中保存,用于微生物區(qū)系測定。

十二指腸、空腸和回腸腸段固定48 h后,從固定液中取出腸段用石蠟進(jìn)行包埋,制成切片并使用蘇木精-伊紅(HE)進(jìn)行染色,于光學(xué)顯微鏡下觀察并拍照。利用Image Pro Plus 6.0軟件測定各腸段絨毛高度和隱窩深度,并計算絨隱比(絨毛高度/隱窩深度)。

1.4.5 腸道抗氧化指標(biāo)

樣品采集見1.4.4。采用標(biāo)準(zhǔn)試劑盒(購自南京建成生物工程研究所)測定腸道過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量及總抗氧化能力(T-AOC)。

1.4.6 盲腸微生物區(qū)系

樣品采集見1.4.4。將盲腸內(nèi)容物樣品送至杭州聯(lián)川生物技術(shù)股份有限公司進(jìn)行16S rDNA測序分析。選擇十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)法對樣本進(jìn)行微生物組總DNA的提取,并通過瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA提取質(zhì)量,同時采用紫外分光光度計DNA進(jìn)行定量。用引物341F(5′-CCTACGGGNGGCWGCAG-3′)和805R(5′-GACTACHVGGGTATCTAATCC-3′)對微生物16S r RNA基因V3～V4可變區(qū)進(jìn)行PCR擴增。PCR產(chǎn)物由AMPure XT beads (Beckman Coulter Genomics公司,美國)純化,Qubit(Invitrogen公司,美國)定量,通過2%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測,采用AMPure XT beads回收試劑盒進(jìn)行回收。使用Agilent 2100生物分析儀(Agilent公司,美國)和Illumina(Kapa Biosciences公司,美國)的文庫定量試劑盒對PCR產(chǎn)物進(jìn)行評估,使用NovaSeq 6000測序儀進(jìn)行2×250 bp測序。對數(shù)據(jù)進(jìn)行相應(yīng)的拆分、拼接、過濾和DADA2去噪后獲得ASV(feature)特征序列和豐度表格?；诘玫降腁SV(feature)特征序列和豐度表格進(jìn)行alpha多樣性和beta多樣性分析。根據(jù)ASV(feature)序列文件,采用SILVA數(shù)據(jù)庫以NT-16S數(shù)據(jù)庫進(jìn)行物種注釋。

1.5 統(tǒng)計分析

利用Excel 2019進(jìn)行初步的數(shù)據(jù)整理分析,再利用SPSS 26.0軟件進(jìn)行單因素方差分析和Duncan氏法多重比較。結(jié)果用平均值和均值標(biāo)準(zhǔn)誤(SEM)表示,P<0.05表示差異顯著。統(tǒng)計圖表用GraphPad Prism 9進(jìn)行繪制。

2 結(jié) 果

2.1 發(fā)酵柴胡莖葉對蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)的影響

由表3可知,與CON組相比,TM5%、TM10%和TM15%組的37～48周齡平均蛋重顯著提高(P<0.05),TM5%和TM10%組的41～44周齡和45～48周齡平均蛋重顯著提高(P<0.05)。各組之間各階段產(chǎn)蛋率、平均日采食量和料蛋比無顯著差異(P>0.05)。

由表4可知,與CON組相比,TM10%組的蛋殼厚度顯著提高(P<0.05)。各組之間蛋殼強度、蛋黃顏色、蛋白高度和哈氏單位無顯著差異(P>0.05)。

表4 發(fā)酵柴胡莖葉對蛋雞蛋品質(zhì)的影響

2.2 發(fā)酵柴胡莖葉對蛋雞腸道形態(tài)的影響

由表5可知,與CON組相比,TM15%組的十二指腸絨毛高度和絨隱比顯著提高(P<0.05)。各組之間空腸和回腸絨毛高度、隱窩深度和絨隱比無顯著差異(P>0.05)。

表5 發(fā)酵柴胡莖葉對蛋雞腸道形態(tài)的影響

2.3 發(fā)酵柴胡莖葉對蛋雞腸道抗氧化指標(biāo)的影響

由表6可知,與CON組相比,TM5%、TM10%和TM15%組的十二指腸SOD活性顯著提高(P<0.05);TM10%和TM15%組的十二指腸MDA含量顯著降低(P<0.05),十二指腸CAT和GSH-Px活性顯著提高(P<0.05);TM10%組的十二指腸T-AOC顯著提高(P<0.05)。與CON組相比,TM5%、TM10%和TM15%組的空腸SOD活性和T-AOC顯著提高(P<0.05),TM10%和TM15%組的空腸MDA含量顯著降低(P<0.05)。與CON組相比,TM10%和TM15%組的回腸CAT活性顯著提高(P<0.05),TM5%和TM15%組的回腸SOD活性顯著提高(P<0.05)。

表6 發(fā)酵柴胡莖葉對蛋雞腸道抗氧化指標(biāo)的影響

2.4 發(fā)酵柴胡莖葉對蛋雞盲腸微生物區(qū)系的影響

2.4.1 盲腸微生物多樣性分析

由表7可知,與CON組相比,TM5%、TM10%和TM15%組的盲腸微生物α多樣性指數(shù)Chao1、Observed-Otus和Shannon指數(shù)顯著提高(P<0.05)。

表7 發(fā)酵柴胡莖葉對蛋雞盲腸微生物α多樣性的影響

由圖1可知,發(fā)酵柴胡莖葉改變了盲腸微生物的β多樣性,其中TM5%組與CON組盲腸微生物組成差異最大。

圖1 發(fā)酵柴胡莖葉對蛋雞盲腸微生物β多樣性的影響

2.4.2 盲腸微生物物種組成分析

據(jù)圖2可知,各組盲腸微生物門水平的優(yōu)勢物種為厚壁菌門(Firmicutes)、擬桿菌門(Bacteriodata)、脫硫桿菌門(Desulfobacterota)、變形菌門(Proteobacteria)和酸桿菌門(Actinobacteriota)。各組盲腸微生物屬水平的優(yōu)勢物種為擬桿菌屬(Bacteroides)、理研菌科RC9腸道群(Rikenellaceae_RC9_gut_group)、糞桿菌屬(Faecalibacterium)、脫硫弧菌屬(Desulfovibrio)、未分類的擬桿菌科(Bacteroidales_unclassified)、未分類的梭菌綱UCG-014(Clostridia_UCG-014_unclassified)等。

Firmicutes:厚壁菌門;Bacteriodata:擬桿菌門;unclassified 未分類;Desulfobacterota:脫硫桿菌門;Proteobacteria:變形菌門;Actinobacteriota:酸桿菌門;Fusobacteriota:梭桿菌門;Synergistota:互養(yǎng)菌門;Verrucomicrobiota:疣微菌門;Deferribacterota:脫鐵桿菌門。Bacteroides:擬桿菌屬;Rikenellaceae_RC9_gut_group:理研菌科RC9腸道群;Faecalibacterium:糞桿菌屬;Desulfovibrio:脫硫弧菌屬;Bacteroidales_unclassified:未分類的擬桿菌科;Megamonas:巨單胞菌屬;Lachnospiraceae_unclassified:未分類的毛螺菌科;Clostridiales_unclassified:未分類的梭菌科;Ruminococcaceae_unclassified:未分類的瘤胃球菌科;Firmicutes_unclassified:未分類的厚壁菌門;Fournierella:馬西里福涅拉氏菌屬;Shuttleworthia:沙特爾沃思菌屬;Oscillibacter:顫螺菌屬;Clostridium:梭菌屬;Alistipes:另支菌屬;Ligilactobacillus:聯(lián)合乳桿菌屬;Prevotellaceae_UCG-001:普雷沃氏菌科UCG-001;Lactobacillus:乳桿菌屬;Limosilactobacillus:黏液乳桿菌屬;Romboutsia:羅姆布茨菌屬;Pediococcus:片球菌屬;Others:其他。

由表8可知,各組之間盲腸微生物相對豐度在門水平上無顯著差異(P>0.05)。由圖3可知,與CON組相比,TM5%、TM10%和TM15%組的盲腸另支菌屬(Alistipes)相對豐度顯著降低(P<0.05);TM15%組的盲腸Clostridia_UCG-014_unclassified相對豐度顯著降低(P<0.05),沙特爾沃思菌屬(Shuttleworthia)和普雷沃氏菌科UCG-001(Prevotellaceae_UCG-001)相對豐度顯著升高(P<0.05)。

*表示差異顯著(P<0.05),ns表示差異不顯著(P>0.05)。

表8 發(fā)酵柴胡莖葉對蛋雞盲腸微生物優(yōu)勢菌門相對豐度的影響

2.4.3 蛋雞盲腸微生物差異物種相關(guān)性分析

據(jù)圖4可知,Alistipes相對豐度與十二指腸SOD活性、空腸CAT活性以及回腸SOD活性和T-AOC呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05);Clostridia_UCG-014_unclassified相對豐度與十二指腸CAT活性以及回腸CAT、SOD活性呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05),而與空腸MDA含量呈顯著正相關(guān)(P<0.05);Prevotellaceae_UCG-001相對豐度與十二指腸CAT、GSH-Px活性和空腸T-AOC以及十二指腸絨毛高度、絨隱比呈顯著正相關(guān)(P<0.05);Shuttleworthia相對豐度與空腸SOD活性和十二指腸絨毛高度呈顯著正相關(guān)(P<0.05),而與十二指腸MDA含量和回腸T-AOC呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)

D-CAT:十二指腸過氧化氫酶 duodenal catalase;D-MDA:十二指腸丙二醛 duodenal malondialdehyde;D-GSH-Px:十二指腸谷胱甘肽過氧化物酶 duodenal glutathione peroxidase;D-SOD:十二指腸超氧化物歧化酶 duodenal superoxide dismutase;D-T-AOC:十二指腸總抗氧化能力 duodenal total antioxidant capacity;J-CAT:空腸過氧化氫酶 jejunal catalase;J-MDA:空腸丙二醛 jejunal malondialdehyde;J-GSH-Px:空腸谷胱甘肽過氧化物酶 jejunal glutathione peroxidase;J-SOD:空腸超氧化物歧化酶 jejunal superoxide dismutase;J-T-AOC:空腸總抗氧化能力 jejunal total antioxidant capacity;I-CAT:回腸過氧化氫酶 ileal catalase;I-MDA:回腸丙二醛 ileal malondialdehyde;I-GSH-Px:回腸谷胱甘肽過氧化物酶 ileal glutathione peroxidase;I-SOD:回腸超氧化物歧化酶 ileal superoxide dismutase;I-T-AOC:回腸總抗氧化能力 ileal total antioxidant capacity;D-VH:十二指腸絨毛高度 duodenal villus height;D-CD:十二指腸隱窩深度 duodenal crypt depth;D-VH/CD:十二指腸絨隱比 duodenal villus height/crypt depth。Alistipes:另支菌屬;Clostridia_UCG-014_unclassified:未分類的梭菌綱UCG-014;Prevotellaceae_UCG-001:普雷沃氏菌科UCG-001;Shuttleworthia:沙特爾沃思菌屬。

3 討 論

3.1 發(fā)酵柴胡莖葉對蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)的影響

柴胡中含有豐富的藥理活性成分。研究表明,柴胡提取物可顯著提高肉雞平均日增重和飼料轉(zhuǎn)化率[11-12]。柴胡莖葉同樣含有豐富的黃酮和皂苷等活性物質(zhì),且具有種植面積廣、產(chǎn)量大、價格低廉等優(yōu)點,但因其粗纖維含量高、適口性差等特點限制了其在家禽中的應(yīng)用。發(fā)酵可以降低飼糧中粗纖維含量,提高風(fēng)味和適口性,促進(jìn)蛋雞的采食,從而有利于生產(chǎn)性能的發(fā)揮。崔藝燕等[13]研究表明,發(fā)酵可以提高桑葉粗蛋白質(zhì)和必需氨基酸含量,降低粗纖維、單寧含量和pH。許棟等[14]研究發(fā)現(xiàn),飼糧中添加4 g/kg發(fā)酵中草藥(黨參、白術(shù)、白芍、茯苓等)可提高蛋雞產(chǎn)蛋率和蛋品質(zhì)。本研究中,飼糧中添加發(fā)酵柴胡莖葉未對生產(chǎn)性能提升產(chǎn)生顯著影響,可能是由于柴胡莖葉中粗纖維含量較高。但發(fā)酵柴胡莖葉在提高平均蛋重和蛋殼厚度方面作用顯著,這可能與發(fā)酵處理有關(guān)。本研究采用的發(fā)酵菌種為乳酸菌,可下調(diào)柴胡莖葉pH,酸性環(huán)境有利于鈣的吸收。同時,發(fā)酵可以提高粗蛋白質(zhì)和必需氨基酸含量,改善氨基酸平衡,從而促進(jìn)氨基酸和鈣的吸收以及體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成,進(jìn)而提高平均蛋重和蛋殼厚度。

3.2 發(fā)酵柴胡莖葉對蛋雞腸道形態(tài)的影響

小腸是動物消化吸收的主要部位,腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的完整性是營養(yǎng)物質(zhì)有效利用的基礎(chǔ)。絨毛高度、隱窩深度和絨隱比是衡量小腸黏膜形態(tài)的重要指標(biāo),可直接反映腸道的消化吸收能力。王士杰等[15]研究發(fā)現(xiàn),飼糧中添加加味小柴胡散可顯著提高鵪鶉腸道絨毛高度,降低隱窩深度和腸壁厚度。謝濤[12]研究發(fā)現(xiàn),柴胡提取物或者其與復(fù)合酸化劑聯(lián)用可有效緩解球蟲誘導(dǎo)的十二指腸絨毛高度和絨隱比的降低,這與本研究結(jié)果類似。發(fā)酵柴胡莖葉在十二指腸的腸道形態(tài)改善方面具有顯著效果,這可能是由于添加發(fā)酵柴胡莖葉改善了飼糧粗纖維水平。研究表明,適度添加飼糧纖維可改善腸道結(jié)構(gòu),提高腸道絨毛高度,促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)吸收[16]。Tejeda等[17]研究表明,飼糧中添加8%大豆殼顯著提高了肉雞十二指腸絨毛高度。這也可能是蛋殼厚度提高的重要原因。研究表明,鈣離子在體內(nèi)吸收主要集中在十二指腸和空腸[18]。十二指腸絨毛高度和絨隱比的提升,增大了絨毛與鈣離子的接觸面積,進(jìn)而促進(jìn)鈣的吸收,提高鈣在蛋殼上的沉積,改善蛋殼厚度。

3.3 發(fā)酵柴胡莖葉對蛋雞腸道抗氧化指標(biāo)的影響

腸道是機體抵抗氧化應(yīng)激的重要屏障,也是活性氧(ROS)主要來源部位[19-20]。MDA常用以反映機體氧化產(chǎn)物累積程度。酶促抗氧化系統(tǒng)是機體氧化還原穩(wěn)態(tài)的重要保障,主要包括GSH-Px、SOD和CAT等,以清除自由基,防止氧化損傷[21]。研究表明,黃酮類物質(zhì)是良好的外源性抗氧化劑,可終止ROS的鏈?zhǔn)椒磻?yīng)[22],并且是柴胡莖葉的主要活性物質(zhì)[4-6,23]。劉秀芳等[24]報道,小葉黑柴胡莖葉總黃酮能有效清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和羥基自由基,表現(xiàn)出良好的抗氧化性能。詹雪晶等[25]也發(fā)現(xiàn)小葉黑柴胡莖葉總黃酮可提高小鼠肝臟SOD活性,降低肝臟MDA含量,緩解急性肝臟氧化損傷。發(fā)酵可以有效提高機體對中草藥中活性成分的利用[26]。本研究中,飼糧中添加發(fā)酵柴胡莖葉提高了腸道抗氧化酶活性,并降低了腸道MDA含量,與劉秀芳等[24]、詹雪晶等[25]研究結(jié)果類似。這表明發(fā)酵柴胡莖葉可有效提高蛋雞腸道抗氧化能力,發(fā)酵處理可能進(jìn)一步促進(jìn)了機體對柴胡莖葉中黃酮類等抗氧化物質(zhì)的利用,充分發(fā)揮了柴胡莖葉的抗氧化性能。結(jié)合腸道抗氧化指標(biāo),蛋雞飼糧發(fā)酵柴胡莖葉的適宜添加水平為10%。

3.4 發(fā)酵柴胡莖葉對蛋雞盲腸微生物區(qū)系的影響

腸道微生物多樣性對腸道健康、營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收有著重要影響。微生物多樣性的降低可能會減弱腸道抗干擾能力,造成腸道疾病[24]。一般采用Chao1、Observed-Otus和Shannon指數(shù)反映腸道微生物的豐富度和多樣性。本研究發(fā)現(xiàn),飼糧中添加發(fā)酵柴胡莖葉顯著提高了盲腸微生物的Chao1、Observed-Otus和Shannon指數(shù)。這表明發(fā)酵柴胡莖葉可以提高腸道微生物區(qū)系穩(wěn)定性及抗干擾能力,促進(jìn)腸道健康。

飼糧中添加發(fā)酵柴胡莖葉改變了盲腸微生物區(qū)系的物種組成,其中屬水平主要差異物種有Alistipes、Clostridia_UCG-014_unclassified、Shuttleworthia和Prevotellaceae_UCG-001。研究表明,Alistipes是一種潛在的致病菌,其相對豐度與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)[27-28]。Clostridia_UCG-014_unclassified中大部分為機會病原菌,且可能與促炎作用相關(guān)[29-30]。本研究中,飼糧中添加發(fā)酵柴胡莖葉降低了盲腸Alistipes和Clostridia_UCG-014_unclassified相對豐度,且與腸道抗氧化指標(biāo)存在顯著負(fù)相關(guān)。這表明發(fā)酵柴胡莖葉可能會通過調(diào)節(jié)與炎癥反應(yīng)相關(guān)的微生物相對豐度,從而緩解腸道炎癥,提高腸道抗氧化性能,改善腸道健康。Liu等[31]、李金燕等[32]報道,Shuttleworthia相對豐度與鳥類體重增長、飼料轉(zhuǎn)化率和胸肌或腿肌總膽固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量呈顯著正相關(guān),并推測其可能通過分泌短鏈脂肪酸參與碳水化合物和脂質(zhì)代謝,促進(jìn)體重增加。Prevotellaceae_UCG-001與蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)及回腸pH呈正相關(guān),并可能在維持腸道酸性環(huán)境中起著關(guān)鍵作用[33-34]。研究表明,腸道低pH有利于鈣離子的吸收,提高鈣的利用率[35]。本研究中,飼糧中添加發(fā)酵柴胡莖葉提高了盲腸Shuttleworthia和Prevotellaceae_UCG-001相對豐度,并且其與十二指腸絨毛高度呈顯著正相關(guān)。十二指腸是鈣離子主要吸收部位。這表明飼糧中添加發(fā)酵柴胡莖葉可以通過調(diào)節(jié)腸道微生物區(qū)系,降低有害菌相對豐度,提高有益菌相對豐度,緩解腸道炎癥,提升腸道形態(tài)和抗氧化性能,降低腸道pH,促進(jìn)鈣離子和蛋白質(zhì)的吸收,提升蛋重和蛋殼厚度。

4 結(jié) 論

飼糧中添加發(fā)酵柴胡莖葉可提高蛋雞盲腸Shuttleworthia和Prevotellaceae_UCG-001相對豐度,降低Alistipes和Clostridia_UCG-014_unclassified相對豐度,改善腸道形態(tài)和抗氧化性能,促進(jìn)蛋白質(zhì)的消化利用和鈣的吸收,進(jìn)而提升蛋重和蛋殼厚度。在本試驗條件下,蛋雞飼糧中發(fā)酵柴胡莖葉適宜添加水平為10%。