劉小蘭

內(nèi)蒙古自治區(qū)鄂爾多斯市中心醫(yī)院血液科，內(nèi)蒙古鄂爾多斯 017000

免疫性血小板減少癥（immune thrombocytopenia，ITP）是以外周血小板計數(shù)降低，皮膚和內(nèi)臟出血為特征一種獲得性自身免疫性疾病，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，仍是當(dāng)今研究的難點(diǎn)和熱點(diǎn)[1]。微RNA（microRNA，miRNA）是一種約有22 個堿基對的非編碼RNA，通過與目標(biāo)mRNA 的3’非編碼區(qū)的部分互補(bǔ)序列配對來控制mRNA 降解和翻譯抑制。隨著對miRNA 不斷的深入研究發(fā)現(xiàn)，miRNA 不僅與細(xì)胞的增殖、分化、傳導(dǎo)、凋亡等生命活動有關(guān)，異常表達(dá)對腫瘤、自身免疫性等疾病有重要影響。近年來研究發(fā)現(xiàn)，miRNA 在多種生理過程中發(fā)揮著重要作用[2]。許多臨床研究和實(shí)驗(yàn)動物模型已經(jīng)證實(shí)，miRNA 與自身免疫性疾病息息相關(guān)，參與調(diào)控了許多自身免疫性疾病，其中包括ITP[3-6]。關(guān)于miRNA 在ITP 中調(diào)控免疫細(xì)胞異常表達(dá)的研究已廣泛開展，并且顯示出了高度的相關(guān)性，ITP 的發(fā)病過程可涉及多種免疫細(xì)胞，但其在免疫系統(tǒng)中的具體作用機(jī)制尚不完全清楚[7-9]。本文通過廣泛檢索相關(guān)文獻(xiàn)，闡述了miRNA 在ITP 中調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的具體作用機(jī)制，這些發(fā)現(xiàn)提示miRNA 可能通過調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞成為治療ITP 的有效靶點(diǎn)，為未來治療ITP 提供新思路。

1 miRNA 在ITP 中調(diào)節(jié)固有免疫細(xì)胞

1.1 miRNA 在ITP 中調(diào)節(jié)單核細(xì)胞

單核細(xì)胞具有活躍的生物學(xué)特征，人外周血單核細(xì)胞是免疫系統(tǒng)的重要組成部分，在天然免疫中發(fā)揮著重要作用，是人體抵御感染和外來入侵的天然屏障。單核細(xì)胞廣泛應(yīng)用于ITP 研究，miRNA 在單核細(xì)胞的增殖和分泌細(xì)胞因子過程中起到了關(guān)鍵作用，一些研究已經(jīng)檢測到了ITP 患者單核細(xì)胞的miRNA 表達(dá)譜[10]。γ 干擾素可作為先天免疫反應(yīng)的一部分參與免疫應(yīng)答反應(yīng)，異常表達(dá)的γ 干擾素與許多炎癥反應(yīng)和自身免疫性疾病有關(guān)，既往研究發(fā)現(xiàn)，ITP 患者血漿中的γ干擾素升高[11]。Iwasaki 等[12]研究發(fā)現(xiàn)，ITP 患者單核細(xì)胞的miR-409-3p 表達(dá)降低，miR-409-3p 通過負(fù)向調(diào)節(jié)γ 干擾素表達(dá)來參與調(diào)節(jié)ITP 發(fā)病機(jī)制，這表明γ 干擾素是一種促進(jìn)ITP 發(fā)生的細(xì)胞因子，是miR-409-3p 的靶點(diǎn)，當(dāng)單核細(xì)胞中miR-409-3p 表達(dá)降低時，可導(dǎo)致血漿中γ 干擾素含量升高，進(jìn)而影響ITP 的發(fā)生、發(fā)展。從上述研究中可以發(fā)現(xiàn)，miR-409-3p 可能是ITP 的治療靶基因，通過抑制γ 干擾素產(chǎn)生來發(fā)揮對ITP 免疫反應(yīng)的調(diào)控作用。

1.2 miRNA 在ITP 中調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞

巨噬細(xì)胞分泌促炎性細(xì)胞因子參與免疫應(yīng)答，或分泌抑制細(xì)胞因子下調(diào)免疫應(yīng)答，在先天免疫和后天免疫中都發(fā)揮著重要作用[13]。在ITP 發(fā)病過程中，脾巨噬細(xì)胞通過吞噬血小板、呈遞抗原來激活自身反應(yīng)性CD4+T 細(xì)胞，此外，ITP 無法緩解可能與不同類型的巨細(xì)胞表達(dá)失衡有關(guān)，因此，巨噬細(xì)胞與ITP 發(fā)病密不可分[14-15]。

細(xì)胞因子信號傳送阻抑物1（suppressor of cytokine signaling 1，SOCS1）是一個典型的調(diào)節(jié)細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的負(fù)反饋系統(tǒng)。研究證實(shí)，SOCS1 與免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)和炎癥級聯(lián)反應(yīng)密切相關(guān)[16]。miR-155 在不同的自身免疫性疾病中發(fā)揮著不同作用，SOCS1 在介導(dǎo)miR-155-5p 對巨噬細(xì)胞生物學(xué)反應(yīng)的調(diào)控作用已被證實(shí)[17]。Wang 等[18]實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在ITP 患者的巨噬細(xì)胞中miR-155 表達(dá)與SOCS1 表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)，miR-155-5p 下調(diào)時，可促進(jìn)1 型跨膜蛋白/L1 型跨膜蛋白通路介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞M2 極化，進(jìn)而上調(diào)SOCS1 表達(dá)從而抑制ITP 病情發(fā)展，故miR-155 可通過靶向SOCS1 影響ITP 的進(jìn)展。因此，未來的治療靶點(diǎn)可以從miR-155 入手，抑制miR-155 下調(diào)從而達(dá)到治療ITP 的效果。

綜上所述，在miRNA 調(diào)節(jié)單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞時可以發(fā)現(xiàn)，miRNA 并不是直接作用于固有免疫細(xì)胞，而是通過調(diào)節(jié)細(xì)胞因子進(jìn)而調(diào)控基因表達(dá)來實(shí)現(xiàn)的，不同的調(diào)控因子所對應(yīng)的調(diào)控基因均不同，這些位點(diǎn)擴(kuò)展了對ITP 發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識，提示miRNA 是ITP潛在的治療靶點(diǎn)，可通過調(diào)節(jié)固有免疫細(xì)胞來實(shí)現(xiàn)。

2 miRNA 在ITP 中調(diào)節(jié)特異性免疫細(xì)胞

2.1 miRNA 在ITP 中調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)性T（regulatory T，Tr）細(xì)胞

Tr 細(xì)胞是T 細(xì)胞的一個特殊亞群，其作用是抑制免疫系統(tǒng)的激活，越來越多的研究表明，Tr 細(xì)胞不僅參與ITP 的發(fā)生、發(fā)展，而且是ITP 的致病因素之一[19]。Tr 細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子叉頭狀轉(zhuǎn)錄因子P3（forkhead box protein P3，F(xiàn)oxp3）的表達(dá)是Tr 細(xì)胞實(shí)現(xiàn)基本功能所必需的[20]。核受體亞家族4A 成員3（nuclear receptor NOR-3，NR4A3）是一種孤核受體，在調(diào)節(jié)癌細(xì)胞各種生理活動中發(fā)揮重要作用[21]。NR4A3 可誘導(dǎo)特異性Foxp3 表達(dá)，促進(jìn)Tr 細(xì)胞分化[22]。Zou 等[23]的研究發(fā)現(xiàn)，ITP 患者外周血中NR4A3 水平顯著降低，轉(zhuǎn)化生長因子β 分泌也降低，沉默NR4A3 可降低Foxp3 表達(dá)水平，抑制轉(zhuǎn)化生長因子β 分泌。在該項研究中觀察到ITP 患者的外周血中miR-106b-5p 升高，根據(jù)雙螢光素酶報告基因檢測證實(shí)NR4A3 是miR-106b-5p 的直接靶基因，miR-106b-5p 通過調(diào)控NR4A3 可以調(diào)控Foxp3 和轉(zhuǎn)化生長因子β 的表達(dá)，從而起到調(diào)節(jié)Tr 細(xì)胞的作用，這項研究的發(fā)現(xiàn)為未來從Tr 細(xì)胞層面治療ITP 提供了新的思路和靶點(diǎn)。

2.2 miRNA 在ITP 中調(diào)節(jié)輔助性T 細(xì)胞17（helper T cell 17，Th17）

Th17 已被確定為效應(yīng)Th 細(xì)胞的一個獨(dú)特的亞群，在自身免疫性疾病和宿主防御細(xì)胞外病原體過程中發(fā)揮促炎作用，在ITP 患者中發(fā)現(xiàn)Th17 分泌增加，Ichiyama 等[24]發(fā)現(xiàn)，在Th17 中miR183-5p、miR-96-5p和miR-182-5p 均存在高表達(dá)，并且這些片段均可促進(jìn)Th17 高表達(dá)。在Chen 等[25]的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，miR-96-5p 對Th17 的調(diào)節(jié)并非必不可少。Hua 等[26]假設(shè)miR-182-5p 和miR-183-5p 是促進(jìn)Th17 發(fā)育的關(guān)鍵調(diào)控因子，在進(jìn)一步試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)外周血中miR-183-5p 在重度ITP 患者中的表達(dá)明顯高于非重度ITP 患者，同時miR-183-5p 的表達(dá)與血小板計數(shù)呈負(fù)相關(guān)，miR-183-5p 可能是臨床應(yīng)用于ITP 患者的一個有價值的靶點(diǎn)。但是該研究尚未明確miR-183-5p 如何調(diào)節(jié)Th17 的分化或參與ITP 的發(fā)病機(jī)制，后續(xù)的研究應(yīng)主要集中在miR-183-5p 在ITP 中的具體作用機(jī)制。

除此之外，miR-199a-5p 對ITP 也有調(diào)節(jié)作用。Zriek 等[27]的研究探討了miR-199a-5p 在Th17 分化中的作用，證實(shí)了miR-199a-5p 是信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄活化因子3（signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）的靶向mRNA，STAT3 是促進(jìn)Th17 細(xì)胞分化的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，提示miR-199a-5p 可能通過抑制STAT3 的表達(dá)抑制CD4+T 細(xì)胞向Th17 表型極化。此外，Mahévas 等[28]的研究發(fā)現(xiàn)，在ITP 中，miR-199a-5p 還可以通過另一種途徑來調(diào)節(jié)Th17 細(xì)胞的異常分化，脂肪源間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cell，MSC）是一種在治療自身免疫性疾病方面具有潛在的應(yīng)用價值的MSC，在該研究建立的實(shí)驗(yàn)性ITP 小鼠模型中，由miR-199a-5p 修飾的脂肪源MSC衍生的胞外囊泡可以通過增強(qiáng)miR-199a-5p 的表達(dá)來減緩ITP 的進(jìn)展，將mir-199a-5p 的胞外囊泡傳遞到小鼠體內(nèi)可顯著增加血小板計數(shù)，這證實(shí)了含有miR-199a-5p 的胞外囊泡抑制了Th17 的分化，從而達(dá)到治療ITP 的目的。后續(xù)的研究可以集中在mir-199a-5p 在人類環(huán)境中的具體作用，以期為未來治療ITP 提供具體的依據(jù)。

2.3 miRNA 在ITP 中調(diào)節(jié)B 細(xì)胞

B 細(xì)胞在ITP 中具有高反應(yīng)性，自身反應(yīng)性B 細(xì)胞產(chǎn)生大量抗血小板糖蛋白的自身抗體，導(dǎo)致脾或肝血小板耗損，研究表明，B 細(xì)胞在ITP 發(fā)病機(jī)制中起關(guān)鍵作用，是影響ITP 發(fā)病的重要因素之一[29-30]。let-7b-5p 是免疫細(xì)胞中l(wèi)et-7 miRNA 家族成員之一，其還參與了多種癌癥的免疫調(diào)節(jié)和腫瘤抵抗[31]。Zhu等[32]的研究發(fā)現(xiàn)，與健康對照組比較，ITP 患者let-7b-5p 的表達(dá)和B 細(xì)胞存活率均有所提高，進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在B 細(xì)胞中過表達(dá)let-7b-5p 可上調(diào)B 細(xì)胞表面的B 細(xì)胞活化因子R 的表達(dá)，促進(jìn)B 細(xì)胞存活。該研究證明了let-7b-5p 通過增強(qiáng)B 細(xì)胞活化因子/B細(xì)胞活化因子R 介導(dǎo)的信號通路來促進(jìn)B 細(xì)胞的生存，誘導(dǎo)ITP 的發(fā)生，因此，靶向降低let-7b-5p 的表達(dá)，可以緩解B 細(xì)胞的高反應(yīng)性，進(jìn)而達(dá)到治療ITP的目的。

2.4 miRNA 在ITP 中調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)性B 細(xì)胞

調(diào)節(jié)性B 細(xì)胞是一種具有負(fù)性免疫調(diào)節(jié)能力的細(xì)胞亞群，可以維持免疫穩(wěn)態(tài)。在ITP 中發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)性B 細(xì)胞表達(dá)異常，因此促進(jìn)調(diào)節(jié)性B 細(xì)胞的分化及擴(kuò)大其在免疫調(diào)節(jié)中的作用是非常重要的[33-34]。MSC 已被證實(shí)具有誘導(dǎo)免疫抑制的能力，而基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1α（stromal cell derived factor-1α，SDF-1α）在MSC 的遷移和生存中發(fā)揮著重要作用[23]。Chen 等[35]認(rèn)為，臍帶來源的MSC 能有效地增強(qiáng)ITP 患者調(diào)節(jié)性B細(xì)胞比例，而在適當(dāng)?shù)臐舛认?，SDF-1α 可促進(jìn)臍帶來源的MSC 的增殖和生存能力，并通過控制外泌體中miRNA-133 的表達(dá)來提高調(diào)節(jié)性B 細(xì)胞的含量?；诖思僭O(shè)，Chen 等[35]的研究發(fā)現(xiàn)，在適當(dāng)?shù)臐舛认拢ㄟ^控制外泌體中miRNA-133 的表達(dá)，SDF-1α 能進(jìn)一步提高臍帶來源的MSC 誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性B 細(xì)胞產(chǎn)生的水平。該研究為改善MSC 對ITP 的免疫調(diào)節(jié)能力提供了一種新的解決方案。因此，這項研究支持將miRNA-133 作為治療靶基因，通過增加調(diào)節(jié)性B 細(xì)胞的比例，減少ITP 疾病的發(fā)生。

3 總結(jié)與展望

ITP 是一類有出血風(fēng)險的疾病，嚴(yán)重時可危及生命。目前研究僅發(fā)現(xiàn)在ITP 患者中自身抗體的血小板被破壞和血小板生成減少，但其具體發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚。miRNA 是參與自身免疫調(diào)節(jié)的非編碼小RNA，在ITP 的生物學(xué)過程中充當(dāng)調(diào)節(jié)分子，通過轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因表達(dá)，可調(diào)控體內(nèi)各種免疫細(xì)胞的激活、功能和穩(wěn)態(tài)。本文就miRNA 在不同免疫細(xì)胞作用展開綜述，總結(jié)了miRNA 在ITP 中復(fù)雜多樣的作用，當(dāng)前的研究主要集中在對ITP 患病人群血液的分析檢測，尚未建立動物模型或在人類環(huán)境中進(jìn)行治療上的進(jìn)一步驗(yàn)證。因此，未來的研究可集中在建立一套標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)方案，包括靈敏度更高的miRNA 檢測方法、PCR 定量分析及建立一套規(guī)范化的治療實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。綜上所述，繼續(xù)分析miRNA 在ITP 發(fā)展中的具體作用仍然是一項很有前景的研究，探索ITP 患者免疫反應(yīng)中miRNA 異常表達(dá)的機(jī)制，以期從全新角度闡明ITP 的發(fā)病機(jī)制，為未來治療ITP 提供新的潛在治療靶點(diǎn)。

利益沖突聲明：本文所有作者均聲明不存在利益沖突。