姜丹丹 羅喜鋼

(1錦州醫(yī)科大學(xué),遼寧 錦州 121001;2錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院檢驗(yàn)科)

近年來(lái),高發(fā)病率及高致死率的肺癌成為眾多研究學(xué)者的研究熱點(diǎn)之一。依據(jù)組織形態(tài)學(xué)特性,肺癌被分為小細(xì)胞肺癌(SCLC)和非小細(xì)胞肺癌(NSCLC),而NSCLC的發(fā)病率在80%～85%。由于疾病缺乏實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)手段,大多數(shù)患者依靠手術(shù)切除與放化療相結(jié)合的干預(yù)方案來(lái)緩解癥狀,極易影響患者的生活和生存質(zhì)量〔1〕。因此,更進(jìn)一步闡明NSCLC細(xì)胞的增殖與轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制,推動(dòng)個(gè)體化靶向治療的開(kāi)展,具有重大臨床意義。大量證據(jù)顯示〔2〕長(zhǎng)鏈非編碼RNA(LncRNAs)及微小RNA(miRNAs)通過(guò)與靶基因、蛋白的相互作用參與腫瘤細(xì)胞的增殖、分化、轉(zhuǎn)移與侵襲等過(guò)程。LncRNAs及miRNAs表達(dá)的異常直接影響腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及惡性轉(zhuǎn)移、化學(xué)耐藥等進(jìn)展。LncRNA MIR503HG位于人類(lèi)基因組X染色體的134543377～134546630區(qū)域,是miR-503的宿主基因。Hu等〔3〕研究顯示LncRNA MIR503HG在宮頸癌組織中的表達(dá)升高,并且高表達(dá)的LncRNA MIR503HG直接增強(qiáng)了癌細(xì)胞的體外增殖與侵襲能力。miR-32-5p位于人染色體9q31.3上,該區(qū)段的基因主要在基因擴(kuò)增及蛋白修飾方面發(fā)揮作用。Yang等〔4〕研究顯示miR-32-5p的表達(dá)在三陰性乳腺癌中明顯降低,轉(zhuǎn)染miR-32-5p mimic之后,細(xì)胞中波形蛋白(Vimentin)表達(dá)明顯降低,E-鈣黏蛋白(cadherin)表達(dá)明顯升高,細(xì)胞的生長(zhǎng)明顯受限,誘導(dǎo)其趨于凋亡。但是有關(guān)LncRNA MIR503HG和miR-32-5p在NSCLC作用的報(bào)道較少。Li等〔5〕研究顯示整合素α(ITGA)6在肺腺癌細(xì)胞的淋巴轉(zhuǎn)移中發(fā)揮關(guān)鍵作用,是治療肺腺癌淋巴轉(zhuǎn)移最具潛力的治療靶點(diǎn),但是并未詳細(xì)闡明ITGA6對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用機(jī)制。本研究主要探討LncRNA MIR503HG、miR-32-5p、ITGA6在NSCLC中的表達(dá)及其對(duì)NSCLC細(xì)胞增殖與轉(zhuǎn)移的影響。

1 材料和方法

1.1在線分析信息〔6〕從癌癥基因組圖譜(TCGA)數(shù)據(jù)庫(kù)中提取273例NSCLC患者癌組織及其對(duì)應(yīng)癌旁組織的LncRNA、miRNA及轉(zhuǎn)錄組mRNA的芯片數(shù)據(jù),R軟件中MAX STAT 函數(shù)包統(tǒng)計(jì)分析LncRNA MIR503HG、miR-32-5p、ITGA6在NSCLC中的表達(dá)情況。并通過(guò)GEPIA分析LncRNA MIR503HG、ITGA6對(duì)NSCLC患者預(yù)后的影響,通過(guò)UALCAN數(shù)據(jù)庫(kù)(http://ualcan.path.uab.edu/index.html)分析miR-32-5p對(duì)NSCLC患者預(yù)后的影響。

1.2NSCLC組織臨床樣本信息 選取2018年2月至2021年8月錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院手術(shù)切除的80例NSCLC患者的癌組織,平均年齡(47.65±18.93)歲,所有入選患者經(jīng)病理切片確診為NSCLC,均為原發(fā)性肺癌,并未經(jīng)放化療干預(yù),入選患者的其他器官或組織未罹患惡性腫瘤、免疫缺陷等疾病,患者的病理資料均完整,同時(shí)收集遠(yuǎn)離病灶位置2 cm以上的癌旁組織。入選患者均已簽署知情同意書(shū),并且本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員審核批準(zhǔn)。所有樣本4%多聚甲醛常規(guī)固定,用于聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測(cè)。

1.3實(shí)驗(yàn)材料 人永生化支氣管上皮細(xì)胞系BEAS-2B、NSCLC細(xì)胞系A(chǔ)549,PC9,H1975,H460,SK-MES-1,H1299購(gòu)自廣州賽庫(kù)生物科技有限公司(中國(guó)廣州)。LncRNA MIR503HG-mimic和LncRNA MIR503HG-mimic-NC,miR-32-5p-agomir和miR-32-5p-agomir-NC及pcDNA3.1-ITGA6由華強(qiáng)基因編輯技術(shù)(沈陽(yáng))有限公司提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品系:BALB/c雄性裸鼠;清潔級(jí)別:SPF級(jí);周齡:6～8周齡;體質(zhì)量(20±2)g,50只,購(gòu)自錦州醫(yī)科大學(xué),動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(遼)2019-0003;實(shí)驗(yàn)動(dòng)物適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w后開(kāi)展實(shí)驗(yàn),本研究已獲取錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)試劑:兔抗大鼠甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)抗體、Vimentin、E-cadherin及ITGA6抗體(美國(guó)Thermo公司),逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、擴(kuò)增試劑盒、RNA提取試劑盒購(gòu)自(日本TaKaRa公司),滅活的胎牛血清(FBS)、多聚甲醛(江蘇萬(wàn)邦醫(yī)藥集團(tuán)有限公司),細(xì)胞裂解液、胰酶消化液、中性樹(shù)脂(天津凱信化學(xué)工業(yè)有限公司),化學(xué)發(fā)光試劑、熒光劑Luciferin、磷酸鹽緩沖液(PBS,江蘇恩莫阿賽生物技術(shù)科技公司),Western印跡試劑盒、二喹啉甲酸(BCA)試劑盒(天津利安隆博華生物技術(shù)有限公司),Transwell小室、雙熒光素酶試劑盒、杜爾伯科改良伊格爾培養(yǎng)基(DMEM)培養(yǎng)基、5-乙炔基-2′脫氧尿嘧啶核苷(EDU)增殖試劑盒(成都科龍生物技術(shù)有限公司)。

實(shí)驗(yàn)儀器:組織研磨器(杭州奧盛科技有限公司),恒溫培養(yǎng)箱(寧波新芝生物儀器有限公司),瓊脂糖電泳儀及全自動(dòng)凝膠成像分析系統(tǒng)(天能科技有限公司),CFX96熒光定量反轉(zhuǎn)錄(qRT-PCR)擴(kuò)增儀(美國(guó)Bio-Rad公司),微量注射器(丹麥 Labogene 公司),光學(xué)顯微鏡(日本Olympus公司)

1.4qRT-PCR實(shí)驗(yàn) Trizol法分別提取臨床癌組織和細(xì)胞系的總RNA,在確定完整性和濃度后〔7〕,按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒要求合成cDNA,PCR儀擴(kuò)增目的基因。通過(guò)2-ΔΔCt表示目的基因相對(duì)表達(dá)量?；蛐蛄袨?5′-3′):LncRNA MIR503HGG上游引物:GTGACAGATGGGCTCTGCTT,下游:AAGGGCCAGTAG-TTGGAAGT;miR-32-5p上游引物:AGCTGCCCACTTGGTGAACGC,下游:TCAGGCCCGGAACAGTTGTGA;ITGA6上游引物:CCACCCCAAATACAAGACGGA,下游:CAGGTCTTCGCTAGGGTTGT;GAPDH上游引物:TGAAGGTCGGAGTCAACGG,下游:CCTGGAAGATGGTGATGGG。

1.5雙熒光素酶實(shí)驗(yàn) 生物信息數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)LncRNA MIR503HG、miR-32-5p、ITGA6之間的作用位點(diǎn),之后按照雙熒光素酶試劑盒要求構(gòu)建野生型與突變型質(zhì)粒,依次與H1299細(xì)胞進(jìn)行共轉(zhuǎn)染,37 ℃,5%CO2條件下培養(yǎng)48 h后,檢測(cè)酶活性。

1.6細(xì)胞的分組處理 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的H1299細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn),分組轉(zhuǎn)染操作如下:LncRNA-mimic-NC組細(xì)胞轉(zhuǎn)染LncRNA MIR503HG-mimic-NC,常規(guī)培養(yǎng);LncRNA-mimic組細(xì)胞轉(zhuǎn)染LncRNA MIR503HG-mimic,常規(guī)培養(yǎng);agomir-NC組細(xì)胞常溫下轉(zhuǎn)染miR-32-5p-agomir-NC,常規(guī)培養(yǎng);agomir組細(xì)胞常溫下轉(zhuǎn)染miR-32-5p-agomir,常規(guī)培養(yǎng);Lnc-mimic+agomir組細(xì)胞轉(zhuǎn)染LncRNA MIR503HG-mimic+miR-32-5p-agomir,常規(guī)培養(yǎng);Lnc-mimic+agomir+pc組細(xì)胞轉(zhuǎn)染LncRNA MIR503HG-mimic+miR-32-5p-agomir+pcDNA3.1-ITGA6,常規(guī)培養(yǎng);agomir+pc組細(xì)胞常溫下轉(zhuǎn)染miR-32-5p-agomir+pcDNA3.1-ITGA6,常規(guī)培養(yǎng);另取不進(jìn)行任何轉(zhuǎn)染的細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)作為Normal組。

1.7EDU染色實(shí)驗(yàn) 調(diào)整對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的H1299細(xì)胞的濃度至1×105個(gè)/孔并接種在24孔板上,分組同1.6,空氣濕度95%,5%CO2,37 ℃條件下培養(yǎng)24 h,收集各組細(xì)胞,PBS漂洗3次,每次3 min,每孔加入100 μl的EDU染色液,避光孵育,熒光顯微鏡觀察,ImageJ軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.8Transwell小室實(shí)驗(yàn) 各組細(xì)胞分組同1.6,將H1299細(xì)胞以1×106個(gè)/ml接種在已預(yù)先鋪好基質(zhì)膠的Transwell小室上室中,培養(yǎng)24 h,室溫下,結(jié)晶紫避光染色,孵育30 min,鏡檢。

1.9裸鼠皮下種植NSCLC實(shí)驗(yàn) 將50只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按隨機(jī)數(shù)字表法分為5組:Normal組、LncRNA-mimic-NC組、LncRNA-mimic組、mimic+agomir組、mimic+agomir+pc組,每組10只。各組細(xì)胞分組處理同1.6,常規(guī)培養(yǎng)24 h,重懸細(xì)胞,將各組細(xì)胞分別注射至對(duì)應(yīng)組的裸鼠體內(nèi),同時(shí)腹腔注射熒光劑,無(wú)菌操作臺(tái)上,顯微鏡下,連接活體小動(dòng)物成像系統(tǒng)(VIS)。常規(guī)喂養(yǎng)裸鼠4 w后,斷頭處死,取出各組動(dòng)物皮下組織中的腫瘤塊,待測(cè)。

1.10Western印跡實(shí)驗(yàn) 放射免疫沉淀試驗(yàn)(RIPA)法裂解細(xì)胞,離心后,BCA法測(cè)定上清液中的蛋白濃度,以50 μg進(jìn)行電泳分離,濕法轉(zhuǎn)膜后,封閉,加入一抗(ITGA6、Vimentin、E-cadherin、GAPDH的稀釋比例均為1∶500),4 ℃避光孵育24 h,磷酸鹽緩沖液(PBS)漂洗,加入二抗(1∶1 500),孵育,ImageJ軟件統(tǒng)計(jì)分析〔8〕各條帶灰度值。

1.11統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS21.0軟件進(jìn)行單因素方差分析、LSD-t檢驗(yàn)及Spearman相關(guān)分析,制圖采用軟件Graphpad8.1。

2 結(jié) 果

2.1臨床腫瘤組織中LncRNA MIR503HG和miR-32-5p表達(dá) 與癌旁組織相比,NSCLC腫瘤組織中LncRNA MIR503HG、ITGA6 mRNA水平明顯增加,miR-32-5p mRNA水平明顯下降(均P<0.05);經(jīng)GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)分析顯示,與LncRNA MIR503HG高表達(dá)的NSCLC患者相比,LncRNA MIR503HG低表達(dá)患者的生存曲線明顯升高(P<0.05);經(jīng)UALCAN數(shù)據(jù)庫(kù)分析,與miR-32-5p高表達(dá)的NSCLC患者相比,miR-32-5p低表達(dá)患者的生存曲線明顯降低(P<0.05);Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示,LncRNA MIR503HG與miR-32-5p在NSCLC癌組織組織中的表達(dá)呈明顯負(fù)相關(guān)(P=0.000)。見(jiàn)圖1、表1。

圖1 在線分析LncRNA MIR503HG和miR-32-5p對(duì)NSCLC患者生存期的影響及二者表達(dá)的相關(guān)性

2.2NSCLC肺癌細(xì)胞系中LncRNA MIR503HG、miR-32-5p及ITGA6 mRNA表達(dá) 與BEAS-2B細(xì)胞相比,LncRNA MIR503HG、ITGA6 mRNA在NSCLC細(xì)胞系A(chǔ)549,PC9,H1975,H460,SK-MES-1,H1299中表達(dá)水平明顯增加,miR-32-5p mRNA表達(dá)水平明顯下降(均P<0.05),而H1299細(xì)胞中LncRNA MIR503HG、miR-32-5p、ITGA6 mRNA表達(dá)與BEAS-2B細(xì)胞中差異最明顯,后續(xù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)均使用H1299細(xì)胞。見(jiàn)表1。

表1 臨床樣本及細(xì)胞系中LncRNA MIR503HG、miR-32-5p和ITGA6 mRNA相對(duì)表達(dá)比較

2.3雙熒光素酶實(shí)驗(yàn) ENCORI數(shù)據(jù)庫(kù)顯示LncRNA MIR503HG和miR-32-5p存在互補(bǔ)位點(diǎn),見(jiàn)圖2。雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,以LncRNA MIR503HG mimic過(guò)表達(dá)LncRNA MIR503HG后,miR-32-5p(野生型)熒光素酶活性明顯下降(P<0.05),miR-32-5p(突變型)熒光素酶活性無(wú)明顯差異(P>0.05),說(shuō)明在NSCLC中,LncRNA MIR503HG可靶向調(diào)控miR-32-5p表達(dá)。見(jiàn)表2。

圖2 LncRNA MIR503HG與miR-32-5p的特異性結(jié)合位點(diǎn)

表2 雙熒光素酶結(jié)果

2.4LncRNA MIR503HG通過(guò)miR-32-5p表達(dá)影響H1299細(xì)胞體外增殖與遷移能力 EDU染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與Normal組相比,LncRNA-mimic組、Lnc-mimic+agomir組能明顯升高EDU陽(yáng)性細(xì)胞比例(P<0.05);與LncRNA-mimic組相比,Lnc-mimic+agomir組EDU陽(yáng)性細(xì)胞比例明顯降低(P<0.05)。Transwell小室實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與Normal組相比,LncRNA-mimic組、Lnc-mimic+agomir組遷移細(xì)胞數(shù)量明顯升高(P<0.05);與LncRNA-mimic組相比,Lnc-mimic+agomir組遷移細(xì)胞數(shù)量明顯降低(P<0.05)。Western印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與Normal組相比,LncRNA-mimic組、Lnc-mimic+agomir組ITGA6、Vimentin表達(dá)水平明顯升高,E-cadherin表達(dá)水平明顯降低(P<0.05);與LncRNA-mimic組相比,Lnc-mimic+agomir組ITGA6、Vimentin表達(dá)水平明顯降低,E-cadherin表達(dá)水平明顯升高(P<0.05)。見(jiàn)圖3、表3、圖4。

圖3 LncRNA MIR503HG通過(guò)調(diào)控miR-32-5p的表達(dá)影響H1299細(xì)胞的體外增殖與遷移

表3 LncRNA MIR503HG調(diào)控miR-32-5p對(duì)H1299細(xì)胞ITGA6、Vimentin、E-cadherin表達(dá)的影響

1～4:Normal組,LncRNA-mimic-NC組,LncRNA-mimic組,Lnc-mimic+agomir組

2.5ITGA6在NSCLC癌中表達(dá) 經(jīng)GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)分析顯示,與ITGA6高表達(dá)的NSCLC患者相比,ITGA6低表達(dá)患者的生存曲線明顯升高(P<0.05),見(jiàn)圖5;Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示,NSCLC癌組織中ITGA6與LncRNA MIR503HG、Vimentin表達(dá)呈明顯正相關(guān)(r=0.802、0.652,均P<0.05),與miR-32-5p、E-cadherin表達(dá)呈明顯負(fù)相關(guān)(r=-0.792、-0.671,均P=0.000)。

圖5 ITGA6表達(dá)影響NSCLC患者生存期

2.6miR-32-5p與ITGA6之間的雙熒光素酶實(shí)驗(yàn) miRDB生物信息數(shù)據(jù)庫(kù)顯示miR-32-5p和ITGA6能發(fā)生特異性結(jié)合。見(jiàn)圖6。雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,在升高miR-32-5p表達(dá)后,ITGA6(野生型)熒光素酶活性明顯下降(P<0.05),TGA6(突變型)熒光素酶活性無(wú)明顯變化(P>0.05),說(shuō)明在NSCLC中,miR-32-5p靶向ITGA6表達(dá)。見(jiàn)表4。

圖6 NSCLC中miR-32-5p與ITGA6的互補(bǔ)序列

表4 miR-32-5p與ITGA6雙熒光素酶結(jié)果

2.7miR-32-5p靶向ITGA6影響H1299細(xì)胞的體外增殖與轉(zhuǎn)移 細(xì)胞EDU染色增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與Normal組相比,agomir組、agomir+pc組EDU陽(yáng)性細(xì)胞比例明顯升高(P<0.05);與agomir組相比,agomir+pc組EDU陽(yáng)性細(xì)胞比例明顯升高(P<0.05)。細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與Normal組相比,agomir組、agomir+pc組遷移細(xì)胞數(shù)量明顯降低(P<0.05);與agomir組相比,agomir+pc組遷移細(xì)胞數(shù)量明顯升高(P<0.05)。Western印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與Normal組相比,agomir組、agomir+pc組ITGA6、Vimentin表達(dá)水平明顯降低,E-cadherin表達(dá)水平明顯升高(P<0.05);與agomir組相比,agomir+pc組ITGA6、Vimentin表達(dá)水平明顯升高,E-cadherin表達(dá)水平明顯降低(P<0.05)。見(jiàn)圖7、圖8、表5。

1～4:Normal組、agomic-NC組、agomir組、agomiR-PC組

圖8 miR-32-5p靶向ITGA6調(diào)控H1299細(xì)胞的體外增殖與轉(zhuǎn)移

表5 miR-32-5p靶向ITGA6對(duì)H1299細(xì)胞中ITGA6、Vimentin、E-cadherin表達(dá)的影響

2.8LncRNA MIR503HG/miR-32-5p/ITGA6對(duì)腫瘤細(xì)胞體內(nèi)生長(zhǎng)與病灶轉(zhuǎn)移的影響 與Normal組相比,LncRNA-mimic組、Lnc-mimic+agomir組、Lnc-mimic+agomir+pc組瘤體質(zhì)量和病灶轉(zhuǎn)移比例明顯升高(P<0.05);與LncRNA-mimic組相比,Lnc-mimic+agomir組、Lnc-mimic+agomir+pc組瘤體質(zhì)量和病灶轉(zhuǎn)移比例明顯降低(P<0.05);與Lnc-mimic+agomir組相比,Lnc-mimic+agomir+pc組瘤體質(zhì)量和病灶轉(zhuǎn)移比例明顯升高(P<0.05)。Western印跡結(jié)果顯示,與Normal組相比,LncRNA-mimic組、Lnc-mimic+agomir組、Lnc-mimic+agomir+pc組ITGA6、Vimentin表達(dá)水平明顯升高,E-cadherin表達(dá)水平明顯降低(P<0.05);與LncRNA-mimic組相比,Lnc-mimic+agomir組、Lnc-mimic+agomir+pc組ITGA6、Vimentin的表達(dá)水平明顯降低,E-cadherin表達(dá)水平明顯升高(P<0.05);與Lnc-mimic+agomir組相比,Lnc-mimic+agomir+pc組ITGA6、Vimentin表達(dá)水平明顯升高,E-cadherin表達(dá)水平明顯降低(P<0.05),見(jiàn)圖9,圖10,表6、圖11。

1～5:Normal組、LncRNA-mimic-NC組、LncRNA-mimic組、LncRNA-mimic+agomir組、Lnc-mimic+agomir+pc組

1～5:Normal組、LncRNA-mimic-NC組、LncRNA-mimic組、Lnc-mimic+agomir組、Lnc-mimic+agomir+pc組

表6 各組瘤體質(zhì)量、病灶轉(zhuǎn)移與瘤體組織中ITGA6、Vimentin、E-cadherin相對(duì)表達(dá)

圖11 5組H1299細(xì)胞體內(nèi)病灶轉(zhuǎn)移

3 討 論

隨著環(huán)境污染及生活方式的極大改變,肺癌尤其是NSCLC的發(fā)病率逐年升高。盡管NSCLC的預(yù)防、臨床診斷、治療均在生命技術(shù)的影響下出現(xiàn)了較為可喜的變化,但是疾病的分子機(jī)制尚未明確,治療手段存在諸多限制,其5年生存率尚未令人滿(mǎn)意,而大多數(shù)NSCLC患者經(jīng)常規(guī)治療后,仍具有較高的復(fù)發(fā)率和靶器官轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)。研究〔9〕顯示,腫瘤細(xì)胞的無(wú)限增殖能力、對(duì)靶器官(尤以胃、乳腺等為主)的惡性侵襲能力是癌細(xì)胞最主要的惡性功能表型,也是導(dǎo)致患者失去生命的關(guān)鍵因子。因此,更為系統(tǒng)、深入的闡明NSCLC細(xì)胞增殖與轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制,及時(shí)而有效的加以安全高效的干預(yù),是NSCLC臨床治療急需解決的挑戰(zhàn)之一。

LncRNAs是由約為200個(gè)核苷酸組成的單鏈RNA,研究〔10〕顯示,LncRNAs通過(guò)參與染色體修飾、基因轉(zhuǎn)錄水平及轉(zhuǎn)錄后的激活等過(guò)程參與細(xì)胞的增殖、侵襲與轉(zhuǎn)移;而miRNAs是由22個(gè)核苷酸組成的單鏈生化小分子,研究〔11〕顯示,miRNAs通過(guò)與靶基因的特異性位點(diǎn)結(jié)合,調(diào)控其表達(dá)或轉(zhuǎn)錄水平,在細(xì)胞增殖、侵襲、衰老及血管生成等生物學(xué)過(guò)程中發(fā)揮重要作用。隨著人類(lèi)基因組計(jì)劃研究的深入,研究〔12〕顯示,作為生物體內(nèi)重要的非編碼基因,具有龐大數(shù)量的LncRNAs及miRNAs的表達(dá)異常在機(jī)體癌癥、組織損傷與修復(fù)、自身免疫性疾病等多種疾病中發(fā)揮重要作用。Zhao等〔13〕研究顯示,在宮頸鱗狀癌組織中LncRNA MIR503HG表達(dá)水平明顯升高,表達(dá)異常升高的LncRNA MIR503HG促進(jìn)宮頸癌的進(jìn)展,沉默其表達(dá)后,能明顯降低癌細(xì)胞的增殖活性。Qin等〔14〕研究報(bào)道,miR-32-5p在口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)明顯降低,升高其表達(dá)后,能明顯升高口腔鱗狀細(xì)胞中E-cadherin表達(dá),下調(diào)口腔鱗狀細(xì)胞中Vimentin表達(dá),直接影響癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過(guò)程。細(xì)胞外基質(zhì)的降解與重塑是腫瘤細(xì)胞惡性增殖及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。作為整合素家族最為重要的成員,ITGA6定位于染色體2q31.1,其表達(dá)水平的高低與腫瘤進(jìn)展及靶器官轉(zhuǎn)移密切相關(guān)〔15〕。研究〔16〕顯示,ITGA6不僅是細(xì)胞膜表面最關(guān)鍵的黏附分子,調(diào)節(jié)細(xì)胞間的黏附,還能增強(qiáng)促癌基因與信號(hào)的表達(dá)水平,調(diào)控腫瘤細(xì)胞增殖、分化、遷移與侵襲等生物學(xué)行為。Guo等〔17〕研究顯示,ITGA6在肝癌組織中呈現(xiàn)高表達(dá)現(xiàn)象,并且高表達(dá)ITGA6增強(qiáng)了細(xì)胞體外增殖與轉(zhuǎn)移活性。本研究得到類(lèi)似結(jié)論。

綜上,NSCLC中LncRNA MIR503HG、ITGA6表達(dá)明顯升高,miR-32-5p表達(dá)明顯降低,LncRNA MIR503HG靶向miR-32-5p調(diào)控ITGA6的表達(dá)影響H1299細(xì)胞的增殖與轉(zhuǎn)移能力,但是如何將這一靶向作用用于NSCLC的臨床診斷與治療中,還需要結(jié)合更多的系統(tǒng)研究做出最為適宜的研判。