蔣凱

1.井岡山大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，江西吉安 343009；

2.江西農(nóng)業(yè)大學(xué)省部共建豬遺傳改良與養(yǎng)殖技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南昌 330045

先天性鎖肛癥是一種復(fù)雜的直腸末端發(fā)育缺陷疾病，通常是后腸發(fā)育異常致使肛門口泄殖腔膜未能破裂引發(fā)的[1-2]。該病最明顯的表型是無肛門，肛門區(qū)為皮膚所覆蓋，無法排出胎糞，出現(xiàn)腹脹、嘔吐等胃腸阻?，F(xiàn)象。環(huán)境因素和遺傳因素均能導(dǎo)致肛門閉鎖癥的發(fā)生，但主要因素是遺傳[3]。肛門閉鎖癥在人、牛、豬、羊和狗等哺乳動(dòng)物中均有發(fā)生。人先天性鎖肛癥的發(fā)病率約為0.03%～0.05%[1]，其病理組織學(xué)較為復(fù)雜，包括簡單的單一性肛門閉鎖和形成不同類型的瘺管（直腸陰道瘺，直腸膀胱瘺及直腸尿道瘺等）的復(fù)雜性肛門閉鎖，而且經(jīng)常會(huì)伴有其他發(fā)育異常[4-6]。豬先天性鎖肛癥自然發(fā)生率遠(yuǎn)高于人類，為0.1%～1.0%[7]，表現(xiàn)形式與人類非常相似，但很少會(huì)伴有其他異常綜合征表型，但鎖肛類型很少被詳細(xì)報(bào)道[6,8]。鎖肛癥發(fā)生在公豬上是致死的，一般在1周內(nèi)死亡，嚴(yán)重影響經(jīng)濟(jì)效益；新生鎖肛母豬中部分母豬因?yàn)闀?huì)形成直腸陰道瘺，糞便能從陰道口排出，因此，鎖肛母豬有50%的存活率[9]。豬先天性鎖肛癥是豬先天性畸形中較為多見的一種消化道末端發(fā)育不良遺傳性疾病，其遺傳率為0.11～0.35[10-11]。但先天性鎖肛豬的血常規(guī)、血清生化以及內(nèi)臟器官HE 切片等常規(guī)生理生化指標(biāo)并未見相關(guān)報(bào)道。該病發(fā)病率高、手術(shù)治療效益差，給養(yǎng)豬業(yè)帶來較大的經(jīng)濟(jì)損失。

本試驗(yàn)對先天性鎖肛豬進(jìn)行臨床診斷或解剖觀察來判定鎖肛類型，比較分析先天性鎖肛豬（直腸陰道瘺鎖肛豬）及其全同胞正常對照個(gè)體的生長曲線、血常規(guī)、血清生化、臟器組織切片觀察等指標(biāo)，旨在加強(qiáng)對先天性鎖肛豬的類型及常規(guī)生理生化指標(biāo)的認(rèn)識(shí)，為后續(xù)研究提供基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)用豬為筆者所在實(shí)驗(yàn)室科研豬場構(gòu)建的1個(gè)大白豬近交群體。該群體由1頭祖代大白公豬和3 頭大白母豬配種獲得F1代個(gè)體，1 頭F1代公豬與4頭F1代母豬、8 頭F2代正常母豬及1 頭F2代鎖肛母豬配種后共獲得了43 頭先天性鎖肛豬，其中5 頭鎖肛豬（直腸陰道瘺鎖肛豬）一直存活。鎖肛豬與對照豬在相同的條件下飼養(yǎng)管理，每日飼喂2次，自由飲水，飼養(yǎng)期間未發(fā)現(xiàn)其他疾患。

1.2 表型判定

首先通過肉眼觀察新生仔豬的肛門發(fā)育情況，為進(jìn)一步確定鎖肛豬的類型，觀察存活鎖肛仔豬和正常仔豬的排便情況，如：正常仔豬是否能從肛門排出糞便（可能存在有正常肛門但直腸閉鎖的類型）；鎖肛母豬是否能從陰道口排出糞便（直腸陰道瘺）。針對死亡的鎖肛豬進(jìn)行解剖學(xué)分析，觀察是否存在直腸閉鎖、是否形成直腸尿道瘺或者直腸膀胱瘺等。

1.3 體質(zhì)量測定

分別稱量5 頭鎖肛豬（直腸陰道瘺鎖肛豬）和5頭對照豬（1 日齡、10 日齡、60 日齡、120 日齡和180日齡）的體質(zhì)量，以日齡為橫坐標(biāo)、體質(zhì)量為縱坐標(biāo)繪制生長曲線。

1.4 血液生理生化指標(biāo)的檢測

通過耳緣靜脈采集90 日齡和180 日齡直腸陰道瘺鎖肛豬和對照豬的血液，1 份保存于EDTA-Na2抗凝管中，送往江西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，利用BC-6800（邁瑞）血液自動(dòng)分析儀檢測血常規(guī)指標(biāo)。另取1 份樣本經(jīng)離心分離血清，送往南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院，使用7600（日立）全自動(dòng)生化分析儀檢測血清生化指標(biāo)。

1.5 組織切片

屠宰2 歲直腸陰道瘺鎖肛豬和同胞對照豬各2頭，采集肝、脾、肺、腎、大腦和小腦等6種組織標(biāo)本，在4%多聚甲醛溶液中保存并帶回實(shí)驗(yàn)室，采用HE染色法（蘇木精-伊紅染色法）制作石蠟切片，切片于BA410顯微鏡（Motic，中國）下觀察。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，通過Stu‐dentt-test 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,在α=0.05 水平進(jìn)行顯著性分析。P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 先天性鎖肛豬表型特征及類型

與正常個(gè)體相比，鎖肛豬個(gè)體無肛門存在，肛門區(qū)被皮膚所覆蓋，不能正常排便、排氣。鎖肛豬剛出生時(shí)大多能正常吃奶；半天后變得煩躁不安，不時(shí)有排便動(dòng)作；2～3 d 后，腹腔壓力增大，出現(xiàn)腹脹、嘔吐，吸乳少或不吸乳，常有排便努責(zé)姿勢，四處游走，不安。鎖肛公豬主要表現(xiàn)出嚴(yán)重腹部膨脹，一般在1周內(nèi)死亡；部分鎖肛母豬因形成直腸陰道瘺，能從陰道口排出糞便，多數(shù)能正常存活。

對所有死亡的鎖肛豬進(jìn)行解剖學(xué)觀察，結(jié)果顯示鎖肛個(gè)體除肛門直腸外，其余各個(gè)組織和器官并無明顯發(fā)育異常，為此重點(diǎn)分析了患病個(gè)體的肛門直腸的異常情況。43 頭鎖肛豬存在4 種鎖肛類型：肛門直腸均閉鎖（n=18）、直腸陰道瘺（n=15）、直腸尿道瘺（n=7）和肛門閉鎖直腸未閉鎖（n=3）。鎖肛公豬和鎖肛母豬的鎖肛類型略有差別（圖1、2）。肛門直腸均閉鎖的個(gè)體中包括10 頭公豬和8 頭母豬（公母比約為1∶1），而發(fā)生直腸尿道瘺和肛門閉鎖直腸未閉鎖的均為公豬，發(fā)生直腸陰道瘺的均為母豬。

4 種類型的表型癥狀分別是:①肛門閉鎖直腸未閉鎖（圖1A）：表現(xiàn)為無肛門存在，但直腸末端有開口，開口于腹腔內(nèi)，且開口前端與腹壁黏連，并發(fā)生組織增生，造成僅能排出少部分稀糞于腹腔內(nèi)，不能存活。②直腸尿道瘺（圖1B）：表現(xiàn)為無肛門存在，但直腸末端開一極小的口與尿道連接，不能正常排糞，排尿處皮毛偶見稀糞污染。③肛門直腸均閉鎖（圖1C和圖2A）：表現(xiàn)為肛門和直腸均閉鎖，無法排出糞便，不能存活。④直腸陰道瘺（圖2B）：表現(xiàn)為無肛門存在，但直腸末端開口于陰道，糞便能夠從陰戶排出，大多數(shù)能正常存活。

圖2 鎖肛母豬的肛門直腸解剖學(xué)觀察

2.2 生長曲線分析

分別在第1 天、第10 天、第60 天、第120 天和第180 天稱量體質(zhì)量。由圖3 可見，直腸陰道瘺鎖肛豬的體質(zhì)量均與對照個(gè)體無顯著差異（P>0.05）。

圖3 直腸陰道瘺鎖肛豬與對照豬生長速度比較

2.3 血常規(guī)與血生化指標(biāo)檢測分析

血常規(guī)和血生化指標(biāo)的檢測結(jié)果(表1、2)均表明，直腸陰道瘺鎖肛豬和對照個(gè)體在2 個(gè)時(shí)間點(diǎn)所有參數(shù)之間均無顯著差異（P>0.05）。

表1 直腸陰道瘺鎖肛豬和對照豬血常規(guī)結(jié)果（n=5）

表2 直腸陰道瘺鎖肛豬和對照豬血生化指標(biāo)結(jié)果（n=5）

2.4 主要組織切片結(jié)果

直腸陰道瘺鎖肛豬和對照豬的肝、脾、肺、腎、大腦和小腦這6個(gè)主要器官組織HE切片結(jié)果顯示，直腸陰道瘺鎖肛豬與對照個(gè)體相比，未發(fā)生明顯的病理性變化，并沒有出現(xiàn)顯著的病理性特征（圖4）。

圖4 直腸陰道瘺鎖肛豬與對照豬組織切片對照圖（×200)

3 討論

本試驗(yàn)對鎖肛豬進(jìn)行臨床診斷或解剖觀察來判定鎖肛類型，發(fā)現(xiàn)存在肛門直腸閉鎖、直腸陰道瘺、直腸尿道瘺和肛門閉鎖直腸未閉鎖4 種鎖肛類型，與前期研究發(fā)現(xiàn)一致[6]，這4 種鎖肛類型在人類鎖肛癥中也有類似報(bào)道[1,12-14]。其中，肛門直腸均閉鎖和直腸陰道瘺2種鎖肛類型在豬中報(bào)道較多[8-9,2]，而直腸尿道瘺和肛門閉鎖直腸未閉鎖2種類型未見相關(guān)報(bào)道。不同類型的鎖肛形成有不同的類型，因此，豬先天性鎖肛癥類型的判定可為該病發(fā)病機(jī)制的遺傳解析提供一定的基礎(chǔ)資料。

此外，本試驗(yàn)分析了存活的鎖肛豬（直腸陰道瘺）的生長速度、血液生理生化指標(biāo)和組織切片。結(jié)果顯示，生長速度、血液生理生化指標(biāo)和組織切片與正常對照個(gè)體相比均不存在顯著差異（P>0.05）（表1～3，圖3～4），表明直腸陰道瘺鎖肛豬常規(guī)生理生化指標(biāo)正常。而且5頭直腸陰道瘺鎖肛豬均能與正常個(gè)體配種繁育后代。因此，本研究試驗(yàn)結(jié)果提示直腸陰道瘺鎖肛豬除無正常肛門外，并不存在其他健康不良情況。本研究豐富了先天性鎖肛豬類型及常規(guī)生理生化指標(biāo)方面的研究，可為先天性鎖肛豬后續(xù)研究提供重要借鑒。