高文雅，趙海譽(yù)，高雙榮，趙小亮，焦 玥，劉 洋，王志國(guó)，高 暢，李 濤，*，杜茂波*

（1.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所，北京 100700； 2.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，北京 100700）

至寶三鞭丸由海狗鞭、狗鞭、鹿鞭、人參、鹿茸、海馬、蛤蚧、肉蓯蓉等四十多味名貴中藥材組成，收載于《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑》，具有補(bǔ)血生精、健腦補(bǔ)腎等功效。臨床研究表明，它具有延緩衰老［1］、抗疲勞［2］的作用，對(duì)腦功能衰退［3］、性功能低下［4］、不孕不育［5］有治療效果，但其物質(zhì)基礎(chǔ)研究薄弱。

中藥丸劑大多以飲片細(xì)粉形式直接入藥，一般配伍藥味多、輔料用量大，化學(xué)組成結(jié)構(gòu)類型多、含量差異大。液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)具有強(qiáng)大的分離能力和結(jié)構(gòu)鑒定的優(yōu)勢(shì)［6］，通過(guò)對(duì)已知同類化合物的質(zhì)譜裂解規(guī)律進(jìn)行總結(jié)，可對(duì)未知化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行合理推測(cè)。HPLC-LTQ-Orbitrap MS 可快速得到多級(jí)質(zhì)譜碎片信息，提高中藥復(fù)雜體系中化學(xué)成分的快速鑒定與分析能力［7］。三重四極桿質(zhì)譜中多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM） 模式的特異性和靈敏性使中藥微量成分的定性、定量分析成為可能，可彌補(bǔ)高分辨質(zhì)譜的不足。

本研究基于HPLC-LTQ-Orbitrap MS、HPLCQQQ MS/MS 技術(shù)對(duì)至寶三鞭丸主要成分進(jìn)行定性分析，明確該制劑化學(xué)組成，以期為其后續(xù)質(zhì)量控制、藥效機(jī)制研究提供有力支撐。

1 材料

1.1 儀器 Dionex Ultimate 3000 超高效液相色譜-質(zhì)譜系統(tǒng)，配置自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、在線真空脫氣機(jī)、四元泵、LTQ-Orbitrap 質(zhì)譜檢測(cè)器（線性離子阱串聯(lián)靜電場(chǎng)軌道阱傅里葉變換高分辨質(zhì)譜儀）、Xcalibur 3.0 工作站、Metworks 1.3、Mass Frontier 7.0 數(shù)據(jù)分析軟件（美國(guó)Thermo Fisher 公司）。高效液相色譜-質(zhì)譜系統(tǒng)（美國(guó)AB Sciex 公司），配置 ExionLC-20AC 高效液相色譜儀、IonDriveTM Turbo V 離子源、Sciex 6500＋三重四極桿檢測(cè)器、Analyst 1.7 數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)、MutiQuant 3.0.3 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。SCIENTZ-18N 型冷凍干燥機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）； KQ-500DE 型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試劑與藥物 至寶三鞭丸（批號(hào)210403） 由煙臺(tái)中亞醫(yī)藥保健酒有限公司提供。毛蕊異黃酮對(duì)照品（批號(hào)SH18030505） 購(gòu)自北京賽百草科技有限公司； 莫諾苷 （批號(hào)PRF21053101）、馬錢苷（批號(hào)PRF20051842）、23-乙酰澤瀉醇B （批號(hào)PRF21040201） 對(duì)照品均購(gòu)自成都普瑞法科技開發(fā)有限公司； 阿魏酸（批號(hào)PS012244）、遠(yuǎn)志口山酮Ⅲ（批號(hào)PS010505）、鞣花酸（批號(hào)PS020571）、β-蛻皮甾酮（批號(hào)PS000094）、山柰酚-3-O-蕓香糖苷 （批號(hào)PS011341）、人參皂苷Re （批號(hào)PS011717）、人參皂苷Rb1 （批號(hào)PS011946）、人參皂苷Rg1 （批號(hào)PS010153）、丹皮酚 （批號(hào)PS000281）、淫羊藿苷（批號(hào)PS011515）、甘松新酮（批號(hào) PS010660）、細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷 （批號(hào)PS000954）、23-乙酰澤瀉醇C （批號(hào)PS012675）對(duì)照品均購(gòu)自成都普思生物科技股份有限公司； 松脂醇二葡萄糖苷（批號(hào)MUST-21032510）、松果菊苷（批號(hào)MUST-21042513）、芍藥苷（批號(hào)MUST-21051210）、甘草苷 （批號(hào)MUST-21052114）、毛蕊花糖苷（批號(hào)MUST-20092315）、3，6′-二芥子?；崽牵ㄅ?hào)MUST-20062304）、甘草酸（批號(hào)MUST-20122305 ）、大 黃 素 （ 批 號(hào) MUST-20092210）、大黃素甲醚（批號(hào)MUST-20072304）、毛蕊異黃酮苷 （批號(hào)MUST-21030920）、小檗堿（批號(hào)MUST-20073011）、蛇床子素（批號(hào)MUST-21041602）、黃芪甲苷（批號(hào)MUST-21031508） 對(duì)照品均購(gòu)自成都曼思特生物科技有限公司。BOND ELUTE C18、Bond Elut C18SPE 色譜柱均購(gòu)自美國(guó)安捷倫公司； 甲酸、甲醇、乙腈均為色譜純，購(gòu)自賽默飛世爾生物化學(xué)制品（北京） 有限公司； 其余溶劑均為分析純； 水為超純水。

2 方法

2.1 HPLC-LTQ-Orbitrap MS/MS 分析條件

2.1.1 色譜 Waters BEH HSS T3 色譜柱（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）； 流動(dòng)相0.1% 甲酸水（A） -乙腈 （B），梯度洗脫 （0 ～10 min，2% ～23%B； 10 ～12 min，23% ～30% B； 12 ～30 min，30% ～95% B； 30.0 ～30.01 min，95% ～2% B；30.01～35.0 min，2%B）； 體積流量0.3 mL/min；柱溫30 ℃； 進(jìn)樣量2 μL。

2.1.2 質(zhì)譜 電噴霧離子源（ESI）； 正負(fù)離子掃描； 碰撞氣超高純氦氣（He）； 霧化氣高純氮?dú)猓∟2）。正離子模式下的參數(shù)條件為毛細(xì)管溫度350 ℃，鞘氣 （N2） 體積流量60 arb，輔助氣（N2） 體積流量10 arb； 負(fù)離子模式下的參數(shù)條件為毛細(xì)管溫度350 ℃，鞘氣（N2） 體積流量35 arb，輔助氣（N2） 體積流量10 arb。一級(jí)質(zhì)譜進(jìn)行全掃描（分辨率30 000，m/z50 ～1 500），采用數(shù)據(jù)依賴性掃描獲得二級(jí)、三級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù)，動(dòng)態(tài)離子排除模式獲得更多化合物信息（優(yōu)化的參數(shù)條件為重復(fù)時(shí)間30 s； 排除列表大小50； 排除持續(xù)時(shí)間180 s）。

2.2 HPLC-QQQ MS/MS 分析條件

2.2.1 色譜 Waters BEH HSS T3 色譜柱（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）； 流動(dòng)相0.1% 甲酸水（A） -甲醇（B），梯度洗脫（0 ～9.0 min，20% ～95%B； 9.0 ～12.0 min，95%B； 12.0 ～12.01 min，95% ～20% B； 12.01 ～15.0 min，20% B）； 體積流量0.2 mL/min； 柱溫35 ℃； 進(jìn)樣量2 μL。

2.2.2 質(zhì)譜 電噴霧離子源（ESI）； MRM 模式；正負(fù)離子掃描； 氣簾氣（N2） 40 psi （1 psi＝6.895 kPa）； 碰撞氣 （N2） 9 psi； 噴霧電壓5 500 V（＋）、4 000 V （-）； 霧化溫度550 ℃； 霧化氣、輔助氣（N2） 55 psi； 駐留時(shí)間20 ms。

2.3 常規(guī)供試品溶液制備 取剪碎后的至寶三鞭丸約1.0 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入5 mL 75%甲醇，振搖至全部溶散，室溫超聲提取30 min，放涼，12 000 r/min 離心10 min，取上清液，即得。

2.4 分段供試品溶液的制備 取剪碎后的至寶三鞭丸約5.0 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入20 mL 純水，振搖至全部溶散，室溫超聲提取30 min，12 000 r/min 離心10 min，取上清液。Bond Elut C18SPE 色譜柱經(jīng)甲醇活化和純水平衡后加入上清液，依次用水、30%甲醇、70%甲醇、甲醇進(jìn)行洗脫，收集各部分洗脫液，減壓干燥，1 mL相應(yīng)洗脫液復(fù)溶，12 000 r/min 離心10 min，取上清液，即得。

3 結(jié)果

鑒定策略為①采用常規(guī)方法制備供試品溶液，進(jìn)行高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)依賴性采集，鑒定離子碎片信息豐富的化學(xué)成分； ②采用極性分段方法制備供試品溶液，進(jìn)行高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)依賴性采集，鑒定離子碎片信息中等的化學(xué)成分； ③進(jìn)行HPLC-QQQMS/MS 靶向成分采集，可鑒定離子碎片信息較少的化學(xué)成分。首先利用①②獲得供試品色譜峰的精確相對(duì)分子質(zhì)量，分析可能的元素組成，再利用其二級(jí)質(zhì)譜碎片信息與文獻(xiàn)比對(duì)鑒定未知的化學(xué)成分，并進(jìn)一步用對(duì)照品確認(rèn)，最后利用自建的離子對(duì)庫(kù)與③獲得供試品的離子對(duì)信息進(jìn)行比對(duì)，篩選未知的化學(xué)成分。

從至寶三鞭丸中鑒定得到82 個(gè)化合物，包括18 個(gè)有機(jī)酸類、17 個(gè)黃酮類、11 個(gè)萜類及皂苷類、8 個(gè)色原酮類、4 個(gè)苯乙醇苷類、3 個(gè)生物堿類、3 個(gè)香豆素類、2 個(gè)木脂素類、2 個(gè)蒽醌類，見圖1、表1～2。其中，72 個(gè)化合物通過(guò)高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)依賴性采集方法鑒定（占比88%），22 個(gè)通過(guò)采集靶向離子對(duì)的方式篩選，30 個(gè)通過(guò)與對(duì)照品進(jìn)行比對(duì)而確認(rèn)。

表1 HPLC-LTQ-Orbitrap MS/MS 所得至寶三鞭丸中化合物Tab.1 Compounds from Zhiabo Sanbian Pills by HPLC-LTQ-Orbitrap MS/MS

表2 HPLC-QQQ MS/MS 法所得至寶三鞭丸中化合物Tab.2 Compounds from Zhiabo Sanbian Pills by HPLC-QQQ MS/MS

圖1 至寶三鞭丸色譜圖Fig.1 Chromatograms of Zhibao Sanban Pills

3.1 有機(jī)酸類 一級(jí)質(zhì)譜中可見化合物9 （tR＝2.6 min） 的準(zhǔn)分子離子峰m/z169.013 6（C7H5O5，［M-H］-，誤差2.84）。在二級(jí)質(zhì)譜中可明顯看到丟失CO2的基峰信號(hào)m/z125.025 3（C6H5O3）?；衔?0 （tR＝7.25 min） 的一級(jí)質(zhì)譜中可見準(zhǔn)分子離子峰m/z167.034 3 （C8H7O4，［M-H］-，誤差2.30）。在二級(jí)質(zhì)譜中的基峰離子m/z152.011 5 （C7H4O4） 是丟失一分子CH3（15 Da） 而來(lái)，并可見丟失CO2（44 Da） 的碎片離子m/z123.045 4 （C7H7O2），m/z152 丟失CO2（44 Da） 生成碎片離子m/z108.021 8 （C6H4O2），推測(cè)化合物20 含有一分子甲氧基、一分子羧基。根據(jù)分子式和不飽和度以及文獻(xiàn)報(bào)道，推測(cè)化合物9、20 分別為3，4，5-三羥基苯甲酸（沒(méi)食子酸）、3-甲氧基-4-羥基苯甲酸（香草酸）。

化合物19 在一級(jí)質(zhì)譜中的準(zhǔn)分子離子峰m/z179.034 4 （C9H7O4，［M-H］-，誤差3.10），二級(jí)質(zhì)譜中出現(xiàn)失去一分子CO2生成的m/z135.045 8（C8H7O2） 基峰離子，并可見m/z135 失去一分子CO 生成的碎片離子m/z107.050 8 （C7H7O）。根據(jù)文獻(xiàn)［8-9］ 報(bào)道，推測(cè)化合物19 為3，4-二羥基肉桂酸（咖啡酸）。

化合物21 （tR＝7.8 min） 在一級(jí)質(zhì)譜中的準(zhǔn)分子離子峰m/z337.090 9 （C16H18O8，［M-H］-，誤差- 2.71）。在二級(jí)質(zhì)譜中m/z191.056 5，173.045 9，155.035 3 的碎片離子與奎寧酸片段碎片離子一致，同時(shí)可見碎片離子m/z163.040 5，119.050 5，該部分與咖啡酸基團(tuán)相差一個(gè)氧，推測(cè)為對(duì)香豆?？鼘幩幔╬CoQA） 片段。根據(jù)文獻(xiàn)［8-9］ 報(bào)道，推斷化合物21 為對(duì)香豆酰基奎寧酸。

化合物17 （tR＝6.47 min） 在一級(jí)質(zhì)譜中的準(zhǔn)分子離子峰m/z353.086 1 （C16H17O9，［M-H］-，誤差-1.75）。在二級(jí)質(zhì)譜中可明顯看到基峰信號(hào)m/z191.057 3 （C7H11O6），這是丟失咖啡?；鶊F(tuán)后的奎寧酸基團(tuán)，進(jìn)一步失去H2O，生成脫水奎寧酸基團(tuán)碎片離子m/z173.046 3 （C7H9O5）。二級(jí)質(zhì)譜中同時(shí)可見質(zhì)量數(shù)為m/z179.035 9（C9H7O4） 的咖啡酸基團(tuán)，m/z179 失去一分子CO2生成m/z135.045 9 （C8H7O2） 的脫羰基咖啡酸基團(tuán)碎片離子?；衔?8 的準(zhǔn)分子離子和碎片離子與化合物17 一致，根據(jù)文獻(xiàn)［10-11］ 報(bào)道，推測(cè)化合物17～18 分別為新綠原酸、隱綠原酸。

3.2 香豆素類 化合物60 （tR＝19.23 min） 在一級(jí)質(zhì)譜中的準(zhǔn)分子離子峰m/z367.116 7（C21H19O6，［M-H］-，誤差-2.49）。二級(jí)質(zhì)譜中可見碎片離子m/z352.096 6 （C20H16O6），與［M-H］-對(duì)比發(fā)現(xiàn)是由于甲氧基斷裂失去一分子CH3生成，碎片離子m/z309.041 3 （C17H9O6） 的豐度最高，是同時(shí)失去CH3和C3H7而來(lái)，其中C3H7來(lái)自異戊烯基鏈。三級(jí)質(zhì)譜中可見中性小分子碎片（CO、CO2） 的丟失，由m/z309 生成的碎片離子m/z281.046 9 （C16H9O5）、m/z265.051 5（C16H9O4） 分別是丟失一分子CO、CO2。根據(jù)文獻(xiàn)［12］ 報(bào)道，推測(cè)化合物60 為甘草香豆素。

3.3 環(huán)烯醚萜類 化合物13 （tR＝4.5 min） 在一級(jí)質(zhì)譜中的準(zhǔn)分子離子峰m/z373.111 9（C16H21O10，［M-H］-，誤差-2.88），二級(jí)質(zhì)譜中可檢測(cè)到糖苷鍵斷裂失去一分子葡萄糖（C6H10O5，162 Da） 生成的離子m/z211.061 8 （C10H11O5），碎片離子m/z355.103 4 （ C16H19O9）、m/z329.124 5 （C15H21O8） 是［M-H］-中性丟失H2O（18 Da）、CO2（44 Da） 而生成的，還可檢測(cè)到碎片離子m/z193.050 8 （C10H9O4），167.071 9（C9H11O3），149.061 3 （C9H9O2），分別是m/z211 失去H2O、CO2、H2O、CO2得到。失去葡萄糖基的m/z211 離子發(fā)生半縮醛結(jié)構(gòu)異構(gòu)化，導(dǎo)致二氫吡喃環(huán)開裂，形成含有2 個(gè)醛基結(jié)構(gòu)的異構(gòu)體，C5-C4鍵斷裂失去C3H4O3（88 Da） 產(chǎn)生豐度很高的離子m/z123.045 6 （C7H7O2）。根據(jù)文獻(xiàn)［13］ 報(bào)道，推測(cè)化合物13 為京尼平苷酸。

3.4 苯乙醇苷類 化合物32、36 分別在保留時(shí)間10.76、11.32 min 處出現(xiàn)準(zhǔn)分子離子峰m/z623.194 0 （C29H35O15，［M-H］-，誤差-4.94）、m/z623.194 2 （ C29H35O15，［M-H］-，誤差-4.55）?；衔?2 二級(jí)質(zhì)譜（圖2） 中出現(xiàn)豐度最高的碎片離子m/z461.167 9 （C20H29O12） 是由酯鍵斷裂失去一分子咖啡?；–9H6O3，162 Da）生成，同時(shí)可見糖苷鍵斷裂失去一分子鼠李糖（C6H10O4，146 Da） 產(chǎn)生的碎片離子m/z477.140 7（C23H25O11），失去一分子3，4 二羥基苯乙基（C8H8O2，136 Da） 而生成的碎片離子m/z487.146 4 （C21H27O13），以及糖苷鍵斷裂后的咖啡酰氧基部分的碎片離子m/z179.035 7 （C9H7O4）。m/z461 失去一分子H2O （18 Da） 生成碎片離子m/z443.157 3 （C20H27O11），再失去一分子鼠李糖生成碎片離子m/z315.109 6 （C14H19O8），最后失去一分子H2O 生成碎片離子m/z297.098 7（C14H17O7）。根據(jù)文獻(xiàn)［14］ 報(bào)道，推測(cè)化合物32、36 為毛蕊花糖苷、異毛蕊花糖苷。

圖2 化合物32 在負(fù)離子模式下的MS2 質(zhì)譜圖Fig.2 MS2 mass spectrogram of compound 32 in negative ion mode

3.5 黃酮類 化合物27 （tR＝9.98 min） 一級(jí)質(zhì)譜中的準(zhǔn)分子離子峰m/z431.095 9 （C21H19O10，［M-H］-，誤差- 3.14），二級(jí)質(zhì)譜中可見m/z341.067 5 （C18H13O7，［M-H-C3H6O3］-），m/z311.056 5 （C17H11O16，［M-H-C4H8O4］-） 的碎片離子，符合黃酮六碳糖苷糖基部分C-3 位開裂丟失C3H6O3（90 Da）、六碳糖C-2 位開裂丟失C4H8O4（120 Da） 特征碎片峰的規(guī)則，推測(cè)其分子結(jié)構(gòu)中連有1 個(gè)六碳糖。根據(jù)文獻(xiàn)［15］ 報(bào)道，推測(cè)化合物27 為牡荊素。

化合物47 經(jīng)對(duì)照品指認(rèn)確定為毛蕊異黃酮，正負(fù)離子模式下響應(yīng)均很高。在負(fù)離子模式下保留時(shí)間為14.14 min 的一級(jí)質(zhì)譜中準(zhǔn)分子離子峰m/z283.059 6 （C16H11O5，［M-H］-，誤差-1.77），二級(jí)質(zhì)譜中出現(xiàn)由于甲氧鍵斷裂丟失一分子CH3（15 Da） 產(chǎn)生的二級(jí)碎片離子m/z268.039 3（C15H8O5），三級(jí)質(zhì)譜中出現(xiàn)由碎片離子m/z268失去一分子CO 而生成的基峰離子m/z240.043 9（C14H8O4），同時(shí)可見碎片離子m/z224.048 7（C14H8O3），211.040 9 （C13H7O3），195.045 9（C13H7O2），184.053 7 （C12H8O2），均是由分子量為m/z268 的離子失去CO、CO2中性小分子而生成。C 環(huán)發(fā)生0/3 裂解，0，3A-部分生成碎片離子m/z120.022 3 （C7H4O2），0，3B-部分生成碎片離子m/z148.017 3 （C8H4O3）。根據(jù)文獻(xiàn)［16］ 報(bào)道，推測(cè)化合物47 為毛蕊異黃酮。

化合物44 （tR＝13.13 min） 一級(jí)質(zhì)譜中的準(zhǔn)分子離子峰m/z417.116 8 （C21H21O9，［M-H］-，誤差-2.85）。糖苷鍵斷裂失去葡萄糖基生成苷元m/z255.066 9 （C15H11O4）。苷元C 環(huán)發(fā)生逆狄爾斯-阿爾德（RDA） 裂解后產(chǎn)生的碎片離子與甘草素碎片離子m/z153.020 0，m/z135.009 1，m/z119.050 8，m/z91.019 4 一致。根據(jù)文獻(xiàn)［17］ 報(bào)道，推測(cè)化合物44 為甘草苷。

化合物52 （tR＝16.59 min） 一級(jí)質(zhì)譜中出現(xiàn)分子量為m/z255.065 4 （C15H11O4，［M-H］-，誤差0.72） 的準(zhǔn)分子離子峰，二級(jí)質(zhì)譜中出現(xiàn)由RDA 裂解1，3A-部分生成的碎片離子m/z135.009 2（C7H3O3），同時(shí)可見1，3B-部分生成的碎片離子m/z119.050 6 （C8H7O）。碎片離子m/z135 失去一分子CO2，生成離子m/z91.019 2 （C6H3O）。根據(jù)文獻(xiàn)［17］ 報(bào)道，推測(cè)化合物52 為甘草素。

3.6 蒽醌類 化合物66 （tR＝20.87 min） 一級(jí)質(zhì)譜中的準(zhǔn)分子離子峰m/z269.044 5 （C15H9O5，［M-H］-，誤差0.15），二級(jí)質(zhì)譜中出現(xiàn)由于丟失一分子CO2（44 Da） 產(chǎn)生的二級(jí)碎片離子m/z225.057 0 （C14H9O3），同時(shí)可見由［M-H］-失去一分子CO 而生成的碎片離子m/z241.051 6（C14H9O4），以及m/z225.057 0 失去一分子CO 而生成的碎片離子m/z197.061 6 （C13H9O2）。查閱相關(guān)文獻(xiàn)及與對(duì)照品比對(duì)，確定化合物66 為大黃素。

3.7 內(nèi)酯類 化合物45 （tR＝13.39 min） 一級(jí)質(zhì)譜中的準(zhǔn)分子離子峰m/z249.147 3 （C15H21O3，［M＋H］＋，誤差-4.82），二級(jí)質(zhì)譜（圖3） 中可見由于丟失一分子H2O （18 Da） 分子量為m/z231.138 0 （C15H19O2） 的基峰離子，m/z231.138 0 失去一分子H2O 生成碎片離子m/z213.127 5（C15H17O），［M＋H］＋失去C2H4O2生成碎片離子m/z189.127 3 （C13H17O）。根據(jù)文獻(xiàn)［18］ 報(bào)道，推測(cè)化合物45 為白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ。

圖3 化合物45 在正離子模式下的MS2 質(zhì)譜圖Fig.3 MS2 mass spectrogram of compound 45 in positive ion mode

4 討論與結(jié)論

針對(duì)至寶三鞭丸化學(xué)組成復(fù)雜而微量的特點(diǎn)，本研究建立了一種綜合的化學(xué)成分鑒定策略，包含不同極性分段供試品制備技術(shù)、高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)依賴性采集、靶向成分采集等，可分別鑒定在質(zhì)譜中離子碎片信息較少、信息中等及信息豐富等不同的化學(xué)成分。目前，靶向采集的篩選策略已用于高通量、高靈敏性的代謝性小分子的組學(xué)研究中［19］，利用三重四極桿質(zhì)譜靈敏度高的優(yōu)勢(shì)，可對(duì)復(fù)方中低豐度的化合物進(jìn)行鑒定。結(jié)果，共鑒定出黃酮類、萜類及皂苷類、有機(jī)酸類、色原酮類、苯乙醇苷類、酚類、香豆素類、生物堿類、蒽醌類、木脂素類、內(nèi)酯類等十余種結(jié)構(gòu)類型的82 個(gè)化合物，覆蓋了至寶三鞭丸中大多數(shù)藥味的化學(xué)成分。

課題組前期已綜合利用HPLC 指紋圖譜、HPLC-MS/MS 等對(duì)16 批至寶三鞭丸進(jìn)行分析，建立了同時(shí)測(cè)定34 種成分含量的方法，評(píng)價(jià)一致性及中藥制劑-血漿-腦組織-腦脊液的轉(zhuǎn)移分析，結(jié)合本研究的定性結(jié)果可進(jìn)一步篩選其“制劑質(zhì)量標(biāo)志物”［20-21］，這是針對(duì)大復(fù)方中藥丸劑篩選制劑質(zhì)量控制指標(biāo)的一種嘗試。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)為至寶三鞭丸“制劑質(zhì)量標(biāo)志物”［22-24］篩選提供了初步數(shù)據(jù)，為進(jìn)一步開展該制劑全面質(zhì)量控制、藥效機(jī)制研究提供了有力支撐，同時(shí)為其他中藥丸劑物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供了參考。