何佳寧，趙偉博，王佩娟

作者單位：1南京中醫(yī)藥大學(xué)研究生院，江蘇 南京 210023；2無(wú)錫市中醫(yī)醫(yī)院婦產(chǎn)科，江蘇 無(wú)錫 214000；3江蘇省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院婦產(chǎn)科，江蘇 南京 210028

多囊卵巢綜合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）是女性常見(jiàn)的婦科內(nèi)分泌疾病，病人多有月經(jīng)失調(diào)，同時(shí)伴有痤瘡、多毛、脫發(fā)、肥胖等臨床癥狀，國(guó)內(nèi)育齡期女性PCOS 發(fā)病率為6%～10%，其中不孕者達(dá)30%～60%，嚴(yán)重影響著女性的生理心理健康及家庭幸福［1-2］。甲狀腺功能減退（簡(jiǎn)稱(chēng)“甲減”）也是常見(jiàn)的內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病，病人以乏力、情緒低落、皮膚干燥、水腫、記憶力下降等臨床表現(xiàn)為主，目前我國(guó)甲減發(fā)病率約為1.1%，而亞臨床甲減病人高達(dá)16.7%［3］。目前已有相關(guān)研究表明PCOS 與甲減的發(fā)生有一定的關(guān)聯(lián)性，且長(zhǎng)期發(fā)展皆易引起高血壓、冠心病等疾病的發(fā)生［4-5］。

金匱腎氣丸出自醫(yī)圣張仲景《傷寒雜病論》雜病病篇，擅溫腎益精，專(zhuān)治腎精、腎陽(yáng)虧虛之虛勞、痰飲之病，其組方脾腎同調(diào)，益精填髓，補(bǔ)中寓瀉，陰中求陽(yáng)。祖國(guó)醫(yī)學(xué)并無(wú)PCOS、甲減等病名，根據(jù)其臨床表現(xiàn)PCOS 可歸屬于“月經(jīng)稀發(fā)”“不孕”范疇，甲減歸屬于“虛勞”“癭病”范疇。中醫(yī)認(rèn)為“足少陰腎經(jīng)起于足小趾端下……其直者：從腎，上貫肝、膈，入肺中，循喉嚨”“任脈起于胞中……沿胸腹正中直上至咽喉”“沖脈起于胞中……一支挾臍上行，與足少陰經(jīng)相并，散布于胸中，再向上行，經(jīng)咽喉”，認(rèn)為胞宮、腎及甲狀腺通過(guò)經(jīng)絡(luò)的絡(luò)屬相互聯(lián)系溝通，所以認(rèn)為PCOS、甲減的發(fā)生多與腎相關(guān)。同時(shí)“腎者主蟄，封藏之本，精之處也”，腎精，主人體生長(zhǎng)發(fā)育及生殖，同時(shí)也是機(jī)體的原動(dòng)力；腎陰腎陽(yáng)為一身陰陽(yáng)之根本，又如《景岳全書(shū)·命門(mén)敘》中所云：“命門(mén)為精血之?！迮K之陰氣，非此不能滋；五臟之陽(yáng)氣，非此不能發(fā)”。所以在病理狀態(tài)下，腎精不足則經(jīng)水化源不足，影響天癸泌至；腎氣不得充養(yǎng)，則命門(mén)相火無(wú)以生發(fā)元?dú)猓M(jìn)而影響生長(zhǎng)發(fā)育出現(xiàn)呆小、善忘等。若腎陽(yáng)氣不足則溫煦推動(dòng)失職，脾陽(yáng)失于腎陽(yáng)溫煦易形成痰濕，進(jìn)而導(dǎo)致困倦、乏力、肥胖、水腫等，同時(shí)胞宮氣血受寒凝，瘀血阻滯，經(jīng)脈不通，月經(jīng)不能按時(shí)下泄。所以腎精虧虛、腎陽(yáng)不足多易導(dǎo)致PCOS、甲減的發(fā)生，治療上以益腎填精，溫補(bǔ)腎陽(yáng)為基本大法，這也就符合中醫(yī)上“異病同治”的理念，即對(duì)于不同的疾病若病因、病機(jī)相同時(shí)則可采取相同的治法。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是基于“疾病、基因、靶點(diǎn)、藥物”相互作用網(wǎng)絡(luò)的基礎(chǔ)上，通過(guò)網(wǎng)絡(luò)分析，系統(tǒng)綜合地探討藥物治療疾病的相關(guān)機(jī)制，雖然現(xiàn)代藥理研究及臨床試驗(yàn)證實(shí)，金匱腎氣丸在治療內(nèi)分泌相關(guān)疾病方面有確切的療效［6-9］，但研究多針對(duì)單一疾病展開(kāi)，所以本研究自2022 年3—10 月從“異病同治”角度入手，結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，探討藥物的作用機(jī)制，以期為臨床用藥提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 金匱腎氣丸活性成分及靶點(diǎn)的獲取通過(guò)中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（TCMSP）數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//tcmspw.com/tcmsp.php）以熟地黃、山藥、山茱萸、茯苓、澤瀉、牡丹皮、桂枝、附子為關(guān)鍵詞進(jìn)行檢索，再利用口服生物利用度≥30%以及類(lèi)藥性≥0.18 進(jìn)一步篩選，獲取各藥中的潛在活性成分。同時(shí)通過(guò)TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)收集其蛋白靶點(diǎn)，借助UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)篩選與人相關(guān)蛋白靶點(diǎn)對(duì)其名稱(chēng)進(jìn)行規(guī)范。

1.2 疾病靶點(diǎn)的獲取通過(guò)The Human Gene Database（GeneCards）數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.genecards.org/）以及DRUGBANK 數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//go.drugbank.com/）檢索與PCOS、甲減相關(guān)的靶點(diǎn)，通過(guò)微生信在線工具（http：//www.bioinformatics.com.cn）繪制藥物和疾病靶點(diǎn)的韋恩圖并取交集。

1.3 金匱腎氣丸治療PCOS、甲減“藥物-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建將藥物靶點(diǎn)分別與PCOS 疾病靶點(diǎn)、甲減疾病靶點(diǎn)取交集，再將分別得到的交集靶點(diǎn)進(jìn)行匹配獲得金匱腎氣丸干預(yù)兩種疾病的共有靶點(diǎn)，導(dǎo)入Cytoscape 3.7.1構(gòu)建“藥物-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)。

1.4 金匱腎氣丸治療PCOS、甲減蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建將共有靶點(diǎn)輸入STRING 11.5 數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//string-db.org/），生物種類(lèi)“homo sapiens”，置信度“medium confidence（0.4）”，得到的數(shù)據(jù)導(dǎo)入Cytoscape構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)。

1.5 核心靶點(diǎn)篩選基因本體（GO）和京都基因和基因組數(shù)據(jù)庫(kù)（KEGG）富集分析利用R 包c(diǎn)luster-Profiler，org.HS.eg.db，enrichplot 包將基因Ensemble轉(zhuǎn)化為ID 形式，并對(duì)基因進(jìn)行GO 和KEGG 分析，通過(guò)ggplot2 包對(duì)結(jié)果進(jìn)行可視化。以P＜0.05 作為富集篩選條件。

1.6 分子對(duì)接對(duì)度（Degree）值排名前5的藥物分子和前20 的蛋白分子進(jìn)行分子對(duì)接分析。通過(guò)Pubchem 網(wǎng)站下載金匱腎氣丸藥物活性成分并保存為mol2 文件格式；Chem3D 19.0 對(duì)獲得的藥物化合物進(jìn)行能量最小化。PDB 數(shù)據(jù)庫(kù)中搜索靶點(diǎn)蛋白PDB ID，保留2D SDF 文件。通過(guò)SYBYL-X 2.0 軟件計(jì)算對(duì)接親和力的總分。親和力總分高于7.0 被認(rèn)為是高親和力表現(xiàn)，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行可視化。

2 結(jié)果

2.1 金匱腎氣丸活性成分及預(yù)測(cè)靶點(diǎn)通過(guò)檢索TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)篩選收集到金匱腎氣丸中8味中藥所含的活性化學(xué)成分共102 個(gè)，其中熟地黃2 個(gè)、山藥16 個(gè)、山茱萸20 個(gè)、茯苓15 個(gè)、澤瀉10 個(gè)、牡丹皮11個(gè)、桂枝7個(gè)、附子21個(gè)，去除重復(fù)值后共有92個(gè)活性成分，見(jiàn)表1。經(jīng)UniProt 數(shù)據(jù)庫(kù)標(biāo)準(zhǔn)化注釋并去重后得到196個(gè)基因靶點(diǎn)。

2.2 疾病靶點(diǎn)及共有靶點(diǎn)的預(yù)測(cè)以“Polycystic Ovary Syndrome、Hypothyroidism”為檢索詞利用DRUGBANK 進(jìn)行檢索分別獲得疾病靶點(diǎn)38、55 個(gè)，利用GeneCards（以relevance score，即前50%進(jìn)行篩選）分別獲得靶點(diǎn)2 510、2 455個(gè)。將藥物成分靶點(diǎn)分別與2 種疾病靶點(diǎn)進(jìn)行匹配，最終得到金匱腎氣丸與PCOS交集靶點(diǎn)101個(gè)，金匱腎氣丸與甲減交集靶點(diǎn)82個(gè)，三者共有靶點(diǎn)65個(gè)，通過(guò)Venn圖可視化展示，見(jiàn)圖1。

圖1 金匱腎氣丸“異病同治”多囊卵巢綜合征和甲狀腺功能減退藥物疾病靶點(diǎn)交集圖

2.3 “藥物-疾病-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建將金匱腎氣丸相關(guān)靶點(diǎn)信息導(dǎo)入Cytoscape 軟件構(gòu)建“藥物-疾病-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)，見(jiàn)圖2。分析結(jié)果顯示，網(wǎng)絡(luò)圖有114個(gè)節(jié)點(diǎn)，224 條邊、平均節(jié)點(diǎn)度值為15.57。根據(jù)度值的大小由高到低進(jìn)行排序，列出度值排名前5 名的藥物，見(jiàn)表2。為槲皮素、山柰酚、谷甾醇、β-谷甾醇和豆甾醇，其度值分別為63、23、18、14、9。

圖2 金匱腎氣丸“異病同治”多囊卵巢綜合征和甲狀腺功能減退“藥物-疾病-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖

表2 金匱腎氣丸“異病同治”多囊卵巢綜合征和甲狀腺功能減退度值排名前5的活性成分

2.4 PPI 網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建將三者共有靶點(diǎn)通過(guò)STRING 數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建PPI 網(wǎng)絡(luò)，再導(dǎo)入Cytoscape 軟件進(jìn)行可視化分析，見(jiàn)圖3。結(jié)果顯示，網(wǎng)絡(luò)圖有65個(gè)節(jié)點(diǎn)，918 條邊，平均節(jié)電度值為28.25。根據(jù)度值大小由高到低進(jìn)行排序，度值排名前20名的靶點(diǎn)有VEGFA、IL-6、TNF-α、Akt1、CASP-3、TP53、MMP-9、IL-1B、EGF、PPARG、CCL2、EGFR、ESR1、MYC、NOS3、IL-10、SERPINE1、PTEN、IFNG、HMOX1。這20 個(gè)靶蛋白是PPI 網(wǎng)絡(luò)核心節(jié)點(diǎn)，很可能是金匱腎氣丸干預(yù)PCOS及甲減的關(guān)鍵靶蛋白，見(jiàn)表3。

圖3 金匱腎氣丸“異病同治”多囊卵巢綜合征和甲狀腺功能減退藥物疾病靶點(diǎn)交集圖

表3 金匱腎氣丸“異病同治”多囊卵巢綜合征和甲狀腺功能減退核心靶點(diǎn)蛋白信息

2.5 GO 與KEGG 富集生物分析將65 個(gè)共有靶點(diǎn)利用R語(yǔ)言進(jìn)行GO富集分析得到生物過(guò)程2 126個(gè)，其中包括對(duì)激素的反應(yīng)、腺體發(fā)育、蛋白質(zhì)磷酸化的正調(diào)節(jié)等；分子功能120個(gè)，其中包括細(xì)胞因子受體結(jié)合、核受體活性等；細(xì)胞組成40個(gè)，其中包括膜筏、囊泡腔、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔等。根據(jù)-lgP值，對(duì)富集結(jié)果前20 條進(jìn)行可視化處理，見(jiàn)圖4A～4C。在KEGG富集分析結(jié)果中顯示篩選得到153 條信號(hào)通路，其中包括PI3K-Akt 信號(hào)通路、AGE-RAGE 信號(hào)通路、胰島素抵抗、JAK-STAT 信號(hào)通路等，根據(jù)每條通路的P值將排名前20 位的進(jìn)行可視化處理，見(jiàn)圖4D。同時(shí)分別研究金匱腎氣丸治療PCOS 與甲減的單獨(dú)作用通路，結(jié)果見(jiàn)表4?！爱惒⊥巍钡年P(guān)鍵通路富集到的基因，結(jié)果見(jiàn)表5。

圖4 金匱腎氣丸“異病同治”多囊卵巢綜合征和甲狀腺功能減退富集生物分析信息：A為生物過(guò)程基因本體（GO）結(jié)果；B為細(xì)胞組成GO結(jié)果；C為分子功能GO結(jié)果；D為京都基因和基因組數(shù)據(jù)庫(kù)（KEGG）結(jié)果

表4 金匱腎氣丸“異病同治”多囊卵巢綜合征和甲狀腺功能減退靶點(diǎn)的KEGG分析

表5 金匱腎氣丸“異病同治”多囊卵巢綜合征和甲狀腺功能減退關(guān)鍵通路的富集基因

2.6 分子對(duì)接選取核心靶點(diǎn)VEGFA、IL-6、TNFα、Akt1、CASP-3、TP53、MMP-9、IL-1B、EGF、PPARG與化合物分子槲皮素、山柰酚、谷甾醇、β-谷甾醇、豆甾醇進(jìn)行分子對(duì)接，結(jié)果見(jiàn)表6。通常情況下，配體與受體之間的結(jié)合能越低，二者之間越有可能發(fā)生作用，結(jié)合能＜-20.929 3 kJ/mol 表示化合物與蛋白結(jié)合較好。分子對(duì)接結(jié)果顯示，IL-6 與β-谷甾醇結(jié)合效果最好，IFNG 與β-谷甾醇結(jié)合效果次之，IFNG與豆甾醇結(jié)合效果較好。關(guān)鍵化合物與核心靶蛋白分子對(duì)接模式圖，見(jiàn)圖5。

圖5 金匱腎氣丸“異病同治”多囊卵巢綜合征和甲狀腺功能減退關(guān)鍵化合物與核心靶蛋白分子對(duì)接模式圖

表6 金匱腎氣丸“異病同治”多囊卵巢綜合征和甲狀腺功能減退關(guān)鍵化合物與核心靶蛋白分子對(duì)接表

3 討論

近年來(lái)PCOS、甲減的發(fā)病率逐年上升，其均有病程遷延、反復(fù)發(fā)作，且遠(yuǎn)期并發(fā)癥多的發(fā)病特點(diǎn)，不僅影響病人身體健康，而且也加重了家庭及社會(huì)的負(fù)擔(dān)。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)多通過(guò)替代療法等維持人體內(nèi)分泌水平穩(wěn)定或調(diào)整月經(jīng)周期，但長(zhǎng)期使用存在一定的依賴(lài)性及并發(fā)癥。通過(guò)中醫(yī)辨證論治的理論，認(rèn)為兩者在病因病機(jī)上均與腎精虧虛、腎陽(yáng)不足有關(guān)，且金匱腎氣丸是中醫(yī)經(jīng)典名方，全方諸藥合用共奏補(bǔ)腎益精、陰中求陽(yáng)的功效。所以本研究基于“異病同治”理論，結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，從金匱腎氣丸治療PCOS、甲減的有效成分及共同靶點(diǎn)出發(fā)，初步探討其發(fā)揮作用的機(jī)制。

研究通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法篩選得到金匱腎氣丸有效活性成分92 種，其中靶點(diǎn)較多的有槲皮素、山柰酚、谷甾醇、β-谷甾醇、豆甾醇，其中槲皮素是一種在植物中廣泛存在的黃酮類(lèi)化合物，其具有抗氧化、抗炎、免疫調(diào)節(jié)等多種藥理活性［10-12］，王針織［13］研究發(fā)現(xiàn)槲皮素可以增加PCOS 模型大鼠正常卵泡及黃體的數(shù)量，同時(shí)改善卵巢局部微環(huán)境以達(dá)到治療PCOS 的作用，槲皮素也可以上調(diào)小鼠血漿3，5，3′-三碘甲腺原氨酸（T3）及甲狀腺素（T4）水平，并下調(diào)促甲狀腺素水平。山柰酚有抗氧化、抗炎、抑制脂肪生成［14］和促進(jìn)胰腺β 細(xì)胞［15］的作用。研究發(fā)現(xiàn)，其可以通過(guò)介導(dǎo)胰島素受體底物-1（IRS-1）、IkB激酶α（IKKα）和IkB 激酶β（IKKβ）的磷酸化，來(lái)改善胰島素抵抗導(dǎo)致的胰島素信號(hào)缺陷［16］。β-谷甾醇主要發(fā)揮抗炎、抗氧化、降脂、調(diào)節(jié)免疫、抗衰老等作用。研究發(fā)現(xiàn)β-谷甾醇可能通過(guò)PI3K/Akt 信號(hào)通路來(lái)調(diào)節(jié)顆粒細(xì)胞增殖，抑制凋亡，進(jìn)而促進(jìn)雌激素的分泌［17］，β-谷甾醇、豆甾醇作為甾醇成分也可通過(guò)與膽固醇競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合位點(diǎn)［18］，也可以減少膽固醇、脂質(zhì)的吸收與再吸收［19］，減少代謝綜合征的發(fā)生，豆甾醇也同時(shí)具有抗分解代謝特性，能夠改善甲減病人脂代謝等功能。

PPI 網(wǎng)絡(luò)分析顯示金匱腎氣丸通過(guò)復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)調(diào)控疾病，其中IL-6 是一種常見(jiàn)的炎癥因子，與人類(lèi)的生殖生理密切相關(guān)，Salvi 等［20］證實(shí)，甲狀腺細(xì)胞表面含有IL-6 受體（IL-6R），研究發(fā)現(xiàn)IL-6、白細(xì)胞介素-8（IL-8）等可能參與亞臨床甲減的病理生理過(guò)程［21］，同時(shí)在PCOS 病人顆粒細(xì)胞中IL-6 的表達(dá)也會(huì)明顯升高［22］。TNF-α 也是一種炎癥介質(zhì)，在原發(fā)性甲減病人外周血中TNF-α 表達(dá)明顯升高，且與疾病嚴(yán)重程度有關(guān)［23］，研究也發(fā)現(xiàn)在PCOS病人TNF-α基因rs4645843位點(diǎn)CC 基因型和C等位基因頻率明顯上升［24］，同時(shí)在大鼠模型中也發(fā)現(xiàn)血清TNF-α 水平和血清睪酮水平呈正相關(guān)。MMP-9 是MMP 家族的一員，可以通過(guò)降解、重塑細(xì)胞內(nèi)外基質(zhì)中的多種成分，研究發(fā)現(xiàn)PCOS 病人血清中MMP-9 水平與雄激素、黃體生成素呈正相關(guān)，這多與卵巢皮質(zhì)分解增多有關(guān)；同時(shí)也發(fā)現(xiàn)MMP-9 通過(guò)破壞基底膜、促進(jìn)新生血管生成等，致卵巢、甲狀腺腫瘤浸潤(rùn)及發(fā)生腺外侵犯。EGF 是表皮生長(zhǎng)因子家族成員，在甲狀腺濾泡表皮細(xì)胞中有所分布，不僅介導(dǎo)調(diào)節(jié)甲狀腺組織增殖，也影響著胚泡著床，研究還發(fā)現(xiàn)PCOS 病人血HB-EGF 表達(dá)水平高于卵巢囊腫組［25］。PPARG 是一種重要的代謝性核受體轉(zhuǎn)錄因子，參與并調(diào)控脂肪細(xì)胞分化和脂代謝，研究發(fā)現(xiàn)甲減病人脂質(zhì)代謝障礙會(huì)更嚴(yán)重，同時(shí)通過(guò)臨床研究發(fā)現(xiàn)PCOS 病人中肥胖或超重的比例明顯增加，且PPARG 基因rs3856806 位點(diǎn)在相加模型條件下與PCOS的發(fā)生有關(guān)聯(lián)［26］。

KEGG 通路分析結(jié)果得知，金匱腎氣丸對(duì)機(jī)體多條信號(hào)通路都具有調(diào)控作用。其中AGE-RAGE信號(hào)通路參與氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，研究發(fā)現(xiàn)PCOS婦女的血清AGEs水平明顯高于非PCOS，AGEs也而會(huì)干擾各種細(xì)胞的胰島素受體信號(hào)通路［27］，誘導(dǎo)胰島素抵抗的發(fā)生，同時(shí)也有研究顯示胰島素抵抗會(huì)進(jìn)一步導(dǎo)致甲狀腺組織增生［28］。PI3K-Akt 信號(hào)通路參與細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)等過(guò)程，控制各種癌癥發(fā)生與進(jìn)展，其中甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞的存活率的與甲減的發(fā)生密切相關(guān)，康春嵋等［29］研究發(fā)現(xiàn)艾灸通過(guò)激活PI3K-Akt 通路，改善甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞的凋亡，從而對(duì)甲減起到了治療作用，同時(shí)下丘腦PI3K 異常是PCOS 病人胰島素抵抗及排卵減少的重要機(jī)制，沈凌宇等［30］研究發(fā)現(xiàn)針灸通過(guò)調(diào)節(jié)下丘腦PI3K通路來(lái)改善局部微炎癥，從而對(duì)PCOS 合并胰島素抵抗大鼠起到治療作用。JAKSTAT信號(hào)通路是細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和凋亡等一系列生理反應(yīng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，研究發(fā)現(xiàn)在甲狀腺癌及卵巢癌中均有STAT3、STAT5 持續(xù)性激活誘導(dǎo)的相應(yīng)蛋白高表達(dá)［31-32］。PPAR 信號(hào)通路主要涉及血脂、血糖的代謝，其中以PPAR-α 分布最為廣泛［33］，通過(guò)調(diào)節(jié)脂蛋白的水平、介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)膽固醇的代謝等過(guò)程來(lái)促進(jìn)脂質(zhì)代謝，從而減少代謝綜合征的發(fā)生。

綜上所述，金匱腎氣丸通過(guò)抑制炎癥反應(yīng)、調(diào)控細(xì)胞凋亡、胰島素抵抗等多靶點(diǎn)、多途徑發(fā)揮“異病同治”的作用，對(duì)既往文獻(xiàn)整理發(fā)現(xiàn)金匱腎氣丸治療PCOS、甲減的療效確切，相關(guān)機(jī)制研究結(jié)果與本次網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)結(jié)果相似，進(jìn)一步說(shuō)明了預(yù)測(cè)的可靠性，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究提供思路和依據(jù)。

（本文圖1～3見(jiàn)插圖3-1，圖4，5見(jiàn)插圖3-2）