張馨心，劉亞清，崔永輝，許春進(jìn)

商丘市第一人民醫(yī)院消化內(nèi)科，河南 商丘 476000

乙型肝炎病毒（HBV）屬于DNA嗜肝病毒，易損傷人體肝細(xì)胞，造成肝功能異常［1］?；颊叨酁榧毙愿腥?，以食欲減退、黃疸、全身乏力為典型癥狀，嚴(yán)重者可誘發(fā)肝硬化或肝癌的發(fā)生。肝癌晚期患者1 年內(nèi)的預(yù)后較差，死亡率較高［2］。目前，在臨床診療中相對缺乏早期肝癌的診斷指標(biāo)，劉沁雨等［3］在慢性乙型肝炎（CHB）患者的治療中發(fā)現(xiàn)，高爾基體蛋白73（GP73）對代償期肝硬化患者具有較高的診斷價(jià)值。白介素-28B（IL-28B）作為Ⅲ型干擾素家族成員之一，積極參與免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)等相關(guān)過程，IL-28B 基因多態(tài)性與CHB 患者干擾素治療的應(yīng)答密切相關(guān)已被廣泛證實(shí)，但其在HBV相關(guān)性肝癌中的表達(dá)研究較少［4］。而在HBV-DNA 的復(fù)制過程中，易造成患者干細(xì)胞纖維化程度進(jìn)一步加劇、機(jī)體免疫功能紊亂等情況，從而改變T 淋巴細(xì)胞亞群的比例，推測T 淋巴細(xì)胞數(shù)目和功能的變化，預(yù)示著機(jī)體免疫狀態(tài)的失衡［5］。因此，本研究旨在分析乙型肝炎相關(guān)性肝癌患者T 淋巴細(xì)胞、IL-28B及GP73的表達(dá)及臨床意義，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018 年10 月—2021 年10 月商丘市第一人民醫(yī)院收治的119 例乙型肝炎相關(guān)性肝癌患者作為觀察組，選取同期體檢的112 例健康人群作為對照組。觀察組：男63例，女56 例；年齡29～75 歲，平均年齡（49.12±7.34）歲；分化程度為低55 例，中34 例，高30 例；TNM 分期為Ⅰ期41 例，Ⅱ期50 例， Ⅲ期19 例，Ⅳ期9 例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況為轉(zhuǎn)移39 例，未轉(zhuǎn)移80 例。對照組：男61 例，女51 例；年齡30～78 歲，平均年齡（50.31±8.04）歲。兩組研究對象一般資料具有可比性（P＞0.05）。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過。

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）病歷資料完整。（2）經(jīng)病理學(xué)檢查確診。（3）之前均未接受放化療。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）存在自身免疫性疾病。（2）合并其他血液、腫瘤疾病。（3）嚴(yán)重心、腎功能異常。

1.2 方法

血清IL-28B 及GP73、T 淋巴細(xì)胞檢測：抽取所有患者5 mL 空腹靜脈血，其中，2 mL 外周靜脈血采用EDTA-K2 抗凝處理，使用流式細(xì)胞儀（泛肽生物科技（浙江）有限公司，浙械注準(zhǔn)20212220112）檢測T 淋巴細(xì)胞指標(biāo)。將另外3 mL 外周靜脈血進(jìn)行離心處理（轉(zhuǎn)速為3 000 r/min，10 min），得到血清后低溫儲(chǔ)存。使用酶聯(lián)免疫法檢測IL-28B及GP73水平。

臨床資料采集：詳細(xì)記錄患者性別、年齡、煙酒史及以往病史，收集患者腫瘤數(shù)目、最大直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及TNM 分期、血清IL-28B 及GP73、T 淋巴細(xì)胞水平等資料。通過電話、走訪等形式統(tǒng)計(jì)觀察組患者1 年內(nèi)的生存情況，終點(diǎn)事件為患者死亡或達(dá)到1年隨訪期。

1.3 觀察指標(biāo)

（1）比較兩組研究對象血清IL-28B、GP73 及T 淋巴細(xì)胞水平。（2）分析血清IL-28B、GP73 及T 淋巴細(xì)胞水平與臨床病理特征的關(guān)系。（3）對比不同生存情況的患者血清IL-28B、GP73及T淋巴細(xì)胞水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t 檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組研究對象IL-28B、GP73及T淋巴細(xì)胞水平情況

觀察組血清IL-28B、GP73 及CD8+表達(dá)水平均高于對照組，CD3+、CD4+及CD4+/CD8+均低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組研究對象IL-28B、GP73及T淋巴細(xì)胞水平情況（±s）

表1 兩組研究對象IL-28B、GP73及T淋巴細(xì)胞水平情況（±s）

組別觀察組（n=119）對照組（n=112）t值P值GP73（ng/mL）201.34±9.12 40.36±7.19 148.380＜0.001 IL-28B（ρ/pg·mL-1）719.23±152.43 502.34±87.51 13.155＜0.001 CD3+（%）70.34±6.27 78.26±5.96 9.827＜0.001 CD4+（%）41.29±5.03 48.27±5.64 9.939＜0.001 CD8+（%）36.94±4.31 27.91±4.06 16.367＜0.001 CD4+/CD8+（%）0.92±0.15 1.54±0.57 11.453＜0.001

2.2 兩組研究對象IL-28B、GP73與病理特征的關(guān)系情況

不同年齡、性別、腫瘤直徑的HBV相關(guān)性肝癌患者血清中IL-28B、GP73 水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期、低分化、有血管浸潤者血清中IL-28B、GP73 水平高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM 分期Ⅰ～Ⅱ期、中/高分化、有無血管浸潤者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 兩組研究對象IL-28B、GP73與病理特征的關(guān)系情況（±s）

表2 兩組研究對象IL-28B、GP73與病理特征的關(guān)系情況（±s）

項(xiàng)目性別例數(shù)（例）GP73（ng/mL）t值1.353 P值0.179 IL-28B（ρ/pg·mL-1）t值0.378 P值0.706男 女63 56 198.41±5.01 196.96±6.64 702.26±142.34 692.54±136.97年齡＜60歲≥60歲TNM分期Ⅰ～Ⅱ期Ⅲ～Ⅳ期分化程度中、高分化低分化淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況1.827 0.070 0.299 0.765 50 69 198.34±6.24 200.36±5.61 698.23±152.34 706.34±141.09 4.529＜0.001 1.986 0.049 91 28 199.23±5.42 204.64±5.87 662.37±126.41 715.98±119.64 3.583＜0.001 2.125 0.036 64 55 201.84±6.01 205.68±5.61 671.42±124.31 719.20±120.07 5.240＜0.001 2.127 0.035否 是80 39 201.24±5.44 206.64±4.92 669.23±119.54 719.14±121.34腫瘤直徑＜3 cm≥3 cm血管浸潤1.810 0.073 0.366 0.715 68 51 203.61±4.83 205.29±5.24 689.64±132.24 698.52±129.61 5.776＜0.001 2.112 0.037否 是81 38 198.52±4.93 204.24±5.26 663.24±124.61 715.64±129.51

2.3 T淋巴細(xì)胞的表達(dá)水平與病理特征的關(guān)系情況

HBV 相關(guān)性肝癌患者血清中CD3+、CD4+、CD8+在不同年齡、性別、腫瘤直徑中比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），CD3+、CD4+、CD8+水平在不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、TNM分期、分化程度及血管浸潤中比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表3。

表3 T淋巴細(xì)胞的表達(dá)水平與病理特征的關(guān)系情況（±s）

表3 T淋巴細(xì)胞的表達(dá)水平與病理特征的關(guān)系情況（±s）

項(xiàng)目性別例數(shù)（例）CD3+（%）t值0.404 P值0.687 CD4+（%）t值1.504 P值0.135 CD8+（%）t值0.814 P值0.417 CD4+/CD8+t值0.981 P值0.329男 女63 56 72.34±5.31 71.96±4.91 40.23±4.21 41.36±3.95 35.12±3.07 34.69±2.64 0.84±0.06 0.85±0.05年齡＜60歲≥60歲TNM分期Ⅰ～Ⅱ期Ⅲ～Ⅳ期分化程度中、高分化低分化淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況否 是腫瘤直徑＜3 cm≥3 cm血管浸潤50 69 91 28 64 55 80 39 68 51 72.34±5.64 71.23±4.26 73.64±3.61 72.32±4.13 71.11±3.67 70.64±3.24 70.34±3.64 69.15±3.57 71.34±3.57 69.95±4.26 1.2230.224 1.6350.105 0.7350.464 1.6840.095 1.9340.055 1.4060.162 41.13±4.21 40.26±4.62 39.54±3.12 38.24±3.54 40.17±3.94 39.54±3.16 41.06±4.16 39.67±5.34 39.11±3.64 38.86±3.74 1.0520.295 1.8670.064 0.9510.343 1.5550.123 0.3660.715 1.8350.069 33.94±2.94 34.17±3.64 33.42±2.67 34.14±2.57 34.86±2.97 35.24±2.19 32.91±2.54 33.26±3.61 33.17±3.15 33.99±2.65 0.3680.714 1.2590.211 0.7830.435 0.6120.542 1.5020.136 0.3360.737 0.83±0.05 0.81±0.07 0.89±0.06 0.81±0.08 0.91±0.07 0.83±0.05 0.85±0.06 0.79±0.07 0.87±0.08 0.85±0.04 1.726 5.681 7.065 4.844 1.637 9.108 0.087＜0.001＜0.001＜0.001 0.104＜0.001否 是81 38 71.24±3.95 72.36±4.26 40.29±3.67 38.92±4.06 33.96±2.54 34.14±3.08 0.87±0.02 0.82±0.04

2.4 不同生存情況的患者血清IL-28B、GP73 及T 淋巴細(xì)胞水平情況

隨訪1 年，其中有35 例患者死亡，4 例患者失訪。死亡者血清GP73、IL-28B 水平均高于生存者，CD4+/CD8+指標(biāo)低于生存者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表4。

表4 不同生存情況的患者血清IL-28B、GP73及T淋巴細(xì)胞水平情況（±s）

表4 不同生存情況的患者血清IL-28B、GP73及T淋巴細(xì)胞水平情況（±s）

生存情況死亡（n=35）生存（n=80）t值P值GP73（ng/mL）228.31±9.12 196.34±9.64 16.629＜0.001 IL-28B（ρ/pg·mL-1）762.34±126.54 709.64±124.18 2.082 0.040 CD3+（%）67.94±5.14 69.41±3.59 1.761 0.081 CD4+（%）40.27±5.05 42.16±4.58 1.973 0.051 CD8+（%）36.15±4.07 34.81±4.57 1.494 0.138 CD4+/CD8+0.81±0.06 0.95±0.08 9.267＜0.001

3 討論

近年來，隨著腫瘤免疫逃逸機(jī)制的發(fā)現(xiàn)，臨床工作者逐漸重視機(jī)體免疫功能在腫瘤發(fā)展、遷移過程中起到的作用［6］。乙型肝炎相關(guān)性肝癌患者體內(nèi)同時(shí)存在HBV與腫瘤抗原的雙重刺激，擁有較為復(fù)雜的免疫狀態(tài)［7］。因此，深入探索相關(guān)因子及免疫功能在乙型肝炎相關(guān)性肝癌發(fā)展、遷移過程中的水平變化尤為重要。

陳超等［8］通過對98 例HBV 相關(guān)性肝癌患者血清因子水平的分析發(fā)現(xiàn)，GP73 呈異常表達(dá)趨勢，在蛋白水解酶的分解作用下，使得GP73 表達(dá)水平顯著增加。而本研究結(jié)果提示，GP73 水平的升高與肝功能損傷有關(guān)。IL-28B與Ⅰ型干擾素具有相似的生物活性和相同的信號(hào)傳導(dǎo)途徑，主要是在病毒或雙鏈RNA 的誘導(dǎo)作用下，產(chǎn)生樹突、巨噬、內(nèi)皮細(xì)胞，進(jìn)一步激活MAPK 等信號(hào)通路，達(dá)到實(shí)現(xiàn)免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗病毒的目的［9］。當(dāng)出現(xiàn)病毒感染時(shí)，CD3+能夠反應(yīng)機(jī)體一系列的免疫狀態(tài)，而CD4+在免疫應(yīng)答過程中能夠有效清除病毒，同時(shí)，影響CD8+的激活和抑制。本研究結(jié)果表明，IL-28B、GP73 水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及TNM 分期、分化程度及血管浸潤有關(guān)，提示IL-28B、GP73 參與乙型肝炎相關(guān)性肝癌的發(fā)生、發(fā)展過程。IL-28B、GP73 血清水平能夠間接地反映疾病的嚴(yán)重程度，受到臨床工作者的高度重視。同時(shí)，胡善雷等［10］研究發(fā)現(xiàn)，GP73 的表達(dá)與炎癥損傷狀態(tài)及患者肝功能情況存在聯(lián)系。當(dāng)存在HBV感染時(shí)，淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)水平紊亂，進(jìn)而導(dǎo)致免疫功能下降，造成病情的加重，三者形成惡性循環(huán)［11］。本研究結(jié)果顯示，CD4+/CD8+水平變化與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及TNM 分期、分化程度和血管浸潤有關(guān)，間接證實(shí)了HBV 的復(fù)制對機(jī)體內(nèi)T細(xì)胞亞群的表達(dá)存在一定的影響。分析其原因在于，在HBV-DNA 的復(fù)制過程中，會(huì)損耗大量CD4+，而CD8+在體內(nèi)抗原慢性刺激的作用下，表達(dá)水平不斷上升，造成CD4+/CD8+顯著下降的情況發(fā)生。候?qū)氈薜龋?2］提出，在腫瘤免疫治療過程中，機(jī)體免疫系統(tǒng)發(fā)揮著識(shí)別、靶向作用。由此可見，嚴(yán)密監(jiān)測HBV 相關(guān)性肝癌患者的外周血T 淋巴細(xì)胞平衡，有利于評估疾病進(jìn)展和免疫功能。此外，本研究結(jié)果表明，死亡患者血清GP73、IL-28B 水平均高于生存患者，CD4+/CD8+指標(biāo)低于生存患者，提示GP73、IL-28B 及CD4+/CD8+指標(biāo)能有效反映患者的預(yù)后情況。GP73 作為一種高爾基體Ⅱ型跨膜蛋白，不僅在肝癌患者血清水平中出現(xiàn)特異性增高的情況，而且在其他肝病中也會(huì)出現(xiàn)此類型情況。因此，GP73 對于早期肝癌的診斷受到諸多質(zhì)疑［13］，但仍可作為反應(yīng)乙型肝炎相關(guān)性肝癌患者病情程度和生存預(yù)后情況的分子指標(biāo)。

綜上所述，乙型肝炎相關(guān)性肝癌患者血清IL-28B、GP733及CD8+表達(dá)水平明顯升高，CD3+、CD4+及CD4+/CD8+指標(biāo)下降，IL-28B、GP73 及CD4+/CD8+水平與相關(guān)病理特征和預(yù)后情況具有密切聯(lián)系。