劉德軍, 羅偉光

(河南省人民醫(yī)院檢驗科 鄭州大學(xué)人民醫(yī)院,鄭州 450003)

強(qiáng)直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)是一種慢性炎性自身免疫性疾病,主要影響脊柱關(guān)節(jié)、骶髂關(guān)節(jié)及關(guān)節(jié)附件組織[1]。在病情持續(xù)發(fā)展的情況下,持續(xù)慢性炎癥引起關(guān)節(jié)組織纖維化和鈣化,進(jìn)而導(dǎo)致關(guān)節(jié)強(qiáng)直及融合。AS的主要臨床表現(xiàn)包括腰背痛和進(jìn)行性脊柱僵硬,發(fā)病后期典型表現(xiàn)為骶髂關(guān)節(jié)破壞,脊柱呈“竹節(jié)樣”改變[2-3]。AS發(fā)病隱匿,早期癥狀不典型,因此早期診斷對AS的治療和預(yù)后具有重要意義。AS的病因復(fù)雜,目前有研究[4]表明,與遺傳背景,免疫反應(yīng),微生物感染和內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)都有密切的關(guān)系。主要的組織相容性復(fù)合體(MHC)I類等位基因人類白細(xì)胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)B27(HLA-B27)是最早報道與AS相關(guān)的等位基因,盡管發(fā)病機(jī)制尚不清楚,但HLA-B27與AS患病密切相關(guān)[5]。有研究[6]表明,90%～95%的AS患者HLA-B27為陽性。C反應(yīng)蛋白(CRP)、抗鏈球菌溶血素O(ASO)、類風(fēng)濕因子(RF)及紅細(xì)胞沉降率(ESR)是臨床常見的免疫炎癥診斷指標(biāo)。本研究回顧性分析AS患者的HLA-B27 核酸及炎癥指標(biāo)(CRP、ASO、RF及ESR)水平,探究其在AS早期診斷中的應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.2 方法

1.2.1 HLA-B27核酸檢測 一次性無菌EDTA抗凝管采集靜脈血2 mL,使用默樂生物技術(shù)有限公司人類HLA-B27 核酸檢測試劑盒進(jìn)行外周血DNA提取及HLA-B27檢測。擴(kuò)增參數(shù):95 ℃ 2 min,循環(huán)1 次;94 ℃ 10 s,59℃ 45 s,循環(huán)40次。結(jié)果使用ABI7500 型實時熒光定量PCR 儀進(jìn)行定性分析,擴(kuò)增曲線CT值<40為陽性,>40為陰性。

1.2.2 CRP、ASO、RF檢測 所有研究對象均抽取空腹外周靜脈血3 mL,分離血清后由羅氏診斷公司生產(chǎn)的CRP、ASO、RF定量試劑盒在COBAS C701 模塊生化分析儀中進(jìn)行檢測,其參考范圍分別為:ASO 17.2～243.7 IU·mL-1, RF 0～20 IU·mL-1, CRP 0～10 mg·L-1。

1.2.3 ESR檢測 采集靜脈血2 mL,注入枸櫞酸鈉抗凝紅細(xì)胞沉降率(ESR)管,用于檢測ESR 值,其參考范圍為:50歲以下,女性0～34 mm·h-1,男性0～20 mm·h-1;50歲以上,女性0～40 mm·h-1,男性0～28 mm·h-1。

2 結(jié)果

表1 2組研究參與者HLA-B27陽性率比較(n)

2.2 2組研究參與者CRP、ASO、RF、 ESR水平比較 AS組CRP及ESR水平均高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)。2組研究參與者ASO和RF水平比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 2組研究參與者CRP、ASO、RF、ESR水平比較

2.3 HLA-B27、CRP和ESR在AS中的診斷價值分析 以AS作為陽性診斷繪制ROC曲線(圖1-2)。HLA-B27對AS的診斷靈敏度為93.02%,特異度為94.45%,曲線下面積(AUC)為0.937(95%CI:0.890～0.985,P=0.006);CRP對AS的診斷cut off值為5.473 mg·L-1,其靈敏度為75.68%,特異度為83.34%,AUC為0.898(95%CI:0.849～0.948);ESR對AS的診斷cut off值為15.5 mm·h-1,其靈敏度為75.58%,特異度為98.01%,AUC為0.837(95%CI:0.772～0.903); 3者聯(lián)合診斷AS的靈敏度為97.67%,特異度為94.46%,AUC為0.99(95%CI:0.978～1.000)。見表3。

圖1 HLA-B27、CRP和ESR診斷AS的ROC曲線

圖2 CRP、ESR和三者聯(lián)合的ROC曲線坐標(biāo)圖

表3 HLA-B27、CRP和ESR在AS中的診斷價值分析

3 討論

AS是一種由眾多因素導(dǎo)致的自身免疫性疾病,主要以脊柱關(guān)節(jié)炎和骶髂關(guān)節(jié)炎為特征,可引起關(guān)節(jié)疼痛及僵硬,導(dǎo)致關(guān)節(jié)破壞和融合,嚴(yán)重者影響患者的生存質(zhì)量[7],因此早期明確診斷具有重要意義。HLA-B27是一種I類MHC分子,在所有核細(xì)胞和血小板上均有表達(dá),其功能是向細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)表面的T細(xì)胞受體(TCR)呈遞抗原表位,還能與自然殺傷細(xì)胞、粒細(xì)胞表面受體結(jié)合,參與多種炎癥反應(yīng),是AS易感的重要基因[8]。以往研究[9]結(jié)果表明,HLA-B27在AS患者的陽性率大于90%,而在正常健康人群中的陽性率為3%～5%,是臨床AS診斷的重要實驗室指標(biāo)。在本研究中,AS患者的HLA-B27陽性率為90.1%,正常人群中AS的陽性率為6%,與以往研究[10-11]報道結(jié)果一致。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),HLA-B27對AS的診斷靈敏度和特異度分別為93.02%和94.45%。雖然AS患者中HLA-B27的陽性率較高,但尚未作為AS診斷的標(biāo)準(zhǔn),因此聯(lián)合炎癥指標(biāo)有利于AS的準(zhǔn)確診斷。

CRP是一種肝臟合成的非特異性急性時相反應(yīng)蛋白,具有激活補(bǔ)體并促進(jìn)細(xì)胞吞噬的功能。當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)組織損傷、病原菌感染或自身免疫性炎癥時CRP會明顯升高[12]。CRP的水平變化常常較癥狀提早出現(xiàn),其水平升高則預(yù)示著機(jī)體存在炎癥反應(yīng)。在本研究中CRP在AS組的水平高于對照組,在cut off值為5.473 mg·L-1時,對AS的診斷效能最大,其敏感度和特異度分別為75.68%和83.34%。ESR的水平變化與炎癥和組織損傷相關(guān)[13]。本研究結(jié)果表明,AS患者組中的ESR 水平高于對照組,在cut off值為15.5 mm·h-1時,對AS的診斷效能最大,其敏感度和特異度分別為75.58%和98.01%。以上研究結(jié)果表明,CRP 能反映AS 患者體內(nèi)的炎癥反應(yīng),與黃藝虹[14]研究結(jié)果相一致。AS患者中存在不同程度的炎癥反應(yīng),CRP和ESR的水平能夠反映機(jī)體中的炎癥程度,因此可作為AS患者炎癥反應(yīng)的篩查指標(biāo)。

HLA-B27是AS的易感基因,但是HLA-B27陽性人群不一定患病,CRP、ESR水平的變化可以作為炎癥反應(yīng)程度的指標(biāo), CRP、ESR 與HLA-B27聯(lián)合檢測對AS 的診斷效能更高,可以用于輔助AS的早期診斷,有益于AS的早期治療。