阿茹娜，包青林，賽音朝克圖，阿古拉，斯楞格*

（1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院，呼和浩特 010110；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)國(guó)際蒙醫(yī)醫(yī)院，呼和浩特 010013；3.內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 包頭 014040）

抑郁癥主要表現(xiàn)為認(rèn)知、情感與軀體的多方面綜合障礙，為臨床相對(duì)常見(jiàn)的精神疾患，研究提示，目前人類(lèi)患抑郁癥總?cè)藬?shù)超過(guò)3 個(gè)億[1]。其中抑郁癥的軀體癥狀臨床上尚無(wú)明確的病理征象，多以機(jī)體痛苦感與致殘情況等感覺(jué)為評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)[2]，其屬于精神障礙最常見(jiàn)癥狀[3]。研究提示約75%抑郁癥患者存在有不同類(lèi)型的失眠、疲勞以及頭暈等癥狀[4]。針對(duì)抑郁癥發(fā)生機(jī)制研究提示，下丘腦-垂體-腎上腺軸在其發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮十分重要的作用[5]，一旦被過(guò)度激活，則將導(dǎo)致機(jī)體分泌皮質(zhì)醇水平的顯著升高，改變患者的認(rèn)知能力，造成患者失眠等癥狀[6]。

臨床上抗抑郁藥物有許多種，其中主要以5-HT 受體拮抗劑和攝取抑制（SARIs）、三環(huán)類(lèi)抗抑郁藥（TCAs）以及NE/DA 再攝取抑制劑（NDRIs）等藥物主。研究顯示，臨床中應(yīng)用的抗抑郁藥物雖然種類(lèi)繁多，但約有30%～60%的抗抑郁藥物治療效果不盡人意，近40%的患者服用后6 ～12 周未見(jiàn)療效，50%以上的患者未被治愈[7-8]。而且這類(lèi)藥物在服用后雖有短期療效，隨著服用時(shí)間的延長(zhǎng)，會(huì)出現(xiàn)不同程度的不良反應(yīng)，嚴(yán)重的甚至?xí)黾踊颊叩淖詺?、自殺風(fēng)險(xiǎn)。蒙醫(yī)溫針療法具有幾千年的悠久歷史[9-10]，以針對(duì)機(jī)體固定穴位實(shí)施針刺治療，加以熱刺激等發(fā)揮治療和預(yù)防疾病、促進(jìn)傷體康復(fù)等目的[11]。其中所用銀針其導(dǎo)熱性能十分良好，結(jié)合熱刺激特定穴位后發(fā)揮調(diào)節(jié)機(jī)體寒熱，改善氣血循環(huán)等作用[12-13]。近年來(lái)針對(duì)抑郁癥復(fù)雜的發(fā)病機(jī)制，利用蒙醫(yī)溫針多角度、多層次、多途徑等獨(dú)特的治療特點(diǎn)，研究證實(shí)了蒙醫(yī)溫針療法對(duì)抑郁大鼠胃腸功能、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、腦腸肽的影響。但是蒙醫(yī)溫針對(duì)抑郁大鼠皮質(zhì)醇含量的影響目前尚無(wú)研究報(bào)道?；诖耍狙芯客ㄟ^(guò)分別建立抑郁大鼠動(dòng)物模型，探討蒙醫(yī)溫針對(duì)動(dòng)物皮質(zhì)醇以及機(jī)體緊張焦慮等狀況的改善，闡述蒙醫(yī)溫針治療抑郁的可能機(jī)理，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物與分組 清潔SD 雄性大鼠，體質(zhì)量160 ～180 g，共45 只（由內(nèi)蒙古大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供），隨機(jī)分為3 組，按隨機(jī)方法分成蒙醫(yī)溫針組、西藥治療組（金耀氨基酸有限公司，天津，中國(guó)，編號(hào)：439-14-6）和生理鹽水組，每組15 只。本研究通過(guò)內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)生物醫(yī)學(xué)科研倫理審批（審批標(biāo)號(hào)：YKD202301169）。1） 蒙醫(yī)溫針組：共15 小籠，每籠1 只孤養(yǎng)，接受各種不同的應(yīng)激刺激28 d。每日進(jìn)行應(yīng)激刺激后1 小時(shí)，給予蒙醫(yī)溫針干預(yù)，將大鼠固定后，用特制蒙醫(yī)銀針進(jìn)行針刺，之后連接蒙醫(yī)智能針灸治療儀，電流強(qiáng)度為100 mA，溫度為40 ℃，干預(yù)15 min。穴位取頂會(huì)、赫依、心、腸、巴達(dá)干、胃等6 個(gè)穴，按頂會(huì)/赫依（鎮(zhèn)赫依）、心/腸（通白脈）、巴達(dá)干/胃（調(diào)胃火）進(jìn)行配伍，按此順序，每日1次，每次15 min，共計(jì)治療28 d。2） 西藥治療組：共15 小籠，每籠1 只孤養(yǎng)，接受各種不同的應(yīng)激刺激28 d。每日進(jìn)行應(yīng)激刺激后1 小時(shí)給予腹腔注射百憂解（注射劑量：2 mg/kg， 每日1 次，生理鹽水稀釋1 mL）；3） 生理鹽水組：共15 小籠，每籠1 只孤養(yǎng)，接受各種不同的應(yīng)激刺激28 d。每日進(jìn)行應(yīng)激刺激后1 小時(shí)給予腹腔注射生理鹽水（注射劑量：2 mg/kg，每日1 次）。

1.2 蒙醫(yī)溫針?lè)椒斑x穴 根據(jù)蒙醫(yī)調(diào)節(jié)三根理論和臨床上行之有效的穴位，蒙醫(yī)溫針療法的選穴原則是以蒙醫(yī)“辨證施治”學(xué)說(shuō)為指導(dǎo)[14-16]，主要根據(jù)不同疾病的病因病機(jī)，并結(jié)合白脈分布、疼痛點(diǎn)、病變部位等具體情況辨證取穴。蒙醫(yī)溫針療法常用穴位是指根據(jù)文獻(xiàn)記載及臨床經(jīng)驗(yàn)，總結(jié)出的適應(yīng)病癥范圍相對(duì)明確而療效確切的固定穴位，選穴原則：頂會(huì)穴、赫依穴、心穴，巴達(dá)干穴、胃穴、腸穴、頂會(huì)穴（位于頂骨正中）、赫依穴（第一胸椎下凹正中）、心穴（第七胸椎下凹陷正中）、巴達(dá)干穴（第三胸椎下凹正中）、胃穴（第十一胸椎下凹正中）、腸穴（第十三胸椎下凹正中）[17]， 使用特制銀針（內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院蒙醫(yī)藥學(xué)院，專(zhuān)利號(hào)：ZL201120058078.0）（直徑0.5 mm，長(zhǎng)度3.0 cm）斜刺后， 接MLY-I 型蒙醫(yī)溫針儀（內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院蒙醫(yī)藥學(xué)院，專(zhuān)利號(hào)：ZL201120058078.0）。電流強(qiáng)度100 mA， 溫度40 ℃， 每次刺激15 min， 每隔3 d 治療1 次， 共5 次。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 抑郁大鼠造模 以CUMS 模型為基礎(chǔ)，試驗(yàn)大鼠均孤養(yǎng)，并接受28 天不同類(lèi)型的應(yīng)激刺激，包括冷水游泳、晝夜顛倒、禁食、夾尾、禁水、水平搖晃和籠位傾斜45°等，隨后通過(guò)觀察大鼠精神狀況、飲水量、進(jìn)食量、糞便情況、測(cè)量體質(zhì)量等一般情況及糖水消耗實(shí)驗(yàn)進(jìn)行評(píng)估，評(píng)定抑郁癥模型大鼠造模是否成功。

1.3.2 中樞神經(jīng)遞質(zhì)檢測(cè)方法[18]快速分離試驗(yàn)動(dòng)物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)，并在冰浴下對(duì)分離組織進(jìn)行稱(chēng)重，離心后置于玻璃器皿內(nèi)打漿搖勻，隨后去上清液，滴入濃度為0.4 mol/L 的高氯酸鈉，快速放入-60℃低溫冰箱保存后備用。

1.3.3 血清皮質(zhì)醇測(cè)定方法 在早上7 點(diǎn)的時(shí)候從尾靜脈取血液1 mL，用冷凍式離心機(jī)離心10 min，離心機(jī)轉(zhuǎn)速設(shè)置為3 000 r/min，離心后取其上清液保存于低溫冰箱，用于后續(xù)的檢測(cè)，具體檢測(cè)方法詳見(jiàn)參見(jiàn)文獻(xiàn)[19]。

1.3.4 大鼠海馬組織神經(jīng)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察 將未麻醉的大鼠脫椎致死，迅速準(zhǔn)確地切取分離出海羅馬狀組織，切片立即再投入已稀釋的4%多聚異甲醛試液箱中，固定約2 h，酒精稀釋的梯度分別是75%、85%、95%以及100%。干燥以后，二甲苯膜層是透明的，用石蠟進(jìn)行包埋。切片厚度可達(dá)近5 mm，置于60 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中干燥約4 h，備用。HE 染色方法：用石蠟進(jìn)行切片，經(jīng)脫蠟劑冷卻處理至表面干燥以后，用蘇木色素溶液浸染15 min，用無(wú)水乙醇和自來(lái)水沖洗干凈，再改用伊紅色素溶液浸染約2 min，用酒精處理，酒精稀釋的梯度分別是75%、85%、95%以及100%。等到二甲苯磺胺變得透明以后，用中性的樹(shù)脂進(jìn)行封片，在顯微鏡下觀察分離出的大鼠腦組織。

2 結(jié)果

2.1 蒙醫(yī)溫針組、西藥治療組和生理鹽水組中樞神經(jīng)遞質(zhì)含量改變 結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 蒙醫(yī)溫針組、西藥治療組和生理鹽水組中樞神經(jīng)遞質(zhì)含量改變

2.2 蒙醫(yī)溫針組和生理鹽水組應(yīng)激前后體質(zhì)量差值及隨時(shí)間的變化 見(jiàn)表1。

表1 不同治療對(duì)抑郁大鼠體質(zhì)量的影響（± s，n = 15） g

表1 不同治療對(duì)抑郁大鼠體質(zhì)量的影響（± s，n = 15） g

注：與生理鹽水組比較，# P ＜0.05

組別 時(shí)間 CUMS 應(yīng)激時(shí)間0 h 24 h 48 h 72 h蒙醫(yī)溫針組 應(yīng)激前 315.15±2.31 285.93±3.65 277.49±3.66 254.19±3.85應(yīng)激后 19.38±1.96 # 18.93±2.20 # 17.15±1.75 # 16.53±1.32 #生理鹽水組 應(yīng)激前 312.93±2.35 277.80±3.57 256.64±3.65 240.00±3.76應(yīng)激后 14.93±0.63 16.55±2.01 13.02±1.72 12.12±0.95 Sum 應(yīng)激前 296.45±2.41 286.47±3.69 268.52±3.53 254.69±3.88應(yīng)激后 17.92±1.88 18.43±2.31 18.78±1.72 20.85±1.69

2.3 蒙醫(yī)溫針對(duì)大鼠血清皮質(zhì)醇含量的影響 見(jiàn)表2。2.4 蒙醫(yī)溫針和生理鹽水組試驗(yàn)大鼠血清皮質(zhì)醇隨時(shí)間變化的觀察 見(jiàn)表3。

表2 2 組間抑郁大鼠的血清皮質(zhì)醇差值的比較（± s，n = 10） nmol/L

表2 2 組間抑郁大鼠的血清皮質(zhì)醇差值的比較（± s，n = 10） nmol/L

注：與生理鹽水組比較，# P ＜0.05

組別 血清皮質(zhì)醇差值蒙醫(yī)溫針組 1.78±0.89#生理鹽水組 4.39±0.72

表3 不同治療對(duì)抑郁大鼠血清皮質(zhì)醇的影響（± s，n = 15） μg/dL

表3 不同治療對(duì)抑郁大鼠血清皮質(zhì)醇的影響（± s，n = 15） μg/dL

注：與生理鹽水組比較， # P ＜0.05

組別 時(shí)間 CUMS 應(yīng)激時(shí)間1 d 2 d 3 d 4 d蒙醫(yī)溫針組 應(yīng)激前 10.15±0.85 11.67±1.21 12.93±1.11 13.16±1.38應(yīng)激后 2.13±0.12 # 1.19±0.32 # 1.43±0.22 # 1.56±0.23 #生理鹽水組 應(yīng)激前 11.58±0.86 12.46±1.15 13.59±1.13 16.15±1.39應(yīng)激后 2.01±0.11 1.77±0.12 1.66±0.21 1.72±0.23 Sum 應(yīng)激前 11.46±0.81 12.17±1.19 13.69±1.14 14.50±1.37應(yīng)激后 2.01±0.09 1.44±0.21 1.85±0.20 2.15±0.38

2.5 抑郁后睡眠剝奪大鼠中樞海馬組織形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果 蒙醫(yī)溫針治療組中樞海馬病理切片顯示（×100）：海馬區(qū)神經(jīng)元呈梭形緊密排列，細(xì)胞輪廓仍較清晰（見(jiàn)圖2A），生理鹽水組中樞海馬病理切片（×100）顯示：神經(jīng)元數(shù)目減少，排列紊亂，細(xì)胞輪廓模糊，出現(xiàn)大量空泡，錐體細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞間隙增大（見(jiàn)圖2B）。

圖2 抑郁大鼠中樞海馬組織形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果（HE 染色，×100）

3 討論

應(yīng)激狀態(tài)下中樞神經(jīng)GLU 含量降低被視為機(jī)體自身的保護(hù)機(jī)制[20]。谷氨酸對(duì)細(xì)胞的毒性作用是隨著濃度增加而增加的，同時(shí)其與人體的焦慮和抑郁的發(fā)生存在一定相關(guān)性[21]，有學(xué)者研究證實(shí)神經(jīng)突觸間隙外谷氨酸的毒性作用可造成中樞神經(jīng)元損傷，是導(dǎo)致動(dòng)物個(gè)體出現(xiàn)精神障礙的重要原因[22]。而焦慮、抑郁的產(chǎn)生，在基底前腦、腦干、腹膜下側(cè)的前額葉區(qū)以及丘腦區(qū)域，都存在中樞神經(jīng)遞質(zhì)的表達(dá)，這導(dǎo)致了癥狀的加重[23]。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，蒙醫(yī)溫針干預(yù)后，SD大鼠中樞神經(jīng)遞質(zhì)GABA 含量顯著升高，GLU 含量降低（與生理鹽水組對(duì)照）；糾正中樞神經(jīng)興奮性/抑制性神經(jīng)遞質(zhì)比值，減輕GLU 的興奮性毒性作用引起的神經(jīng)細(xì)胞損害；這可能是蒙醫(yī)溫針改善患者焦慮、抑郁狀態(tài)的神經(jīng)內(nèi)分泌機(jī)制之一。

現(xiàn)有研究提示SD 的應(yīng)激將導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)顯著的神經(jīng)-內(nèi)分泌方面的病理生理改變，其中最重要的改變?cè)谟谙虑鹉X-垂體-腎上腺軸的變化[24]。研究提示實(shí)驗(yàn)大鼠慢性應(yīng)激后，長(zhǎng)時(shí)間均處于顯著的疲勞狀態(tài)，且刺激下丘腦-垂體-腎上腺軸分泌大量的皮質(zhì)醇類(lèi)激素，故應(yīng)激障礙者其出現(xiàn)緊張焦慮的比例顯著增高。而被激活的下丘腦-垂體-腎上腺軸，同時(shí)還將促使生長(zhǎng)激素釋放激素與促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素大量分泌，進(jìn)一步影響機(jī)體的焦慮和抑郁狀態(tài)，干擾正常的情緒狀態(tài)，導(dǎo)致抑郁的加重。

本次實(shí)驗(yàn)對(duì)給予大鼠進(jìn)行72 h 連續(xù)睡眠剝奪慢性不可預(yù)知性應(yīng)激刺激，大鼠引起的主要病理生理的變化是出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)，能量消耗過(guò)多導(dǎo)致機(jī)體營(yíng)養(yǎng)不良而衰竭死亡。本試驗(yàn)在造模24 小時(shí)后，2 組大鼠的體質(zhì)量和皮質(zhì)醇含量呈現(xiàn)出差異，說(shuō)明治療組對(duì)應(yīng)激條件下動(dòng)物的機(jī)能調(diào)節(jié)具有正面意義。另一方面從血清皮質(zhì)醇升高的程度，亦表明蒙醫(yī)溫針對(duì)應(yīng)激反應(yīng)有良好的緩和作用，降低應(yīng)激大鼠的焦慮、緊張情緒，從而調(diào)整其異常升高的基礎(chǔ)代謝率。目前臨床多見(jiàn)抑郁癥，伴隨焦慮、抑郁、失眠等精神障礙的患者，蒙醫(yī)溫針從整體機(jī)能狀態(tài)的調(diào)節(jié)入手，能阻斷HPA 興奮，下調(diào)HPA 軸興奮水平，恢復(fù)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)平衡，這也是蒙醫(yī)溫針通過(guò)多路徑達(dá)到治療抑郁癥的目的。