張慧慈，商慶新

（1.山東中醫(yī)藥大學(xué)，濟(jì)南 250355；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)診斷學(xué)教研室，濟(jì)南 250355）

乳腺癌是導(dǎo)致女性死亡的第二大惡性腫瘤，手術(shù)切除、放射治療、靶向技術(shù)等已成功應(yīng)用，但不良反應(yīng)較大，因而尋找安全有效的藥物具有重要意義[1]。中藥在乳腺癌等多種疾病中發(fā)揮重要作用，并可改善患者預(yù)后[2]。白細(xì)胞介素-6（IL-6）是一種具有多效活性的細(xì)胞因子，在炎癥向腫瘤轉(zhuǎn)化過程中具有促進(jìn)作用[3]。IL-6 可由腫瘤微環(huán)境中的間質(zhì)細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞本身分泌，是腫瘤微環(huán)境中間質(zhì)細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞之間“相互交流”的重要媒介[4]。Gprc5a-ko 小鼠中高水平的IL-6 可重新編程腫瘤基因表達(dá)從而促進(jìn)乳腺癌的肺轉(zhuǎn)移[5]。同時，IL-6 加劇了乳腺癌細(xì)胞的增殖和侵襲[6-7]。這提示了IL-6 與腫瘤細(xì)胞的惡性行為是相互促進(jìn)、相互依存的?？疃▽儆诰湛浦参锟疃母稍锘ɡ?，具有抗白血病、抗腫瘤和增強(qiáng)機(jī)體免疫力的作用[8]。此外，款冬花多糖可抑制食管癌細(xì)胞的增殖和侵襲[9]。然而，尚未知款冬花多糖對乳腺癌細(xì)胞的影響，以及否它可以參與IL-6 誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為。

微小RNA（miRNA）屬于非編碼RNA 小分子，可調(diào)控mRNA 降解和翻譯抑制通過特異性識別和結(jié)合靶基因3’UTR，進(jìn)而調(diào)控腫瘤發(fā)展。miR-889-3p 上調(diào)限制宮頸癌細(xì)胞增殖和遷移[10]。starBase 網(wǎng)站預(yù)測miR-889-3p 與Toll 樣受體4（TLR4）存在結(jié)合位點，而TLR4 促進(jìn)了乳腺癌惡性表型[11]，但尚未未知miR-889-3p/TLR4 在乳腺癌中的作用機(jī)制。文章通過體外培養(yǎng)IL-6 誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞，探討款冬花多糖聯(lián)合miR-889-3p/TLR4 調(diào)控軸對乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的影響。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑 重組人IL-6、RNA 提取試劑盒與cDNA 合成試劑盒購自上海碧云天生物；款冬花購自亳州市佰林堂藥業(yè)有限公司；SYBR Green 試劑盒購自北京天根生化；SDS-PAGE 凝膠制備試劑、ECL 化學(xué)發(fā)光試劑購自武漢博士德；人乳腺癌細(xì)胞MCF-7 購自美國ATCC；LipofectamineTM 3000 購自美國Invitrogen；兔抗人TLR4 抗體與HRP 標(biāo)記的山羊抗兔免疫球蛋白（IgG）二抗購自美國Abcam 公司；美國Promega 公司設(shè)計構(gòu)建野生型載體WTTLR4 與突變型載體MUT-TLR4；miR-889-3p 模擬物（miR -889 -3p mimics）、miR -889 -3p 抑制物（miR -889 -3p -inhibitors） 及陰性對照mimic NC（miR-NC）、inhibitor NC 序列（NC-inhibitor）購自廣州銳博生物公司；噻唑藍(lán)（MTT）、Matrigel 基質(zhì)膠購自北京索萊寶公司；兔抗人基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）-2、MMP-9 抗體購自美國CST 公司。

1.2 方法

1.2.1 提取款冬花多糖[8]款冬花磨碎成粉末，取60 目篩篩選款冬花粉末，按照1∶27 比例加入95%乙醇脫脂，加入一定劑量水超聲浸提脫脂后的粉末，68 ℃提取36 min，提取3 次，收集并合并3 次濾液，濃縮后去除蛋白，醇沉、抽濾后依次用無水乙醇、丙酮、乙醚清洗，真空干燥后得到款冬花多糖，用苯酚-硫酸法檢測款冬花多糖的提取率（2.01%），用培養(yǎng)基稀釋款冬花多糖作為實驗濃度：20、40、80 mg/L。

1.2.2 實驗處理及分組 25 ng/mL 的IL-6 處理24 h[12]，記為IL-6 組。經(jīng)20、40、80 mg/L 的款冬花多糖與IL-6 處理24 h，記為IL-6+款冬花多糖20 mg/L組、IL-6+款冬花多糖40 mg/L 組、IL-6+款冬花多糖80 mg/L 組。轉(zhuǎn)染miR-NC（5’-UUCUCCGAACGUG UCACGUTT-3’）、miR-889-3p mimics（5’-TTAATA TCGGACAACCATTGT-3’）25 ng/mL IL-6 處理，記為IL-6+miR-NC 組、IL-6+miR-889-3p 組。轉(zhuǎn)染NC-inhibitor（5’-CAGUACUUUUGUGUAGUACAA-3’）、miR-889-3p-inhibitors（5’-ACAATGGTTGTCC GATATTAA-3’）80 mg/L 款冬花多糖與25 ng/mL IL-6 處理24 h，分別記為IL-6+款冬花多糖80 mg/L+NC-inhibitor 組、IL-6+款冬花多糖80 mg/L+miR-889-3p-inhibitors 組。

1.2.3 MTT 檢測細(xì)胞增殖 每孔加入20 μL MTT溶液，2～4 h 后，加入150 μL DMSO，直至孔中甲臜溶解，應(yīng)用酶標(biāo)儀分析樣品（OD 490 nm）。

1.2.4 平板克隆形成實驗 MCF-7 細(xì)胞（500 個/孔），于37 ℃培養(yǎng)14 d，棄培養(yǎng)基。500 μL 甲醇固定20 min，1%結(jié)晶紫染色15 min 后，用相機(jī)對每孔進(jìn)行單獨拍照。

1.2.5 TranswellTM實驗 遷移實驗：不含血清的培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞，（5×104）個加入小室的上室，下室加入含10%胎牛血清培養(yǎng)液，于37 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h，取出小室，將上室內(nèi)的細(xì)胞擦去，多聚甲醛固定30 min，0.1%結(jié)晶紫染液染色20 min，用棉簽輕輕擦拭小室的上側(cè)，顯微鏡下統(tǒng)計遷移細(xì)胞數(shù)。侵襲實驗：將Matrigel 基質(zhì)膠涂于上室聚碳酸酯膜表面，隨后1×105細(xì)胞被加入這個上室中，后續(xù)實驗步驟同遷移實驗。（放大倍數(shù)，200×）

1.2.6 實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR） 1×107個細(xì)胞經(jīng)1 mL Trizol 試劑裂解液裂解細(xì)胞后，參照BeyoRTTM ⅡcDNA 試劑盒合成cDNA。取50 ng cDNA 利用SuperReal 熒光定量預(yù)混試劑盒進(jìn)行基因表達(dá)定量分析。采用2-ΔΔCt法計算miR-889-3p、TLR4 mRNA 表達(dá)。

1.2.7 雙熒光素酶報告實驗驗證miR-889-3p 對TLR4 的靶向調(diào)控 構(gòu)建野生型載體WT-TLR4、突變型載體MUT-TLR4 熒光素酶表達(dá)載體后，與miR-NC、miR-889-3p mimics 共轉(zhuǎn)染至MCF-7 細(xì)胞，檢測其熒光素酶活性。轉(zhuǎn)染miR-NC、miR-889-3p mimics、NC-inhibitor、miR-889-3p-inhibitors 至MCF-7 細(xì)胞后，蛋白免疫印跡（Western blot）法檢測TLR4 蛋白表達(dá)。

1.2.8 Western blot 加入蛋白裂解液提取總蛋白后，對樣品統(tǒng)一定量并上樣，在目的蛋白泳動到膠下緣停止電泳，將分離的蛋白凝膠轉(zhuǎn)移至PVDF 膜，將膜從電轉(zhuǎn)槽取出浸沒于封閉液2 h，分別加入TLR4、MMP-2、MMP-9、GAPDH 抗體孵育過夜，和二抗稀釋液孵育1 h，用ECL 試劑進(jìn)行發(fā)光鑒定。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS21.0 統(tǒng)計學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，且均符合正態(tài)分布，兩組間比較采用獨立樣本t 檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，多組間兩兩比較采用LSD-t 檢驗。P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 款冬花多糖對IL-6 誘導(dǎo)的MCF-7 細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的影響 與對照組比較，IL-6 組細(xì)胞增殖率升高，克隆形成數(shù)、遷移及侵襲細(xì)胞數(shù)增多，MMP-2、MMP-9 蛋白水平升高（P＜0.05）；與IL-6 組比較，IL-6+款冬花多糖20 mg/L 組、IL-6+款冬花多糖40 mg/L 組、IL-6+款冬花多糖80 mg/L 組細(xì)胞增殖率降低，克隆形成數(shù)、遷移及侵襲細(xì)胞數(shù)減少，MMP-2、MMP-9 蛋白水平降低（P＜0.05）。見圖1、圖2、表1。

圖1 Western blot 法檢測MMP-2、MMP-9 蛋白表達(dá)量Fig.1 Detection of MMP-2 and MMP-9 protein expression by Western blot method

表1 款冬花多糖對IL-6 誘導(dǎo)的MCF-7 細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的影響（±s，n=9）Tab.1 Effects of polysaccharides from Tussilago farfara on IL-6-induced proliferation，migration and invasion of MCF-7 cells（±s，n=9）

表1 款冬花多糖對IL-6 誘導(dǎo)的MCF-7 細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的影響（±s，n=9）Tab.1 Effects of polysaccharides from Tussilago farfara on IL-6-induced proliferation，migration and invasion of MCF-7 cells（±s，n=9）

注：與對照組比較，*P＜0.05；與IL-6 組比較，#P＜0.05；與IL-6+款冬花多糖20 mg/L 組比較，△P＜0.05；與IL-6+款冬花多糖40 mg/L 組比較，▽P＜0.05。

組別 增殖率（%） 克隆形成數(shù)（個） 遷移細(xì)胞數(shù)（個） 侵襲細(xì)胞數(shù)（個） MMP-2 MMP-9對照組 0.00± 0.00 55.11±8.49 83.78± 2.22 75.44± 3.50 0.44±0.05 0.35±0.04 IL-6 組 211.12±18.62* 154.11±7.10* 210.56±11.95* 223.67±17.37* 0.95±0.06* 0.94±0.03*IL-6+款冬花多糖20 mg/L 組 143.41±11.65# 112.89±8.22# 176.44± 3.97# 181.56± 4.61# 0.73±0.02# 0.74±0.05#IL-6+款冬花多糖40 mg/L 組 54.67± 8.78#△ 94.44±1.94#△ 153.33± 8.32#△ 158.33± 5.07#△ 0.64±0.03#△ 0.62±0.02#△IL-6+款冬花多糖80 mg/L 組 25.01± 7.07#△▽ 73.11±2.42#△▽ 103.89± 2.09#△▽ 118.44±10.22#△▽ 0.54±0.03#△▽ 0.51±0.02#△▽

2.2 款冬花多糖對IL-6 誘導(dǎo)的MCF-7 細(xì)胞中miR-889-3p 與TLR4 表達(dá)量的影響 IL-6 處理抑制miR-889-3p 表達(dá)，促進(jìn)TLR4 表達(dá)（P＜0.05）；而與IL-6 組比較，IL-6+款冬花多糖20 mg/L 組、IL-6+款冬花多糖40 mg/L 組、IL-6+款冬花多糖80 mg/L組miR-889-3p 的表達(dá)量升高，TLR4 的表達(dá)量降低（P＜0.05）。見圖3、表2。

圖3 Western blot 法檢測TLR4 蛋白表達(dá)量Fig.3 Detection of TLR4 protein expression Western blot method

表2 款冬花多糖對IL-6 誘導(dǎo)的MCF-7 細(xì)胞中miR-889-3p 與TLR4 表達(dá)量的影響（±s，n=9）Tab.2 Effects of polysaccharides from Tussilago farfara on IL-6-induced expression of miR-889-3p and TLR4 in MCF-7 cells（±s，n=9）

表2 款冬花多糖對IL-6 誘導(dǎo)的MCF-7 細(xì)胞中miR-889-3p 與TLR4 表達(dá)量的影響（±s，n=9）Tab.2 Effects of polysaccharides from Tussilago farfara on IL-6-induced expression of miR-889-3p and TLR4 in MCF-7 cells（±s，n=9）

注：與對照組比較，*P＜0.05；與IL-6 組比較，#P＜0.05；與IL-6+款冬花多糖20 mg/L 組比較，△P＜0.05；與IL-6+款冬花多糖40 mg/L組比較，▽P＜0.05。

?組別 miR-889-3p TLR4 mRNA TLR4 蛋白對照組 1.00±0.06 1.00±0.03 0.29±0.06 IL-6 組 0.21±0.01* 4.19±0.14* 0.92±0.04*IL-6+款冬花多糖20 mg/L 組 0.44±0.02# 3.17±0.11# 0.72±0.02#IL-6+款冬花多糖40 mg/L 組 0.66±0.04#△ 2.08±0.07#△ 0.58±0.04#△IL-6+款冬花多糖80 mg/L 組 0.82±0.05#△▽ 1.30±0.05#△▽ 0.44±0.04#△▽

2.3 雙熒光素酶報告實驗驗證miR-889-3p 與TLR4 的靶向調(diào)控作用 starBase 預(yù)測顯示miR-889-3p 與TLR4 存在結(jié)合位點，見圖4A。miR-889-3p 轉(zhuǎn)染抑制細(xì)胞的熒光素酶活性（P＜0.05）；共轉(zhuǎn)染突變型載體MUT-TLR4 的MCF-7 細(xì)胞實驗中，兩組熒光素酶活性差異無統(tǒng)計學(xué)意義。見圖4B。與miR-NC 組比較，miR-889-3p 組TLR4 蛋白水平降低（P＜0.05）；與NC-inhibitor 組比較，miR-889-3pinhibitors 組TLR4 蛋白水平升高（P＜0.05）。見圖4C。

圖4 雙熒光素酶報告實驗驗證miR-889-3p 與TLR4 的靶向調(diào)控作用Fig.4 Validation of targeted regulation of miR-889-3p with TLR4 by Dual luciferase reporter assay

2.4 miR-889-3p 過表達(dá)對IL-6 誘導(dǎo)的MCF-7 細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的影響 與IL-6+miR-NC 組比較，IL-6+miR-889-3p 組TLR4 蛋白水平降低，細(xì)胞增殖率降低，克隆形成數(shù)、遷移及侵襲細(xì)胞數(shù)減少，MMP-2、MMP-9 蛋白水平降低（P＜0.05）。見圖5、圖6、表3。

圖5 Western blot 法檢測TLR4、MMP-2、MMP-9 蛋白表達(dá)量Fig.5 Detection of TLR4，MMP -2，and MMP -9 protein expression by Western blot method

圖6 miR-889-3p 過表達(dá)對IL-6 誘導(dǎo)的MCF-7 細(xì)胞增殖、遷移及侵襲影響的細(xì)胞圖Fig.6 Cytological map of effect of miR-889-3p overexpression on IL-6-induced proliferation, migration and invasion of MCF-7 cell

表3 miR-889-3p 過表達(dá)對IL-6 誘導(dǎo)的MCF-7 細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的影響（±s，n=9）Tab.3 Effect of miR-889-3p overexpression on IL-6-induced proliferation，migration and invasion of MCF-7 cells（±s，n=9）

表3 miR-889-3p 過表達(dá)對IL-6 誘導(dǎo)的MCF-7 細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的影響（±s，n=9）Tab.3 Effect of miR-889-3p overexpression on IL-6-induced proliferation，migration and invasion of MCF-7 cells（±s，n=9）

注：與IL-6+miR-NC 組比較，*P＜0.05。

組別 miR-889-3p TLR4 蛋白 增殖率（%）克隆形成數(shù)（個）遷移細(xì)胞數(shù)（個）侵襲細(xì)胞數(shù)（個） MMP-2 MMP-9 IL-6+miR-NC 1.00±0.06 0.91±0.03 210.77±24.55 153.89±5.37 210.67±7.60 223.56±18.72 0.94±0.03 0.94±0.02 IL-6+miR-889-3p 2.20±0.09* 0.61±0.04* 88.14±12.19* 92.89±3.92* 156.78±8.66* 155.44± 9.68* 0.62±0.04* 0.58±0.04*

2.5 抑制miR-889-3p 表達(dá)可降低款冬花多糖對IL-6 誘導(dǎo)的MCF-7 細(xì)胞增殖的抑制作用 IL-6+款冬花多糖80 mg/L+NC-inhibitor 組、IL-6+款冬花多糖80 mg/L+miR-889-3p-inhibitors 組與IL-6+款冬花多糖80 mg/L+NC-inhibitor 組比較，IL-6+款冬花多糖80 mg/L+miR-889-3p-inhibitors 組TLR4 蛋白水平升高，細(xì)胞增殖率升高，克隆形成數(shù)增多（P＜0.05）。見圖7、圖8、表4。遷移及侵襲細(xì)胞數(shù)增多，MMP-2、MMP-9 蛋白水平升高（P＜0.05）。見圖9、圖10、表5。

圖7 Western blot 法檢測TLR4 蛋白表達(dá)量Fig.7 Detection of TLR4 protein expression by Western blot method

圖8 抑制miR-889-3p 表達(dá)對款冬花多糖引起IL-6誘導(dǎo)的MCF-7 細(xì)胞增殖抑制作用的細(xì)胞圖Fig.8 Gytological map of inhibitory effect of polysaccharides in Tussilago farfara on IL-6-induced proliferation of MCF-7 cells by inhibition of miR-889-3p expression

圖9 Western blot 法檢測MMP-2、MMP-9 蛋白表達(dá)量Fig.9 Detection of MMP-2 and MMP-9 protein expression

圖10 抑制miR-889-3p 表達(dá)對款冬花多糖引起IL-6誘導(dǎo)的MCF-7 細(xì)胞遷移及侵襲抑制作用Fig.10 Gytological map of inhibitory effect of polysaccharides in Tussilago farfara on IL-6-induced migration and invasion of MCF-7 cells by inhibition of miR-889-3p expression

表4 抑制miR-889-3p 表達(dá)對款冬花多糖引起IL-6誘導(dǎo)的MCF-7 細(xì)胞增殖抑制作用（±s，n=9）Tab.4 Inhibitory effect of polysaccharides in Tussilago farfara on IL-6-induced proliferation of MCF-7 cells by inhibition of miR-889-3p expression（±s，n=9）

表4 抑制miR-889-3p 表達(dá)對款冬花多糖引起IL-6誘導(dǎo)的MCF-7 細(xì)胞增殖抑制作用（±s，n=9）Tab.4 Inhibitory effect of polysaccharides in Tussilago farfara on IL-6-induced proliferation of MCF-7 cells by inhibition of miR-889-3p expression（±s，n=9）

注：與IL-6+款冬花多糖80 mg/L+NC-inhibitor 組比較，*P＜0.05。

克隆形成數(shù)（個）IL-6+款冬花多糖組別 miR-889-3p TLR4 蛋白 增殖率（%）1.00±0.05 0.45±0.05 25.22± 7.03 73.56±4.53 80 mg/L+NC-inhibitor IL-6+款冬花多糖80 mg/L+miR-889-3p-inhibitors 0.38±0.04* 0.78±0.04* 141.56±14.83* 123.78±3.27*

表5 抑制miR-889-3p 表達(dá)可對款冬花多糖引起IL-6 誘導(dǎo)的MCF-7 細(xì)胞遷移及侵襲抑制作用（±s，n=9）Tab.5 Inhibitory effect of polysaccharides in Tussilago farfara on IL-6-induced migration and invasion of MCF-7 cells by inhibition of miR-889-3p expression（±s，n=9）

表5 抑制miR-889-3p 表達(dá)可對款冬花多糖引起IL-6 誘導(dǎo)的MCF-7 細(xì)胞遷移及侵襲抑制作用（±s，n=9）Tab.5 Inhibitory effect of polysaccharides in Tussilago farfara on IL-6-induced migration and invasion of MCF-7 cells by inhibition of miR-889-3p expression（±s，n=9）

注：與IL-6+款冬花多糖80 mg/L+NC-inhibitor 組比較，*P＜0.05。

組別 遷移細(xì)胞數(shù)（個）侵襲細(xì)胞數(shù)（個） MMP-2 MMP-9 IL-6+款冬花多糖80 mg/L+NC-inhibitor 102.56±3.61 118.22±9.52 0.53±0.02 0.52±0.04 IL-6+款冬花多糖80 mg/L+miR-889-3p-inhibitors 171.56±9.99* 184.33±9.43* 0.79±0.03* 0.82±0.02*

3 討論

近年來，研究表明中藥可抑制乳腺癌細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)移，但作用機(jī)制仍需探究[13]。miRNA 作為一種進(jìn)化保守的小RNA 能夠通過和靶mRNA 堿基互補(bǔ)配對參與包括乳腺癌在內(nèi)的癌癥發(fā)展，研究指出miRNA 具有作為乳腺癌治療潛在靶點的潛力[14]。

款冬花多糖可通過抑制肺癌細(xì)胞增殖及促進(jìn)細(xì)胞凋亡從而發(fā)揮抗肺癌作用[15]。研究表明款冬花提取物還可抑制炎癥因子的釋放從而緩解病理過程[16]。本研究結(jié)果顯示，IL-6 誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞增殖率升高，克隆形成數(shù)增多，分析原因可能為由于炎癥反應(yīng)過于強(qiáng)烈或長期存在導(dǎo)致乳腺癌的發(fā)生，炎癥與腫瘤發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，同時炎癥反應(yīng)可能激活癌基因從而促使細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化進(jìn)而誘導(dǎo)腫瘤的發(fā)生，巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞等可產(chǎn)生IL-6，IL-6 可參與炎癥反應(yīng)而促進(jìn)免疫細(xì)胞增殖從而引起腫瘤的發(fā)生，因而抗IL-6 治療可能作為治療腫瘤的方法之一。本研究指出款冬花多糖能降低IL-6 誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞增殖率，克隆形成數(shù)、遷移及侵襲細(xì)胞數(shù)增加。MMP-2、MMP-9 屬于鋅依賴性內(nèi)肽酶家族成員，在轉(zhuǎn)移環(huán)境中能促使細(xì)胞轉(zhuǎn)移[17]。本文數(shù)據(jù)指出款冬花多糖處理能緩解IL-6 誘導(dǎo)的MMP-2、MMP-9 蛋白水平增加。以上結(jié)果表明款冬花多糖抑制IL-6 誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞增殖和運(yùn)動。但款冬花多糖影響IL-6 誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的分子機(jī)制尚需進(jìn)一步探究。

本研究發(fā)現(xiàn)IL-6 誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞中miR-889-3p 的表達(dá)量降低，而TLR4 的表達(dá)量升高，進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)隨著款冬花多糖作用劑量的增加，IL-6誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞中miR-889-3p 的表達(dá)量升高，TLR4 的表達(dá)量降低。研究表明miR-889-3p 在宮頸癌中表達(dá)下調(diào)，上調(diào)其表達(dá)可抑制宮頸癌發(fā)展進(jìn)程[18]。同時本研究證實miR-889-3p 可特異性結(jié)合TLR4 mRNA 的3’UTR 而抑制其表達(dá)。研究表明TLR4 表達(dá)異常與炎癥反應(yīng)有關(guān)，其與配體結(jié)合后可激活細(xì)胞核因子κB（NF-κB）通路從而促進(jìn)炎癥因子的轉(zhuǎn)錄進(jìn)而加重炎癥反應(yīng)，最終誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)移[19-20]。本研究結(jié)果顯示，miR-889-3p 靶向調(diào)控TLR4，miR-889-3p 過表達(dá)對IL-6 誘導(dǎo)的MCF-7 細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的影響具有抑制作用，抑制miR-889-3p 表達(dá)可降低款冬花多糖對IL-6誘導(dǎo)的MCF-7 細(xì)胞增殖的抑制作用。而且miR-889-3p 低表達(dá)能夠緩解款冬花多糖對IL-6 誘導(dǎo)的MCF-7 細(xì)胞遷移及侵襲的抑制。提示款冬花多糖可通過調(diào)控miR-889-3p/TLR4 軸發(fā)揮抗乳腺癌的作用。

綜上所述，IL-6 誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞中miR-889-3p 的表達(dá)量降低，而TLR4 的表達(dá)量升高，款冬花多糖可通過上調(diào)miR-889-3p 的表達(dá)而抑制TLR4產(chǎn)生進(jìn)而介導(dǎo)IL-6 誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞表型變化，本研究為款冬花多糖治療乳腺癌提供潛在靶點。