趙小亮 ，郭正磊楊超福王海利王寶忠向紫駿張偉杰 *

（1.蘭州理工大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，甘肅 蘭州 730050； 2.甘肅省高校中藏藥篩選評價(jià)及深加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅 蘭州 730050）

半夏來源于天南星科植物半夏Pinelliaternata（Thunb.） Breit.，又名地文、守田等，為傳統(tǒng)中藥［1］。半夏多糖是半夏中的重要活性成分之一，具有鎮(zhèn)咳止吐［2］、抗氧化［3］、抗腫瘤［4］、免疫增強(qiáng)［5］等活性，具有毒副作用小、來源豐富的特點(diǎn)，逐漸成為當(dāng)前的研究熱點(diǎn)。

目前已有關(guān)于半夏多糖的純化、結(jié)構(gòu)和生物活性方面的研究報(bào)道，如Gonda 等［6］從半夏中分離出酸性多糖pinellian PA，具有增強(qiáng)補(bǔ)體活性。楊有林等［7］優(yōu)化了半夏多糖提取工藝，發(fā)現(xiàn)其具有抗氧化活性。黃聰?shù)龋?］從清半夏中提取半夏多糖，發(fā)現(xiàn)其能夠顯著降低肺組織的MU5AC mRNA 表達(dá)來降低黏液分泌，減少痰液生成。Kim 等［9］發(fā)現(xiàn)半夏多糖具有抗肥胖活性。Tian 等［10］發(fā)現(xiàn)半夏多糖對HepG2 細(xì)胞具有一定的抑制作用。Li 等［4］提取了半夏多糖命名為PTPA，發(fā)現(xiàn)其可誘導(dǎo)Sk-ChA-1 細(xì)胞凋亡。Chen等［11］從半夏中分離的半夏腦苷可有效抑制白色假絲酵母菌生長。盡管已有對半夏多糖制備及活性方面的研究，但由于多糖結(jié)構(gòu)的不均一性及組成的復(fù)雜性，對半夏多糖結(jié)構(gòu)分析、抗氧化和免疫增強(qiáng)活性以及構(gòu)效關(guān)系的研究相對較少。

本研究通過提取半夏多糖，并對其進(jìn)行分離純化，在對不同多糖組分結(jié)構(gòu)分析的基礎(chǔ)上，對抗氧化、免疫增強(qiáng)活性進(jìn)行評價(jià)，以期為半夏多糖的結(jié)構(gòu)及抗氧化、免疫增強(qiáng)活性的深入研究及應(yīng)用提供參考。

1 材料

1.1 藥材 半夏于2019 年10 月購自甘肅省蘭州市黃河藥材市場，經(jīng)蘭州理工大學(xué)楊林副教授鑒定為天南星科植物半夏Pinelliaternata（Thunb.） Breit.的干燥塊莖。

1.2 試劑 單糖對照品鼠李糖（Rha）、甘露糖（Man）、葡萄糖（Glc）、半乳糖（Gal）、葡萄糖醛酸（GlcA）、半乳糖醛酸（GalA）、木糖（Xyl）、阿拉伯糖（Ara）、巖藻糖（Fuc） 及1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP） 購自西格瑪奧德里奇（上海） 貿(mào)易有限公司； Folin-酚試劑購自上海安耐吉化學(xué)有限公司； 二甲亞砜（DMSO）、1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、（4，5-二甲基噻唑-2） -2，5-二苯基四氮唑溴鹽（MTT）、香菇多糖（LNT）、牛血清白蛋白（BSA） 購自阿拉丁試劑 （上海） 有限公司； 胎牛血清（FBS）、青霉素-鏈霉素、胰酶購自武漢賽維爾生物科技有限公司； Q-Sephodex Fast Flow （QFF） 陰離子交換填料購自美國Cyctiva 公司； 其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.3 儀器 BJ-800A 多功能粉碎機(jī)（德清拜杰電器有限公司）； DHG-9030A 恒溫電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）； B220 恒溫水浴鍋、RE53CS 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）； AB104-N 分析天平（瑞士梅特勒-托利多儀器公司）； Agilent 1260 高效液相色譜儀 （美國Agilent 公司）； ZF-7 磁力攪拌器（江蘇省金壇市醫(yī)療儀器廠）； FD-1-55 冷凍干燥機(jī)（北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）； TG16-WS 低速大容量離心機(jī)（長沙湘儀離心機(jī)儀器公司）； SHB-IIIA 循環(huán)水式真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）； UV-9200 紫外分光光度計(jì)（北京瑞利分析儀器公司）； Spectrum Two 紅外光譜儀（美國PerkinElmer 公司）。

2 方法

2.1 半夏多糖提取 參考文獻(xiàn)［12］ 方法對半夏進(jìn)行處理。半夏塊莖500 g 于50 ℃干燥箱烘干，粉碎后過40 目篩，加入5 L 80%乙醇80 ℃回流攪拌脫脂4 次，每次4 h，過濾，收集濾渣，干燥后備用。半夏脫脂粉中加入5 L 蒸餾水于室溫提取6 次，每次2 h，過濾后合并提取液，真空減壓濃縮后加入4 倍體積無水乙醇，4 ℃靜置過夜，7 000 r/min 離心10 min，收集沉淀，沉淀復(fù)溶于蒸餾水，透析（截留分子量7 kDa） 3 d，透析液減壓濃縮后冷凍干燥，得半夏多糖（PT）。

2.2 半夏多糖分離純化 QFF 陰離子交換柱填料按文獻(xiàn)［13］ 方法預(yù)處理后，裝填于55 mm×15 cm 柱中，蒸餾水沖洗3 個(gè)柱體積。取半夏多糖150 mg，以蒸餾水完全溶解，過0.22 μm 微孔濾膜后上樣，依次用0、0.1、0.2、0.5 mol/L 的NaCl 溶液各洗脫3 個(gè)柱體積，自動(dòng)部分收集器分步收集，苯酚-硫酸法檢測，根據(jù)洗脫體積和吸光度繪制洗脫曲線。根據(jù)洗脫曲線合并收集不同組分，減壓濃縮后分別透析（截留分子量7 kDa） 3 d，透析液減壓濃縮后冷凍干燥得半夏多糖QFF 離子交換柱分離各組分。

2.3 總糖含量測定 使用苯酚-硫酸法［14］測定半夏多糖的總糖含量。取葡聚糖對照品溶于蒸餾水中，配制0.1 mg/mL 的對照品溶液，稀釋得到0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1 mg/mL 的稀釋液，取1 mL 于試管中，每支試管依次加入1 mL 6%苯酚、5 mL 濃硫酸，混勻后沸水浴加熱10 min，冷卻后使用紫外-可見分光光度計(jì)在490 nm 波長處測定吸光度，以對照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X），以吸光度為縱坐標(biāo)（Y） 進(jìn)行回歸，得回歸方程。半夏多糖各純化組分配制成0.1 mg/mL 的溶液，按上述方法處理并測定吸光度，根據(jù)回歸方程計(jì)算總糖含量。

2.4 蛋白質(zhì)含量測定 使用Lowry 法［15］測定蛋白質(zhì)含量。使用BSA 配制0.1 mg/mL 的蛋白質(zhì)對照品溶液，使用去離子水分別稀釋至0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1 mg/mL，取1 mL 于試管中，每支試管加入5 mL 試劑甲，25 ℃水浴10 min，逐管加入0.5 mL 試劑乙混勻，25 ℃水浴30 min，使用紫外-可見分光光度計(jì)在700 nm 波長處測定吸光度，以蛋白質(zhì)對照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X），以吸光度為縱坐標(biāo)（Y） 進(jìn)行回歸，得回歸方程。同樣方法配制0.1 mg/mL 各多糖樣品溶液并測定吸光度，根據(jù)回歸方程計(jì)算蛋白質(zhì)含量。

2.5 半夏多糖單糖組成分析 使用PMP 柱前衍生高效液相色譜法對半夏多糖各組分進(jìn)行單糖組成分析。參考文獻(xiàn)［16］ 方法對樣品進(jìn)行降解，取樣品1 ～2 mg 于安瓿瓶中，加入200 μL H2O 完全溶解后加入200 μL 4 mol/L 三氟乙酸（TFA） 溶液，混勻后封口，105 ℃下水解6 h，水解液經(jīng)氮吹儀吹干，加甲醇反復(fù)吹干3 次，除去TFA。參考文獻(xiàn)［17］ 方法對降解單糖進(jìn)行衍生，降解樣品用100 μL 蒸餾水溶解，加入100 μL 0.3 mol/L NaOH 溶液混勻，再加入120 μL 0.5 mol/L PMP 甲醇溶液，密封70 ℃水浴反應(yīng)60 min，冷卻后加入100 μL 0.3 mol/L HCl 溶液中和。反應(yīng)液用氯仿萃取5 次，水相用0.22 μm 微孔濾膜過濾，備用，不同單糖對照品采用同樣方法衍生和處理。

色譜條件為流動(dòng)相0.1 mol/L 磷酸鹽緩沖液 （pH 6.7） -乙腈（83 ∶17）； 柱溫30 ℃； DAD 檢測器，檢測波長245 nm； 體積流量1 mL/min； 進(jìn)樣量20 μL。單糖對照品和樣品進(jìn)樣分析，根據(jù)出峰時(shí)間確定單糖組成，根據(jù)峰面積計(jì)算各單糖相對比例。

2.6 紫外-可見光譜分析 參考文獻(xiàn)［18］ 方法，將樣品溶于適量蒸餾水，分別配制0.1 mg/mL 半夏多糖各組分溶液，用紫外-可見分光光度計(jì)在200 ～900 nm 范圍內(nèi)掃描，記錄紫外-可見光譜圖。

2.7 紅外光譜掃描分析 參考文獻(xiàn)［19］ 方法，半夏多糖樣品在放有P2O5的真空干燥箱中干燥48 h，分別取2～3 mg 樣品用干燥KBr 壓片，在4 000～400 cm-1范圍內(nèi)進(jìn)行紅外光譜掃描，記錄紅外光譜圖。

2.8 抗氧化活性評價(jià) 對DPPH 自由基的清除活性： 按文獻(xiàn)［20］ 方法，分別配制39、78、156、313、625、1 250、2 500 μg/mL 半夏多糖各組分樣品，取2 mL 于試管中，等體積蒸餾水為空白對照，分別加入2 mL 0.1 mmol/mL DPPH 乙醇溶液，混勻，避光靜置30 min，維生素C 作為陽性對照。紫外分光光度計(jì)517 nm 波長處測定吸光度，計(jì)算DPPH 自由基清除率，公式如下：

式中A0為空白標(biāo)準(zhǔn)組吸光度，A為樣品吸光度。

對超氧陰離子自由基的清除活性： 按文獻(xiàn)［21］ 方法，分別取39、78、156、313、625、1 250、2 500 μg/mL半夏多糖各組分樣品1 mL 于試管中，等體積蒸餾水為空白對照，立即加入3 mL 0.05 mol/L Tris-HCl （pH 8.2） 溶液混勻，37 ℃水浴加熱10 min 后，加入2 mL 30 mmol/L 鄰苯三酚溶液反應(yīng)5 min，加入1 mL 8 mol/L HCl 中止反應(yīng)，維生素C 作為陽性對照。320 nm 波長處測定吸光度，計(jì)算樣品超氧陰離子自由基清除率，公式如下：

式中A0為空白標(biāo)準(zhǔn)組吸光度，A為樣品吸光度。

對羥基自由基的清除活性： 按文獻(xiàn)［22］ 方法，分別取39、78、156、313、625、1 250、2 500 μg/mL 半夏多糖各組分樣品1 mL 于試管中，等體積蒸餾水為空白對照。依次加入1 mL 9 mmol/L Fe2SO4、1 mL 8.8 mmol/L H2O2和1 mL 9 mmol/L 水楊酸溶液混勻，37 ℃水浴恒溫反應(yīng)15 min，維生素C 作為陽性對照，在510 nm 波長處測定吸光度，計(jì)算羥基自由基清除率，公式如下：

式中A0為空白標(biāo)準(zhǔn)組吸光度，A為樣品吸光度。

2.9 免疫增強(qiáng)活性評價(jià)

2.9.1 多糖溶液配制 將半夏多糖各組分分別溶于細(xì)胞培養(yǎng)液中，配制成800 μg/mL 的多糖溶液，0.22 μm 無菌針式過濾器過濾，備用。

2.9.2 細(xì)胞培養(yǎng) RAW264.7 細(xì)胞，用含10% FBS 和1%青鏈霉素的高糖DMEM 培養(yǎng)液在5% CO2、37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。用適量胰酶將RAW264.7 細(xì)胞消化至脫離瓶壁，1 000 r/min 離心6 min，棄上清液，用培養(yǎng)液吹散細(xì)胞團(tuán)制備細(xì)胞懸浮液，計(jì)數(shù)［23］。

2.9.3 免疫增強(qiáng)活性評價(jià) 采用MTT 法［10］測定半夏多糖對RAW264.7 細(xì)胞增殖的影響。將100 μL 密度為50 個(gè)/μL細(xì)胞的懸浮液接種于96 孔板中培養(yǎng)24 h，依次加入100 μL質(zhì)量濃度分別為0、50、100、200、400、800 μg/mL 的半夏多糖樣品孵育48 h。之后每孔加入10 μL 5 mg/mL MTT溶液，孵育4 h 后除去各孔中的培養(yǎng)液，加入100 μL DMSO，振蕩10 min，充分溶解結(jié)晶物，在570 nm 波長處測吸光度，以LNT 為陽性對照，計(jì)算細(xì)胞活力，公式如下：

式中A0為空白標(biāo)準(zhǔn)組吸光度，A為樣品吸光度。

2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 所有樣品均進(jìn)行3 次重復(fù)，采用SPSS 19.0 軟件進(jìn)行處理，2 組間比較采用單因素方差分析，P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，數(shù)據(jù)以（±s） 表示，使用Origin 8.0 和Graphpad prism 7.0 軟件作圖。

3 結(jié)果

3.1 提取與分離 通過水提-醇沉法從半夏中提取半夏多糖，得率為3.49%。通過QFF 陰離子交換柱分離，洗脫曲線見圖1，依次在濃度為0、0.1、0.2、0.5 mol/L NaCl 溶液下洗脫，得到PTC0、PTC01、PTC02、PTC05。

圖1 半夏多糖Q-Sepharose Fast Flow 陰離子交換柱分離洗脫曲線

3.2 基本化學(xué)性質(zhì)分析 通過PMP 柱前衍生HPLC 法對半夏多糖各組分的單糖組成進(jìn)行分析，見圖2，不同組分多糖的總糖含量、蛋白質(zhì)含量以及各單糖相對比例計(jì)算結(jié)果見表1。

表1 半夏多糖總糖含量、蛋白質(zhì)含量、單糖組成及相對比例分析結(jié)果（±s）

表1 半夏多糖總糖含量、蛋白質(zhì)含量、單糖組成及相對比例分析結(jié)果（±s）

注： —為未檢測到。

樣品總糖含量/%蛋白質(zhì)含量/%單糖組成及相對比例RhaGlcGalManGlcNGlcAGalAAra PTC072.4±1.23.4±0.18.719.649.810.24.0——7.7 PTC0169.3±0.93.4±0.39.19.959.37.13.67.9—3.1 PTC0274.6±1.13.1±0.29.824.239.710.62.14.03.56.1 PTC0575.9±1.83.1±0.114.226.231.615.04.8—4.04.2

圖2 半夏多糖各組分單糖組成HPLC 分析圖

從圖2 可知，半夏多糖各組分PTC0、PTC01、PTC02和PTC05 單糖組成較復(fù)雜，其中PTC0 由Gal、Glc、Man、Rha、Ara 和GlcN 6 種單糖組成，相對比例為49.8 ∶19.6 ∶10.2 ∶8.7 ∶7.7 ∶4.0； PTC01 由Gal、Glc、Rha、GlcA、Man、GlcN 和Ara 7 種單糖組成，相對比例為59.3 ∶9.9 ∶9.1 ∶ 7.9 ∶ 7.1 ∶ 3.6 ∶ 3.1； PTC02 由Gal、Glc、Man、Rha、Ara、GlcA、GalA 和GlcN 8 種單糖組成，相對比例為39.7 ∶24.2 ∶10.6 ∶9.8 ∶6.1 ∶4.0 ∶3.5 ∶2.1； 而PTC05由Gal、Glc、Man、Rha、GlcN、Ara 和GalA 7 種單糖組成，相對比例為31.6 ∶26.2 ∶15.0 ∶14.2 ∶4.8 ∶4.2 ∶4.0，說明半夏多糖是單糖組成極為復(fù)雜的雜多糖。

由表1 可知，半夏多糖各純化組分蛋白含量均較低。

3.3 紫外-可見光譜分析 半夏多糖經(jīng)QFF 純化獲得的4個(gè)組分的紫外-可見光譜見圖3?？芍?，PTC0、PTC01、PTC02 和PTC05 在260、280 nm 附近僅有微弱吸收峰，說明半夏多糖各組分核酸和蛋白質(zhì)含量較低，這與蛋白質(zhì)含量測定結(jié)果一致，可用于后續(xù)進(jìn)一步的研究。

圖3 半夏多糖各組分紫外-可見光譜圖

3.4 紅外光譜分析 半夏多糖經(jīng)QFF 純化得到的各組分的紅外光譜分析圖見圖4。可知，4 個(gè)多糖組分存在相似的多糖特征峰。4 個(gè)樣品在3 395 cm-1附近均有強(qiáng)且寬大的吸收峰出現(xiàn)，說明多糖存在分子間和分子內(nèi)氫鍵，為糖鏈中-OH伸縮振動(dòng)引起［24］； 2 926 cm-1附近出現(xiàn)的吸收峰為糖類物質(zhì)特征峰，為糖鏈上-CH 伸縮振動(dòng)引起［25］。1 640 cm-1附近出現(xiàn)-OH 彎曲振動(dòng)特征吸收峰［26］，1 060 cm-1附近為糖鏈上糖苷鍵C-O-C 伸縮振動(dòng)引起，1 034 cm-1附近的吸收峰為葡萄糖特征峰，說明4 個(gè)組分均含葡萄糖，這與單糖組成分析結(jié)果相符，可知PTC0、PTC01、PTC02 和PTC05 均為糖類化合物。

圖4 半夏多糖各組分紅外光譜圖

3.5 半夏多糖不同組分的抗氧化活性 以多糖質(zhì)量濃度的對數(shù)為橫坐標(biāo)（X），以不同自由基清除率為縱坐標(biāo)（Y）進(jìn)行回歸，半夏多糖各組分對DPPH 自由基、超氧陰離子自由基和羥基自由基的清除活性結(jié)果見圖5，其IC50值見表2。由圖5A 可知，4 個(gè)組分對DPPH 自由基均有清除作用，且隨著質(zhì)量濃度升高，對DPPH 自由基清除作用增強(qiáng)，其中PTC0 作用最強(qiáng)。由圖5B 可知，與維生素C 相比，4 個(gè)組分對超氧陰離子自由基均有清除作用，且隨多糖質(zhì)量濃度升高而升高，其中PTC0 作用最強(qiáng)。從圖5C 可知，與維生素C 相比，4 個(gè)組分對羥基自由基的清除作用較弱，且隨質(zhì)量濃度升高而升高，其中PTC01 作用最強(qiáng)。說明4 個(gè)組分均具有較好的抗氧化活性且呈劑量依賴性，但不同多糖組分對不同自由基的清除活性存在一定差異，這可能與其細(xì)微結(jié)構(gòu)的差異有關(guān)［27］。

表2 半夏多糖各組分抑制自由基的IC50值（±s，n＝3）

表2 半夏多糖各組分抑制自由基的IC50值（±s，n＝3）

注：*P＜0.05。

樣品IC50/（μg·mL-1）DPPH 自由基超氧陰離子自由基羥基自由基VC102.3±9.6* 316.4±12.3* 158.2±15.8*PTC01 011.4±32.3*999.8±29.7*3 162.5±25.4*PTC011 653.1±14.5*3 981.3±45.5*1 003.3±10.7*PTC025 623.2±58.1*6 309.7±25.4*2 238.6±12.5*PTC052 213.1±22.9*1 258.1±10.2*6 309.4±47.4*

圖5 半夏多糖對3 種自由基的清除活性

3.6 免疫增強(qiáng)活性 由圖6 可知，4 個(gè)半夏多糖組分均有促進(jìn)RAW264.7 細(xì)胞增殖的作用，PTC0 在100～400 μg/mL范圍內(nèi)能促進(jìn)RAW264.7 細(xì)胞增殖，且細(xì)胞活力隨多糖質(zhì)量濃度增大而增大，在400 μg/mL 時(shí)促進(jìn)RAW264.7 細(xì)胞增殖作用最強(qiáng)，細(xì)胞活力為118.8%； PTC01 在各質(zhì)量濃度均有促增殖作用，在400 μg/mL 時(shí)細(xì)胞活力最大，為128.8%； PTC02 在各質(zhì)量濃度均能促進(jìn)RAW264.7 細(xì)胞增殖，且作用效果與質(zhì)量濃度呈正相關(guān)，細(xì)胞活力在400 μg/mL時(shí)達(dá)到161.9%，與空白組比較，對RAW264.7 促增殖作用極顯著（P＜0.01），與陽性對照LNT 作用相當(dāng)（LNT 在400 μg/mL 時(shí)細(xì)胞活力為163.1%）； PTC05 在各質(zhì)量濃度均有促增殖作用，但與空白組比較，促增殖作用不顯著，在400 μg/mL 時(shí)細(xì)胞活力為最大值111.8%。表明PTC02 具有較強(qiáng)的免疫增強(qiáng)活性。

圖6 半夏多糖對RAW264.7 細(xì)胞的作用

4 討論

多糖是半夏的主要活性成分，本研究以半夏為原料，通過水提醇沉獲得半夏多糖，并經(jīng)過QFF 陰離子交換柱進(jìn)行分離純化，得到4 個(gè)組分。通過紅外光譜分析發(fā)現(xiàn)，4 個(gè)組分均為糖類化合物； 紫外-可見光譜和化學(xué)分析發(fā)現(xiàn)其蛋白質(zhì)和核酸含量較低，總糖含量高。半夏多糖各組分組成復(fù)雜，其中PTC0 由6 種單糖組成，PTC01 和PTC05 由7 種單糖組成，PTC02 由8 種單糖組成，并且不同組分單糖組成的相對比例也存在較大差異。多糖的活性與其結(jié)構(gòu)密切相關(guān)，特別是決定一級結(jié)構(gòu)的單糖殘基組成及相對比例，半夏多糖不同組分結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性也預(yù)示不同組分可能具有不同的活性。

生物體內(nèi)活性氧過量時(shí)會(huì)引起細(xì)胞器損傷、蛋白質(zhì)變質(zhì)和DNA 損傷等，導(dǎo)致病理損傷。對DPPH、超氧陰離子和羥基自由基清除活性的評價(jià)是常用的體外抗氧化活性評價(jià)方法，本研究結(jié)果表明半夏多糖各組分對3 種自由基的清除活性具有量效關(guān)系，不同組分的IC50差異較大，推測可能與4 個(gè)多糖的單糖組成和相對比例有關(guān)，可能還與分子量、空間結(jié)構(gòu)等因素有關(guān)［28］，其抗氧化活性與結(jié)構(gòu)的關(guān)系還需進(jìn)一步深入研究。

免疫調(diào)節(jié)藥物常用于免疫失調(diào)，但研究發(fā)現(xiàn)有些免疫調(diào)節(jié)劑會(huì)產(chǎn)生有害作用［29］。天然多糖不僅具有免疫調(diào)節(jié)活性，且毒副作用小，這使其成為研究熱點(diǎn)。本研究發(fā)現(xiàn)4個(gè)組分在25 ～400 μg/mL 范圍內(nèi)對RAW264.7 細(xì)胞增殖均有促進(jìn)作用，其中PTC02 作用最強(qiáng)，與臨床使用的免疫調(diào)節(jié)藥物L(fēng)NT 活性相當(dāng)，并且呈明顯的劑量依賴性。單糖組成及相對比例分析結(jié)果表明，和其他組分相比，PTC02 的單糖組成最復(fù)雜，這使其一級結(jié)構(gòu)與空間結(jié)構(gòu)變化更多樣，可能是其高免疫增強(qiáng)活性的原因［30］。

綜上所述，從半夏中制備的4 個(gè)組分均為雜多糖，具有較好的抗氧化活性和免疫增強(qiáng)活性，其中PTC02 作用最強(qiáng)，具有進(jìn)一步開發(fā)為免疫調(diào)節(jié)藥物的潛力。本研究為半夏多糖進(jìn)一步的結(jié)構(gòu)表征奠定了基礎(chǔ)，并為其作為天然抗氧化劑和免疫增強(qiáng)藥物的開發(fā)提供了參考。