黃小平,李 軼,李 萍 （. 西安市第九醫(yī)院消化內(nèi)科，陜西 西安 70054；. 西安市第九醫(yī)院血管介入科，陜西 西安70054）

胃癌是一種發(fā)病率和病死率都很高的疾病，多數(shù)患者表現(xiàn)為食欲下降和腹部不適等癥狀[1-2]。由于缺乏相對(duì)方便可靠的生物標(biāo)志物，大量胃癌患者確診時(shí)已為晚期，預(yù)后較差[3]。早期發(fā)現(xiàn)和診斷對(duì)于降低胃癌患者的病死率至關(guān)重要，因此尋找特異性、敏感性和便利性均較高的可靠生物標(biāo)志物以進(jìn)行早期診斷至關(guān)重要[4]。性別決定區(qū)Y 框蛋白6（sex determining region Y-box 6, SOX6）是SOX 基因家族D 亞族成員之一。大量研究表明，SOX6 異常表達(dá)與許多腫瘤疾病相關(guān)[5-6]。Dang 等[7]的研究證實(shí)，SOX6 在胃癌細(xì)胞中作為抑癌基因發(fā)揮功能。多功能蛋白聚糖（versican,VCAN）屬蛋白聚糖家族，是一種硫酸軟骨素蛋白多糖，也是重要的細(xì)胞外基質(zhì)成分，與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，VCAN 在胃癌組織中呈高表達(dá)，可能是胃癌預(yù)后的潛在分子標(biāo)志物[8]。SOX6和VCAN皆與胃癌的發(fā)生有關(guān)，但二者對(duì)胃癌診斷及病情評(píng)估的價(jià)值目前尚不明確?；诖耍狙芯客ㄟ^檢測(cè)胃癌患者血清中SOX6、VCAN 的表達(dá)，探討二者在胃癌診斷及病情評(píng)估中的價(jià)值，為胃癌的早期診斷和治療提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2019 年1 月至2021 年10 月本院收治的胃癌患者105 例為胃癌組，其中男61 例，女44 例，年齡48～68 歲，平均（54.33±2.62）歲。依據(jù)手術(shù)病理檢查結(jié)果判斷胃癌患者病理分期[9]，將患者分為Ⅰ、Ⅱ期組（早期胃癌，37 例）和Ⅲ、Ⅳ期組（中晚期胃癌，68 例）。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《胃癌規(guī)范化診療指南（試行）》[10]中關(guān)于胃癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②經(jīng)病理檢查確診為胃癌；③首發(fā)胃癌。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有精神障礙，無法進(jìn)行正常溝通；②合并其他惡性腫瘤及免疫缺陷等疾??；③處于妊娠期或哺乳期；④合并心、肝、肺、腦等重要臟器疾病。另選取本院同期收治的85 例胃良性病變患者為良性組，其中男48 例，女37 例，年齡44～65 歲，平均（54.15±2.50）歲。選取同期85例健康體檢者（無急慢性炎癥、感染性疾病、自身免疫性疾病和腫瘤疾病）為對(duì)照組，其中男43例，女42例，年齡45～67歲，平均（54.24±2.35）歲。3組研究對(duì)象的性別、年齡、BMI、吸煙史、飲酒史比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)（2018-10-291），獲得患者或其親屬的書面知情同意。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 采集所有研究對(duì)象的空腹靜脈血5 mL，以10 000 r/min離心15 min，取上層血清，置于-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 qRT-PCR 法檢測(cè)血清中SOX6、VCAN mRNA水平 按照制造商說明書，采用TRIzol 試劑（日本TaKaRa）提取血清總RNA。采用NanoDrop 1000 分光光度計(jì)（美國Thermo Fisher Scientific）檢測(cè)總RNA 濃度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案，使用PrimeScript RT Master Mix（日本TaKaRa）將總RNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。使用SYBR PREMIX EX Taq Ⅱ（日本TaKaRa）通過qRT-PCR 檢測(cè)血清中SOX6、VCAN mRNA 表達(dá)水平，以GAPDH 為內(nèi)參基因。反應(yīng)條件：95 ℃ 30 s；95 ℃ 10 s，57 ℃ 20 s，72 ℃ 30 s，共40 個(gè)循環(huán)。采用2-ΔΔCt法對(duì)血清SOX6、VCAN mRNA 表達(dá)水平進(jìn)行定量分析。SOX6、VCAN及內(nèi)參引物序列見表1。

表1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物序列

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

利用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)。多組數(shù)據(jù)采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。采用Spearman法分析SOX6、VCAN 表達(dá)與病理分期的相關(guān)性。利用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線評(píng)價(jià)血清SOX6、VCAN 表達(dá)水平對(duì)胃癌的診斷價(jià)值。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組血清中SOX6、VCAN的表達(dá)水平

胃癌組患者血清中SOX6 表達(dá)水平低于對(duì)照組和良性組，VCAN 表達(dá)水平高于對(duì)照組和良性組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 各組患者血清中SOX6、VCAN表達(dá)水平比較（）

表2 各組患者血清中SOX6、VCAN表達(dá)水平比較（）

*：與對(duì)照組比較，P＜0.05；#：與良性組比較，P＜0.05

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2.2 胃癌組不同病理分期患者血清中SOX6、VCAN的表達(dá)水平

Ⅲ、Ⅳ期組患者血清VCAN表達(dá)水平高于Ⅰ、Ⅱ期組患者，SOX6 表達(dá)水平低于Ⅰ、Ⅱ期組患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表3 各組血清中SOX6、VCAN表達(dá)水平比較（）

表3 各組血清中SOX6、VCAN表達(dá)水平比較（）

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2.3 血清SOX6、VCAN表達(dá)與病理分期的相關(guān)性分析

相關(guān)性分析結(jié)果顯示，胃癌患者血清中SOX6 表達(dá)與病理分期呈負(fù)相關(guān)（r=-0.485，P＜0.05），VCAN 表達(dá)與病理分期呈正相關(guān)（r=0.518，P＜0.05）。

2.4 血清SOX6、VCAN表達(dá)對(duì)胃癌患者的診斷價(jià)值

ROC曲線結(jié)果顯示，SOX6、VCAN 及二者聯(lián)合診斷胃癌患者的曲線下面積（area under the curve,AUC）、敏感度、特異度見圖1、表4。

圖1 SOX6、VCAN表達(dá)診斷胃癌患者的ROC曲線

表4 SOX6、VCAN表達(dá)對(duì)胃癌患者的診斷價(jià)值

3 討論

胃癌的發(fā)病率和病死率在國內(nèi)僅次于肺癌[11]。手術(shù)是其主要治療方法，但大多數(shù)患者在確診時(shí)已處于晚期，無法進(jìn)行根治性手術(shù)。近年來，雖然胃癌的診斷技術(shù)與臨床治療不斷發(fā)展，患者病死率有所降低，但是胃癌患者的預(yù)后較差，5 年生存率較低[12-13]。因此，繼續(xù)開發(fā)用于早期胃癌檢測(cè)的有效診斷標(biāo)志物仍然具有重要意義。

SOX6 在中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育及早期胚胎軟骨和肌肉組織形成過程中特異性表達(dá)，在細(xì)胞生長(zhǎng)、發(fā)育和增殖中發(fā)揮重要作用。近期研究表明，SOX6 轉(zhuǎn)錄因子在多種癌癥中作為抑癌基因發(fā)揮作用，SOX6 的表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)[14-15]。付真睿等[15]研究表明，SOX6 通過降低蛋白酶體活性，在膀胱癌中發(fā)揮抑癌基因作用。黃偉釗等[16]研究表明，食管癌中SOX6 的表達(dá)水平與病理分期呈負(fù)相關(guān)，檢測(cè)SOX6 水平有助于食管癌病情診斷。目前，SOX6 的表達(dá)是否與胃癌及其病理分期有關(guān)尚不清楚。本研究結(jié)果顯示，胃癌患者血清中SOX6 表達(dá)水平顯著降低，病理分期Ⅲ、Ⅳ期的胃癌患者血清SOX6 表達(dá)水平顯著低于Ⅰ、Ⅱ期的患者，提示SOX6 與胃癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，SOX6 表達(dá)水平對(duì)病理分期具有一定的指導(dǎo)意義，有可能成為臨床治療效果評(píng)估的指標(biāo)之一。ROC曲線結(jié)果顯示，SOX6 水平診斷胃癌患者的AUC為0.921，敏感度為92.38%，特異度為83.53%。提示SOX6 可在一定程度上作為診斷胃癌患者的生物標(biāo)志物。

VCAN 是一種大型的硫酸軟骨素蛋白多糖，是細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分[17]。有研究表明，VCAN 能夠通過調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附、凋亡、增殖、轉(zhuǎn)移、遷移、侵襲和血管生成等促進(jìn)癌癥進(jìn)展[18]。Zhai等[19]研究表明，VCAN 過表達(dá)可促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，為胃癌的診斷、治療和預(yù)后提供潛在的生物標(biāo)志物和基因靶點(diǎn)。張捷等[20]研究表明，VCAN 可能通過調(diào)控Toll 樣受體、Wnt 樣受體等信號(hào)通路參與胃癌的發(fā)生、發(fā)展。本研究結(jié)果顯示，病理分期Ⅲ、Ⅳ期的胃癌患者血清VCAN表達(dá)水平顯著高于Ⅰ、Ⅱ期的患者，表明VCAN水平可間接反映胃癌的進(jìn)展，預(yù)測(cè)病情嚴(yán)重程度，與張捷等[20]的研究結(jié)果一致。本研究進(jìn)一步通過相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，血清中SOX6 表達(dá)與病理分期呈負(fù)相關(guān)，VCAN 表達(dá)與病理分期呈正相關(guān)，提示二者共同參與胃癌的發(fā)生、發(fā)展。ROC曲線結(jié)果顯示，VCAN 診斷胃癌患者的AUC為0.915，敏感度為79.05%，特異度為95.29%，SOX6 聯(lián)合VCAN 診斷胃癌患者的AUC為0.969，敏感度為94.29%，特異度為90.59%。提示SOX6、VCAN二者聯(lián)合檢測(cè)可作為診斷胃癌患者的生物標(biāo)志物，且診斷效能和敏感度均高于單一指標(biāo)檢測(cè)。

綜上，胃癌患者血清中SOX6、VCAN 的表達(dá)較健康人群和胃良性病變患者有明顯差異，在不同病理分期胃癌患者的血清中上述指標(biāo)也有明顯差異，二者聯(lián)合檢測(cè)可作為胃癌患者診斷的生物學(xué)指標(biāo)，也可間接反映病情的進(jìn)展情況，具有重要的臨床意義。