馬 杰, 王卓君, 石瑤瑤, 葉元土, 蔡春芳, 吳 萍, 陳 鵬

(蘇州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院1,蘇州 215123) (江蘇省水產(chǎn)動物營養(yǎng)重點實驗室2,蘇州 215123) (北京英惠爾生物技術(shù)有限公司3,北京 100081)

在水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中,多種因素如水環(huán)境條件、飼料中有害物質(zhì)等均可引起養(yǎng)殖魚類發(fā)生嚴重的氧化應(yīng)激,并導(dǎo)致魚體健康損傷、病害的發(fā)生和發(fā)展,給養(yǎng)殖業(yè)帶來不可忽視的損失。氧化應(yīng)激是指體內(nèi)的氧化和抗氧化的失衡,會導(dǎo)致細胞損傷、甚至死亡。氧化損傷是細胞損傷的主要類型之一,如何通過飼料途徑修復(fù)魚體氧化損傷的細胞、維護魚體主要器官組織的結(jié)構(gòu)及功能完整性是現(xiàn)代營養(yǎng)與飼料研究的重要領(lǐng)域之一。酵母類飼料在水產(chǎn)飼料中被廣泛用于增強魚體免疫防御功能和抗氧化損傷的功能,已經(jīng)成為一類常規(guī)的飼料添加劑[1]。在建立草魚原代肝細胞H2O2損傷模型、并研究飼料酵母對氧化損傷修復(fù)的基礎(chǔ)上[2],本實驗選擇3種酵母飼料產(chǎn)品制備成水溶物凍干粉,并用于對草魚原代肝細胞生長的影響和對H2O2損傷細胞的修復(fù)實驗。旨在通過離體細胞實驗,探究飼料酵母水溶物對草魚原代肝細胞生長影響、對氧化損傷細胞的修復(fù)效果和作用機制。

1 材料和方法

1.1 實驗魚

用于原代肝細胞分離的材料魚為平均體重(27.92±5.47)g的一冬齡草魚幼魚,飼養(yǎng)于蘇州大學(xué)魚類循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng)中,每天使用實驗室自制的草魚飼料(粗蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)28%、粗脂肪質(zhì)量分數(shù)6%)飽食投喂1次,每2 d更換1/2體積的水。定期監(jiān)測水環(huán)境變化,維持水體中溶氧量為4.5～4.8 mg/L、pH為7.5～8.0、水溫20～28 ℃。

1.2 飼料酵母水溶物的制備

取3種飼料酵母產(chǎn)品(菌種均為釀酒酵母Saccharomycescerevisiae),其營養(yǎng)組成見表1。樣品粉碎后全部過60目標準篩,定量稱取實驗樣品、加入雙蒸水、攪拌均勻,置于4 ℃浸泡24 h。使用孔徑為3 μm的低速濾膜抽濾,將得到的濾液冷凍干燥,所得凍干粉置于-80 ℃低溫冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

分別稱取一定量的酵母水溶物凍干粉,完全溶解于無菌PBS溶液中,使樣品水溶物的質(zhì)量濃度為25 mg/mL,使用0.22 μm微孔濾膜過濾后,4 ℃保存,現(xiàn)配現(xiàn)用。

表1 3種飼料酵母產(chǎn)品成分質(zhì)量分數(shù)/%

1.3 草魚原代肝細胞分離與培養(yǎng)

參照秦潔等[3]的原代肝細胞分離方法,原代肝細胞置于體積分數(shù)5% CO2、27 ℃的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),24 h后更換一半的培養(yǎng)液。

1.4 水溶物濃度對原代肝細胞生長影響實驗

3種酵母水溶物分別設(shè)置6個質(zhì)量濃度梯度,用完全培養(yǎng)基(在M199培養(yǎng)液中加入15 mg/100 mL胎牛血清、1 mg/100 mL三抗和1 mg/100 mL牛胰島素)按梯度稀釋,分別使3種飼料酵母水溶物的質(zhì)量濃度為0(對照組)、25、50、100、200、400 mg/L。原代肝細胞培養(yǎng)16 h(細胞融合率約為50%)后更換培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)24 h。隨后,使用MTT法測定3種水溶物對原代肝細胞生長的影響,并依據(jù)對照組計算各組細胞相對活力。

1.5 H2O2損傷模型及水溶物對損傷模型修復(fù)作用的實驗設(shè)計

參照石瑤瑤等[2]的方法建立草魚原代肝細胞的H2O2損傷模型(H2O2組),以不添加H2O2和水溶物的實驗組為對照組。按照H2O2模型組實驗條件,細胞培養(yǎng)1 h后,分別用含有3種水溶物(為1.4篩選的最佳促生長濃度)的完全培養(yǎng)基更換培養(yǎng)液,分別為YC-A、YC-B和YCP實驗組,見表2。

表2 酵母水溶物對草魚原代肝細胞H2O2損傷的修復(fù)作用實驗設(shè)計

1.6 實驗方法

1.6.1 細胞活力檢測

使用MTT法檢測并計算相對細胞活力,計算公式為:

1.6.2 培養(yǎng)液中LDH活性檢測

收集各處理組細胞的培養(yǎng)液,根據(jù)LDH試劑盒方法檢測并計算培養(yǎng)液中LDH活性。

1.6.3 透射電鏡觀察細胞超微結(jié)構(gòu)變化

分別收集各組細胞,加入體積分數(shù)為2.5%戊二醛溶液,避光固定。用預(yù)冷PBS漂洗,1%鋨酸溶液后固定30 min后,使用梯度濃度的丙酮(體積分數(shù)分別為50%、70%、90%、100%)在室溫下脫水、包埋劑(V100%丙酮∶V樹脂=1∶1)浸透2 h、包埋固化、修塊、超薄切片、檸檬酸鉛和醋酸鈾染色,在透射電鏡下(TEM)觀察超微結(jié)構(gòu)變化。

1.6.4 AnnexinV/PI雙染法檢測細胞凋亡

建立原代肝細胞氧化應(yīng)激模型后,在培養(yǎng)液中分別加入3種飼料酵母水溶物繼續(xù)培養(yǎng)24 h,收集所有細胞,每組3個重復(fù),每個樣本細胞量在10 000個左右。加入5 μL Annexin V-FITC、10 Μl PI (碘化丙啶)染色液。避光孵育15 min后置于冰浴,采用流式細胞儀檢測細胞凋亡情況。

1.6.5 線粒體膜電位(MMP)檢測

線粒體膜電位檢測使用JC-1試劑盒,在收集好的細胞中加入500 μL JC-1工作液,重懸細胞,置于37 ℃培養(yǎng)箱中避光孵育30 min。孵育完成后收集細胞,使用緩沖液清洗3次,重懸細胞,使用流式細胞儀檢測。

1.6.6 細胞內(nèi)活性氧(ROS)檢測

細胞內(nèi)ROS水平通過DCFH-DA氧化引起的熒光變化來檢測。細胞經(jīng)處理后,將DCFH-DA加入培養(yǎng)基中,置于27 ℃培養(yǎng)箱中孵育30 min,收集細胞,PBS洗滌2次,隨后使用流式細胞儀檢測。

1.6.7 轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析

收集各組細胞,每組3個重復(fù),加入適量Trizol裂解細胞。將充分裂解的細胞轉(zhuǎn)移至凍存管,在液氮中速凍,用于后續(xù)測序。RNA提取與RNA-seq測序技術(shù)服務(wù)由北京百邁客生物科技有限公司提供,采用Illumina高通量測序平臺對cDNA文庫進行測序,生成高質(zhì)量的原始數(shù)據(jù)(Raw Data)。對Raw Data進行過濾,去除N的比例大于10%的Reads、質(zhì)量值Q≤10的堿基數(shù)占整條Read的50%以上的Reads,獲得高質(zhì)量的Clean Data。利用生物學(xué)信息手段對轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)進行分析,將Clean Data與指定的參考基因組序列對比(參考基因組下載地址見:http://www.ncgr.ac.cn/grasscarp/),進行文庫質(zhì)量評估、序列結(jié)構(gòu)分析、差異基因分析。使用DEseq2軟件進行差異表達分析,篩選條件為基因差異表達量的對數(shù)值Fold Change≥1.5且P<0.01。

1.7 數(shù)據(jù)分析

所有結(jié)果均以至少3次獨立實驗的平均值±標準差表示。使用SPSS 22.0軟件對實驗數(shù)據(jù)進行單因素方差分析,并使用Duncan氏多重比較分析檢驗組間差異顯著性,P<0.05為差異顯著,P<0.01表示差異極顯著。使用GraphPad Prism 9進行統(tǒng)計分析及圖形繪制。

2 結(jié)果與分析

2.1 細胞生長觀察

如圖1所示,剛分離的草魚原代肝細胞呈規(guī)則的球形或橢球形,離散分布于細胞板上。培養(yǎng)16 h后,觀察到細胞貼壁生長且其融合率(細胞融合匯片的面積與細胞板的孔底面積的百分比)在50%左右;培養(yǎng)24 h細胞融合率能夠達到80%,生長狀態(tài)良好。

圖1 顯微鏡下肝細胞的形態(tài)

2.2 水溶物濃度對原代肝細胞生長的影響

圖2為各組草魚原代肝細胞活力的測定結(jié)果,細胞活力隨著3種水溶物的質(zhì)量濃度增加而增加。與對照組0 mg/L比較,YC-A質(zhì)量濃度為25 mg/L時無顯著差異(P>0.05),質(zhì)量濃度在50～400 mg/L時,細胞活力極顯著增加(P<0.01);YC-B質(zhì)量濃度為25 mg/L和400 mg/L時差異顯著(P<0.05),50～200 mg/L差異極顯著(P<0.01);YCP質(zhì)量濃度為25、400 mg/L時無顯著差異(P>0.05),質(zhì)量濃度在50～200 mg/L時差異極顯著(P<0.01)。

結(jié)果表明,3種水溶物對原代肝細胞表現(xiàn)出良好的促生長作用,并表現(xiàn)出促進細胞生長的二次方程曲線劑量效應(yīng)。為便于進一步研究水溶物對氧化應(yīng)激狀態(tài)下細胞的保護作用,分別在3種水溶物的促生長質(zhì)量濃度范圍內(nèi)選取1個最佳促生長質(zhì)量濃度進行后續(xù)試驗,即YC-A、YCP為100 mg/L,YC-B為200 mg/L,細胞活力分別為(119.48±6.93)%、(124.98±8.48)%、(117.52±6.73)%。

圖2 不同質(zhì)量濃度水溶物對細胞活力的影響

2.3 對H2O2誘導(dǎo)的草魚原代肝細胞氧化應(yīng)激的修復(fù)效果

2.3.1 細胞活力變化

利用H2O2誘導(dǎo)的草魚原代肝細胞氧化損傷模型,比較3種水溶物對原代肝細胞生長的影響結(jié)果,見圖3。H2O2組與對照組比較,細胞活力極顯著下降(P<0.001);與H2O2組相比,YC-A組、YC-B組和YCP組細胞活力極顯著提高(P<0.001),表明3種飼料酵母水溶物具有修復(fù)肝細胞H2O2氧化損傷的作用,使受到損傷的肝細胞活力得到顯著的恢復(fù)。

圖3 水溶物對損傷細胞的活力影響

2.3.2 培養(yǎng)液中LDH活性

培養(yǎng)液中LDH活性可以顯示培養(yǎng)細胞膜的通透性。各組細胞培養(yǎng)液中LDH活性測定結(jié)果見圖4。H2O2組與對照組相比,培養(yǎng)液中LDH活性極顯著提高(P<0.001),表明H2O2對肝細胞膜造成損傷導(dǎo)致細胞膜通透性顯著增加。3種水溶物處理組與H2O2組相比,培養(yǎng)液中LDH活性極顯著降低(P<0.001),顯示3種水溶物可以修復(fù)受損肝細胞的細胞膜通透性。

圖4 培養(yǎng)液中LDH活性

2.3.3 肝細胞超微結(jié)構(gòu)

如圖5所示,對照組細胞形狀呈橢圓形,細胞膜完整,胞質(zhì)分布均勻,細胞核核仁清晰且核膜完整,染色質(zhì)分布均勻,線粒體豐富、且嵴清晰。H2O2組的細胞顯示出了典型的線粒體損傷,線粒體腫脹、嵴扭曲或消失,細胞核固縮、染色質(zhì)凝集,細胞核位置偏移,細胞內(nèi)出現(xiàn)空泡。3種水溶物處理組對H2O2誘導(dǎo)的細胞損傷表現(xiàn)出了明顯的修復(fù)效果,主要體現(xiàn)在線粒體腫脹情況得以改善,但與對照組相比細胞仍有損傷的形態(tài)學(xué)特征,如染色質(zhì)凝集、胞內(nèi)空泡、部分線粒體輕微腫脹及嵴模糊等。

圖5 肝細胞超微結(jié)構(gòu)變化

2.3.4 細胞凋亡特征指標

由細胞的凋亡圖(圖6a)及凋亡率(圖6b)可知,H2O2組與對照組相比,凋亡率從(20.00±3.88)%上升到(71.37±2.44)%,差異極顯著(P<0.001);與H2O2組比,3種水溶物處理組凋亡率極顯著降低(P<0.01),YC-A組、YC-B組和YCP組的凋亡率分別為(58.87±4.37)%、(58.63±3.73)%、(46.88±4.35)%。與對照組相比,H2O2處理極顯著增加了細胞內(nèi)ROS含量(P<0.001),細胞內(nèi)ROS水平達到正常細胞的3倍以上。與H2O2組比較,3個水溶物處理組極顯著抑制H2O2誘導(dǎo)的細胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生量(P<0.01)。H2O2組與對照組相比,MMP極顯著降低(P<0.001);3個水溶物處理MMP均極顯著高于H2O2組 (P<0.001)。

圖6 飼料酵母緩解H2O2誘導(dǎo)的細胞凋亡

2.4 差異表達基因(DEGs)分析

依據(jù)轉(zhuǎn)錄組結(jié)果,使用DESeq2進行分析,設(shè)置參數(shù)錯誤發(fā)現(xiàn)率(FDR)≤0.01且差異倍數(shù)(FC)≥1.5篩選差異表達基因。結(jié)果如表3所示,對照組與H2O2組比較,差異表達的基因共計505個,其中,283個基因表達上調(diào)、222個基因表達下調(diào);YC-A組與H2O2組相比,差異表達的基因共計34個,其中,29個基因表達上調(diào)、5個基因表達下調(diào);YC-B組與H2O2組相比,差異表達的基因共計1 400個,其中,754個基因表達上調(diào)、646個基因表達下調(diào);YCP組與H2O2組相比,差異表達的基因共計186個,其中,139個基因表達上調(diào)、47個基因表達下調(diào)。

表3 差異表達基因數(shù)目統(tǒng)計表

從差異表達基因集H2O2/對照組、H2O2/YC-A、H2O2/YC-B、H2O2/YCP中篩選出與氧化損傷相關(guān)的關(guān)鍵基因,見表4。

3 討論

3.1 飼料酵母水溶物能夠促進原代肝細胞生長活性

酵母培養(yǎng)物為以釀酒酵母為菌種,經(jīng)固體發(fā)酵后濃縮、干燥獲得的產(chǎn)品,其中包含有酵母菌體、酵母次級代謝產(chǎn)物和殘余的培養(yǎng)基。酵母細胞壁為釀酒酵母經(jīng)液體發(fā)酵后得到的菌體,再經(jīng)酶解后分離、干燥獲得的細胞壁產(chǎn)品,其主要成分包括β-葡聚糖和甘露聚糖[1]。本實驗中制備的酵母水溶物去除了飼料酵母中的非水溶性物質(zhì),包括無活性的酵母菌體、非水溶性蛋白質(zhì)和不溶性糖等。在本實驗的條件下,3種酵母產(chǎn)品的水溶物對草魚原代肝細胞的生長都表現(xiàn)出一定的促進效果,即除YC-A 25 mg/L組、YCP的25 mg/L和400 mg/L組外,其他各實驗組的結(jié)果均顯著或極顯著地高于對照組。這一方面可能由于酵母水溶物能夠為細胞提供其生長所需的營養(yǎng)物質(zhì),另一方面可能是水溶物中的某些生物活性物質(zhì)和未知促生長因子發(fā)揮了促生長作用。同時,3種水溶物對細胞的促生長效果表現(xiàn)出二次方程的曲線劑量效應(yīng),即低質(zhì)量濃度時效果不明顯,如YC-A組和YCP組水溶物質(zhì)量濃度為25 mg/L時,對細胞促生長作用不顯著(P>0.05);在達到最適宜質(zhì)量濃度下具有最佳促進生長的效果,如YC-A、YCP、YC-B添加量在 100、100、200 mg/L時表現(xiàn)出最佳的促生長效果。然而還難以解釋高質(zhì)量濃度的酵母水溶物反而導(dǎo)致培養(yǎng)細胞生長下降的原因,影響因素可能是多方面的。實際生產(chǎn)中,在配合飼料中添加酵母類產(chǎn)品有適宜的添加量,過低、過高的添加量其沒有顯示出更好的飼料效果[1,15]。

表4 關(guān)鍵差異表達基因

飼料酵母水溶物含有促進細胞生長的成分,且具有最適宜的添加劑量效應(yīng)關(guān)系,質(zhì)量濃度過高、過低均不顯著。

3.2 飼料酵母水溶物能夠緩解原代肝細胞線粒體途徑的凋亡與損傷

線粒體作為細胞的主要細胞器,在調(diào)節(jié)細胞凋亡方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。H2O2是一種強氧化劑,能夠穿透細胞膜,極易轉(zhuǎn)化為高活性的羥基自由基、過氧自由基等,攻擊線粒體呼吸鏈的生物氧化途徑,導(dǎo)致抗氧化酶活性降低、生成大量的ROS,導(dǎo)致細胞氧化應(yīng)激,進而激活線粒體凋亡途徑[13]。

飼料酵母能夠通過調(diào)控細胞和組織中的多種生理或病理事件,提高水產(chǎn)動物機體抗應(yīng)激能力[14,15]。本實驗發(fā)現(xiàn),飼料酵母水溶物能夠緩解H2O2誘導(dǎo)的細胞凋亡,主要表現(xiàn)為顯著降低細胞凋亡率、顯著降低細胞內(nèi)ROS水平。相較于模型組,YCP、YC-A和YC-B分別使細胞內(nèi)ROS水平降低了16.51%、9.37%、21.16%,凋亡率降低34.32%、17.51%、17.85% (圖6)。在線粒體凋亡途徑中,線粒體外膜的可滲性是凋亡觸發(fā)的關(guān)鍵,該過程涉及粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔道的打開,從而改變線粒體外膜通透性,在細胞質(zhì)中高水平的Ca2+影響下,導(dǎo)致MMP的降低[16]。飼料酵母水溶物能夠提高氧化應(yīng)激下的肝細胞的線粒體膜電位,本實驗中,H2O2作用下肝細胞MMP下降了54.52%;而在3種水溶物處理后均不同程度提高了MMP(圖6),相較于模型組細胞MMP水平,YCP組、YC-A組、YC-B組分別提高了65.18%、11.51%、16.69%。

線粒體是細胞能量代謝中心,線粒體膜電位的異常往往表明線粒體功能障礙,提示著細胞內(nèi)供能及代謝受阻,從而影響細胞活力。本實驗結(jié)果表明,飼料酵母水溶物能夠提高氧化應(yīng)激狀態(tài)下原代肝細胞的細胞活力。此外,飼料酵母水溶物能夠維持細胞膜完整性、修復(fù)H2O2誘導(dǎo)的原代肝細胞超微結(jié)構(gòu)損傷。乳酸脫氫酶(LDH)位于正常細胞的細胞質(zhì)中,當細胞受到損傷時,會釋放到細胞外,是細胞損傷的敏感標記物[17]。通過檢測培養(yǎng)液中LDH活性,發(fā)現(xiàn)3種水溶物均能降低培養(yǎng)液中LDH活性,結(jié)合透射電鏡結(jié)果(圖5)可知,3種水溶物作用下,氧化損傷的肝細胞超微結(jié)構(gòu)得以修復(fù)和改善,細胞膜完整性得以維持。

3種酵母產(chǎn)品水溶物通過對細胞膜完整性修復(fù)、線粒體膜損傷的修復(fù)、降低細胞內(nèi)ROS水平等途徑,對H2O2誘導(dǎo)的草魚原代肝細胞損傷進行有效的修復(fù),主要表現(xiàn)為顯著降低受損肝細胞凋亡率、有效促進原代肝細胞生長能力。

3.3 飼料酵母水溶物對原代肝細胞的保護機制

為進一步闡明飼料酵母水溶物對細胞的保護機制,通過轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析飼料酵母水溶物處理組與模型組之間的關(guān)鍵DEGs,見表4。其中,基因g6pd是4個差異基因表達集中共同涉及的DEG。H2O2作用下基因g6pd表達受到抑制,而3種水溶物處理后表達上調(diào),提示飼料酵母水溶物能夠提高細胞抗氧化能力。H2O2組基因nqo1、spartin表達下調(diào),但YCP水溶物處理后nqo1上調(diào),YC-B處理后spartin表達上調(diào),提示飼料酵母水溶物能夠維持線粒體形態(tài)和功能正常。線粒體功能異常會阻礙ATP合成,使細胞內(nèi)能量供給受限,影響細胞活力。TCA循環(huán)與磷酸戊糖途徑(PP途徑)同屬于細胞的中心碳代謝通路,對細胞能量供給至關(guān)重要。轉(zhuǎn)錄組結(jié)果顯示,在H2O2作用下TCA循環(huán)通路(suclg2、cs、idh1)和PP途徑中(g6pd、tkt、6pgd)的關(guān)鍵DEGs表達受抑制,在3種飼料酵母水溶物處理后表達上調(diào),提示飼料酵母水溶物可能能夠緩解細胞內(nèi)能量供應(yīng)障礙,從而提高細胞活力。DIABLO是線粒體內(nèi)的促凋亡蛋白,能夠通過結(jié)合凋亡抑制蛋白(IAPs)誘導(dǎo)細胞凋亡[11],本研究中,YC-B組和YCP組基因diablo相比模型組下調(diào)。這些結(jié)果驗證了飼料酵母對H2O2誘導(dǎo)的氧化損傷具有保護作用,提示3種水溶物具有促進原代肝細胞生長增殖、緩解H2O2誘導(dǎo)的線粒體途徑凋亡的作用。

與其他脊椎動物一樣,魚類肝臟富含Ⅰ相、Ⅱ相代謝酶用于清除外源藥物或毒物。細胞色素P450(CYP450)和谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GSTs)分別是肝臟的Ⅰ相代謝酶和Ⅱ相代謝酶,在外源性物質(zhì)的代謝中起著關(guān)鍵作用[9,10]。YCP可能通過提高肝細胞內(nèi)解毒酶基因表達水平,即提高細胞藥物代謝能力,從而保護細胞免受氧化損傷。YCP組與H2O2組相比,CYP450相關(guān)基因(cyp3a27、cyp2g1、cyp3c1、cyp27a1)表達上調(diào);谷胱甘肽代謝通路中基因(gsta、gst3、gsto1)上調(diào)。

YC可能通過調(diào)節(jié)細胞內(nèi)GSH水平,抑制細胞鐵死亡發(fā)生。發(fā)生鐵死亡時,細胞內(nèi)的谷胱甘肽(GSH)被消耗,導(dǎo)致谷胱甘肽過氧化物酶4(GPX4)失活,最終導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化和大量活性氧的產(chǎn)生[18]。胱氨酸/谷氨酸逆轉(zhuǎn)運體(system-Xc)和GPX4是鐵死亡的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子[19]。本研究中細胞經(jīng)YC-B處理后,slc7a11表達上調(diào)。SLC7A11是system-Xc的重要組成部分,system-Xc可以通過胱氨酸轉(zhuǎn)運來維持GPX4的活性[20]。slc7a11上調(diào)可能使運輸?shù)郊毎械碾装彼崃吭龆?從而提高細胞內(nèi)GSH水平,促進GPX4對鐵死亡的抑制功能。GCLC是谷氨酸-半胱氨酸連接酶(GCL)的亞基,通過調(diào)節(jié)GSH的表達,發(fā)揮抗氧化作用[8]。YC-A和YC-B處理細胞后,gclc表達上調(diào)。此外,YC-A可能通過上調(diào)鐵蛋白含量,維持細胞內(nèi)鐵穩(wěn)態(tài)。FTH1是鐵死亡的負調(diào)節(jié)因子,FTH1下調(diào)使得鐵儲存減低,鐵超載促進鐵死亡。本研究中YC-A處理細胞后,基因fth1上調(diào)。

4 結(jié)論

飼料酵母水溶物不僅能夠促進草魚原代肝細胞生長活性,還可以降低細胞內(nèi)ROS水平、提高細胞抗氧化能力,從而保護細胞免氧化損傷。轉(zhuǎn)錄組結(jié)果提示,YCP可能通過增加細胞內(nèi)Ⅰ相和Ⅱ相代謝酶保護細胞免受氧化損傷,而YC對細胞的保護可能是通過調(diào)控細胞內(nèi)鐵穩(wěn)態(tài)實現(xiàn)的。