黃夏冰 王馨苑 李娟 陳一萍 農(nóng)焦 黃德慶 （.廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院急診科，南寧 500；.廣西中醫(yī)藥大學(xué)發(fā)展規(guī)劃處，南寧 500；.廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院兒科，南寧 500；.廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院教學(xué)部，南寧 500）

急性胰腺炎（acute pancreatitis，AP）是一種急性腹部急危重癥，病情進(jìn)展迅速且兇險(xiǎn)，可誘發(fā)胰腺及全身炎癥，其中肺臟是最常被累及的器官，導(dǎo)致的急性嚴(yán)重肺損傷是造成AP患者死亡的主要原因，盡早防治可有效提升患者生存率［1-2］。炎癥細(xì)胞因子過量分泌引發(fā)并放大的全身炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)是導(dǎo)致AP患者急性肺損傷的主要因素，減少血清淀粉酶及炎癥因子水平，進(jìn)行抗炎治療能夠顯著減輕AP引發(fā)的肺損傷［3-4］。Toll樣受體4（Toll-like receptor 4，TLR4）是脂多糖激活炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)必需的一種信號(hào)受體，可促進(jìn)核轉(zhuǎn)錄因子-κB（nuclear transcription factor-κB，NF-κB）蛋白核轉(zhuǎn)移，進(jìn)而引發(fā)機(jī)體組織炎癥，在AP發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用［5］。抑制TLR4/NF-κB通路激活可顯著減弱脂多糖誘導(dǎo)的肺組織炎癥，改善急性肺損傷，提示TLR4/NF-κB信號(hào)是治療AP后肺損傷的重要靶點(diǎn)［6-7］。五味子乙素是提取自中藥北五味子中的一種聯(lián)苯環(huán)辛烯類木脂素，具有明顯的抗感染、抗炎與抗氧化活性，可通過抑制氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)減輕2型糖尿病大鼠腎損傷，并可抑制NF-κB信號(hào)激活，緩解膿毒癥誘發(fā)的急性肺損傷［8-9］。但五味子乙素能否通過TLR4/NF-κB信號(hào)改善AP相關(guān)肺部損傷，目前還不清楚。本文通過構(gòu)建AP肺損傷大鼠模型，對(duì)此問題進(jìn)行探究。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)雄性SD大鼠購于廣州啟特生物科技有限公司，許可證號(hào)：SYXK（粵）2021-0245。在屏障環(huán)境下分籠飼養(yǎng)，每籠5～6只，大鼠自由飲水、進(jìn)食，飼養(yǎng)室溫度為23～25 ℃，相對(duì)濕度為55%～60%，照明以12 h/12 h明暗交替進(jìn)行。本研究獲得武漢華聯(lián)科生物技術(shù)有限公司倫理委員會(huì)審批通過，批件號(hào)：HLK-2022107496。

1.1.2 主要試劑與儀器 五味子乙素（規(guī)格：HPLC≥98%，20 mg，貨號(hào)：S19861-20 mg）購于上海吉至生化科技有限公司；?；悄懰徕c（純度：HPLC≥98%，貨號(hào)：ST8040）、兔SP檢測試劑盒（貨號(hào)：SP0021）購于北京索萊寶科技有限公司；兔源MYD88一抗、大鼠IL-6 ELASA試劑盒、大鼠IL-18 ELASA試劑盒、兔源GAPDH一抗、兔源NF-κB p65一抗、兔源PCNA一抗、羊抗兔二抗（貨號(hào)：ab219413、ab234570、ab213909、ab9485、ab16502、ab92552、ab150077）購于美國Abcam公司；HE染色試劑盒、兔源TLR4一抗、RIPA裂解液、BCA蛋白測定試劑盒、兔源p-NFκB p65一抗（貨號(hào)：C0105、AF8187、P0013K、P0011、AF5875）購于上海碧云天公司。

小動(dòng)物無創(chuàng)肺功能儀購于上海玉研科學(xué)儀器有限公司；全自動(dòng)生化分析儀（型號(hào)：AU 2700）購于日本Olympus公司；血?dú)夥治鰞x（型號(hào)：RAPIDPoint 500）購于德國Siemens公司；全波長酶標(biāo)儀（型號(hào)：SLFAD）購于美國Bio Tek公司；生物組織包埋機(jī)（型號(hào)：YD-6D）購于浙江省金華市益迪醫(yī)藥設(shè)備廠；組織石蠟切片機(jī)（型號(hào)：1015）購于德國LEICA公司；正置顯微鏡（型號(hào)：ECLIPSE 80i）購于日本Nikon公司；組織勻漿機(jī)（型號(hào)：Precellys 24）購于法國Bertin公司；電子天平（型號(hào)：ML204）購于梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀（型號(hào)：DYY-6B）購于北京六一儀器廠；蛋白轉(zhuǎn)印系統(tǒng)、凝膠成像儀（型號(hào)：Trans-Blot Turbo、170-8200）購于美國Bio-Rad公司等。

1.2 方法

1.2.1 建立AP大鼠模型及分組給藥 制備AP模型的方法參照文獻(xiàn)［10］：將?；悄懰徕c加入生理鹽水中溶解混勻，制備為質(zhì)量濃度為5%的溶液備用，SD大鼠禁食12 h后，通過腹腔注射劑量為40 mg/kg的3%戊巴比妥鈉溶液麻醉，仰臥固定后，腹部備皮、消毒、于正中切開（切口約2 cm），暴露十二指腸后夾閉近腸端和近肝門端胰膽管，向膽胰管內(nèi)逆行注射1.5 ml/kg的5%?；悄懰徕c溶液，然后去除動(dòng)脈夾，按壓并封閉穿刺孔，復(fù)位腸管后縫合切口，若觀察到大鼠胰腺出現(xiàn)水腫、出血癥狀，且呼吸困難急促，肺部聽診有雜音，表明模型制備成功。經(jīng)隨機(jī)數(shù)表法分為模型組、五味子乙素組、TLR4過表達(dá)載體組、TLR4空載組、五味子乙素+TLR4過表達(dá)載體組，每組12只大鼠，再取12只SD大鼠僅翻動(dòng)腸管不注射5%?；悄懰徕c，作為假手術(shù)組。

將五味子乙素加入生理鹽水中溶解混勻，制備為8 mg/ml的藥液［9］，五味子乙素+TLR4過表達(dá)載體組大鼠腹腔注射10 ml/kg五味子乙素藥液（1次/d），同時(shí)靜脈注射0.5 ml腺病毒包裝的TLR4過表達(dá)載體（1×1011PFU，1次/周）［11］；五味子乙素組大鼠腹腔注射10 ml/kg五味子乙素藥液（1次/d），同時(shí)靜脈注射0.5 ml生理鹽水（1次/周）；TLR4過表達(dá)載體組大鼠腹腔注射10 ml/kg生理鹽水（1次/d），同時(shí)靜脈注射0.5 ml腺病毒包裝的TLR4過表達(dá)載體（1×1011PFU，1次/周）；TLR4空載組大鼠腹腔注射10 ml/kg生理鹽水（1次/d），同時(shí)靜脈注射0.5 ml腺病毒包裝的TLR4空載體（1×1011PFU，1次/周）；模型組和假手術(shù)組大鼠腹腔注射10 ml/kg生理鹽水（1次/d），同時(shí)靜脈注射0.5 ml生理鹽水（1次/周），共用藥2周。

1.2.2 肺功能檢測 最后1次藥物干預(yù)結(jié)束后24 h，采用無創(chuàng)肺功能儀測定肺功能指標(biāo)：吸氣阻力（resistance inspiratory，Ri）、每分通氣量（minute ventilation，MV）、呼氣峰流值（peak expiratory flow，PEF），全身體積描記系統(tǒng)參數(shù)：氣泵流量2 L/min，傳感器放大500倍，采樣頻率200 Hz，輸入校準(zhǔn)-50。

1.2.3 標(biāo)本采集及大鼠動(dòng)脈血?dú)?、腹水量與肺組織W/D檢測 肺功能檢測結(jié)束后，吸入乙醚麻醉大鼠，采集頸動(dòng)脈血，以血?dú)夥治鰞x測定其中二氧化碳分壓（arterialpartial pressure of carbon dioxide，PaCO2）、氧分壓（arterial partial pressure of oxygen，PaO2）與氧合指數(shù)（oxygenation index，OI），OI計(jì)算公式為：OI=PaO2/FiO2（吸氧濃度），因大鼠在本實(shí)驗(yàn)中均自由呼吸，F(xiàn)iO2為空氣中氧濃度0.21。再次采集頸動(dòng)脈血1.1 ml，離心收集上清，將其分組標(biāo)記后保存在-80 ℃條件下；抽取大鼠腹水并測量其體積，然后開胸取出肺臟，左右肺對(duì)半剪開，稱量右肺濕重，以烤箱烤干后稱量其干重，計(jì)算濕重/干重（W/D）；左肺組織剪下約0.6 g，剪成小碎塊，加入RIPA裂解液勻漿、離心、收集上清，BCA試劑盒測定其中蛋白總濃度后，將其分組標(biāo)記并保存在-80 ℃條件下；其余左肺組織經(jīng)漂洗、固定、脫水、透明、包埋后切片備用。

1.2.4 肺組織病理形態(tài)檢測 1.2.3中的肺組織切片取出后，每只大鼠選3張切片，經(jīng)脫蠟、水化后進(jìn)行HE染色，脫水、透明、封片、鏡下觀察，拍照后以顯微鏡自帶的系統(tǒng)分析肺組織的病理改變情況，以如下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行Holfbauer評(píng)分［12］：肺組織完好，無病理損傷，計(jì)0分；25%視野出現(xiàn)水腫、出血、炎癥浸潤等病理改變，計(jì)1分；50%視野出現(xiàn)水腫、出血、炎癥浸潤等病理改變，計(jì)2分；75%視野出現(xiàn)水腫、出血、炎癥浸潤等病理改變，計(jì)3分；全部視野出現(xiàn)水腫、出血、炎癥浸潤等病理改變，計(jì)4分。

1.2.5 血清淀粉酶與炎癥細(xì)胞因子IL-6、IL-18水平測定 取1.2.3中的血清，凍融后采用ELISA試劑盒測定炎癥細(xì)胞因子IL-6、IL-18水平，以全自動(dòng)生化分析儀測定血清淀粉酶水平。

1.2.6 肺組織TLR4/NF-κB信號(hào)通路蛋白水平檢測 取1.2.3中的肺組織蛋白樣品液，凍融后每組取20 μg總蛋白變性后以電泳分離，濕轉(zhuǎn)后以5%脫脂奶粉封閉其非特異位點(diǎn)，將目的蛋白TLR4、PCNA、核內(nèi)NF-κB p65、GAPDH自膜上剪下后，分別以相應(yīng)一抗孵育，洗膜后孵育二抗，顯影后拍照，以Quantity One軟件定量各蛋白灰度值后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，最后得到其相對(duì)表達(dá)量。

1.2.7 肺組織病理形態(tài)檢測 1.2.3中的肺組織切片取出后，每只大鼠再次選3張切片，同樣脫蠟、水化后孵育稀釋100倍的兔源TLR4一抗溶液，使用兔SP檢測試劑盒孵育二抗后，進(jìn)行DAB顯色、蘇木素復(fù)染處理，最后封片觀察TLR4蛋白著色情況，每張切片隨機(jī)選6個(gè)視野拍照，通過Image J軟件分析圖片，定量細(xì)胞數(shù)后計(jì)算TLR4陽性細(xì)胞比例（%）=TLR4陽性細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS24.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以±s表示，兩組間的差異比較采用t檢驗(yàn)；多組間差異比較行單因素方差分析，兩兩進(jìn)一步比較采用LSD-t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠肺功能檢測結(jié)果 與假手術(shù)組相比，模型組大鼠MV、PEF顯著降低（P＜0.05），Ri顯著升高（P＜0.05）。與模型組、五味子乙素+TLR4過表達(dá)載體組分別相比，五味子乙素組大鼠MV、PEF均升高（P＜0.05），Ri均降低（P＜0.05）；TLR4過表達(dá)載體組大鼠MV、PEF均降低（P＜0.05），Ri均升高（P＜0.05）。與模型組相比，TLR4空載組大鼠MV、PEF與Ri差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 各組大鼠肺功能指標(biāo)MV、PEF與Ri水平（±s，n=12）Tab.1 Levels of pulmonary function indexes MV， PEF and Ri of rats in each group （±s，n=12）

Note：Compared with sham operation group， 1）P＜0.05； compared with model group， 2）P＜0.05； compared with schisandrin B+TLR4 overexpression vector group， 3）P＜0.05.

Groups Sham operation Model Schisandrin B TLR4 overexpression vector TLR4 empty Schisandrin B+TLR4 overexpression vector MV/ml 7.39±0.45 3.28±0.221）6.70±0.712）3）PEF/（ml·s-1）61.47±8.29 34.66±3.951）57.58±8.122）3）Ri/（kPa·s·L-1）26.87±4.43 67.31±8.761）28.72±4.682）3）1.56±0.182）3）9.84±2.432）3）93.16±10.752）3）3.34±0.33 34.95±4.13 67.02±10.81 2.89±0.31 32.52±3.94 65.34±11.06

2.2 各組大鼠動(dòng)脈血?dú)鈾z測結(jié)果 與假手術(shù)組相比，模型組大鼠PaO2、OI顯著降低（P＜0.05），PaCO2顯著升高（P＜0.05）。與模型組、五味子乙素+TLR4過表達(dá)載體組分別相比，五味子乙素組大鼠PaO2、OI均升高（P＜0.05），PaCO2均降低（P＜0.05）；TLR4過表達(dá)載體組大鼠PaO2、OI均降低（P＜0.05），PaCO2均升高（P＜0.05）。與模型組相比，TLR4空載組大鼠PaCO2、PaO2與OI差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 各組大鼠動(dòng)脈血?dú)庀嚓P(guān)指標(biāo)PaCO2、PaO2與OI水平（±s，n=12）Tab.2 Levels of PaCO2， PaO2 and OI in arterial blood gas of rats in each group （±s，n=12）

表2 各組大鼠動(dòng)脈血?dú)庀嚓P(guān)指標(biāo)PaCO2、PaO2與OI水平（±s，n=12）Tab.2 Levels of PaCO2， PaO2 and OI in arterial blood gas of rats in each group （±s，n=12）

Note：Compared with sham operation group， 1）P＜0.05； compared with model group， 2）P＜0.05； compared with schisandrin B+TLR4 overexpression vector group， 3）P＜0.05.

Groups Sham operation Model Schisandrin B TLR4 overexpression vector TLR4 empty Schisandrin B+TLR4 overexpression vector PaCO2/mmHg 38.92±1.53 52.83±2.041）40.17±2.122）3）PaO2/mmHg 98.76±1.12 63.54±1.911）94.35±5.032）3）OI 470.29±8.13 302.57±5.791）449.28±7.962）3）61.95±2.782）3）47.82±3.282）3）227.71±9.522）3）53.04±2.35 64.03±2.25 304.90±5.81 50.29±3.16 60.37±3.14 287.48±6.08

2.3 各組大鼠腹水量與W/D檢測結(jié)果 與假手術(shù)組相比，模型組大鼠腹水量與W/D顯著升高（P＜0.05）。與模型組、五味子乙素+TLR4過表達(dá)載體組分別相比，五味子乙素組大鼠腹水量與W/D均降低（P＜0.05）；TLR4過表達(dá)載體組大鼠腹水量與W/D均升高（P＜0.05）。與模型組相比，TLR4空載組大鼠腹水量與W/D差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表3。

表3 各組大鼠腹水量與W/D（±s，n=12）Tab.3 Ascites volume and W/D of rats in each group（±s， n=12）

表3 各組大鼠腹水量與W/D（±s，n=12）Tab.3 Ascites volume and W/D of rats in each group（±s， n=12）

Note：Compared with sham operation group， 1）P＜0.05； compared with model group， 2）P＜0.05； compared with schisandrin B+TLR4 overexpression vector group， 3）P＜0.05.

Groups Sham operation Model Schisandrin B TLR4 overexpression vector TLR4 empty Schisandrin B+TLR4 overexpression vector Ascites volume/ml 0.35±0.11 10.81±1.341）1.74±0.572）3）14.96±1.862）3）10.32±1.53 W/D 4.26±0.41 6.47±0.731）4.53±0.502）3）8.24±0.642）3）6.59±0.61 9.48±0.95 6.12±0.52

2.4 各組大鼠肺組織病理形態(tài)檢測結(jié)果 假手術(shù)組肺組織形態(tài)正常完好，無病理損傷，Holfbauer評(píng)分為0。模型組大鼠肺泡縮小塌陷，間隔變寬，肺組織出現(xiàn)水腫、出血及炎癥細(xì)胞大量浸潤等病理損傷，Holfbauer評(píng)分相較于假手術(shù)組顯著升高（P＜0.05）。與模型組、五味子乙素+TLR4過表達(dá)載體組分別相比，五味子乙素組大鼠肺組織上述病理損傷改變程度均減輕，Holfbauer評(píng)分均降低（P＜0.05）；TLR4過表達(dá)載體組大鼠肺組織上述病理損傷改變程度均加重，Holfbauer評(píng)分均升高（P＜0.05）。與模型組相比，TLR4空載組大鼠肺組織上述病理損傷程度無明顯改變，Holfbauer評(píng)分差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表4、圖1。

圖1 HE染色觀察各組大鼠肺組織病理形態(tài)（×200）Fig.1 Pathological morphology in lung tissue of rats in each group was observed by HE staining （×200）

表4 各組大鼠肺組織Holfbauer評(píng)分（±s，n=12）Tab.4 Holfbauer score of rats lung tissue in each group（±s，n=12）

表4 各組大鼠肺組織Holfbauer評(píng)分（±s，n=12）Tab.4 Holfbauer score of rats lung tissue in each group（±s，n=12）

Note：Compared with sham operation group， 1）P＜0.05； compared with model group， 2）P＜0.05； compared with schisandrin B+TLR4 overexpression vector group， 3）P＜0.05.

Groups Sham operation Model Schisandrin B TLR4 overexpression vector TLR4 empty Schisandrin B+TLR4 overexpression vector Holfbauer/point 0 2.67±0.371）0.75±0.242）3）3.67±0.282）3）2.58±0.42 2.25±0.50

2.5 各組大鼠血清淀粉酶與炎癥細(xì)胞因子IL-6、IL-18水平檢測結(jié)果 與假手術(shù)組相比，模型組大鼠血清淀粉酶與炎癥細(xì)胞因子IL-6、IL-18水平顯著升高（P＜0.05）。與模型組、五味子乙素+TLR4過表達(dá)載體組分別相比，五味子乙素組大鼠血清淀粉酶與炎癥細(xì)胞因子IL-6、IL-18水平均降低（P＜0.05）；TLR4過表達(dá)載體組大鼠血清淀粉酶與炎癥細(xì)胞因子IL-6、IL-18水平均升高（P＜0.05）。與模型組相比，TLR4空載組大鼠血清淀粉酶與炎癥細(xì)胞因子IL-6、IL-18水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表5。

表5 各組大鼠血清淀粉酶與炎癥細(xì)胞因子IL-6、IL-18水平（±s，n=12）Tab.5 Levels of serum amylase and inflammatory cytokines IL-6 and IL-18 in each group （±s，n=12）

表5 各組大鼠血清淀粉酶與炎癥細(xì)胞因子IL-6、IL-18水平（±s，n=12）Tab.5 Levels of serum amylase and inflammatory cytokines IL-6 and IL-18 in each group （±s，n=12）

Note：Compared with sham operation group， 1）P＜0.05； compared with model group， 2）P＜0.05； compared with schisandrin B+TLR4 overexpression vector group， 3）P＜0.05.

Groups Sham operation Model Schisandrin B TLR4 overexpression vector TLR4 empty Schisandrin B+TLR4 overexpression vector Amylase/（U·L-1）1 026.53±50.195 2 934.16±72.841）11 1 057.72±58.732）3）5 3 894.64±91.652）3）16 2 921.92±74.3211 2 901.23±70.5710 IL-6/（ng·L-1）3.24±6.36 4.83±15.621）8.95±5.682）3）IL-18/（μg·L-1）0.39±0.08 1.17±0.131）0.43±0.072）3）8.47±20.142）3）1.85±0.162）3）6.52±16.17 1.19±0.12 9.21±20.13 1.12±0.20

2.6 各組大鼠肺組織TLR4/NF-κB信號(hào)通路蛋白表達(dá)檢測結(jié)果 與假手術(shù)組相比，模型組大鼠肺組織TLR4陽性細(xì)胞比例、TLR4與MYD88蛋白表達(dá)、p-NF-κB p65/NF-κB p65水平顯著升高（P＜0.05）。與模型組、五味子乙素+TLR4過表達(dá)載體組分別相比，五味子乙素組大鼠肺組織TLR4陽性細(xì)胞比例、TLR4與MYD88蛋白表達(dá)、p-NF-κB p65/NF-κB p65水平均降低（P＜0.05）；TLR4過表達(dá)載體組大鼠肺組織TLR4陽性細(xì)胞比例、TLR4與MYD88蛋白表達(dá)、p-NF-κB p65/NF-κB p65水平均升高（P＜0.05）。與模型組相比，TLR4空載組大鼠肺組織TLR4/NF-κB信號(hào)通路蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見圖2、圖3、表6。

圖2 免疫組化染色檢測各組大鼠肺組織TLR4蛋白表達(dá)（×200）Fig.2 Expression of TLR4 protein in lung tissue of rats in each group was detected by immunohistochemical staining （×200）

圖3 免疫印跡檢測各組大鼠肺組織TLR4/NF-κB通路相關(guān)蛋白表達(dá)Fig.3 TLR4/NF-κB signaling pathway proteins expressions in lung tissue of rats in each group were detected by Western blot

表6 各組大鼠肺組織TLR4/NF-κB信號(hào)通路蛋白相對(duì)表達(dá)（±s，n=12）Tab.6 Relative expressions of TLR4/NF-κB signaling pathway proteins in lung tissue of rats in each group （±s， n=12）

表6 各組大鼠肺組織TLR4/NF-κB信號(hào)通路蛋白相對(duì)表達(dá)（±s，n=12）Tab.6 Relative expressions of TLR4/NF-κB signaling pathway proteins in lung tissue of rats in each group （±s， n=12）

Note：Compared with sham operation group， 1）P＜0.05； compared with model group， 2）P＜0.05； compared with schisandrin B+TLR4 overexpression vector group， 3）P＜0.05.

Groups TLR4/GAPDH Sham operation Model Schisandrin B TLR4 overexpression vector TLR4 empty Schisandrin B+TLR4 overexpression vector 0.54±0.12 1.21±0.181）0.59±0.072）3）1.96±0.252）3）1.19±0.20 MYD88/GAPDH 0.45±0.10 1.18±0.121）0.51±0.082）3）1.83±0.242）3）1.17±0.23 p-NF-κB p65/NF-κB p65 0.48±0.09 1.30±0.231）0.53±0.082）3）2.04±0.172）3）1.32±0.26 1.16±0.19 1.11±0.22 1.25±0.20

3 討論

AP作為一種常見的急診科重癥疾病，近年來患病人數(shù)處于上升趨勢，大多數(shù)患者會(huì)因全身炎癥出現(xiàn)急性肺損傷，造成肺功能衰竭，是導(dǎo)致患者住院時(shí)間延長甚至死亡的重要因素［12-14］。本研究以膽胰管內(nèi)逆行注射5%?；悄懰徕c的方法誘導(dǎo)建立AP模型，結(jié)果顯示，造模大鼠血清淀粉酶與炎癥細(xì)胞因子IL-6、IL-18水平明顯升高，誘發(fā)了全身炎癥，造成腹水及肺部水腫，導(dǎo)致肺泡縮小塌陷，間隔變寬，肺組織出現(xiàn)水腫、出血及炎癥細(xì)胞大量浸潤等病理損傷，損害了肺功能，使MV、PEF、PaO2、OI顯著降低，Ri、PaCO2顯著升高，揭示AP肺損傷模型構(gòu)建成功。

AP不僅可損害胰腺組織，還可誘發(fā)全身炎癥，進(jìn)而造成肺組織損傷，抑制機(jī)體炎癥是防治AP所致肺損傷的有效方法［15-16］。五味子乙素是一種天然抗炎化合物，可抑制炎癥因子表達(dá)，減輕脂多糖引起的肺上皮細(xì)胞炎癥，并可通過提高組織抗氧化活性減輕肺組織氧化應(yīng)激損傷，延緩肺纖維化［17-18］。本研究以五味子乙素處理AP肺損傷大鼠，可明顯降低其血清淀粉酶與炎癥細(xì)胞因子IL-6、IL-18水平，抑制炎癥，減輕肺組織病理損傷改變，緩解腹水與肺組織水腫，提高M(jìn)V、PEF、PaO2、OI，降低Ri、PaCO2，修復(fù)肺功能，表明五味子乙素可顯著改善AP引發(fā)的肺組織損傷，具有明顯的肺保護(hù)作用。

TLR4/NF-κB是啟動(dòng)炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)的重要信號(hào)通路，參與介導(dǎo)AP的發(fā)病與病情進(jìn)展過程，下調(diào)TLR4蛋白表達(dá)可抑制NF-κB蛋白的核轉(zhuǎn)移，減弱氧化應(yīng)激和炎癥，并可抵抗胰腺巨噬細(xì)胞炎性激活，緩解AP病理癥狀，并減輕脂多糖引發(fā)的急性肺損傷［7，19-20］。本研究以TLR4過表達(dá)載體處理AP大鼠，可提升血清淀粉酶與炎癥細(xì)胞因子IL-6、IL-18水平，加重肺組織水腫及腹水癥狀，并促使肺部炎癥進(jìn)展，進(jìn)一步損害肺功能，表明TLR4/NF-κB通路參與介導(dǎo)AP引發(fā)的肺損傷過程，與上述提及的既往研究結(jié)果相似，而本研究結(jié)果顯示五味子乙素可降低AP大鼠肺組織中TLR4陽性細(xì)胞比例，下調(diào)其TLR4/NF-κB通路蛋白表達(dá)，減輕大鼠肺部炎癥損傷，表明TLR4/NF-κB通路在五味子乙素對(duì)AP引發(fā)肺損傷的治療過程中發(fā)揮重要調(diào)控作用；另外，當(dāng)五味子乙素與TLR4過表達(dá)載體合用時(shí)，TLR4過表達(dá)載體可減弱五味子乙素的抗炎作用，并拮抗其對(duì)肺部炎癥損傷的改善作用，最終逆轉(zhuǎn)五味子乙素的肺功能修復(fù)功效，表明五味子乙素改善AP大鼠肺部損傷并修復(fù)肺功能是通過下調(diào)TLR4/NF-κB信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)的。

綜上所述，本研究證實(shí)五味子乙素可以下調(diào)TLR4蛋白表達(dá)，抑制NF-κB磷酸化，抵抗AP引起的肺部炎癥，緩解肺損傷，減輕腹水與肺部水腫癥狀，促使肺功能恢復(fù)，下調(diào)TLR4/NF-κB信號(hào)通路是其起到上述藥理功效的作用機(jī)制之一，為AP提供了新的治療思路，并對(duì)五味子乙素的臨床推廣應(yīng)用做出了一定貢獻(xiàn)。