秦佳琪，齊強(qiáng)強(qiáng)，張亞軍，王 焱，趙思源，曹德艷，朱美霖

（1.寧夏醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生與管理學(xué)院，寧夏 銀川 750004； 2.寧夏醫(yī)科大學(xué)，寧夏環(huán)境因素與慢性病控制重點(diǎn)實驗室，寧夏 銀川 750004； 3.寧夏回族自治區(qū)疾病預(yù)防控制中心，寧夏 銀川 750003； 4.寧夏醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，寧夏 銀川 750004）

枸杞是一種藥食同源的經(jīng)濟(jì)作物，被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、保健品等領(lǐng)域［1-2］，具有預(yù)防心血管疾病、抗疲勞、抗氧化等作用［3-5］。寧夏回族自治區(qū)是枸杞出口的主要地方，近年來，我國多次出現(xiàn)枸杞農(nóng)藥殘留問題，監(jiān)管任務(wù)艱巨［6-8］。農(nóng)藥超標(biāo)不僅不利于外貿(mào)市場，其降低機(jī)體免疫力、造成帕金森等慢性病的危害也不容忽視［9-12］。噴灑農(nóng)藥是種植戶用來預(yù)防蟲病災(zāi)害的主要手段，而部分種植戶因缺乏對農(nóng)藥毒性、殘留特性等方面的認(rèn)知，出現(xiàn)了種植枸杞時濫用農(nóng)藥的情況［13-14］。為了保持并提高枸杞的出口效益，降低因農(nóng)藥殘留超標(biāo)產(chǎn)生的負(fù)面影響，可以依靠枸杞的基礎(chǔ)研究，采用先進(jìn)的檢測技術(shù)、分析方法，加快枸杞產(chǎn)業(yè)的標(biāo)準(zhǔn)化進(jìn)程。

目前，GC-MS 法具有靈敏度高、可同時完成多組分混合物的定性定量分析等優(yōu)勢，成為應(yīng)用較廣的農(nóng)藥殘留分析方法［15-18］。因此，本研究基于《GB 23200.8-2016 水果和蔬菜中500 種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定氣相色譜-質(zhì)譜法》 中固相萃取法的前處理方法，結(jié)合GC-MS 技術(shù)對寧夏地區(qū)枸杞的農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測，再通過膳食風(fēng)險評估、風(fēng)險排序等技術(shù)方法，評估殘留農(nóng)藥的膳食風(fēng)險，識別風(fēng)險相對較高的殘留農(nóng)藥，最后結(jié)合危害指數(shù)法將不同化合物的危害商相加即得到危害指數(shù)，該方法易于理解，適合累積暴露評估［19］。

1 材料

1.1 藥材 枸杞采自寧夏回族自治區(qū)枸杞主產(chǎn)區(qū)中寧地區(qū)（經(jīng)度105°27′E～105°94′E，緯度37°29′N～37°55′N，海拔1 166.86 ～1 465.02 m），通過梅花型采樣法（在一個單位面積內(nèi)東南西北中分別取樣） 采摘產(chǎn)地枸杞［20］，共5 份，再采用四分法混合為1 個樣品（約200 g），置于紙袋中，共37 個點(diǎn)，即37 份。商超枸杞共50 份，購自寧夏中寧枸杞交易市場以及銀川市各大超市。經(jīng)寧夏醫(yī)科大學(xué)朱美霖副教授鑒定為正品。

1.2 儀器 Agilent 7890B 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國Agilent 公司）； DB-5MS 色譜柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）、Carbon/NH2 固相萃取柱（美國Agilent 公司）； FW100 高速萬能粉碎機(jī)（天津市泰斯特儀器有限公司）； AL204 電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）； HSC-24A 氮吹儀（天津恒奧科技發(fā)展有限公司）； LXJ-IIB 離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）； KQ-500 超聲波清洗機(jī)（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.3 試劑 乙腈（色譜純，美國Thermo Fisher 公司）； 二氯甲烷（分析純，天津市瑞金特化學(xué)品有限公司）； 丙酮（色譜純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）； 氯化鈉（分析純，上海廣諾化學(xué)科技有限公司）； 1 000 μg/mL 敵敵畏、馬拉硫磷、殺撲磷、異菌脲、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氯菊酯、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯對照品（農(nóng)業(yè)部環(huán)境質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心）； 1 000 μg/mL毒死蜱、噠螨靈對照品，100 μg/mL 螺螨酯對照品（北京北方偉業(yè)計量技術(shù)研究院有限公司）； 1 000 μg/mL 三唑醇對照品 （中國計量大學(xué)）； 100 μg/mL 溴蟲腈對照品（北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司）。

2 方法

2.1 對照品溶液制備 精密吸取各對照品適量，丙酮定容，分別制成質(zhì)量濃度為2.5 mg/mL 的毒死蜱、氯氟氫菊酯、噠螨靈的對照品溶液，5 mg/mL的敵敵畏、殺撲磷、溴蟲腈、甲氰菊酯、螺螨酯、氯菊酯、氰戊菊酯的對照品溶液，7.5 mg/mL的三唑醇、氯氰菊酯對照品溶液，10 mg/mL的馬拉硫磷、抑菌脲、氟氯氰菊酯、溴氰菊酯對照品溶液，避光、-18 ℃下保存。

2.2 供試品溶液制備 稱取枸杞5 g 至50 mL 離心管中，加入10 mL 乙腈，搗碎成勻漿，加入1 g氯化鈉，振蕩30 s，分層后加入4 g 無水硫酸鎂，繼續(xù)振蕩1 min，10 000 r/min 離心5 min，取上清液5 mL 轉(zhuǎn)移至10 mL 離心管中，使用氮吹儀吹干，即得。

2.3 凈化 5 mL 丙酮-二氯甲烷（1 ∶1） 活化Carbon/NH2 柱，3 mL 丙酮-二氯甲烷（1 ∶1） 分3次溶解平底燒瓶中蒸發(fā)殘留物，洗液用Carbon/NH2 柱過濾，待液面低至SPE 柱篩板表面后加入12 mL 丙酮-二氯甲烷（1 ∶1），收集過濾后的15 mL 溶液，置于50 mL 平底燒瓶中，于45 ℃水浴下減壓濃縮至3 mL 左右，轉(zhuǎn)移至5 mL 刻度試管中，氮?dú)獯抵两珊笥帽ㄈ?，即得?/p>

2.4 GC-MS 條件

2.4.1 色譜 DB-5MS 色譜柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）； 程序升溫（初始溫度8 ℃，保持1 min，15 ℃/min 升至165 ℃，保持5 min，5 ℃/min 升至200 ℃，保持6 min，8 ℃/min 升至280 ℃，保持5 min，30 ℃/min 升至300 ℃，保持3 min）； 進(jìn)樣量1 μL，不分流； 體積流量1.0 mL/min； 進(jìn)樣口溫度250 ℃。

2.4.2 質(zhì)譜 電子轟擊電離 （EI），電子能量70 eV； 離子源溫度230 ℃； 接口溫度280 ℃； 多反應(yīng)監(jiān)測模式； 碰撞氣高純N2。對照品溶液在SIM 模式下采集得到的色譜圖見圖1。

圖1 對照品溶液色譜圖（SIM 模式）Fig.1 Chromatogram of reference substance solution （SIM mode）

2.5 風(fēng)險評估方法 慢性膳食攝入風(fēng)險評估采用國際通用指標(biāo)（%ADI）［21］，其大小與風(fēng)險呈正相關(guān)，小于100%時風(fēng)險可被接受，大于100% 時不可被接受，公式為%ADI＝ ［（STMR×P） /（ADI×bw）］ ×100%［22］，其中STMR 為農(nóng)藥平均殘留量，P 為2020 年版《中國藥典》 一部中枸杞的建議成人每日最高食用量（12 g）［23］，ADI 為每日允許攝入量［21］，bw 為成年人平均體質(zhì)量（以60 kg計算）［24］。

急性膳食攝入風(fēng)險采用指標(biāo)% ARfD，公式為%ARfD ＝ ［（HR×P） /（ARfD×bw）］ ×100%，其中HR 為農(nóng)藥的最大殘留值，ARfd 為急性參考值。

2.6 農(nóng)藥風(fēng)險排序 采用英國獸藥殘留委員會開發(fā)的排序矩陣對殘留風(fēng)險進(jìn)行排序，指標(biāo)共5 項，賦值標(biāo)準(zhǔn)見表1［25-26］，計算農(nóng)藥使用頻率（FOD）、風(fēng)險得分（S），公式分別為FOD ＝ （T/P） ×100、S ＝ （A＋B） × （C＋D＋E＋F），其中T 為果實發(fā)育過程中使用此類農(nóng)藥的次數(shù)（根據(jù)中國農(nóng)藥合理使用標(biāo)準(zhǔn)［27］，當(dāng)年每種農(nóng)藥在枸杞上最多使用3次）； P 為果實發(fā)育日數(shù)（開花到結(jié)果的時間，枸杞的發(fā)育期在30～40 d［22］）； A 為毒性得分（毒性依據(jù)農(nóng)藥品種基本信息數(shù)據(jù)庫提供農(nóng)藥經(jīng)口半數(shù)致死量）； B 為毒效得分（根據(jù)ADI 值計算［28］）； C為枸杞膳食比例得分（比例小于2.5%［29］）； D 為使用頻率； E 為高暴露人群得分（目前我國無相關(guān)數(shù)據(jù)［22］）； F 為殘留水平得分。

表1 農(nóng)藥殘留風(fēng)險排序賦值標(biāo)準(zhǔn)Tab.1 Criteria of risk ranking assignment for pesticide residues

2.7 累積暴露評估 采用危害指數(shù)法（HI 法），計算慢性膳食暴露量（EXPc） 和急性膳食暴露量（EXPa），公式分別為，再計算HI 值，公式為，膳食暴露量（EXP） 與參考值（RV）的比值為各農(nóng)藥危害商（HQ），ADI 為慢性膳食風(fēng)險的RV 值，ARfD 為急性膳食風(fēng)險的RV 值。HI＜1 則累積暴露風(fēng)險可接受，反之則不可接受［30］。

3 結(jié)果

3.1 儀器條件確定 采用SIM 模式對各農(nóng)藥對照品進(jìn)行掃描，以此確定定性、定量離子，同時測定各種農(nóng)藥的保留時間。方法學(xué)研究結(jié)果表明，16 種農(nóng)藥在0.025 ～4.00 μL/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r≥0.994 4），平均加樣回收率70% ～114%，RSD＜2%，具體見表2。

表2 各農(nóng)藥質(zhì)譜參數(shù)、線性關(guān)系及加樣回收率Tab.2 Mass spectral parameters，linear relationships and recoveries for various pesticides

3.2 農(nóng)藥殘留水平分析 37 份產(chǎn)地枸杞樣品中34份被檢出有農(nóng)藥殘留，共5 種； 50 份商超枸杞樣品中31 份被檢出有農(nóng)藥殘留，共5 種，見表3。產(chǎn)地枸杞和商超枸杞中共同檢出的農(nóng)藥是氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯。產(chǎn)地枸杞中氟氯氰菊酯、氯氰菊酯的檢出率最高，均達(dá)到92%，1 份樣品中氯氰菊酯超標(biāo)； 商超枸杞檢出率最高的是氯氰菊酯，檢出率為46%，無樣品超標(biāo)情況。因國家標(biāo)準(zhǔn)未規(guī)定氟氯氰菊酯的最大殘留限量，故暫不討論其超標(biāo)情況。

表3 枸杞中各農(nóng)藥殘留水平Tab.3 Levels of various pesticide residues in Lycii Fructus

3.3 膳食風(fēng)險評估 由表4 可知，產(chǎn)地、商超枸杞中16 種農(nóng)藥的%ADI 均低于100%，兩者最高的均是氯氰菊酯，分別為0.735 4%、0.088 4%，表明寧夏地區(qū)其農(nóng)藥殘留慢性膳食攝入風(fēng)險均很低，完全可被接受。除敵敵畏、溴蟲腈、異菌脲和螺螨酯無急性參考值，氯菊酯急性參考值不需要外，其余12 種農(nóng)藥的急性參考值見表4，可知產(chǎn)地、商超%ARfD 均低于100%，其中氯氰菊酯最高，分別為3.977 8%、0.243 7%，商超枸杞遠(yuǎn)低于產(chǎn)地枸杞，表明寧夏地區(qū)枸杞中農(nóng)藥的急性膳食風(fēng)險也可被接受。

表4 枸杞中各農(nóng)藥殘留膳食風(fēng)險評估結(jié)果Tab.4 Results of dietary risk assessment for various pesticide residues in Lycii Fructus

3.4 農(nóng)藥殘留風(fēng)險排序 如圖2～3 所示，可將16種殘留農(nóng)藥分為高、中、低風(fēng)險，高風(fēng)險農(nóng)藥為溴氰菊酯、噠螨靈、毒死蜱、敵敵畏、殺撲磷，風(fēng)險得分≥20 分，其中噠螨靈在商超枸杞中檢出，其風(fēng)險可被接受； 中風(fēng)險農(nóng)藥為氯菊酯、氯氟氫菊酯、甲氰菊酯、溴蟲腈、氰戊菊酯、氯氰菊酯、氟氯氰菊酯、和螺螨酯，其中螺螨酯、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯，風(fēng)險得分在15 ～20 分之間，甲氰菊酯、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯在商超枸杞中檢出； 低風(fēng)險農(nóng)藥為三唑醇、馬拉硫磷、異菌脲，風(fēng)險得分＜15 分，其中異菌脲在產(chǎn)地枸杞中檢出。

圖2 產(chǎn)地枸杞中各農(nóng)藥殘留風(fēng)險排序Fig.2 Residual risk ranking of various pesticides in Lycii Fructus from production regions

圖3 商超枸杞中各農(nóng)藥殘留風(fēng)險排序Fig.3 Residual risk ranking of various pesticides in Lycii Fructus commodities

3.5 累計暴露評估 產(chǎn)地及商超枸杞的慢性、急性危害指數(shù)均遠(yuǎn)低于風(fēng)險指數(shù)1，產(chǎn)地枸杞慢性、急性HI 值分別為0.012 9、0.065 5，商超枸杞慢性、急性HI 值分別為0.001 2、0.005 4，表明攝入寧夏地區(qū)枸杞引起的膳食風(fēng)險均在可接受限度內(nèi)。

4 討論

寧夏枸杞因農(nóng)藥殘留帶來的膳食風(fēng)險均在可接受范圍內(nèi)。商超枸杞中農(nóng)藥殘留水平明顯低于產(chǎn)地枸杞中農(nóng)藥殘留水平，其原因主要是商超枸杞由各枸杞品牌提供，而枸杞品牌比散戶具備更成熟的品控和檢測體系。枸杞中檢出率高的農(nóng)藥均屬于擬除蟲菊酯類農(nóng)藥，該類農(nóng)藥除了具有對部分產(chǎn)生有機(jī)磷農(nóng)藥抗性的害蟲有效的優(yōu)勢之外，對哺乳動物毒性低、易降解等特點(diǎn)正逐漸成為果蔬主要農(nóng)藥類別之一［31］。在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)少量使用農(nóng)藥有利于保證枸杞的質(zhì)量和產(chǎn)量，但本研究未發(fā)現(xiàn)有明顯的農(nóng)藥科學(xué)復(fù)配使用情況，而它更有利于達(dá)到低成本、低濃度、高防治的效果，值得被大力推廣［32］。另外，本研究只考慮了因攝入枸杞而攝入的農(nóng)藥，未考慮農(nóng)藥其他來源引起的健康風(fēng)險，因此枸杞中農(nóng)藥膳食風(fēng)險越低越有利于人體健康。

在研究農(nóng)藥種類及濃度的同時，考慮到枸杞生長不同時期噴灑的農(nóng)藥有所差別［33］，課題組下一步將全年監(jiān)測枸杞農(nóng)藥的使用情況，研究枸杞生長周期內(nèi)不同時間段使用農(nóng)藥的種類及農(nóng)藥殘留水平。

5 結(jié)論

本研究采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法對87 份寧夏枸杞中的農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測，其中65 份存在農(nóng)藥殘留，產(chǎn)地枸杞檢出率為92%，商超枸杞檢出率為62%； 產(chǎn)地枸杞中氟氯氰菊酯的平均殘留量最高，為0.999 2 mg/kg，而商超枸杞中氯氰菊酯的平均殘留量最高，為0.088 4 mg/kg； 產(chǎn)地枸杞和商超枸杞中慢性、急性膳食風(fēng)險最高的農(nóng)藥均是氯氰菊酯，%ADI 分別為0.735 4%、0.088 4%，%ARfD分別為3.977 8%、0.243 7%； 溴氰菊酯、噠螨靈、毒死蜱、敵敵畏、殺撲磷風(fēng)險得分在20 分以上，風(fēng)險較高，但實際上只有噠螨靈被檢出，而且未超標(biāo)；產(chǎn)地、商超枸杞的慢性危害指數(shù)分別為0.012 9、0.001 2，急性危害指數(shù)分別為0.065 5、0.005 4，寧夏地區(qū)枸杞中農(nóng)藥的累積膳食風(fēng)險可被接受。