祁曉星 徐丹丹 卞建強(qiáng)

結(jié)直腸癌較為常見,早期無明顯癥狀,病情不斷進(jìn)展下可逐漸誘發(fā)便血、大便性狀改變、腹痛等,若不及時(shí)治療,則會(huì)對(duì)患者生命造成威脅[1-2]。手術(shù)是臨床治療結(jié)直腸癌重要手段,通過切除病灶后能夠延長患者生存時(shí)間,獲得較高生存率[3-4]。但長期隨訪發(fā)現(xiàn),仍有部分結(jié)直腸癌患者術(shù)后存在復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn),若能于早期構(gòu)建以腫瘤生物標(biāo)志物為基礎(chǔ)的預(yù)后預(yù)測(cè)模型,則有助于改善預(yù)后。高遷移率族蛋白B2(HMGB2)是一種核內(nèi)結(jié)構(gòu)蛋白,在DNA重組修復(fù)過程中具有重要作用,與腫瘤侵襲、增殖等相關(guān)[5]。黑色素瘤相關(guān)抗原-A9(MAGE-A9)則為黑色素瘤抗原家族成員,在多種惡性腫瘤組織內(nèi)均存在不同程度表達(dá)。DNA錯(cuò)配修復(fù)基因(MMR)為人體修復(fù)DNA基堿錯(cuò)配的安全保障系統(tǒng),當(dāng)其缺乏后則無法保證DNA復(fù)制的準(zhǔn)確性,易出現(xiàn)癌基因突變等[6]。鑒于此,本研究分析結(jié)直腸癌中HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白表達(dá)情況及其在預(yù)后評(píng)估中的臨床價(jià)值。報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月至2020年1月我院收治的52例結(jié)直腸癌患者作為研究對(duì)象,其中男性34例,女性18例;年齡38～72歲,平均年齡(54.19±5.13)歲;體質(zhì)量指數(shù)19～28 kg/m2,平均體質(zhì)量指數(shù)(23.63±2.15)kg/m2;腫瘤位置:28例結(jié)腸,24例直腸。納入標(biāo)準(zhǔn):經(jīng)病理活檢或手術(shù)確診為結(jié)直腸癌;均行手術(shù)治療;精神狀態(tài)正常;臨床資料完整;患者及家屬簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):存有肝腎衰竭或凝血功能障礙;合并其他惡性腫瘤;中途隨訪失聯(lián);術(shù)前接受化療;存在急慢性感染。

1.2 方法

所有患者均行手術(shù)治療,術(shù)中切除腫瘤組織標(biāo)本,并距離腫瘤組織5 cm以上部位切除癌旁正常組織標(biāo)本,術(shù)后均及時(shí)送檢。免疫組織化學(xué)法:取石蠟組織進(jìn)行脫蠟、水化等處理,之后加入3% H2O2后在37攝氏度環(huán)境下濕盒孵育30 min,經(jīng)高壓鍋抗原修復(fù),封閉液孵育1 h;再滴加HMGB2、MAGE-A9一抗工作液,抗體4攝氏度孵育過夜;滴加二抗工作液,室溫下孵育0.5 h,經(jīng)DAB顯色,再進(jìn)行蘇木精復(fù)染、脫水、固定等操作,最后經(jīng)熒光倒置顯微鏡觀察染色結(jié)果。結(jié)果判定:陽性細(xì)胞比例≤5%為0分,>5%且<25%為1分,≥25%且<50%為2分,≥50%且<75%為3分,≥75%為4分;無色為0分,淡黃色為1分,棕黃色2分,棕褐色為3分;兩者乘積>4分為陽性表達(dá),反之為陰性表達(dá)。MMR:通過免疫組織化法檢測(cè)組織內(nèi)hMLH1、hMSH2、hMSH6蛋白表達(dá),標(biāo)本均經(jīng)3.7%甲醛液固定、脫水及石蠟包埋,連續(xù)切片,之后進(jìn)行常規(guī)免疫組織化學(xué)法染色,以PBS代替一抗為陰性對(duì)照。結(jié)果判斷:當(dāng)MMR蛋白位于細(xì)胞核,以細(xì)胞核存在黃褐色或棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞,并隨機(jī)選取5個(gè)高倍鏡下視野,觀察陽性細(xì)胞占比,將無陽性細(xì)胞為0分,≤10%為1分,>10%且≤50%為2分,>50%且≤75為3分,>75%則為4分;著色程度為無色為0分,淡黃色為1分,棕黃色2分,棕褐色為3分;兩項(xiàng)乘積>3分則為MMR表達(dá)正常,反之為缺失。hMLH1、hMSH2、hMSH6均正常表達(dá)為MMR陰性表達(dá),至少一項(xiàng)表達(dá)缺失者為陽性表達(dá)。隨訪:所有患者均開展3年隨訪,隨訪內(nèi)容包括存活情況,隨訪方式為電話隨訪或門診復(fù)查。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)比較腫瘤組織與癌旁組織中HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白表達(dá)差異。(2)分析比較HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白表達(dá)與年齡、性別、腫瘤分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理特征間的關(guān)系。(3)比較HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白不同表達(dá)患者生存率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白表達(dá)情況

腫瘤組織內(nèi)HMGB2、MAGE-A9、MMR陽性表達(dá)高于癌旁組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 組織標(biāo)本中HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白表達(dá)情況對(duì)比(例,%)

2.2 HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白表達(dá)與病理特征間關(guān)系

腫瘤分期Ⅲ期、分化程度低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者HMGB2、MAGE-A9、MMR陽性表達(dá)率高于Ⅰ期、Ⅱ期、中、高分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 HMGB2蛋白表達(dá)與病理特征的關(guān)系(例,%)

2.3 HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白表達(dá)與預(yù)后關(guān)系

隨訪3年,52例患者存活率為71.15%(37/52)。HMGB2陽性組存活率[61.76%(21/34)]低于HMGB2陰性組[88.89%(16/18)],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.219,P=0.040);MAGE-A9陽性組存活率[58.62%(17/29)]低于MAGE-A9陰性組[86.96%(20/23)],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.018,P=0.025);MMR陽性組存活率[52.00%(13/25)]低于MMR陰性組[88.89%(24/27)],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.606,P=0.003)。

3 討論

結(jié)直腸癌發(fā)病與遺傳、飲食、消化道疾病關(guān)系密切,多種因素長期影響,可促使腸道黏膜細(xì)胞發(fā)生癌性變化[7-8]。以手術(shù)為主的綜合治療方案是治療結(jié)直腸癌的重要手段,但仍有患者預(yù)后欠佳,還需進(jìn)一步深入研究腫瘤相關(guān)分子機(jī)制,以便于尋找結(jié)直腸癌分子靶點(diǎn),并將其用于疾病的診斷和治療,從而更好地改善患者預(yù)后[9-10]。

HMGB2屬于細(xì)胞周期調(diào)控蛋白,可參與G2/M期及G1/S期細(xì)胞周期轉(zhuǎn)化,與腫瘤增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。相關(guān)研究顯示[11-12],HMGB2在結(jié)直腸癌中會(huì)受到長鏈非編碼RNA調(diào)控,HMGB2表達(dá)水平較高,則會(huì)加快腫瘤細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化,促使腫瘤進(jìn)展。MAGE在腫瘤的發(fā)生及發(fā)展中具有重要作用,而MAGE-A9則為MAGE家族成員,為腫瘤特異性抗原,在多種惡性腫瘤中均存在高表達(dá),能夠增強(qiáng)腫瘤侵襲能力,加速腫瘤生長[13]。MMR共包括hMLH1、hMLH3、hMSH2、hMSH6、hPMS1等9種,其中hMLH1、hMSH2、hMSH6突變?cè)贛MR突變中占比較高,可判斷MMR情況。MMR在人體中主要功能在于識(shí)別、糾正錯(cuò)配位點(diǎn),確保DNA復(fù)制準(zhǔn)確性,一旦MMR出現(xiàn)突變,則會(huì)喪失錯(cuò)誤配對(duì)修復(fù)功能,引起基因組不穩(wěn)定,導(dǎo)致部分癌基因或突變的抑癌基因迅速聚集,促使腫瘤過度增殖[14-15]。本研究結(jié)果顯示,腫瘤組織內(nèi)HMGB2、MAGE-A9、MMR陽性表達(dá)高于癌旁組織;腫瘤分期Ⅲ期、分化程度低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者HMGB2、MAGE-A9、MMR陽性例數(shù)高于Ⅰ期、Ⅱ期、中、高分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者;HMGB2陽性組存活率低于HMGB2陰性組,MAGE-A9陽性組存活率低于MAGE-A9陰性組,MMR陽性組存活率低于MMR陰性組。提示HMGB2、MAGE-A9、MMR在結(jié)直腸癌中存在異常表達(dá),腫瘤分期高、存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及低分化程度患者異常表達(dá)更為明顯,且與預(yù)后關(guān)系密切。其原因?yàn)镠MGB2、MAGE-A9、MMR異常表達(dá)均與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移密切相關(guān),可通過多種途徑加速腫瘤的生長,增強(qiáng)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移能力,促使腫瘤進(jìn)展更為迅速,臨床分期普遍偏高,且易合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等。而腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移又是影響患者預(yù)后的重要危險(xiǎn)因素,故HMGB2、MAGE-A9、MMR異常表達(dá)患者在預(yù)后普遍較差。

綜上所述,HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白在結(jié)直腸癌中存在不同程度異常表達(dá),且腫瘤分期高、低分化程度及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的表達(dá)異常更為明顯,且異常表達(dá)越明顯則預(yù)后越差。