符小春,劉秀玲,王茹娜

(駐馬店市中心醫(yī)院 腫瘤婦科,河南 駐馬店 463000)

我國宮頸癌發(fā)病率、病死率高,大部分患者確診時(shí)已處于中晚期,臨床常采用同步放化療進(jìn)行治療,5 a生存率為60%～70%,但40%左右患者存在腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移[1-2]。血清因子水平已成為臨床病情評(píng)估、預(yù)測(cè)預(yù)后的重要手段,因而需尋找新型血清因子預(yù)測(cè)宮頸癌患者預(yù)后,有助于臨床調(diào)整治療方案。淋巴細(xì)胞/單核細(xì)胞比值(lymphocyte/monocyte ratio,LMR)降低與宮頸癌侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)[3]。微小RNA(microRNA,miRNA)可調(diào)控RNA轉(zhuǎn)錄水平功能,參與宮頸癌發(fā)生發(fā)展過程,研究表明微小RNA-21(microRNA-21,miR-21)表達(dá)異常與宮頸癌發(fā)病密切相關(guān)[4]。轉(zhuǎn)錄因子含同源結(jié)構(gòu)域蛋白同源盒(homeodomain-only protein homeobox,HOPX)與DNA靶定、細(xì)胞分化、蛋白復(fù)合體加工等有關(guān),其在腫瘤組織中表達(dá)量降低,可發(fā)揮抑制腫瘤作用[5]。目前LMR、miR-21、HOPX與宮頸癌同步放化療患者預(yù)后關(guān)系尚未明確,本研究主要探討LMR、miR-21、HOPX與瘤體體積變化參數(shù)關(guān)系,并分析其對(duì)預(yù)后的預(yù)測(cè)效能。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年6月至2022年3月醫(yī)院收治的108例接受同步放化療宮頸癌患者為研究對(duì)象,收集研究對(duì)象臨床資料,包括年齡、體重指數(shù)、生育史、Karnofsky功能狀態(tài)(Karnofky performance status,KPS)評(píng)分[6]、腫瘤家族史、宮頸癌浸潤深度、國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟FIGO分期、放療劑量、合并疾病。納入標(biāo)準(zhǔn):符合宮頸癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[7],且經(jīng)病理檢查確診為宮頸癌;首次接受同步放化療;無腹部手術(shù)史;無放化療病史;簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):已行宮頸癌根治術(shù);合并或繼發(fā)性宮頸癌;伴有血液系統(tǒng)相關(guān)疾病;對(duì)本研究所用藥物等過敏;合并嚴(yán)重感染性疾病;合并其他惡性腫瘤。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 治療方法

采用鉑類為基礎(chǔ)的同步化療聯(lián)合外照射(external beam radiotherapy,EBRT)、腔內(nèi)后裝治療(intracavitary brachytherapy,ICBT)為標(biāo)準(zhǔn)治療方式,EBRT選用適形調(diào)強(qiáng)放療(intensity- modulated radiotherapy,IMRT),依據(jù)治療前MRI、CT圖像由靶區(qū)勾畫系統(tǒng),定義腫瘤靶區(qū)、臨床靶區(qū)(clinical target volume,CTV)、計(jì)劃靶區(qū),使用劑量為45 Gy,每次1.8 Gy,每周5次;高劑量率近距離ICBT(HDR-ICBT)。靶區(qū)處方劑量:中危靶區(qū)每次CTV 5～6 Gy,高危靶區(qū)每次CTV 7 Gy,每周2次,共4次,并統(tǒng)計(jì)患者放療總劑量?；煼桨?順鉑(Hospira Australia PtyLtd,生產(chǎn)批號(hào)H20140372)75 mg·m-2,每3周使用1次,以21 d為1個(gè)周期,共化療3個(gè)周期。治療結(jié)束后通過電話、門診復(fù)查等方式進(jìn)行隨訪,隨訪時(shí)間為3個(gè)月,采用腹盆腔B超、MRI、胸片、婦科檢查等評(píng)估有無宮頸癌復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移征象,有宮頸癌復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移征象納入預(yù)后不良組,否則納入預(yù)后良好組。

1.3 血清LMR、miR-21、HOPX水平

研究對(duì)象分別于治療前、治療后14 d采集空腹肘靜脈血5 mL,以3 000 r·min-1離心處理10 min,獲得上清液。采用Coulter LH750型血常規(guī)自動(dòng)分析儀(美國貝克曼庫爾特公司)檢測(cè)淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、單核細(xì)胞計(jì)數(shù),并計(jì)算LMR。采用qRT-PCR法檢測(cè)miR-21、HOPXmRNA表達(dá)量:采用miRNA提取試劑盒(用于檢測(cè)miR-21)、Trizol試劑(用于檢測(cè)HOPXmRNA)分別提取血清總RNA,參照反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA,使用qRT-PCR試劑盒進(jìn)行擴(kuò)增,反應(yīng)體系為模板cDNA 2 μL,Real-Time Master Mix 10 μL,正反向引物各1 μL,RNase-Free ddH2O補(bǔ)足體系至20 μL;反應(yīng)條件為95 ℃2 min,95 ℃ 30 s,60 ℃ 30 s,72 ℃ 60 s(循環(huán)35次)。采用2-ΔΔCt法計(jì)算miR-21、HOPXmRNA表達(dá)量。所有引物均使用Primer 6.0設(shè)計(jì),委托上海生工生物公司合成。miR-21:F為5’-ACGTTGTGCAGCTTATCAGACTG-3’,R為5’-AATGGTTGTTCTCCACACTCTC-3’。HOPX:F為5’-CAGATCCGTCACAGACTAAG-3’;R為5’-GACTCAAAGGGAAATGCT-3’。

1.4 檢測(cè)瘤體縮減率(tumor volume reduction rate,TVRR)

治療前行MRI檢查,獲取治療前瘤體最大徑、瘤體體積,經(jīng)1.5 T MRI掃描,腫瘤呈現(xiàn)層厚5 mm圖像,MRI有效圖像定義為腫瘤T2加權(quán)高信號(hào)病灶且與附近組織分界清晰。由2名放療科醫(yī)師確定圖片中腫瘤區(qū)面積,全部腫瘤平面面積與層高乘積即為腫瘤體積,按照美國腫瘤放射治療協(xié)作組指南進(jìn)行瘤體勾畫,得到腫瘤體積數(shù)據(jù)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 臨床資料

預(yù)后不良組宮頸癌浸潤深度≥50%、FIGO分期Ⅳ期占比高于預(yù)后良好組(P<0.05),見表1。

表1 兩組臨床資料比較

2.2 血清LMR、miR-21、HOPX水平及TVRR

治療前兩組血清LMR、miR-21、HOPX水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后14 d兩組血清LMR水平、HOPXmRNA表達(dá)量高于治療前,miR-21表達(dá)量低于治療前;預(yù)后不良組治療后14 d血清LMR水平、HOPXmRNA低于預(yù)后良好組,miR-21表達(dá)量高于預(yù)后良好組(P<0.05)。治療后14 d,預(yù)后不良組TVRR(76.85±5.61)低于預(yù)后良好組(86.54±6.88),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=7.379,P<0.001)。見表2。

表2 兩組血清LMR、miR-21、HOPX水平及TVRR比較

2.3 血清各指標(biāo)與TVRR相關(guān)性分析

治療前血清LMR、HOPX與宮頸癌浸潤深度、FIGO分期呈負(fù)相關(guān),miR-21與宮頸癌浸潤深度、FIGO分期呈正相關(guān);治療后14 d血清LMR、HOPX與TVRR呈正相關(guān),miR-21與TVRR呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。見表3。

表3 血清各指標(biāo)與TVRR相關(guān)性分析

2.4 宮頸癌同步放化療患者預(yù)后影響因素的logistic回歸分析

以宮頸癌同步放化療患者預(yù)后為因變量(預(yù)后良好=0、預(yù)后不良=1),以前述單因素分析(表1、2)中P<0.05指標(biāo)/因素作為自變量,所有自變量均進(jìn)行兩分類轉(zhuǎn)化:連續(xù)數(shù)值指標(biāo)參考兩組均值進(jìn)行分層,回歸過程采用逐步后退法,以進(jìn)行自變量選擇、剔除?；貧w結(jié)果顯示,LMR、miR-21、HOPXmRNA與宮頸癌同步放化療患者預(yù)后相關(guān)(P<0.05),見表4、5。

表4 賦值情況

表5 宮頸癌同步放化療患者預(yù)后影響因素的logistic回歸分析

2.5 血清各指標(biāo)聯(lián)合預(yù)測(cè)預(yù)后的ROC分析

LMR、miR-21、HOPX對(duì)患者預(yù)后均有預(yù)測(cè)價(jià)值,且三者聯(lián)合預(yù)測(cè)價(jià)值最高(P<0.05),見表6。

表6 血清各指標(biāo)聯(lián)合預(yù)測(cè)預(yù)后的ROC分析

3 討論

宮頸癌發(fā)生發(fā)展與炎癥反應(yīng)、腫瘤細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移有關(guān),炎癥反應(yīng)可促進(jìn)中性粒細(xì)胞轉(zhuǎn)移至腫瘤細(xì)胞周圍,增加破壞細(xì)胞核酸物質(zhì)釋放量,為腫瘤生長提供有利條件[8]。宮頸癌中晚期患者預(yù)后不佳,因而選擇可靠指標(biāo)預(yù)測(cè)患者預(yù)后,對(duì)臨床調(diào)整治療方案及個(gè)體精準(zhǔn)化治療具有重要意義。

淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞可反映全身炎癥反應(yīng),并可預(yù)測(cè)腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移,研究表明LMR降低時(shí)機(jī)體免疫應(yīng)答、抗腫瘤免疫能力較弱,腫瘤進(jìn)展較快,且與宮頸癌患者不良預(yù)后密切相關(guān)[9-10]。本研究結(jié)果顯示,預(yù)后不良組治療后14 d LMR低于預(yù)后良好組,提示LMR降低與宮頸癌同步放化療患者預(yù)后不良有關(guān)。由此推測(cè)LMR降低可促進(jìn)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移,降低抗腫瘤免疫細(xì)胞的攻擊能力,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、黏附,影響腫瘤生長及轉(zhuǎn)移,并可促使中性粒細(xì)胞轉(zhuǎn)移至腫瘤細(xì)胞周圍,增加活性氧釋放量,造成預(yù)后不良。TVRR可反映放化療敏感度,且與宮頸癌預(yù)后有關(guān)[11]。本研究結(jié)果顯示,LMR與宮頸癌浸潤深度、FIGO分期呈負(fù)相關(guān),而與TVRR呈正相關(guān),提示LMR降低可能促進(jìn)宮頸癌發(fā)生發(fā)展,并可能作為判斷患者預(yù)后的潛在指標(biāo)。miR-21具有癌基因特性,可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲,抑制腫瘤細(xì)胞凋亡,進(jìn)而參與腫瘤發(fā)生發(fā)展過程[12-13]。研究表明miR-21可調(diào)節(jié)激酶磷酸化水平,促進(jìn)腫瘤生長,致使腫瘤患者預(yù)后不良[14]。本研究結(jié)果顯示,預(yù)后不良組治療后14 d血清miR-21表達(dá)量高于預(yù)后良好組,其與宮頸癌浸潤深度、FIGO分期呈正相關(guān),且與TVRR呈負(fù)相關(guān),提示miR-21表達(dá)量升高可能促進(jìn)宮頸癌惡性進(jìn)展,增加預(yù)后不良發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。分析其原因可能為miR-21可通過調(diào)節(jié)磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶 B信號(hào)通路,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖,抑制細(xì)胞凋亡,并可促進(jìn)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化,增強(qiáng)宮頸癌細(xì)胞侵襲性,進(jìn)而誘發(fā)預(yù)后不良[15]。

HOPX在多種腫瘤中呈低表達(dá),其高表達(dá)可抑制腫瘤細(xì)胞增殖、遷移及侵襲[16]。HOPX過表達(dá)可促進(jìn)p21表達(dá),抑制細(xì)胞周期蛋白D1、CDK4表達(dá),誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯、腫瘤細(xì)胞凋亡,抑制體內(nèi)移植瘤生長[17]。本研究結(jié)果顯示預(yù)后不良組治療后14 d血清HOPX表達(dá)量低于預(yù)后良好組,且與臨床病理特征、TVRR密切相關(guān),提示HOPX可能參與宮頸癌發(fā)生發(fā)展過程,且與宮頸癌同步放化療患者預(yù)后不良相關(guān)。由此可知HOPX低表達(dá)可能促進(jìn)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化發(fā)生,增強(qiáng)宮頸癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力,促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)展,進(jìn)而降低同步放化療的治療效果,致使預(yù)后不良發(fā)生。目前LMR、miR-21、HOPX單一預(yù)測(cè)宮頸癌同步放化療患者預(yù)后具有一定局限性,因而本研究選取聯(lián)合預(yù)測(cè)模型,結(jié)果發(fā)現(xiàn)聯(lián)合預(yù)測(cè)預(yù)后的AUC大于單一指標(biāo)預(yù)測(cè),提示早期實(shí)施聯(lián)合檢測(cè)血清LMR、miR-21、HOPX水平可能作為臨床預(yù)測(cè)宮頸癌同步放化療患者預(yù)后的有效輔助手段。

4 結(jié)論

血清LMR、miR-21、HOPX水平與宮頸癌同步放化療患者TVRR及其預(yù)后密切相關(guān),聯(lián)合檢測(cè)其水平對(duì)預(yù)后具有一定預(yù)測(cè)價(jià)值,可為宮頸癌同步放化療患者診療提供科學(xué)指導(dǎo)。