彭 帥，蔡 旻，程 悅，查君君，丁鶴影，劉曉瑩，方向明

（安徽中醫(yī)藥大學中醫(yī)學院，安徽 合肥 230038）

支氣管哮喘（bronchial asthma，BA），簡稱哮喘，是一種常見的慢性呼吸系統(tǒng)疾病[1]。目前BA影響著全球3.5億人，是兒童中最常見的慢性疾病，影響到歐洲至少3 000萬兒童和年輕人[2]。我國最近哮喘患病率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢。最新的流行病學調查結果表明，成人（≥20歲）哮喘患病率達到4.2%，患病人數(shù)增加到4 570萬[3]。目前我國哮喘總體控制水平尚不理想，根據(jù)全球哮喘管理和預防策略（GINA）定義的哮喘控制水平分級，我國城區(qū)哮喘總體控制率僅為28.5%[4]。GINA估計到2025年，全球將會有4億哮喘患者[5]。BA是由多種細胞（嗜酸性粒細胞、T淋巴細胞、中性粒細胞、氣道上皮細胞等）和細胞組分參與引起氣道慢性炎癥的疾病[6]。這種慢性炎癥通常與氣道高反應性相關，通常出現(xiàn)廣泛而多變的可逆性呼氣氣流受限，導致反復發(fā)作的喘息氣促、胸悶和（或）咳嗽等癥狀[7]。隨著病程的延長及診治不及時、不徹底，氣道可產生不可逆性縮窄和氣道重塑[8-9]。

平喘寧是本課題組長期用于臨床治療寒哮的有效方劑，由射干麻黃湯與三子養(yǎng)親湯化裁而成，具有溫肺化痰、止咳平喘之功效。本研究通過建立大鼠寒哮動物模型，觀察平喘寧對哮喘大鼠肺組織中肌醇依賴酶1α（IRE-1α）、剪接型X-盒結合蛋白1（XBP-1s）、核轉錄因子kappa B（NF-κB） p65、Hgsnat、Pdgfrb、Scara3表達的影響，探究平喘寧對卵清蛋白（OVA）誘導的哮喘大鼠氣道炎癥的防治作用及機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 6周齡SPF級雄性大鼠105只，體質量（165±15）g，由濟南朋悅實驗動物繁育有限公司提供，動物生產許可證號：SCXK（魯）2019-0003。大鼠自由采食進水，溫度為24℃，濕度為70%，12 h光照/12 h黑暗模擬晝夜，適應性飼養(yǎng)1周。本實驗符合動物倫理學要求，動物實驗倫理審查批準編號為AHUCM-rats-2022046。

1.2 藥物與試劑 平喘寧方藥組成：麻黃9 g，細辛3 g，紫蘇子6 g，杏仁9 g，陳皮6 g，法半夏9 g，黃芪9 g，防風6 g，地龍6 g，浙貝母9 g，太子參9 g。上述藥材均購于安徽中醫(yī)藥大學國醫(yī)堂，均經(jīng)鑒定符合2020年版《中華人民共和國藥典》規(guī)定。將中藥混合放入干凈的中藥鍋中，加入蒸餾水浸泡，第1次用水浸泡1 h，中藥飲片質量（g）與水的體積（mL）比為1∶10，煮沸后，煎煮30 min過濾。第2次煎煮30 min，中藥飲片質量（g）與水的體積（mL）比為1∶8，合并2次濾液，濃縮，待冷卻后，密封裝瓶于4 ℃冰箱中，以待備用。醋酸地塞米松片（規(guī)格：0.75 mg/片，批準文號：國藥準字H31020793）由上海信誼藥業(yè)有限公司生產；桂龍咳喘寧片（規(guī)格：0.41 g/片，批準文號：國藥準字Z20050134）由江西藥都仁和制藥有限公司生產；卵清蛋白（批號：AP0028）購于美國Sigma公司；氫氧化鋁（批號：20190514）購于上海國藥集團化學試劑公司；二甲苯（批號：20220418）購于天津市凱通化學公司；無水乙醇（批號：20210508）、異丙醇（批號：20220403）均購于上海廣諾化學科技公司；蘇木素染液（批號：02162211）、醇溶伊紅染液（批號：03092215）、中性樹膠（批號：02162210）、檸檬酸鹽修復液（批號：06252117）均購于安徽Ebiogo公司；白介素-5（IL-5）ELISA檢測試劑盒（批號：20220620）、白介素-17（IL-17）ELISA檢測試劑盒（批號：20220620）均購于武漢基因美科技公司；三氯甲烷（批號：20190227）均購于上海蘇懿化學試劑公司；Trizol（批號：380706）購于美國Life technogies公司；DEPC-H2O（批號：2112G20）購于上海Generay Biotech公司；熒光染料（批號：05229413）購于上海Novoprotein公司；反轉錄試劑盒（批號：AL50947A）購于大連TaKaRa公司；PBS緩沖液粉末（批號：19022401）、GAPDH（批號：210040421）、山羊抗兔IgG（批號：202700514）、山羊抗小鼠IgG（批號：140193）均購于北京Zsbio公司；NF-κB p65抗體（批號：10017763）購于美國Proteintech公司；IRE-1α抗體（貨號：ab37117）購于英國Abcam公司；XBP-1s抗體（貨號：bs-1668R）購于北京Bioss公司。

1.3 主要儀器 ZT-12M型生物組織自動脫水機、YT-7FB型生物組織攤烤片機、YB-7LF型生物組織包埋機（湖北亞光醫(yī)用電子技術有限公司）；RM2016型徠卡切片機、Leica 819型切片刀（德國Leica公司）；DHG-9070型電熱恒溫鼓風干燥箱、GNP-9080型隔水式恒溫培養(yǎng)箱、DNP-9052BS-Ⅲ型電熱恒溫箱（上海三發(fā)科學儀器有限公司）；B004型黏附載玻片（安徽Ebiogo公司）；CX41型顯微鏡（日本OLYMPUS公司）；JW-3021HR 型高速冷凍離心機、JW3021HR 型離心機、JW-3021HR型高速臺式冷凍離心機（安徽嘉文儀器設備有限公司）；RT-6000型酶標儀（深圳雷杜生命科學股份有限公司）；UV-1800型紫外可見分光光度計、FA2004N型電子天平（上海菁華科技儀器有限公司）；GL-88B型漩渦混合器、LX300型低速迷你離心機、LX 300型常溫微量離心機、TS-1000型水平搖床（海門市其林貝爾儀器制造公司）；K960型普通PCR儀（杭州晶格科學儀器有限公司）；PIKOREAL 96型熒光定量PCR儀、10212432C型PIKO Plate Illuminator（美國Thermo Scientific公司）；MINI-P25型微孔板迷你離心機（杭州奧盛儀器有限公司）；OD1000+型超微量分光光度計（南京五義科技有限公司）；IMS-20型自動制冰機（常熟市雪科電器有限公司）；EPS300型電泳儀、VE-180型電泳槽、VE-186轉膜儀（上海Tanon公司）；Master-S30 UF）型純水機（上海和泰儀器有限公司）；JJ-79-1型磁力加熱攪拌器（常州市人和儀器廠）；JS-1070P型自動曝光儀（上海培清科技有限公司）。

1.4 造模與分組 將105只SD大鼠采用隨機數(shù)字表法分為正常組、模型組、平喘寧低劑量組、平喘寧中劑量組、平喘寧高劑量組、地塞米松組、桂龍咳喘寧組，每組15只，適應性喂養(yǎng)7 d后進行實驗。根據(jù)寒哮大鼠模型的設計要求和方法進行造模[10]，即采用腹腔注射致敏及霧化吸入的方法復制哮喘模型。除正常組外，其余各組大鼠分別在實驗的第1天和第7天腹腔注射1 mL 10% OVA（含OVA 10 mg，氫氧化鋁10 mg），實驗第15天開始將致敏大鼠置于霧化箱中，霧化吸入1% OVA，每次30 min，然后將致敏大鼠放入0～2 ℃可調節(jié)的寒冷箱中，1次/d，每次1 h，持續(xù)14 d。大鼠出現(xiàn)精神萎靡，活動度下降，反應不靈敏，身體震顫、蜷縮，毛色晦暗，飲食量下降，大便稀，頻頻點頭，呼吸急促時伴有腹部收縮等現(xiàn)象提示造模成功。正常組大鼠參照上述方法，在致敏及激發(fā)時采用等體積生理鹽水替換卵清蛋白混懸液進行注射及霧化。

1.5 實驗給藥 第21天開始給藥，根據(jù)《藥理實驗方法學》[11]，各組大鼠用藥量按人與動物的體表面積換算，成人與大鼠間的系數(shù)是6.25（以成人體質量70 kg計）。平喘寧低、中、高劑量組大鼠灌胃給予平喘寧水煎液，3.645、7.289、14.578 g/（kg·d）。桂龍咳喘寧組：將桂龍咳喘寧片研碎后溶解于生理鹽水，按0.405 g/（kg·d）劑量灌胃。地塞米松組：將地塞米松藥片研碎后，溶解于生理鹽水，按0.405 mg/（kg·d）劑量灌胃。正常組、模型組大鼠灌胃給予等容積生理鹽水，1次/d，連續(xù)4周。

1.6 實驗標本采集 末次灌胃禁食24 h后，進行哮喘激發(fā)試驗（正常組大鼠用生理鹽水進行霧化，其余各組大鼠用10%卵清蛋白混懸液進行霧化）。在激發(fā)試驗后2 h內，用2%巴比妥鈉（20 mg/100 g）腹腔注射將大鼠麻醉，待大鼠完全麻醉后，固定大鼠，按“V”形切開大鼠腹腔，充分暴露氣管，氣管作一橫行切口，插入氣管插管，將右主支氣管結扎，隨后經(jīng)氣管插管用生理鹽水10 mL分3次灌洗左肺后，回收支氣管肺泡灌洗液（BALF），離心，棄上清液。然后取肺組織，分離左右肺，取右肺，用10%甲醛固定；將左肺置于凍存管內，放在-80 ℃箱中凍存，備用。

1.7 觀察指標

1.7.1 觀察肺組織病理學改變情況 將固定好的左肺依次進行脫水、石蠟包埋、切片等步驟，再進行HE染色，光鏡下觀察肺組織的病理學變化。

1.7.2 檢測BALF中IL-5、IL-17水平 使用ELISA測定試劑盒測定BALF中IL-5和IL-17的水平，嚴格按照說明書進行操作。

1.7.3 Real-time PCR法檢測肺組織IRE-1α mRNA、XBP-1s mRNA、NF-κB p65 mRNA、Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA、Scara3 mRNA相對表達量 剪取新鮮肺組織，稱重后使用Trizol法提取組織總RNA，按逆轉錄試劑盒說明書進行cDNA合成。以cDNA為模板，應用Real-time PCR儀檢測各組大鼠肺組織中IRE-1α mRNA、XBP-1s mRNA、NF-κB p65 mRNA、Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA、Scara3 mRNA相對表達量，以β-actin作為內參，采用2-△△Ct法進行分析。各檢測指標引物見表1。

表1 引物序列

1.7.4 Western blotting法檢測肺組織IRE-1α、XBP-1s、NF-κB p65蛋白相對表達量 剪取肺組織并稱重，加入RIPA細胞裂解液裂解。收集上清液，提取組織總蛋白。在收集的蛋白樣品中按照1∶4加入5×SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液；沸水浴15 min，待樣品冷卻到室溫，把蛋白樣品上樣到SDS-PAGE膠加樣孔內；轉膜完畢后，立即把蛋白膜放置到預先準備好的洗滌液中，漂洗5 min，以洗去膜上的轉膜液。加入封閉液，在搖床上緩慢搖動，室溫封閉2 h。IRE-1α抗體屬性為兔抗1∶2 000稀釋，XBP-1s抗體屬性為兔抗1∶1 000稀釋，NF-κB p65抗體屬性為鼠抗1∶2 000稀釋。按照1∶20 000用二抗稀釋液稀釋辣根過氧化物酶（HRP）標記的二抗，室溫孵育2 h，使用ECL發(fā)光試劑盒檢測蛋白表達水平。

1.8 統(tǒng)計學方法 運用SPSS 23.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理，計量資料符合正態(tài)分布者以（±s）來表示，不符合正態(tài)分布者用中位數(shù)（四分位數(shù)）表示。各組間計量資料比較服從正態(tài)分布和方差齊時，采用單因素方差分析，組間比較采用LSD-t檢驗；數(shù)據(jù)不服從正態(tài)性分布或方差不齊時，采用Kruskal-Wallis H檢驗，進一步兩兩比較采用Nemenyi法檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

寒哮模型建立及治療過程中，由于各種因素導致大鼠死亡，每組存活在9只以上，為便于統(tǒng)計每組抽取9只大鼠，剩余大鼠進行后續(xù)其他實驗。

2.1 各組大鼠肺組織病理學改變情況 正常組大鼠肺組織結構清晰，支氣管管腔結構完整且無明顯增厚現(xiàn)象，肺泡結構完整且無融合情況發(fā)生，肺大泡呈正常形態(tài)，周圍炎癥細胞浸潤未見明顯異常，管腔內無黏液物質。模型組大鼠支氣管壁明顯增厚、黏膜褶皺增加，管腔狹窄并可見大量黏液物質，肺泡周圍間質可見明顯的滲出性水腫，肺泡塌陷嚴重，在血管附近區(qū)域和支氣管周圍區(qū)域出現(xiàn)大量炎癥細胞浸潤。與模型組比較，各給藥組大鼠肺組織病理情況都有不同程度的緩解，其中平喘寧低、中劑量組大鼠支氣管壁增厚減輕、褶皺減少，管腔內黏液物質減少，肺泡結構較完整，但肺泡和間質腫脹依然明顯，血管及支氣管周邊區(qū)域炎癥細胞浸潤程度依然較為顯著；與平喘寧低、中劑量組比較，平喘寧高劑量組、桂龍咳喘寧組、地塞米松組大鼠肺部病理損傷有進一步的改善。（見圖1）

圖1 各組大鼠肺組織病理切片圖 （HE，×200）

2.2 各組大鼠BALF中IL-5、IL-17水平比較 與正常組比較，模型組大鼠BALF中IL-5、IL-17水平明顯升高（P＜0.01）；與模型組比較，各給藥組大鼠BALF中IL-5、IL-17水平明顯降低（P＜0.01），且平喘寧具有劑量依賴性；平喘寧低、中劑量組大鼠BALF中IL-5、IL-17水平高于地塞米松組和桂龍咳喘寧組（P＜0.01）；平喘寧高劑量組大鼠BALF中IL-5水平明顯高于地塞米松組和桂龍咳喘寧組（P＜0.01），而IL-17水平與地塞米松組和桂龍咳喘寧組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。（見表2）

表2 各組大鼠BALF中IL-5、IL-17水平比較 （±s，pg/mL）

表2 各組大鼠BALF中IL-5、IL-17水平比較 （±s，pg/mL）

注：與正常組比較，aP＜0.01；與模型組比較，bP＜0.01；與桂龍咳喘寧組比較，cP＜0.01；與地塞米松組比較，dP＜0.01。

組別 n 給藥劑量 IL-5 IL-17正常組 9 65.57±3.17 383.14±57.28模型組 9 115.24±2.73a 628.39±20.78a平喘寧低劑量組 9 3.645 g/（kg·d） 103.94±2.88a b c d 562.50±15.16a b c d平喘寧中劑量組 9 7.289 g/（kg·d） 96.84±3.09a b c d 527.80±9.29a b c d平喘寧高劑量組 9 14.578 g/（kg·d） 79.07±4.21a b c d 460.71±26.97a b桂龍咳喘寧組 9 0.405 g/（kg·d） 71.09±2.61a b 473.12±15.27a b地塞米松組 9 0.405 mg/（kg·d） 72.95±4.27a b 457.02±39.83a b

2.3 各組大鼠肺組織IRE-1α mRNA、XBP-1s mRNA、NF-κB p65 mRNA、Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA、Scara3 mRNA相對表達量比較 與正常組比較，模型組大鼠肺組織IRE-1α mRNA、XBP-1s mRNA、NF-κB p65 mRNA相對表達量均明顯升高（P＜0.01），Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA、Scara3 mRNA相對表達量均明顯降低（P＜0.01）；與模型組比較，各給藥組大鼠肺組織IRE-1α mRNA、XBP-1s mRNA、NF-κB p65 mRNA相對表達量均明顯降低（P＜0.01），Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA、Scara3 mRNA相對表達量均明顯升高（P＜0.01），且平喘寧具有劑量依賴性；平喘寧低劑量組大鼠肺組織IRE-1α mRNA、XBP-1s mRNA、NF-κB p65 mRNA相對表達量均明顯高于地塞米松組和桂龍咳喘寧組（P＜0.01），Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA、Scara3 mRNA相對表達量均明顯低于地塞米松組和桂龍咳喘寧組（P＜0.01）；平喘寧中劑量組大鼠肺組織XBP-1s mRNA、NF-κB p65 mRNA相對表達量均明顯高于地塞米松組和桂龍咳喘寧組（P＜0.01），Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA、Scara3 mRNA相對表達量均明顯低于地塞米松組和桂龍咳喘寧組（P＜0.05或P＜0.01），而IRE-1α mRNA相對表達量與地塞米松組和桂龍咳喘寧組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；平喘寧高劑量組大鼠肺組織IRE-1α mRNA相對表達量明顯低于地塞米松組和桂龍咳喘寧組（P＜0.01），Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA相對表達量均明顯高于地塞米松組（P＜0.01），而Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA相對表達量與桂龍咳喘寧組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），XBP-1s mRNA、NF-κB p65 mRNA、Scara3 mRNA與地塞米松組和桂龍咳喘寧組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。（見表3）

表3 各組大鼠肺組織IRE-1α mRNA、XBP-1s mRNA、NF-κB p65 mRNA、Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA、Scara3 mRNA相對表達量比較 （±s）

表3 各組大鼠肺組織IRE-1α mRNA、XBP-1s mRNA、NF-κB p65 mRNA、Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA、Scara3 mRNA相對表達量比較 （±s）

注：與正常組比較，aP＜0.01；與模型組比較，bP＜0.01；與桂龍咳喘寧組比較，cP＜0.01；與地塞米松組比較，dP＜0.05，eP＜0.01。

組別 n 給藥劑量 IRE-1α mRNA XBP-1s mRNA NF-κB p65 mRNA Hgsnat mRNA Pdgfrb mRNA Scara3 mRNA正常組 9 1.00±0.23 1.02±0.20 1.00±0.04 1.00±0.05 1.00±0.06 1.00±0.08模型組 9 1.86±0.71a 4.32±0.38a 1.94±0.12a 0.34±0.03a 0.15±0.02a 0.55±0.03a平喘寧低劑量組 9 3.645 g/（kg·d） 1.55±0.51a b c e 3.39±0.39a b c e 1.66±0.05a b c e 0.55±0.04a b c e 0.28±0.02a bc e 0.60±0.02abcd平喘寧中劑量組 9 7.289 g/（kg·d） 1.33±0.45a b 2.58±0.23a b c e 1.52±0.06a b c e 0.69±0.03a bc e 0.45±0.05a b c e 0.70±0.03abcd平喘寧高劑量組 9 14.578 g/（kg·d） 1.21±0.60a b c e 1.62±0.18a b 1.14±0.06a b 0.79±0.04a b e 0.69±0.12a b e 0.83±0.08a b桂龍咳喘寧組 9 0.405 g/（kg·d） 1.34±0.40a b 1.80±0.26a b 1.18±0.10a b 0.77±0.05a b 0.64±0.09a b 0.81±0.05a b地塞米松組 9 0.405 mg/（kg·d） 1.38±0.45a b 1.86±0.28a b 1.19±0.07a b 0.73±0.02a b 0.59±0.06a b 0.78±0.03a b

2.4 各組大鼠肺組織IRE-1α、XBP-1s、NF-κB p65蛋白相對表達量比較 與正常組比較，模型組大鼠肺組織IRE-1α、XBP-1s、NF-κB p65蛋白相對表達量均明顯升高（P＜0.01）；與模型組比較，各給藥組大鼠肺組織IRE-1α、XBP-1s、NF-κB p65蛋白相對表達量均明顯降低（P＜0.01），且平喘寧具有劑量依賴性；平喘寧低劑量組大鼠肺組織IRE-1α、XBP-1s、NF-κB p65蛋白相對表達量均明顯高于地塞米松組和桂龍咳喘寧組（P＜0.01）；平喘寧中劑量組大鼠肺組織XBP-1s、NF-κB p65蛋白相對表達量均明顯高于地塞米松組和桂龍咳喘寧組（P＜0.05或P＜0.01），而IRE-1α蛋白相對表達量明顯高于桂龍咳喘寧組（P＜0.05），IRE-1α蛋白相對表達量與地塞米松組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；平喘寧高劑量組大鼠肺組織而IRE-1α、XBP-1s、NF-κB p65蛋白相對表達量與地塞米松組和桂龍咳喘寧組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。（見表4、圖2）

圖2 各組大鼠肺組織IRE-1α、XBP-1s、NF-κB p65蛋白表達Western blotting 圖

表4 各組大鼠肺組織IRE-1α、XBP-1s、NF-κB p65蛋白相對表達量比較 （±s）

表4 各組大鼠肺組織IRE-1α、XBP-1s、NF-κB p65蛋白相對表達量比較 （±s）

注：與正常組比較，aP＜0.01；與模型組比較，bP＜0.01；與桂龍咳喘寧組比較，cP＜0.05，dP＜0.01；與地塞米松組比較，eP＜0.01。

組別 n 給藥劑量 IRE-1α XBP-1s NF-κB p65正常組 9 0.19±0.05 0.14±0.03 0.12±0.03模型組 9 0.82±0.06a 0.81±0.06a 0.80±0.08a平喘寧低劑量組 9 3.645 g/（kg·d） 0.63±0.05a b c e 0.62±0.07a b c e 0.64±0.03a b c e平喘寧中劑量組 9 7.289 g/（kg·d） 0.49±0.06a b c 0.46±0.04a b c e 0.51±0.01a b c e平喘寧高劑量組 9 14.578 g/（kg·d） 0.38±0.06a b 0.34±0.04a b 0.35±0.04a b桂龍咳喘寧組 9 0.405 g/（kg·d） 0.38±0.08a b 0.36±0.02a b 0.34±0.06a b地塞米松組 9 0.405 mg/（kg·d） 0.40±0.03a b 0.34±0.04a b 0.34±0.02a b

3 討 論

慢性氣道炎癥是支氣管哮喘發(fā)病機制的基礎。它由多種炎癥細胞介導，主要包括Th2淋巴細胞、嗜酸性粒細胞、巨噬細胞和中性粒細胞[12]。嗜酸性粒細胞已被確定為氣道炎癥的主要驅動因素，它會破壞氣道上皮細胞并通過釋放各種白三烯和生長因子來促進氣道重塑[13]。此外，有證據(jù)[14]表明，嗜酸性粒細胞有助于氣道高反應性。本研究HE染色結果顯示，模型組大鼠肺組織存在大量炎癥細胞的浸潤，此外在OVA致敏的大鼠中發(fā)現(xiàn)促炎性細胞因子的上調。這些結果表明，在OVA誘導的支氣管哮喘模型大鼠中成功發(fā)展了氣道炎癥。14.578 g/kg平喘寧可有效緩解OVA誘導的支氣管周圍炎癥細胞浸潤，并減少炎癥細胞因子（IL-5、IL-17)表達。這些發(fā)現(xiàn)證明了平喘寧可減輕OVA誘導的大鼠氣道炎癥。

在黏蛋白1樣蛋白質3基因（ORMDL3）高表達為主的遺傳背景下，各種環(huán)境因素（真菌、塵螨等）參與了內質網(wǎng)應激的誘導。內質網(wǎng)應激通過不同方式調節(jié)氣道炎癥、凋亡、黏液分泌、氣道高反應和氣道重塑，最終導致哮喘的發(fā)生。內質網(wǎng)應激所致的中性粒細胞占優(yōu)勢的哮喘也可能依賴于NF-κB的激活[15]。內質網(wǎng)的蛋白質質量控制系統(tǒng)激活3種不同的信號通路，稱為未折疊蛋白反應（UPR），主要用以恢復內質網(wǎng)穩(wěn)態(tài)[16]。在UPR傳感器中，IRE-1是從酵母到哺乳動物進化上最保守的蛋白質。IRE-1α是IRE-1的一種亞型，具有激酶和核糖核酸內切酶（RNase）活性。激活的IRE-1α可通過非常規(guī)剪接誘導剪接形式的XBP-1 mRNA進入成熟形態(tài)[17]，剪接后的XBP-1 mRNA被轉譯為強效轉錄因子XBP-1s。該因子可以刺激炎癥細胞因子IL-6的產生，從而激活NF-κB進而產生炎癥反應[18]。此外，有研究表明，IRE-1α還識別出廣泛的mRNA作為底物，并誘導這些mRNA的降解。這一過程[19]被稱為調控IRE1依賴性衰變（RIDD）。RIDD反應產生單鏈κ片段（其中Hgsnat、Pdgfrb、Scara3作為RIDD反應的靶基因），進而通過核轉錄因子NF-κB途徑引起細胞炎癥反應[20]。有研究表明，NF-κB信號可通過促進嗜酸性細胞炎癥和Th2細胞分化，在支氣管哮喘的發(fā)病機制中發(fā)揮重要作用[21]。此外，研究還發(fā)現(xiàn)嚴重未控制哮喘患者外周血單核細胞中的NF-κB信號通路持續(xù)激活[22]。據(jù)報道，抑制NF-κB信號可以減輕卵清蛋白誘導的大鼠呼吸道炎癥和氣道高反應性[23-24]。本研究發(fā)現(xiàn)平喘寧可顯著下調OVA致敏大鼠肺組織中IRE-1α、XBP-1的表達，上調肺組織中Hgsnat、Pdgfrb、Scara3的表達，下調肺組織中NF-κB的活性。這可能與平喘寧的抗炎作用有關。

Th2細胞分泌的IL-5是支氣管哮喘發(fā)展過程中的主要炎癥細胞因子，IL-5是負責嗜酸性粒細胞分化、生長、激活、存活和向氣道招募的最重要的生物因素[25]。其與嗜酸性粒細胞炎癥之間的密切致病聯(lián)系已通過動物和人類哮喘實驗模型得到了清楚的證明[26]?，F(xiàn)在越來越多的證據(jù)表明，Th17細胞及其相關細胞因子也參與過敏性哮喘的病理生理學，IL-17在哮喘患者的肺、痰、BALF和血清中表達水平升高，且AHR的嚴重程度與IL-17表達水平呈正相關[27-28]。此外，在過敏性肺病的小鼠模型中，缺乏IL-17A的小鼠表現(xiàn)出對抗原致敏的Th2反應降低，而缺乏IL-17RA的小鼠表現(xiàn)出現(xiàn)嗜酸性粒細胞募集減少[29-30]。本研究中OVA致敏大鼠中促炎性細胞因子IL-5、IL-17水平上調，而平喘寧治療有效降低了OVA致敏大鼠中促炎性細胞因子IL-5、IL-17的水平，驗證了平喘寧對OVA誘導的大鼠氣道炎癥的抗炎作用。

綜上所述，平喘寧可通過降低促炎性細胞因子IL-5、IL-17的表達水平，減輕卵清蛋白誘導的大鼠呼吸道炎癥。這些抗炎作用可能是通過下調卵清蛋白致敏大鼠IRE-1α、XBP-1s、NF-κB p65和上調來Hgsnat、Pdgfrb、Scara3表達來實現(xiàn)的。這些結果提示，平喘寧可通過調節(jié)IRE-1α-XBP-1s信號軸改善OVA誘導的支氣管哮喘大鼠氣道炎癥損傷。