張峰碩，季秋蓉，何婷莉，蘇曲楊昂毛，王志有，侯生珍，桂林生

（青海大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院，青海 西寧 810016）

近年來，隨著畜牧業(yè)的快速發(fā)展，我國飼料原料較為匱乏，尤其是蛋白質(zhì)資源大多從國外進(jìn)口。而且飼喂高蛋白質(zhì)飼料并不能使動(dòng)物機(jī)體全部有效利用，還會(huì)使氮排放增加導(dǎo)致環(huán)境污染。而把日糧中蛋白質(zhì)含量降低，又會(huì)影響動(dòng)物機(jī)體的生長以及纖維物質(zhì)的消化，但作為第一級(jí)和二級(jí)氨基酸的賴氨酸和蛋氨酸，又是構(gòu)成蛋白質(zhì)的主要原料，在低蛋白日糧中添加適宜比例氨基酸能夠大大提高其利用率[1-2］。有研究表明，飼喂蛋白比例12.3%并添加賴氨酸和蛋氨酸為3∶1 時(shí)，能提高斷奶犢牛生長性能并減少氮排放[3］。所以在低蛋白水平下添加氨基酸逐漸成為畜牧業(yè)研究熱點(diǎn)。

隨著生活水平的提升，優(yōu)質(zhì)健康成為人們的追求。羊肉需求量與日俱增，而藏羊因?yàn)殚L期生活在高海拔地區(qū)，與其他品種相比其對極端天氣和惡劣環(huán)境具有極強(qiáng)的適應(yīng)性，是青藏高原優(yōu)秀的種質(zhì)資源[4］。因其肉質(zhì)中蛋白質(zhì)含量高、氨基酸種類齊全、脂肪沉積低、肉質(zhì)鮮嫩和膻味少等益處，越來越被廣大消費(fèi)者青睞[5］。張俊峰等[6］研究表明，飼喂3 種不同低蛋白水平下不同比例氨基酸日糧，其中美國NRC（National Research Council，全國科學(xué)研究委員會(huì)）2012 豬營養(yǎng)氨基酸比例日糧能有效提高藏香豬的肉品質(zhì)以及脂肪酸含量。夏偉光等[7］研究顯示，飼喂低蛋白質(zhì)氨基酸平衡日糧能有效改善清遠(yuǎn)麻雞肌內(nèi)脂肪，并減少氮排放。但在藏羊上此類報(bào)道卻較少。

鑒于此，本試驗(yàn)以藏羊?yàn)檠芯繉ο?，探究低蛋白日糧中不同比例氨基酸對藏羊背腰最長肌肉品質(zhì)、氨基酸和脂肪酸組成以及維生素和礦物質(zhì)含量的影響，為探究藏羊日糧中不同氨基酸含量對改善背腰最長肌肉品質(zhì)提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)條件

試驗(yàn)于2022 年4-7 月在青海省海北藏族自治州海晏縣金藏牧場進(jìn)行，試驗(yàn)期間所有試驗(yàn)藏羊均為全舍飼飼養(yǎng)，有自然光照并配備運(yùn)動(dòng)場。試驗(yàn)期共97 d，其中7 d 預(yù)飼期，90 d 正試期。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與日糧

試驗(yàn)選取90 只體重相近 [（15.60±0.10） kg］，健康無病的高原型藏羊公羔，隨機(jī)分為3 組，每組30 只，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)6 只羊。試驗(yàn)結(jié)束后，在每組的每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)挑選1 只羊，共15 只羊進(jìn)行屠宰。日糧精料中蛋白水平為12%，3 組分別為LP-L 組（賴氨酸與蛋氨酸為1∶1）；LP-M 組（賴氨酸與蛋氨酸為2∶1）；LP-H 組（賴氨酸與蛋氨酸為3∶1）。試驗(yàn)日糧由70%精料和30%粗料組成（粗料由燕麥青貯和燕麥干草按干物質(zhì)1∶1 組成），日糧精料組成與營養(yǎng)水平見表1。

表1 日糧精料組成及營養(yǎng)水平Table 1 Dietary concentrate composition and nutrient levels

1.3 飼養(yǎng)管理

整個(gè)飼養(yǎng)期間試驗(yàn)藏羊均采用舍飼飼養(yǎng)，每天在8：00 和17：00 各飼喂一次，所有試驗(yàn)藏羊自由采食，自由飲水，試驗(yàn)開始前所有試驗(yàn)藏羊統(tǒng)一打耳標(biāo)，羊舍進(jìn)行全面消毒，每隔半個(gè)月進(jìn)行一次消毒以及水槽清洗，并根據(jù)羊場防疫規(guī)定統(tǒng)一注射四聯(lián)苗。

1.4 樣品采集與指標(biāo)測定及方法

1.4.1 肉品質(zhì)指標(biāo) 屠宰后取藏羊背腰最長肌，參照趙亞星等[8］的方法測定解凍損失、蒸煮損失、系水力、剪切力、pH45min和pH24h。

解凍損失：將肉樣在解凍前稱重即為M1，解凍后再次稱重即為M2。相關(guān)公式如下：

蒸煮損失：將肉樣的長、寬、厚截取約1 cm×1 cm×2 cm 的體積并稱重即為N1，在85 ℃水浴鍋中蒸煮20 min，使肉樣冷卻至室溫并用吸水紙吸干水分后稱重即為N2。相關(guān)公式如下：

筆者認(rèn)為，培育壯大新動(dòng)能，推動(dòng)經(jīng)濟(jì)發(fā)展動(dòng)力變革，已成為當(dāng)前和今后相當(dāng)長時(shí)期經(jīng)濟(jì)發(fā)展的中心工作。培育壯大新動(dòng)能、推動(dòng)經(jīng)濟(jì)發(fā)展動(dòng)力變革，應(yīng)該采取以下幾方面措施：

系水力：將肉樣長、寬、厚截取約5 cm×1 cm×1 cm 的體積肉樣并稱重即為D1，放置在加壓儀（YT-YS300，中國杭州）上，加壓至35 kg 并保持5 min 后測定肉樣重量即為D2。相關(guān)公式如下：

剪切力：將肉樣排酸后去掉筋膜和脂肪，在80 ℃水浴鍋中蒸煮40 min，冷卻至室溫后按肌纖維方向切取長條形肉樣約25 cm，截面為10 mm×10 mm，使用肌肉嫩度儀（MAQC-12，中國南京）測定，每個(gè)肉樣測3 次。

pH：屠宰后取背腰最長肌，按照便攜式酸度計(jì)（PHB-1，中國上海）說明書操作。將電極直接插入到肉樣中，使肉樣包裹住電極頭部，深度大于1 cm 測定45 min 時(shí)的肌肉pH 值。再將肉樣放在（0～4 ℃）冰箱中24 h 后測定肌肉pH 值，每個(gè)肉樣測3 次。

1.4.2 氨基酸與脂肪酸組成測定 氨基酸與脂肪酸含量均使用混標(biāo)測定。氨基酸測定以GB5009.124-2016標(biāo)準(zhǔn)[9］為依據(jù)，樣品采用（塞卡姆S4300 氨基酸分析儀，德國）超高效液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行分離。流動(dòng)相：A 液為25 mmol·L-1甲酸銨+0.08% FA 水溶液，B 液為0.1% FA 乙腈。樣品置于4 ℃自動(dòng)進(jìn)樣器中，柱溫40 ℃，流速為250 μL·min-1，進(jìn)樣量1 μL 樣本隊(duì)列中每間隔一定數(shù)量的試驗(yàn)樣本設(shè)置一個(gè)QC 樣本，用于檢測和評(píng)價(jià)系統(tǒng)的穩(wěn)定性及重復(fù)性。采用5500 QTRAP 質(zhì)譜儀（AB SCIEX，美國）在正離子模式下進(jìn)行質(zhì)譜分析。采用Multiquant軟件提取色譜峰面積及保留時(shí)間。使用氨基酸及其衍生物的標(biāo)準(zhǔn)品矯正保留時(shí)間進(jìn)行代謝物鑒定。

脂肪酸測定以GB5009.168-2016 標(biāo)準(zhǔn)[10］為依據(jù)，采用40 種脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液制成10 種混合標(biāo)準(zhǔn)濃度梯度。樣品在冰上解凍，取50 mg 樣品于2 mL 玻璃離心管中進(jìn)行代謝物提取。使用氣相色譜儀（Agilent，7890A/S-01-08，美國）進(jìn)行分離。樣本隊(duì)列中每間隔一定數(shù)量的試驗(yàn)樣本設(shè)置一個(gè)QC 樣本，用于檢測和評(píng)價(jià)系統(tǒng)的穩(wěn)定性及重復(fù)性。采用氣-質(zhì)聯(lián)用儀（Agilent 7890/5975C，美國）進(jìn)行質(zhì)譜分析。用MSD ChemStation 軟件提取色譜峰面積及保留時(shí)間，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品中中長鏈脂肪酸的含量。

1.4.3 維生素與礦物質(zhì)含量測定 維生素測定以GB5009.82-2016 標(biāo)準(zhǔn)[11］為依據(jù)，使用液相色譜儀（iChrom 5100，中國大連）檢測肌肉中維生素A、α-維生素E、γ-維生素E 和維生素E 的含量。肌肉中礦物質(zhì)元素硒的測定以GB5009.93-2017 標(biāo)準(zhǔn)[12］為依據(jù)，使用原子熒光光度計(jì)（AFS-550，中國濟(jì)南）檢測。肌肉中礦物質(zhì)元素鐵、鈣、錳的測定以GB5009.268-2016 標(biāo)準(zhǔn)[13］為依據(jù)，使用電感耦合等離子體光譜儀（PRIDE100，中國北京）檢測。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

采用Excel 2010 整理數(shù)據(jù)，使用SPSS 26 進(jìn)行單因素方差分析，并利用Duncan 氏法對不同組間進(jìn)行多重比較，結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，以P＜0.05 作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 低蛋白日糧中不同比例氨基酸對藏羊背腰最長肌肉品質(zhì)的影響

2.2 低蛋白日糧中不同比例氨基酸對藏羊背腰最長肌氨基酸組成的影響

由表3 可知，總氨基酸含量LP-H 組分別比LP-L 和LP-M 組高0.40 和0.23 g·100 g-1，但差異不顯著（P＞0.05），必需氨基酸含量和非必需氨基酸含量LP-L、LP-M 和LP-H 組間均沒有顯著差異（P＞0.05）。

表3 低蛋白日糧中不同比例氨基酸對藏羊背腰最長肌氨基酸組成的影響Table 3 Effect of different ratios of amino acids in low-protein diets on the amino acid composition of the longest muscle of the dorsal girdle in Tibetan sheep （g·100 g-1）

2.3 低蛋白日糧中不同比例氨基酸對藏羊背腰最長肌脂肪酸組成的影響

由表4 可知，飽和脂肪酸中，LP-L、LP-M 和LP-H 組均沒有顯著差異（P＞0.05）。不飽和脂肪酸中，十五碳烯酸、反式亞油酸和二十二碳三烯酸含量LP-L 組顯著高于LP-M 組（P＜0.05）；亞油酸、α-亞麻酸和十七碳烯酸含量LP-L 組顯著高于LP-M 和LP-H 組（P＜0.05）。

2.4 低蛋白日糧中不同比例氨基酸對藏羊背腰最長肌維生素含量的影響

由表5 可知，α-維生素E、γ-維生素E 和維生素E 含量LP-L 組顯著高于LP-M 組（P＜0.05），維生素A 含量在LP-L、LP-M 和LP-H 組之間差異不顯著（P＞0.05）。

表5 低蛋白日糧中不同比例氨基酸對藏羊背腰最長肌維生素含量的影響Table 5 Effect of different ratios of amino acids in low-protein diets on the vitamin content of the longest muscle of the dorsal girdle in Tibetan sheep

2.5 低蛋白日糧中不同比例氨基酸對藏羊背腰最長肌礦物質(zhì)含量的影響

由表6 可知，礦物質(zhì)元素鈣LP-L 組顯著高于LP-M 組（P＜0.05），礦物質(zhì)元素鐵LP-L 組分別比LP-M 和LPH 組高1.300 和0.933 mg·kg-1；但3 組之間差異均不顯著（P＞0.05）。

表6 低蛋白日糧中不同比例氨基酸對藏羊背腰最長肌礦物質(zhì)含量的影響Table 6 Effect of different ratios of amino acids in low-protein diets on the mineral content of the longest muscle of the dorsal girdle in Tibetan sheep （mg·kg-1）

3 討論

3.1 低蛋白日糧中不同比例氨基酸對藏羊背腰最長肌肉品質(zhì)的影響

肌肉的綜合狀態(tài)由肉品質(zhì)體現(xiàn)，而影響肉品質(zhì)的因素與動(dòng)物的種類、年齡、性別、日糧組成以及肌肉分布等有關(guān)[14］。解凍損失和蒸煮損失是影響肌肉保水性的重要指標(biāo)，數(shù)值越小，說明保水性越好[15］。系水力指標(biāo)與肌肉中營養(yǎng)物質(zhì)、水分等有關(guān)，系水力越大，肌肉品質(zhì)越好[16］。肌肉的多汁性、嫩度和脂肪含量主要由剪切力反映，剪切力越小，說明肌肉更鮮嫩[17］。有研究表明，飼喂低蛋白日糧并添加支鏈氨基酸2∶1∶2 能有效提高育肥豬的生長性能并通過降低剪切力和提高持水力改善肉的嫩度和多汁性[18］。李慶敏等[19］研究顯示，在低蛋白日糧中添加7.5 g·d-1過瘤胃賴氨酸和4.5 g·d-1過瘤胃蛋氨酸能提高灘羊的肉質(zhì)、保水性以及肉色表現(xiàn)。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼喂LP-L 組與LP-M 和LP-H 組相比蒸煮損失和剪切力指標(biāo)顯著下降，系水力指標(biāo)雖沒有顯著差異，但LP-L 組也比LP-M 和LP-H 組有提高，說明在12%低蛋白日糧中賴氨酸和蛋氨酸比例為1∶1 時(shí)藏羊的吸收程度更好，肌肉的嫩度和水分含量等最佳，可以有效地改善肌肉品質(zhì)。

pH 作為評(píng)定肉品質(zhì)的重要指標(biāo)，有研究表明，在屠宰動(dòng)物1 h 后，新鮮肌肉的pH 通常為5.8～6.5，而隨著時(shí)間的變化，糖原被肌肉利用使其產(chǎn)生能量來支持某些能量消耗反應(yīng)，它們會(huì)產(chǎn)生大量乳酸使pH 下降到5.4～5.7[20-21］。本試驗(yàn)pH45min和pH24h在LP-L、LP-M 和LP-H 組之間差異不顯著，且pH 均在正常范圍內(nèi)，與上述研究結(jié)果相一致；說明低蛋白日糧中不同比例氨基酸含量對于pH 沒有不良影響。

3.2 低蛋白日糧中不同比例氨基酸對藏羊背腰最長肌氨基酸組成的影響

蛋白質(zhì)的含量影響肌肉的營養(yǎng)水平，由于蛋白質(zhì)的基本組成單位是氨基酸，所以肌肉中氨基酸含量越高，種類越豐富其肉品質(zhì)越好[22］。影響肉質(zhì)風(fēng)味前體物質(zhì)的氨基酸稱為鮮味氨基酸，鮮味氨基酸包括精氨酸、谷氨酸、甘氨酸和天冬氨酸等，其中谷氨酸占主導(dǎo)作用[23-24］。Teixeira 等[25］研究表明，在育肥牛日糧中加入一定比例的精氨酸和賴氨酸可以提高肌肉中的水分、系水力以及肉質(zhì)中賴氨酸含量。韓云勝等[26］研究發(fā)現(xiàn)，在荷斯坦奶牛日糧中添加過瘤胃蛋氨酸、賴氨酸能顯著提高胴體肌肉的氨基酸含量。本研究與其結(jié)果不一致，本試驗(yàn)中，所有氨基酸含量LP-L、LP-M 和LP-H 組之間差異不顯著且含量非常相近，說明低蛋白日糧中1∶1、2∶1 和3∶1 的賴氨酸與蛋氨酸含量對于藏羊肌肉背腰最長肌氨基酸含量沒有顯著影響，這可能與試驗(yàn)的環(huán)境、地點(diǎn)以及動(dòng)物的品種等有關(guān)，這與郭偉等[27］的研究結(jié)果相似。

3.3 低蛋白日糧中不同比例氨基酸對藏羊背腰最長肌脂肪酸組成的影響

肌肉中脂肪酸的含量與組成影響肉質(zhì)的風(fēng)味與嫩度等[28］。本試驗(yàn)中在藏羊背腰最長肌中共檢測出17 種脂肪酸，其中油酸含量最多，棕櫚酸和硬脂酸含量分列二、三。植物源性脂肪和動(dòng)物脂肪中飽和脂肪酸含量較多，人體攝入過多飽和脂肪酸會(huì)使低密度脂蛋白膽固醇、三酰甘油等升高從而導(dǎo)致動(dòng)脈硬化等疾病發(fā)生[29］。本試驗(yàn)中，飽和脂肪酸含量LP-L、LP-M 和LP-H 組之間均沒有顯著差異，說明低蛋白中添加不同比例氨基酸不會(huì)引起健康問題且對飽和脂肪酸含量影響較小。但是在飽和脂肪酸中硬脂酸含量與羊肉的膻味成正比，含量越高羊肉的膻味越重[30］。本試驗(yàn)中硬脂酸含量3 組之間雖差異不顯著，但LP-L 組比LP-M 和LP-H 組下降了2.56%和1.83%，說明LP-L 組中肌肉的膻味更少一些。

不飽和脂肪酸主要包括單不飽和脂肪酸和多不飽和脂肪酸，可以合成二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid， DHA）和二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid， EPA）等，對健康有很多益處[31］。其中油酸、亞油酸和反式亞油酸有軟化血管、降低血壓和預(yù)防動(dòng)脈硬化等效果。有研究表明，當(dāng)油酸和亞油酸含量較高時(shí)其肉質(zhì)更鮮美[32］。本試驗(yàn)中亞油酸LP-L 組顯著高于LP-M 和LP-H 組，反式亞油酸LP-L 組顯著高于LP-M 組。所以賴氨酸與蛋氨酸比例為1∶1 時(shí)可能有利于降低心腦血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)。α-亞麻酸與二十二碳三烯酸等有利于人體大腦的發(fā)育[33］，十七碳烯酸和十五碳烯酸具有生物活性，對人體健康起著重要作用[34］。而本試驗(yàn)中，十五碳烯酸、反式亞油酸和二十二碳三烯酸含量LP-L 組顯著高于LP-M 組；亞油酸、α-亞麻酸和十七碳烯酸含量LP-L 組顯著高于LP-M 和LP-H 組。差異顯著的原因可能是添加氨基酸的比例不同使其吸收效果不一致，還有可能是在動(dòng)物機(jī)體采食后飼料在瘤胃微生物作用下氫化程度不同，氫化的脂肪酸被機(jī)體吸收沉積到肌肉中造成顯著差異[35］。但也有研究顯示，在育肥豬中降低蛋白比例和賴氨酸在皮下脂肪中觀察到脂肪酸含量減少，本試驗(yàn)結(jié)果與其不一致可能與品種、環(huán)境和地區(qū)等因素不同有關(guān)[36］。

3.4 低蛋白日糧中不同比例氨基酸對藏羊背腰最長肌維生素和礦物質(zhì)含量的影響

肉類是多種維生素和礦物質(zhì)的來源。有研究表明，每100 g 紅肉中能夠提供人體的核黃素、煙酸、維生素B6和泛酸的建議膳食攝入量約為25%，而提供的維生素B12 的日需求量約為2/3，所以肉質(zhì)中維生素與礦物質(zhì)含量對健康至關(guān)重要[37］。維生素A 又被稱為視黃醇是治療夜盲癥、維持人體免疫功能以及骨骼發(fā)育的營養(yǎng)元素[38］。Pickford 等[39］研究顯示，攝入100 g 的視黃醇超過了膳食推薦值的338%。而本試驗(yàn)中，維生素A 含量LP-L 組、LP-M 和LP-H 組之間差異不顯著，但LP-L 與LP-H 組比LP-M 組分別高出2.194 和2.190 μg·100 g-1。維生素E是預(yù)防動(dòng)脈硬化的物質(zhì)，其具有抗氧化性，也具有非抗氧化作用，包括參與調(diào)節(jié)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑[40］。α-維生素E 與γ-維生素E 是維生素E 的異構(gòu)體[41］，有研究表明，α-維生素E 與γ-維生素E 均可降低大鼠體內(nèi)的血小板聚集并減緩動(dòng)脈血栓形成，它們還減少低密度脂蛋白氧化和脂質(zhì)過氧化，超氧化物生成，并增加超氧化物歧化酶活性[42］。本試驗(yàn)中在肉質(zhì)里檢測出這3 種維生素E 含量，且α-維生素E、γ-維生素E 和維生素E 含量LP-L 組顯著高于LPM 組。說明1∶1 賴氨酸與蛋氨酸比例日糧的肉質(zhì)中維生素含量更多，可能有助于預(yù)防心腦血管疾病以及提高免疫力等。

鐵是影響人體健康重要的元素，缺鐵會(huì)導(dǎo)致生長發(fā)育障礙以及生物功能受損[43］。而肉質(zhì)中含有血紅素鐵，具有很高的生物利用度，即使少量攝入，其生物可利用度也高出2～3 倍，且15%～35%易于吸收[44］。硒在谷胱甘肽過氧化物活性中起重要作用，谷胱甘肽過氧化物是解毒過程中的一種重要酶。多項(xiàng)研究表明，成人每日硒的推薦攝取量為55 μg·d-1，硒本身也能發(fā)揮抗癌作用[45］。錳元素缺乏會(huì)影響智力以及出現(xiàn)神經(jīng)衰弱等癥狀，對凝血效果以及免疫功能作用較大[46］。本試驗(yàn)中，鐵、硒和錳含量LP-L、LP-M 和LP-H 3 組之間差異均不顯著，但鐵和錳含量LP-L 組比LP-M 和LP-H 組含量稍高，說明不同比例氨基酸對于肉質(zhì)中礦物質(zhì)元素鐵、硒和錳的含量沒有不良影響。鈣是反芻動(dòng)物骨骼和牙齒的基本材料之一，它在動(dòng)物的肌肉活動(dòng)、保護(hù)動(dòng)物神經(jīng)中起著重要的作用，可以激活體內(nèi)某些酶的活性，并通過控制膜的滲透性來維持細(xì)胞的完整性[47］。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，在肉質(zhì)中檢測到礦物質(zhì)元素鈣的含量最多，且LP-L 組顯著高于LP-M 組；與LP-H 組相比雖不顯著，但也高2.3 mg·kg-1。說明在低蛋白日糧中賴氨酸與蛋氨酸含量為1∶1 時(shí)，其動(dòng)物機(jī)體吸收程度更好，其肉質(zhì)中維生素與礦物質(zhì)含量更豐富，可能對健康更有益處。

4 結(jié)論

綜上，在低蛋白日糧中隨著氨基酸比例的增加，藏羊背腰最長肌肉品質(zhì)顯著下降；當(dāng)日糧中賴氨酸與蛋氨酸比例為1∶1 時(shí)能提高不飽和脂肪酸含量以及肉質(zhì)中維生素和礦物質(zhì)元素；且對氨基酸組成沒有不良影響，并能有效改善肉品質(zhì)。