霍 亮 駱 楊 馮海林

肝癌是指發(fā)生在肝臟中的惡性腫瘤,其發(fā)病率一直居于高位,早期癥狀常被人忽視,其典型癥狀往往只發(fā)生在疾病進(jìn)展到中晚期,所以許多肝癌患者預(yù)后生存較差[1]。盡管在肝癌的檢測(cè)和治療方面已經(jīng)有了一些突破性的進(jìn)展,但其死亡率仍較高。因此,尋找有效的指標(biāo)評(píng)估患者病情,并及時(shí)采取有效措施控制預(yù)后具有重要意義。G蛋白信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白(G-protein signaling modulator,GPSM)2協(xié)助鳥(niǎo)嘌呤核苷酸的交換,并允許細(xì)胞外信號(hào)通過(guò)細(xì)胞表面?zhèn)鬟f給細(xì)胞,最終在G蛋白的激活中發(fā)揮關(guān)鍵作用[2];研究表明[3-4],GPSM2可促進(jìn)胰腺癌癌細(xì)胞的遷移,靶向GPSM2及其下游基因可延長(zhǎng)胰腺癌患者的生存時(shí)間。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子1(transforming growth factor 1,TGF-β1)是一種具有多種功能的蛋白多肽,在細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、免疫調(diào)節(jié)、炎癥和損傷修復(fù)等方面發(fā)揮重要的作用;既往研究表明,在老年宮頸癌組織中,TGF-β1蛋白呈高表達(dá),并可能與腫瘤病情的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[5]。但國(guó)內(nèi)關(guān)于肝癌組織中GPSM2、TGF-β1蛋白表達(dá)的相關(guān)報(bào)道尚處于初步階段,基于此,本研究將GPSM2、TGF-β1蛋白表達(dá)作為研究指標(biāo),探討其與肝癌患者臨床病理參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系,旨在為肝癌的早期診斷及預(yù)后改善提供更多循證數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取本院2018年1月至2022年1月行肝癌根治術(shù)的80例原發(fā)性肝癌患者為研究對(duì)象,術(shù)中收集患者的肝癌組織和癌旁正常組織(距離腫瘤邊緣5 cm以上,且無(wú)腫瘤浸潤(rùn))。納入標(biāo)準(zhǔn):①符合《原發(fā)性肝癌規(guī)范化病理診斷指南(2015年版)》的標(biāo)準(zhǔn)[6],經(jīng)病理及組織學(xué)檢查確診為原發(fā)性肝癌;②年齡18～80周歲;③術(shù)前未進(jìn)行任何抗腫瘤治療。排除標(biāo)準(zhǔn):①存在嚴(yán)重的心、腦、肝、腎功能障礙;②存在嚴(yán)重血液系統(tǒng)相關(guān)疾病;③存在其他惡性腫瘤;④存在肝移植手術(shù)史。入組的80例PLC患者中男性62例,女性18例;年齡26～78歲,平均(52.13±13.07)歲。

1.2 方法

GPSM2、TGF-β1蛋白表達(dá)均采用免疫組化法檢測(cè),所有操作嚴(yán)格按照試劑盒(上海雅吉生物科技有限公司)說(shuō)明書進(jìn)行:石蠟組織切片,常規(guī)脫蠟至水;蒸餾水沖洗,PBS緩沖液浸泡5 min;3%雙氧水去離子水孵育15～20 min,以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性;滴加山羊血清工作液室溫孵育15～20 min,傾去,滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗GPSM2、TGF-β1抗體,37 ℃孵育2～3 h;PBS緩沖液沖洗3次,每次3 min;DAB顯色劑顯色,蒸餾水充分沖洗,復(fù)染,脫水,透明,封片。結(jié)果判讀:隨機(jī)選取10個(gè)高倍鏡(×400)視野,觀察陽(yáng)性細(xì)胞數(shù),取平均值,以陽(yáng)性細(xì)胞百分比進(jìn)行評(píng)分,依次為0分(<5%)、1分(5%～25%)、2分(25%～50%)、3分(50%～75%)、4分(>75%);按染色強(qiáng)度評(píng)分:顏色從淺到深依次為0分(未著色),1分(淺黃色),2分(棕黃色),3分(棕褐色)。兩類評(píng)分的乘積為免疫組織化學(xué)染色評(píng)分,將患者分為 GPSM2、TGF-β1低表達(dá)(<5分)和高表達(dá)(≥5分)[7]。

1.3 隨訪

自術(shù)后起開(kāi)始每3個(gè)月對(duì)所有入組患者以電話或門診的形式進(jìn)行隨訪,截止時(shí)間為2022年6月,隨訪至終止時(shí)間或患者死亡,所有入組患者隨訪時(shí)間1～54個(gè)月。

1.4 觀察指標(biāo)

根據(jù)本研究目的,設(shè)立醫(yī)院專職人員收集患者年齡、性別、腫瘤直徑、病灶數(shù)量、腫瘤分化程度、乙型肝炎史、肝硬化史、肝功能Child-pugh分級(jí)、淋巴轉(zhuǎn)移、神經(jīng)轉(zhuǎn)移、血管轉(zhuǎn)移等資料,并比較所有入組患者肝癌組織和癌旁組織中GPSM2、TGF-β1的表達(dá)情況,分析GPSM2、TGF-β1表達(dá)與臨床病理參數(shù)以及預(yù)后的關(guān)系。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 癌組織與癌旁正常組織中GPSM2、TGF-β1表達(dá)比較

肝癌組織中GPSM2、TGF-β1高表達(dá)率分別為71.25%(57/80)、82.50%(66/80),高于癌旁正常組織的18.75%(15/80)、13.75%(11/80),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=44.545、75.731,P均<0.001)。

2.2 癌組織中GPSM2、TGF-β1表達(dá)水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

分化程度低的肝癌患者癌組織中GPSM2、TGF-β1高表達(dá)率較高,血管轉(zhuǎn)移的肝癌患者癌組織中TGF-β1高表達(dá)率較高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而在不同年齡、性別、腫瘤直徑、病灶數(shù)量、乙型肝炎史、肝硬化史、肝功能Child-pugh分級(jí)、淋巴轉(zhuǎn)移、神經(jīng)轉(zhuǎn)移的肝癌患者癌組織中GPSM2、TGF-β1高表達(dá)率無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),同時(shí)在不同血管轉(zhuǎn)移的肝癌患者癌組織中GPSM2高表達(dá)率無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 癌組織中GPSM2、TGF-β1表達(dá)水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例,%)

2.3 不同GPSM2、TGF-β1表達(dá)水平于患者預(yù)后關(guān)系

對(duì)80例肝癌患者進(jìn)行術(shù)后隨訪,隨訪期間死亡患者36例,存活患者44例,累積生存率為55.00%。GPSM2、TGF-β1低表達(dá)患者累積生存率分別為77.27%(17/23)、85.71%(12/14),高于GPSM2、TGF-β1高表達(dá)患者的47.37%(27/57)、48.48%(32/66),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.041、0.022)。見(jiàn)圖1。

圖1 不同GPSM2、TGF-β1表達(dá)肝癌患者生存曲線圖

3 討論

全球原發(fā)性肝癌發(fā)病率呈增長(zhǎng)趨勢(shì),在惡性腫瘤死亡風(fēng)險(xiǎn)排名中居第三位,同時(shí)其占肝癌的80%,嚴(yán)重威脅人類的健康和生命[8]。隨著我國(guó)醫(yī)療技術(shù)與設(shè)備的飛速發(fā)展,肝癌的外科手術(shù)已取得較快的進(jìn)步,肝癌病死率有所下降,但術(shù)后死亡的風(fēng)險(xiǎn)仍較高[9]。原發(fā)性肝癌的病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全明確,根據(jù)相關(guān)調(diào)查研究發(fā)現(xiàn),與飲酒、病毒性肝炎、食物及飲水、毒物及寄生蟲、遺傳因素等有關(guān)[10]。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)許多與肝癌臨床特征及預(yù)后有關(guān)的蛋白分子,然而尚未有統(tǒng)一明確的蛋白分子能夠成為肝癌的治療靶點(diǎn),因此繼續(xù)尋找與疾病相關(guān)的蛋白分子具有重要臨床意義。

GPSM2參與多種疾病的病理過(guò)程,既往研究[11]報(bào)道,GPSM2可抑制口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞的侵襲、增殖能力。本研究中,肝癌組織中GPSM2高表達(dá)率高于癌旁正常組織,提示臨床可結(jié)合患者癌組織GPSM2表達(dá)進(jìn)行肝癌診斷。國(guó)外研究[12]報(bào)道,GPSM2加速細(xì)胞生長(zhǎng),細(xì)胞周期,遷移和侵襲,并抑制細(xì)胞凋亡,在肝細(xì)胞癌中發(fā)揮癌基因的作用。GPSM2抑制G蛋白信號(hào)通路,與癌細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移等諸多惡性生物學(xué)行為密切相關(guān)[13]。另有研究[14]報(bào)道,下調(diào)GPSM2的表達(dá)可促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞的體內(nèi)外增殖?；谝陨蠄?bào)道,可見(jiàn)GPSM2與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有一定的關(guān)聯(lián),但可能不同的癌組織中有不同的表達(dá)情況,需分析不同臨床病理參數(shù)癌癥患者的GPSM2表達(dá)情況。張繼方等[15]研究發(fā)現(xiàn),GPSM2高表達(dá)與漿液性卵巢癌發(fā)生、化療耐藥和FIGO高分期顯著相關(guān),上調(diào) GPSM2 的表達(dá)能增加細(xì)胞的遷移和侵襲能力。此外,GPSM2是一個(gè)缺氧反應(yīng)基因,其可能通過(guò)增強(qiáng)己糖激酶-2(HK2)表達(dá)促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖和糖酵解[16]。本研究在分化程度低的肝癌組織中,GPSM2的高表達(dá)率更高,提示GPSM2參與了肝癌的發(fā)生和發(fā)展,有望成為肝癌早期診斷的監(jiān)測(cè)指標(biāo)。Kaplan-Meier生存分析顯示,GPSM2低表達(dá)患者的中位生存期較長(zhǎng),提示下調(diào)GPSM2表達(dá)可以延長(zhǎng)肝癌患者的術(shù)后生存時(shí)間。

TGF-β1參與多種惡性腫瘤的病情發(fā)生、發(fā)展過(guò)程,既往研究[17]報(bào)道,結(jié)直腸癌組織中TGF-β1表達(dá)水平上調(diào)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞免疫逃逸,可能是結(jié)直腸腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的主要機(jī)制之一。本研究中,肝癌組織中TGF-β1高表達(dá)率高于癌旁正常組織,結(jié)合上述報(bào)道,提示臨床可結(jié)合患者癌組織TGF-β1表達(dá)進(jìn)行肝癌診斷。國(guó)外研究[18]報(bào)道,TGF-β1促進(jìn)胃成纖維細(xì)胞向腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)化,加速腫瘤細(xì)胞遷移和轉(zhuǎn)移。另有研究[19]報(bào)道,下調(diào)TGF-β1抑制乳腺癌細(xì)胞MCF-7細(xì)胞遷移、侵襲能力。基于以上報(bào)道,可見(jiàn)TGF-β1與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有一定的關(guān)聯(lián),但可能不同的癌組織中有不同的表達(dá)情況,需分析不同臨床病理參數(shù)癌癥患者的TGF-β1表達(dá)情況。黃勝藍(lán)等[20]研究發(fā)現(xiàn),TGF-β1高表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌患者腫瘤分化程度顯著相關(guān)。此外,TGF-β1可能通過(guò)上調(diào)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)間接刺激血管生成而促進(jìn)子宮頸鱗狀細(xì)胞癌的進(jìn)展[21]。本研究中,在分化程度低、有血管轉(zhuǎn)移的肝癌組織中,TGF-β1的高表達(dá)率更高,提示TGF-β1參與了肝癌的發(fā)生和發(fā)展,有望成為肝癌早期診斷的監(jiān)測(cè)指標(biāo)。Kaplan-Meier生存分析顯示,TGF-β1低表達(dá)患者的中位生存期較長(zhǎng),提示下調(diào)TGF-β1表達(dá)可以延長(zhǎng)肝癌患者的術(shù)后生存時(shí)間。

綜上所述,肝癌組織中GPSM2、TGF-β1呈現(xiàn)高表達(dá),且其表達(dá)水平與腫瘤分化程度或血管轉(zhuǎn)移有關(guān);同時(shí),GPSM2、TGF-β1低表達(dá)的肝癌患者生存率更高。GPSM2、TGF-β1可以作為診斷肝癌病情進(jìn)展及預(yù)測(cè)患者預(yù)后的輔助指標(biāo),采用相應(yīng)的分子靶向治療可能有助于提高肝癌患者的術(shù)后生存率。但GPSM2、TGF-β1在肝癌中的具體的作用機(jī)制尚不清楚,還需要進(jìn)一步采用體外細(xì)胞試驗(yàn)或動(dòng)物試驗(yàn)探索GPSM2、TGF-β1參與肝癌預(yù)后的作用機(jī)制及作為肝癌治療靶點(diǎn)新方向的可能性。