劉少云，張紅，劉艷靜，吳瑋，劉志敏

作者單位：1華北石油管理局總醫(yī)院，a心內(nèi)二科，b老年病科，河北 滄州 062552；2天津市第二醫(yī)院內(nèi)分泌科，天津 300143

冠心病為常見心血管疾病，病人在多種因素的作用下發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化，冠狀動(dòng)脈內(nèi)膜下粥樣斑塊聚集引發(fā)冠狀動(dòng)脈狹窄甚至阻塞，導(dǎo)致心肌缺氧、缺血，嚴(yán)重者可導(dǎo)致死亡［1］。冠心病是目前全球死亡的主要原因之一，在中國(guó)其發(fā)病率、病死率均呈上升趨勢(shì)，該病由高血壓、高脂血癥、吸煙、糖尿病等危險(xiǎn)因素相互作用而引發(fā)［2］。有效加強(qiáng)冠心病預(yù)防，提高早期診斷、治療、干預(yù)的成功率對(duì)于改善冠心病預(yù)后意義重大。微RNA（microRNA，miRNA）是長(zhǎng)度18～24 nt 的小分子非編碼RNA，在人體中發(fā)揮調(diào)控功能，其水平變化與心血管疾病密切相關(guān)［3］。微RNA-133b（microRNA-133b，miR-133b）在癌癥中研究較為廣泛，其在食管鱗癌組織中低表達(dá)，作為抑癌基因發(fā)揮作用，可能成為食管鱗癌的治療靶點(diǎn)［4］；過表達(dá)miR-133b，可抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移［5］。近年來發(fā)現(xiàn)，miR-133b與心力衰竭、心肌梗死等心血管疾病有關(guān)，心力衰竭病人血清miR-133b水平隨著心功能分級(jí)升高而增加，miR-133b 水平可在一定程度上預(yù)測(cè)心衰病人病情嚴(yán)重程度［6］。miR-133b 與冠心病的關(guān)系研究較少，本研究擬探討冠心病病人血清miR-133b水平及其與病人預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2019 年7 月至2021 年1 月于華北石油管理局總醫(yī)院就診的冠心病病人95例，其中穩(wěn)定性冠心?。╯table coronary heart disease，SACD）病人54 例為SACD 組，急性冠狀動(dòng)脈綜合征（acute coronary syndrome，ACS）41 例為ACS 組。冠心病病人納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）ACS 符合《急性冠脈綜合征急診快速診治指南（2019）》［7］中的診斷標(biāo)準(zhǔn)，病人具有典型的缺血性胸痛癥狀；（2）SACD 符合2013年歐洲心臟病學(xué)會(huì)指南［8］中的診斷標(biāo)準(zhǔn)，ACS 后穩(wěn)定的、無癥狀的階段；（3）冠狀動(dòng)脈造影證實(shí)單支和（或）多支冠狀動(dòng)脈狹窄≥50%；（4）依從性良好，病人或近親屬知情同意；（5）臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并自身免疫疾病者；（2）合并精神異常、認(rèn)知功能異常者；（3）合并血液系統(tǒng)疾病者；（4）妊娠期、哺乳期女性；（5）合并惡性腫瘤者。另選同期該院進(jìn)行體檢的健康人群60 例作為對(duì)照組，均無心血管疾病，排除標(biāo)準(zhǔn)與冠心病病人一致。收集所有研究對(duì)象的年齡、性別、高血壓、糖尿病、吸煙史、身體質(zhì)量指數(shù)及血脂異常情況。本研究經(jīng)華北石油管理局總醫(yī)院倫理委員會(huì)審批同意（批號(hào)20190322）。

1.2 方法

1.2.1 冠脈動(dòng)脈造影成像分析根據(jù)Gensini 評(píng)分系統(tǒng)［9］評(píng)估冠心病病人動(dòng)脈狹窄程度，0 分：無任何異常，1 分：狹窄＜25%，2 分：25%≤狹窄＜50%，4 分：50%≤狹窄＜75%，8 分：75%≤狹窄＜90%，16 分：90%≤狹窄＜100%，32 分：100%閉塞。不同冠脈評(píng)分系數(shù)，左主干病變×5.0；前降支遠(yuǎn)段×1.0，中段×1.5，近段×2.5；回旋支遠(yuǎn)段×1.0，中段×1.0，近段×1.5；右冠狀動(dòng)脈遠(yuǎn)段、中段及近段×1.0；小分支×0.5。最終積分為各分支積分總和。

1.2.2 血清miR-133b 水平檢測(cè)采集所有研究對(duì)象的空腹肘靜脈血3 mL，室溫靜置30 min，離心后取上層血清，-20 ℃保存待測(cè)。采用Trizol 試劑提取血清總RNA，并逆轉(zhuǎn)錄為互補(bǔ)DNA（cDNA），以cDNA 為模板進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR 反應(yīng)，在實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀上擴(kuò)增miR-133b。采用2-ΔΔCt法計(jì)算血清miR-133b 水平。miR-133b 引物序列：正向5'-TTTGGTCCCCTTCAACCAGCTA-3'，反向5'-GTGCAGGGTCCGAGGT-3'，內(nèi)參U6 引物序列：正向5'-TTAGCATGGCCCCTGC-3'，反向5'-TGCGTGTCGTGGAGTC-3'。

1.3 隨訪病人出院后進(jìn)行隨訪，采用電話、微信或門診等方式，共隨訪6個(gè)月，記錄病人的主要心臟不良事件，包括死亡、非致死性心肌梗死、血運(yùn)重建、新發(fā)狹窄及再狹窄。隨訪期間病人出現(xiàn)主要心臟不良事件，即為預(yù)后不良組（33 例）；未出現(xiàn)主要心臟不良事件，即為預(yù)后良好組（62例）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 24.0 軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以描述，兩組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例（%）描述，采用χ2檢驗(yàn)。采用Spearman 檢驗(yàn)分析血清miR-133b水平與Gensini評(píng)分的關(guān)系；采用多因素logistic回歸分析影響冠心病病人預(yù)后的危險(xiǎn)因素；采用受試者操作特征曲線（ROC 曲線）分析血清miR-133b 水平對(duì)冠心病病人預(yù)后不良的預(yù)測(cè)價(jià)值。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組一般資料比較三組年齡、男性及糖尿病占比相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；SACD 組、ACS組身體質(zhì)量指數(shù)、高血壓、吸煙史及血脂異常者比例高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；ACS組Gensini 評(píng)分、病變支數(shù)≥3 支占比高于SACD 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 體檢健康者60例和冠心病病人95例一般資料比較

2.2 三組血清miR-133b 水平比較ACS 組、SACD組、對(duì)照組血清miR-133b 水平分別為1.59±0.15、1.36±0.12、1.02±0.05（F=349.57，P＜0.001），ACS 組、SACD 組miR-133b 水平均高于對(duì)照組（P＜0.05），ACS組miR-133b水平高于SACD組（P＜0.05）。

2.3 血清miR-133b 水平與Gensini 評(píng)分的關(guān)系SACD 組病人血清miR-133b 水平與Gensini 評(píng)分呈正相關(guān)（r=0.58，P＜0.001）；ACS 組病人血清miR-133b 水平與Gensini 評(píng)分也呈正相關(guān)（r=0.57，P＜0.001）。

2.4 不同預(yù)后冠心病病人一般資料及血清miR-133b 水平比較不同預(yù)后冠心病病人年齡、身體質(zhì)量指數(shù)及男性、高血壓、糖尿病、吸煙史、血脂異常占比相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；預(yù)后不良組病人Gensini 評(píng)分、血清miR-133b 水平及病變支數(shù)≥3 支占比高于預(yù)后良好組（P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2。

表2 不同預(yù)后冠心病95例一般資料及血清miR-133b水平比較

2.5 影響冠心病病人預(yù)后的危險(xiǎn)因素分析以冠心病病人預(yù)后情況（預(yù)后良好=0，預(yù)后不良=1）作為因變量，以Gensini評(píng)分、病變支數(shù)、miR-133b作為自變量進(jìn)行多因素logistic回歸分析，結(jié)果顯示，Gensini評(píng)分、病變支數(shù)、miR-133b 均為影響冠心病病人預(yù)后的危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。見表3。

表3 影響冠心病95例預(yù)后的危險(xiǎn)因素分析

2.6 血清miR-133b 水平預(yù)測(cè)冠心病病人預(yù)后不良的價(jià)值分析血清miR-133b 水平預(yù)測(cè)冠心病病人預(yù)后不良的曲線下面積為0.83［95%CI：（0.75，0.91）］，最佳截?cái)嘀禐?.55，靈敏度高達(dá)97.0%，特異度為64.5%。見圖1。

圖1 血清miR-133b水平預(yù)測(cè)冠心病95例預(yù)后不良的ROC曲線

3 討論

冠心病好發(fā)于中老年人群，臨床癥狀以突感心前區(qū)疼痛、多發(fā)性壓榨痛為主，該疾病與肥胖、高血壓、糖尿病等有關(guān)，隨著生活質(zhì)量的不斷提高和老齡化加劇，冠心病發(fā)病率逐年上升［10-11］。研究顯示，降低收縮壓和脂蛋白膽固醇、戒煙、保持健康的體質(zhì)量、鍛煉和健康飲食均可降低冠心病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)［12］。本研究中，SACD 組、ACS 組身體質(zhì)量指數(shù)、高血壓、吸煙史及血脂異常者比例高于對(duì)照組，表明保持良好的生活習(xí)慣、盡早采用藥物治療控制血壓、血脂有助于降低冠心病發(fā)病率。冠心病因心肌細(xì)胞損傷、變性或纖維化，導(dǎo)致心肌運(yùn)動(dòng)平衡失調(diào)，繼而引發(fā)心室重構(gòu)，心力衰竭，甚至死亡，冠心病病人經(jīng)系統(tǒng)治療后，部分病人可能再發(fā)心血管事件，致使住院率、病死率增加，給病人家庭及社會(huì)帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)［13］。

miRNA 是一類進(jìn)化上保守的非編碼小RNA，已成為一類新型基因調(diào)控分子，作為內(nèi)源性分子，miRNA 已被證明在人體病理生理過程的不同領(lǐng)域中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，不僅參與細(xì)胞發(fā)育、細(xì)胞內(nèi)代謝機(jī)制、細(xì)胞分化和增殖過程，還參與心血管疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病和各種惡性腫瘤中的應(yīng)激反應(yīng)等基本生物學(xué)過程［14］。miRNA 體積小且對(duì)降解具有很強(qiáng)的抵抗力，又因與某些基于脂質(zhì)的載體相連或被包裹在微囊泡中，甚至不受內(nèi)源性RNase的影響，憑借以上優(yōu)勢(shì)，miRNA 已成為研究包括冠心病在內(nèi)的心血管疾病的新型標(biāo)志物［15］。miR-133b定位于6號(hào)染色體，最初在骨骼肌中發(fā)現(xiàn)，被認(rèn)為是肌肉特異性miRNA，參與骨骼肌生長(zhǎng)發(fā)育，其異常變化與神經(jīng)系統(tǒng)生長(zhǎng)、神經(jīng)系統(tǒng)疾病有關(guān)［16］。miR-133b 在炎癥和腫瘤中起著重要作用，miR-133b 在許多類型的腫瘤中表達(dá)異常［17］。近年來，miR-133b 在心腦血管疾病中的作用越來越多地被揭示。有研究顯示，miR-133b 在心力衰竭病人血清中呈高表達(dá)，其水平隨病情加重而升高，且與心室重構(gòu)有關(guān)，可通過miR-133b 水平判斷心室重構(gòu)狀況［6］。此外，ST 抬高型急性心肌梗死病人血清miR-133b水平升高，其高表達(dá)病人術(shù)后心功能與低表達(dá)病人相比較差，心血管不良事件發(fā)生率較高，預(yù)后不佳［18］。

本研究中，SACD 組、ACS 組血清miR-133b 水平均高于對(duì)照組，ACS 組血清miR-133b 水平高于SACD 組，且miR-133b 水平與病人Gensini 評(píng)分（呈正相關(guān)），與賈秋菊、李莉［18］研究結(jié)果基本一致，提示miR-133b 參與冠心病的發(fā)生發(fā)展，可通過監(jiān)測(cè)miR-133b 水平，預(yù)測(cè)冠心病病人的疾病嚴(yán)重程度。分析原因，miR-133b 可能通過影響心肌纖維化和心肌細(xì)胞凋亡而參與冠心病的病情進(jìn)展［19］，需增加細(xì)胞實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證此推測(cè)。病人出院后進(jìn)行隨訪，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，預(yù)后不良組病人Gensini 評(píng)分、血清miR-133b 水平及病變支數(shù)≥3支占比高于預(yù)后良好組，且Gensini評(píng)分、病變支數(shù)、miR-133b 均為影響冠心病病人預(yù)后的危險(xiǎn)因素，且血清miR-133b水平預(yù)測(cè)冠心病病人預(yù)后不良的曲線下面積為0.83，靈敏度高達(dá)97.0%，血清miR-133b 水平高于1.55 時(shí)冠心病病人預(yù)后不良發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)較高。表明可根據(jù)miR-133b 水平預(yù)測(cè)冠心病病人預(yù)后情況，針對(duì)高表達(dá)病人盡早采取相應(yīng)措施，以降低其心臟不良事件發(fā)生率。

綜上所述，冠心病病人血清miR-133b 水平升高，miR-133b 水平越高冠心病病人冠脈狹窄越嚴(yán)重，監(jiān)測(cè)miR-133b水平對(duì)于預(yù)測(cè)病人疾病嚴(yán)重程度及預(yù)后情況有一定的幫助。但鑒于本研究是小樣本量、單中心的研究，研究得出的結(jié)論需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，并進(jìn)行多中心的研究證實(shí)，同時(shí)，外周血miR-133b 表達(dá)水平與冠心病病人長(zhǎng)期預(yù)后的關(guān)系也需要進(jìn)一步研究明確。