陳 林，楊巖濤，滕 艷，陳 俊，姜金生，何小蘭，李立霞，周 倩

（1.湖南中醫(yī)藥大學藥學院，湖南 長沙 410208；2.三金集團湖南三金制藥有限責任公司，湖南 常德 415000）

玉葉金花Mussaenda pubescens Ait.f，又名白紙扇，茜草科植物，常野生于丘陵、山坡、灌叢、林緣、溝谷、山野、路旁等地，廣泛分布于我國長江以南各省區(qū)，其中廣東、廣西、湖南、貴州等地較為常見。其藥用部位為干燥莖和根，味甘、性涼，具有清涼消暑、清熱疏風、抗炎等功效[1-2]。此外，玉葉金花對流感病毒也有一定功效[3]。其作為主要原材料，廣泛應用于多種中成藥，如玉葉解毒顆粒、玉葉金花清熱片、玉葉清火片等。玉葉金花分布廣泛，《中華人民共和國藥典》（2020年版）未收錄其標準。目前各地制定了中藥材玉葉金花地方標準，如《廣東省中藥材標準》（2019年版）[4]、《貴州省中藥材民族藥材質量標準》（2019年版）[5]、《湖南省中藥材標準》（2009年版）[6]、《廣西壯族自治區(qū)壯藥質量標準》（2008年版）[7]。本實驗收集了全國不同地區(qū)玉葉金花樣品，通過狀性鑒別、薄層鑒別、顯微鑒別、理化鑒別、含量測定等方法來考察各地玉葉金花藥材質量情況。

1 儀器與材料

1.1 儀器 LC-20AT型高效液相色譜儀，配備紫外可見光檢測器，購自日本株式會社島津制造所；BSA124S型電子天平（一級）購自賽多利斯科學儀器（北京）有限公司；XSR205型電子天平（一級）購自梅特勒-托利多有限公司；JM-3002電子天平（三級）購自諸暨市超澤衡器設備有限公司；9960D型超聲儀購自天津科貝爾光電技術有限責任公司；藥典篩（編號2，孔徑0.85 mm）購自紹興市上虞圣超儀器設備有限公司；ZF-2型紫外分析儀購自上海市安亭電子儀器廠；BPG-9156A精密鼓風干燥箱購自上海一恒科學儀器有限公司；QE-500克一斤搖擺式高速萬能粉碎機購自浙江屹立工貿有限公司；Medium Touch-S400UVF型純水機購自上海和泰儀器有限公司；徠卡DM750顯微鏡購自徠卡顯微系統(tǒng)（上海）有限公司。

1.2 材料 液相色譜柱，十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，Ultimate AQ-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），購自月旭科技（上海）股份有限公司；綠原酸對照品（批號：110753-202119，含量96.3%）購自中國食品藥品檢定研究院；8-O-乙酰山梔苷甲酯對照品（批號：111872-201703，含量90.3%）購自中國食品藥品檢定研究院；玉葉金花對照藥材（批號：121404-201502）購自中國食品藥品檢定研究院；甲醇（批號：A22T0315，含量>99.9%，HPLC級）購自美國阿斯頓化學技術有限公司；乙腈（批號：DW26E121201，含量>99.9%，HPLC級）購自湖北弗頓科學技術有限公司（磷酸，含量≥85.0%，HPLC級）購自天津市科密歐化學試劑有限公司；無水乙醇（批號：20220012，AR，含量≥99.7%）購自湖南匯虹試劑有限公司；香草醛（批號：V8020371，AR，含量99%）購自上海麥克林生化科技有限公司；硫酸（批號：202105172，AR，含量95.0%～98.0%）購自湖南匯虹試劑有限公司；乙酸乙酯（批號：20211019，AR，≥99.5%）購自湖南匯虹試劑有限公司；三氯甲烷（批號：202106102，AR，99.0%）購自湖南匯虹試劑有限公司；環(huán)己烷（批號：160214，AR，≥99.5%）購自天津市康科德科技有限公司；三氯化鐵（批號：20180418，AR）購自上海沃凱生物技術有心公司；鐵氰化鉀（批號：20211206，AR，≥99.5%）購自天津市光復科技發(fā)展有限公司；丙酮（批號：20141031，AR，≥99.5%）購自衡陽市凱信化工試劑股份有限公司；乙醇（批號：202116253，AR，≥95.0%）購自湖南匯虹試劑有限公司；二氯甲烷（批號：151201，AR，≥99.5%）購自天津市康科德科技有限公司；硅膠G板（批號：20211107）購自青島海洋化工廠分廠。

玉葉金花樣品1來源：湖南桃源；玉葉金花樣品2來源：廣西玉林；玉葉金花樣品3來源：廣東茂名。以上玉葉金花樣品經三金集團湖南三金制藥有限責任公司副主任中藥師陳開義鑒定為正品。

2 方法與結果

2.1 薄層鑒別

2.1.1 2022年7月20日按《湖南省中藥材標準》檢驗 依次取玉葉金花樣品1、樣品2、樣品3粉末各4 g，加水100 mL，煎煮30 min，濾過，濾液濃縮至2 mL，加無水乙醇50 mL，攪勻，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取玉葉金花對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。按照薄層色譜法（2020年版《中華人民共和國藥典》附錄ⅥB）試驗，吸取上述兩種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-甲醇-水（13∶6∶2）10 ℃以下放置分層的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛乙醇溶液-10%硫酸乙醇溶液（1∶1）的混合溶液（臨用新配），在105 ℃加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。（見圖1）樣品1、樣品2、樣品3在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，符合《湖南省中藥材標準》要求。

圖1 玉葉金花按《湖南省中藥材標準》檢驗薄層鑒別圖

2.1.2 2022年7月21日按《貴州省中藥材民族藥材質量標準》（2019年版第一冊）檢驗 依次取玉葉金花樣品1、樣品2、樣品3粉末各0.5 g，加乙酸乙酯5 mL，超聲處理20 min，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另取玉葉金花對照藥材0.5 g，同法制得對照藥材溶液。照薄層色譜法（2020年版《中華人民共和國藥典》四部 通則0502）試驗，吸取上述兩種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上以三氯甲烷-甲醇-水（85∶15∶15）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，置105 ℃下加熱10 min，置紫外燈光（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。（見圖2）樣品1、樣品2、樣品3在與對照藥材色譜相應的位置上，未顯相同顏色的熒光斑點，不符合《貴州省中藥材民族藥材質量標準》要求。

圖2 玉葉金花按《貴州省中藥材民族藥材質量標準》檢驗薄層鑒別圖

2.1.3 2022年7月23日按《廣東省中藥材標準》第三冊（2019年版）檢驗 依次取玉葉金花樣品1、樣品2、樣品3粉末各4 g，加乙醇20 mL，加熱回流30 min，趁熱濾過，取續(xù)濾液作為供試液。另取玉葉金花對照藥材4 g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法（2020年版《中華人民共和國藥典》通則0502）試驗，吸取上述兩種溶液各4～6 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-丙酮-乙酸乙酯（4∶2∶1）為展開劑，展開,取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。（見圖3）樣品1、樣品2、樣品3在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，符合《廣東省中藥材標準》要求。

圖3玉葉金花按《廣東省中藥材標準》檢驗薄層鑒別圖

2.2 顯微鑒別 本品粉末為棕褐色。非腺毛眾多，成簇或單個散在，2～9個細胞，有的胞腔含有棕色物。上表皮細胞與葉肉柵欄組織多連接，上表皮細胞側面觀排列整齊，葉肉柵欄組織為3～4列細胞。下表皮垂周壁微彎曲或較平直，氣孔不定式，副衛(wèi)細胞4～6個，螺紋導管多見。樣品1、樣品2、樣品3根據《廣東省中藥材標準》顯微鑒別，符合要求。（見圖4～7）

圖4 按《廣東省中藥材標準》第三冊標準進行顯微鑒別檢驗

圖5 樣品1 玉葉金花粉末顯微鑒別圖

圖6 樣品2 玉葉金花粉末顯微鑒別圖

圖7 樣品3 玉葉金花粉末顯微鑒別圖

2.3 理化鑒別 樣品按《廣西壯族自治區(qū)壯藥質量標準》進行理化鑒別檢驗，發(fā)現(xiàn)樣品1、樣品2、樣品3符合《廣西壯族自治區(qū)壯藥質量標準》部分理化鑒別項目。具體如下。

2.3.1 理化鑒別（1） 取樣品1、樣品2、樣品3粗粉10 g，加水100 mL，浸漬12 h，濾過，取濾液1 mL，加1%三氯化鐵乙醇液，顯藍綠色，見圖8。結論：顏色反應，符合標準。

圖8 理化鑒別（1）結果圖

2.3.2 理化鑒別（2） 取“2.3.1”項濾液3 mL，平均分置3支試管中，一管加入碘化鉍鉀試液1～2滴，產生棕紅色沉淀，見圖9。結論：顏色反應，符合標準。

圖9 理化鑒別（2）結果圖

2.3.3 理化鑒別（3） 取本品粗粉1 g，加乙醚10 mL，浸漬過夜，濾過、揮散乙醚，殘渣加冰醋酸少量溶解，再加醋酐－硫酸（19∶2）數滴，溶液顯綠色，見圖10。結論：顏色反應，符合標準。

圖10 理化鑒別（3）結果圖

2.4 玉葉金花性狀對比 樣品1與樣品2、樣品3葉面有稍微差別，考慮到地理因素，樣品2、品樣3地理距離較近，而樣品1相距較遠（＞1 000 km）。（見表1）

表1 樣品1、樣品2、樣品3 性狀對比

2.5 含量測定 參考玉葉金花中相關成分含量檢測方法[8-12]，制定新綠原酸等總含量內部檢測方法，測定樣品1、樣品2、樣品3 新綠原酸（C16H18O9）、綠原酸（C16H18O9）、隱綠原酸（C16H18O9）、異綠原酸A（C25H24O12）、異綠原酸B（C25H24O12）、異綠原酸C（C25H24O12）的總量，相關的檢測圖譜見圖11～13，檢驗結果見表2。

表2 檢驗結果

圖11 樣品1 含量檢測圖譜

圖12 樣品2 含量檢測圖譜

圖13 樣品3 含量檢測圖譜

2.6 總結 三地的玉葉金花在其薄層鑒別、理化鑒別、顯微鑒別方面差別不大，外觀性狀有些微差別，湖南桃源玉葉金花中的新綠原酸（C16H18O9）、綠原酸（C16H18O9）、隱綠原酸（C16H18O9）、異綠原酸A（C25H24O12）、異綠原酸B（C25H24O12）、異綠原酸C（C25H24O12）的總量最低，而廣西玉林和廣東茂名玉葉金花中這些成分總含量較高，數值也比較接近。三地玉葉金花藥材質量對比見表3。

表3 三地玉葉金花藥材質量對比表

3 討 論

玉葉金花作為廣東、廣西、湖南等地所產藥材，使用廣泛，在多個中成藥中作為原藥材使用。同時，兩廣地區(qū)也使用玉葉金花作為涼茶清涼解表、清暑利濕由于過度采伐，野生玉葉金花中藥材數量減少，培育種植玉葉金花是一項重要工作[13]。本研究選用的樣品都是野生品種，對不同產地的玉葉金花質量情況進行比對，為掌握不同產地玉葉金花質量控制研究提供了參考[14-15]。玉葉金花質量受多種情況因素影響，包括選種、生長環(huán)境、采收時間、干燥儲存等。不同地區(qū)玉葉金花在葉面上有區(qū)別，兩廣地區(qū)玉葉金花中的新綠原酸等總含量比湖南地區(qū)高。